CN104886187A - 一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药技术领域，尤其是一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂；所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物10-20份、连翘提取物5-10份、薄荷提取物6-12份、木鳖子提取物5-20份、大蒜提取物10-20份、牛蒡子提取物5-16份、芦根提取物2-8份。本发明将金银花提取物、连翘提取物、薄荷提取物、木鳖子提取物和大蒜提取物配伍使用，他们之间的协同作用不仅在较低使用量的情况能够有效抑制杂菌的生长，而且牛蒡子提取物和芦根提取物是对灵芝液体发酵优异的物质，所以本发明的杂菌抑制剂不仅对灵芝菌丝体液体深层发酵几乎无影响，而且还能促进灵芝液体发酵。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其是一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂。
背景技术
灵芝是一种药用价值很高的名贵真菌，近年来，大量实验证明灵芝代谢产物中的很多成分如灵芝多糖、灵芝酸都具有明显的药理活性，有很好的保健作用。灵芝子实体长成以后含有较多的纤维素，影响了有效成分的萃取，而且难以保证水溶性和脂溶性有效成分全部萃取出来，采用液体发酵技术生产发酵液，与从子实体萃取相比，更能有效的利用灵芝的全部有效成分。
发酵罐深层培养具有生产周期短、产量高、效益大等优点，是灵芝进行大量生产的重要途径。但是发酵罐中发酵有诸多影响因素要控制，所以灵芝菌丝体液体深层发酵工艺易感染杂菌，目前已知杂菌的主要技术手段如高温、高压、化学法等易造成灵芝有效药用成分分解或相互反应以及最终制品的污染等问题。
目前也有采用化学消毒剂作为杂菌抑制剂，但是这类抑制剂的选择性较差，有些甚至会严重影响灵芝菌丝体的发酵。
发明内容
本发明的目的是：克服现有技术中的不足，提供一种能有效抑制灵芝菌丝发酵过程中其他杂菌生长的灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物10-20份、连翘提取物5-10份、薄荷提取物6-12份、木鳖子提取物5-20份、大蒜提取物10-20份、牛蒡子提取物5-16份、芦根提取物2-8份。
进一步的，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物12-18份、连翘提取物6-9份、薄荷提取物8-10份、木鳖子提取物6-18份、大蒜提取物12-18份、牛蒡子提取物8-12份、芦根提取物3-5份。
进一步的，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物15份、连翘提取物8份、薄荷提取物10份、木鳖子提取物12份、大蒜提取物15份、牛蒡子提取物10份、芦根提取物5份。
进一步的，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流2-3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:8-12，乙醇选用体积浓度为65-75％的乙醇。
更进一步的，所述金银花与乙醇的质量比为1:10.5，乙醇选用75％的乙醇。
进一步的，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。
更进一步的，每次石油醚用量为木鳖子药材的3-5倍，每次提取时间30-45min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1-2倍，提取3-5次，每次提取时间30-45min。
更进一步的，每次石油醚用量为木鳖子药材的4倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1.5倍，提取4次，每次提取时间30min。
进一步的，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:2-6；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
更进一步的，所述料液比为1:4。
采用本发明的技术方案的有益效果是：
1、金银花提取物及其他中药提取物都含有天然抑菌成分，但是其单独使用时都无法满足即灵芝菌丝体液体深层发酵对各方面的要求，而且单剂使用量大且影响灵芝菌丝体的发酵。本发明将金银花提取物、连翘提取物、薄荷提取物、木鳖子提取物和大蒜提取物配伍使用，他们之间的协同作用不仅在较低使用量的情况能够有效抑制杂菌的生长，而且牛蒡子提取物和芦根提取物是对灵芝液体发酵优异的物质，所以本发明的杂菌抑制剂不仅对灵芝菌丝体液体深层发酵几乎无影响，而且还能促进灵芝液体发酵。
2、该杂菌抑制剂直接加入灵芝培养基中即可起到抑制杂菌的作用，其加入量为0.1％～2％(质量)，在0.4％～0.8％范围内可以达到最佳的效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物10份、连翘提取物5份、薄荷提取物6份、木鳖子提取物5份、大蒜提取物10份、牛蒡子提取物5份、芦根提取物2份。
其中，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流2次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:12，乙醇选用体积浓度为65％的乙醇。
其中，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。其中，每次石油醚用量为木鳖子药材的3倍，每次提取时间45min，正丁醇的用量为木鳖子质量的2倍，提取3次，每次提取时间30min。
其中，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:2；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
实施例2
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物12-18份、连翘提取物6-9份、薄荷提取物8-10份、木鳖子提取物6-18份、大蒜提取物12-18份、牛蒡子提取物8-12份、芦根提取物3-5份。
其中，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:8，乙醇选用体积浓度为75％的乙醇。
其中，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。其中，每次石油醚用量为木鳖子药材的5倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1倍，提取5次，每次提取时间30min。
其中，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:3；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
实施例3
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物15份、连翘提取物8份、薄荷提取物10份、木鳖子提取物12份、大蒜提取物15份、牛蒡子提取物10份、芦根提取物5份。
