CN104894051A - 一种新型的细胞培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新型的细胞培养方法，包括以下步骤，（1）共培养的准备，盖玻片、24孔板、不绣钢筛网的准备；（2）细胞单独培养，从组织中取细胞样品分离鉴定培养；（3）细胞共同培养实验，取单独培养好的细胞计数后接种于24孔板中，加入血清培养液，培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换小牛血清的DMEM，每孔加入庆大霉素24小时候进行共培养。本发明通过采用细胞共培养的手段观察两种不同类型细胞之间的相互作用，有助于医学和生物学方面今后对细胞间相互关系的研究。

Description

一种新型的细胞培养方法

技术领域

   本发明属于生物技术领域，涉及一种新型的细胞培养方法。

背景技术

细胞是组成有机体的形态和功能的基本单位，自身又是由许多部分构成的。关于结构的研究不仅要知道它是由哪些部分构成，而且要进一步搞清每个部分的组成。相应地，关于功能不仅要知道细胞作为一个整体的功能，而且要了解各个部分在功能上的相互关系。有机体的生理功能和一切生命现象都是以细胞为基础表达的，因此，不论对有机体的遗传、发育以及生理机能的了解，还是对于作为医疗基础的病理学、药理学以及农业育种等，细胞学都是至关重要的。

细胞间相互关系是当今医学和生物学研究的一种重要方向，进行这方面的研究往往离不开细胞的培养，特别是细胞共培养。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种新型的细胞培养的方法，通过细胞共养的手段观察两种不同类型细胞之间的相互作用，有效提高药物的生物利用度，增强药效，降低毒副作用，达到缓释、长效、靶向的目的。

 本发明通过下述技术方案实现如下：一种新型的细胞培养方法，包括以下步骤：

（1）共培养的准备，盖玻片、24孔板、不绣钢筛网；

（2）细胞单独培养，从组织中取细胞样品分离鉴定培养；

（3）细胞共同培养实验，取单独培养好的细胞计数后接种于24孔板中，加入血清培养液，培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换小牛血清的DMEM，每孔加入庆大霉素24小时候进行共培养。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤（1）共培养的准备：盖玻片用玻璃刀裁成刚好能放入24孔板的正方形，按细胞培养用品要求清洗后消毒备用，不锈钢筛网的钢丝完全垂直于网面的支脚，大小能放入24板孔，使两层细胞相差1mm，清洗后消毒备用。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤（2）中细胞单独培养，大鼠肾间质成纤维细胞和大鼠肾小管上皮细胞的培养与鉴定按文献报道进行，培养成功后进行下列试验，观察上述装置培养细胞的可行性，实验前大鼠肾小管上皮细胞和大鼠肾间质成纤维细胞均用0.4%锥虫蓝染色，检测细胞的活性状态。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

   （1）本发明所采用的细胞培养方法，简单易行，在一般实验室即可进行。

（2）在共培养过程中可以清楚地观察到两种细胞生长情况，便于拍照等观察。

（3）在细胞接种时，玻片大小一样，玻片上的细胞数可由每孔总的细胞数减去每孔剩余的细胞数而得，只需在实验前试验几次即可，

（4）共培养的是贴壁细胞，细胞不易交叉感染。

（5）通过筛网上再固定盖玻片的方法还可观察3种贴壁细胞的共培养情况。

（6）实验结束后可在玻片上进行扫描电镜、免疫组化等研究。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

  一种新型的细胞培养方法，包括以下步骤：

（1）共培养的准备，盖玻片、24孔板、不绣钢筛网的准备；

（2）细胞单独培养，从组织中取细胞样品分离鉴定培养；

（3）细胞共同培养实验，取单独培养好的细胞计数后接种于24孔板中，加入血清培养液，培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换小牛血清的DMEM，每孔加入庆大霉素24小时候进行共培养。

其中共培养的准备，具体操作为盖玻片用玻璃刀裁成刚好能放入24孔板的正方形，按细胞培养用品的要求清洗后消毒备用，不锈钢筛网用剪刀剪成正方形，再用筛网的钢丝完成垂直于网面的支脚，大小以能放入24孔板孔为宜，使上下两层细胞相距1mm，清洗后消毒备用。

细胞共同培养实验：将原代培养的大鼠肾小管上皮细胞消化后计数，按每孔1X105个细胞接种于预先放有备用盖玻片的24孔板中，以含10%小牛血清的DMEM培养液培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换细胞液位含1%小牛血清的DMEM，每孔加入200ug/ml庆大霉素24小时后进行共同培养。取第3代的大鼠肾间质成纤维细胞，按每孔1×105细胞数值植入24孔板内以含10%小牛血清的DMEM培养液培养12小时，细胞贴壁生长后，将培养液更换为含1%小牛血清DMEM继续培养24小时，放入不锈钢筛网，⑤再放入上述长有大鼠肾小管上皮细胞的盖玻片，共培养48小时后，去盖玻片及不锈钢筛网，用四甲基偶氮多胍（MTT）掺入法测定大鼠肾间质成纤维细胞的增殖情况。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种新型的细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）共培养的准备；

（2）细胞单独培养，从组织中提取细胞样品分离鉴定培养；

（3）细胞共同培养实验，取单独培养好的细胞计数后接种于24孔板中，加入血清培养液，培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换小牛血清的DMEM，每孔加入庆大霉素24小时后进行共培养。

2.根据权利要求1所述的一种新型的细胞培养方法，其特征在于：所述步骤（1）共培养的准备：盖玻片用玻璃刀裁成刚好能放入24孔板的正方形，按细胞培养用品要求清洗后消毒备用，不锈钢筛网的钢丝完全垂直于网面的支脚，其大小能放入24板孔，使两层细胞相差1mm，清洗后消毒备用。

3.根据权利要求2所述的一种新型的细胞培养方法，其特征在于：所述步骤（2）中细胞单独培养，大鼠肾间质成纤维细胞和大鼠肾小管上皮细胞的培养，培养成功后观察，实验前大鼠肾小管上皮细胞和大鼠肾间质成纤维细胞均用0.4%锥虫蓝染色，检测细胞的活性状态。