其中，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:10.5，乙醇选用75％的乙醇。
其中，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。其中每次石油醚用量为木鳖子药材的4倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1.5倍，提取4次，每次提取时间30min。
其中，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:4；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
实施例4
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物18份、连翘提取物8份、薄荷提取物10份、木鳖子提取物18份、大蒜提取物18份、牛蒡子提取物15份、芦根提取物6份。
其中，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:10.5，乙醇选用体积浓度为75％的乙醇。
其中，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。其中，每次石油醚用量为木鳖子药材的3倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1倍，提取3次，每次提取时间30min。
其中，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:5；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
实施例5
一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物20份、连翘提取物10份、薄荷提取物12份、木鳖子提取物20份、大蒜提取物20份、牛蒡子提取物16份、芦根提取物8份。
其中，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:8，乙醇选用体积浓度为75％的乙醇。
其中，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。其中，每次石油醚用量为木鳖子药材的5倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的2倍，提取3次，每次提取时间30min。
其中，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:6；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
实验：
菌种：灵芝、毛霉、木霉、枯草芽孢杆菌
培养基：葡萄糖硫酸培养基、PDA培养基。
一、对常见杂菌生长的影响
在添加不同浓度(质量)抑制剂的葡萄糖硫酸培养基中，接入某一供试杂菌，27～29℃培养，隔24h观测1次，重复三次。结果见表1。
表1
注：“-”清亮；“+”微浑浊，“++”浑浊，“+++”浑浊且长菌
从表1可得知，本发明的杂菌抑制剂在0.4％左右含量即可达到较好的抑制效果。
二、对灵芝生长的影响
在添加不同浓度抑制剂的葡萄糖硫酸培养基中，接种灵芝食用菌，27～29℃和120次/min振荡培养，隔24h观测1次，重复三次。结果见表2。
表2
注：“-”菌丝体生长良好、增多；“+”菌丝体无明显变化，“++”菌丝体完全萎缩、沉底。
从表2可得，本发明的中药杂菌抑制剂对灵芝的生长几乎没有不良影响，而化学抑制剂即使在较低浓度下，也会严重影响灵芝的生长。
三、对灵芝及杂菌混合影响
在添加不同浓度抑制剂的PDA培养基中，无菌操作接种灵芝食用菌和三种受试杂菌，27～29℃和120次/min振荡培养，隔24h观测1次，重复三次。总体结果见表3。
表3
注：“-”菌丝体生长良好、增多；“+”菌丝体无明显变化，“++”菌丝体完全萎缩、沉底。
从表3可得，本发明的中药杂菌抑制剂对灵芝的生长几乎没有不良影响，且能够
有效抑制杂菌的生长，显示出优异的选择性。而化学抑制剂在不影响灵芝生长的情况下对杂菌也没有影响。
尽管上述实施例已对本发明的技术方案进行了详细地描述，但是本发明的技术方案并不限于以上实施例，在不脱离本发明的思想和宗旨的情况下，对本发明的技术方案所做的任何改动都将落入本发明的权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物10-20份、连翘提取物5-10份、薄荷提取物6-12份、木鳖子提取物5-20份、大蒜提取物10-20份、牛蒡子提取物5-16份、芦根提取物2-8份。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物12-18份、连翘提取物6-9份、薄荷提取物8-10份、木鳖子提取物6-18份、大蒜提取物12-18份、牛蒡子提取物8-12份、芦根提取物3-5份。
3.根据权利要求1所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述杂菌抑制剂的质量份组成如下：金银花提取物15份、连翘提取物8份、薄荷提取物10份、木鳖子提取物12份、大蒜提取物15份、牛蒡子提取物10份、芦根提取物5份。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述金银花提取物采用以下方法制得：将金银花放置于乙醇溶剂中回流2-3次得到乙醇提取液，然后将乙醇提取液除去乙醇得到提取物干膏；其中金银花与乙醇的质量比为1:8-12，乙醇选用体积浓度为65-75％的乙醇。
5.根据权利要求4所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述金银花与乙醇的质量比为1:10.5，乙醇选用75％的乙醇。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述木鳖子提取提取物采用以下方法制得：取木鳖子药材，粉碎，加石油醚萃取数次至颜色变浅，收集提取液，残渣除去石油醚后再向残渣中加入0.2％的盐酸，超声提取3次，合并酸液，旋转除去酸水后用氨水调节至pH＝10，滤液再用正丁醇提取，浓缩得到提取物干膏。
7.根据权利要求6所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于：每次石油醚用量为木鳖子药材的3-5倍，每次提取时间30-45min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1-2倍，提取3-5次，每次提取时间30-45min。
8.根据权利要求7所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于：每次石油醚用量为木鳖子药材的4倍，每次提取时间30min，正丁醇的用量为木鳖子质量的1.5倍，提取4次，每次提取时间30min。
9.根据权利要求1所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于，所述大蒜提取物采用超声波辅助提取法制得：溶剂为75％的乙醇，料液比为1:2-6；提取时间为60min，工作间歇时间2s:1s，搅拌转速500r/min，超声功率为1000w。
10.根据权利要求9所述的一种灵芝菌丝体发酵的杂菌抑制剂，其特征在于：所述料液比为1:4。
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