CN104886152B - 一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及农业病虫害防治技术领域，尤其涉及一种防治茴香薄翅野螟的生物防控药剂、制备方法及其使用方法。该生物防控药剂的有效活性成分为冰核活性细菌，冰核活性细菌含量占总重量的1～90％，冰核活性细菌为丁香假单胞菌(Pseudomonassyringae)和欧文氏菌(Erwiniapyrifoliae)中的任意一种或二者的混合物；冰核活性细菌中丁香假单胞菌为0.1～99.9wt％，欧文氏菌为0.1～99.9wt％；冰核活性细菌中添加或不添加助剂而制成乳油、微乳剂、水乳剂、水剂、水悬浮剂、油剂、油悬剂、微囊悬浮剂或水分散粒剂。利用冰核活性细菌提高茴香薄翅野螟越冬幼虫过冷点，使其在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤，减少其下一年虫源，实现茴香薄翅野螟无公害、低毒、环保的防治目的，达到防治效果。

Description

一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂应用

技术领域

本发明涉及农业病虫害防治技术领域，尤其涉及一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂应用、制备方法及其使用方法。

背景技术

茴香薄翅野螟(Evergestisextimalis Scopli)，属鳞翅目螟蛾科(Lepidoptera，Pyralidida)。又名油菜角野螟，茴香螟、油菜螟，其国内主要分布于青海、甘肃、宁夏、内蒙和黑龙江等北方地区，国外分布于朝鲜、日本、美国及西北利亚等地。主要危害茴香、甜菜、白菜、油菜、荠菜、萝卜、甘蓝、芥菜等植物。在春油菜上主要以幼虫钻蛀角果，食籽粒的方式危害。近几年，角野螟的危害呈“以青海省海东油菜种植区为中心，由低海拔向高海拔扩散蔓延”的态势，其危害范围不断扩大，严重威胁青海春油菜生产。

现有技术病虫害的控制主要依靠的是化学农药防治，其药效低，残毒期长。且由于大量施用化学农药，空气、水源、土壤和食物受到了污染，毒物积累在家畜和人体当中引起中毒等。而且，化学农药的大量投入和长期使用带来了许多问题，如害虫、病原菌产生抗药性，农产品中产生残毒，由于生物富集作用而使以这些农作物为食的动物体内残毒加大，影响作物的无公害绿色化生产。

生物农药具有对人畜安全，无毒害，不污染环境，只杀害虫，不杀害虫天敌，也不易使防治对象产生抗性等优点，是发展绿色农业的唯一选择。近些年来，生物农药的发展已逐渐形成规模，而且推广的速度越来越快。

一般地，过冷却点是昆虫耐寒性的主要判断指标。据发明人研究茴香薄翅野螟的耐寒性，发现其幼虫过冷却点在整个越冬期内的变化显著随着气温的降低而降低，升高而升高，表明其过冷却能力可以适应当地冬季的低温胁迫，茴香薄翅野螟有一定的耐寒性。冰核活性细菌通过降低植物、昆虫及其他生物的过冷却点，而实现其干扰生物的耐寒性的目的。

发明内容

本发明的目的是利用冰核活性细菌提高茴香薄翅野螟越冬幼虫过冷点，使其在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤，减少其下一年虫源，实现茴香薄翅野螟无公害、低毒、环保的防治目的，达到防治效果。

本发明目的通过以下技术方案得以实现。

一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂应用，其有效活性成分为冰核活性细菌，所述的冰核活性细菌的含量占总重量的1～90％，所述的冰核活性细菌生物防控药剂用于茴香薄翅野螟幼虫的防治；所述的冰核活性细菌为Pseudomonas syringae和Erwiniapyrifoliae二者的混合物或Erwinia pyrifoliae。

进一步的，所述的冰核活性细菌中Pseudomonas syringae为0.1～99.9wt％，Erwinia pyrifoliae为0.1～99.9wt％。

一种茴香薄翅野螟幼虫生物防控药剂中的冰核活性细菌通过以下步骤制得：步骤一，培养基配制：培养基组分为，蛋白胨8～14g；牛肉浸取物2～6g；氯化钠3～10g；蒸馏水1.0L；pH＝6.0～8.0，灭菌，冷却备用；步骤二，用无菌吸管吸取0.5～1mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的丁香假单胞菌或欧文氏菌中任意一种或二者的混合的菌体悬浮状溶解；步骤三，冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于50～200mL培养基中，在相对湿度60～80％、27～30℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌。

进一步的，冰核活性细菌中添加或不添加助剂而制成乳油、微乳剂、水乳剂、水剂、水悬浮剂、油剂、油悬剂、微囊悬浮剂或水分散粒剂。

本发明还提供一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂应用方法，包括以下步骤：步骤一，按药剂与水体积比1∶150～250配制药剂溶液；

步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕；茴香薄翅野螟虫害严重时，可翻耕后再次喷洒药剂。

上述生物防控药剂的施用效果：

表1对茴香薄翅野螟过冷却点(℃)的影响

表2茴香薄翅野螟死亡率(％)的变化

从表1可以看出，经生物防控药剂的处理，越冬幼虫过冷却点较对照约提高1～4℃。说明生物防控药剂能明显提高茴香薄翅野螟越冬幼虫的过冷却点。另外，丁香假单胞菌处理后较欧文氏菌处理对冷却点影响明显。尤其是青海省一年中最冷的1、2月份间，丁香假单胞菌处理对冷却点影响最明显。

从表2可以看出，经生物防控药剂的处理，越冬幼虫死亡率较对照高1～28％，所以，冰核活性细菌处理后能明显提高茴香薄翅野螟越冬幼虫的死亡率。其中1、2、3月份，丁香假单胞菌处理对其死亡率影响最明显。

综上，生物防控药剂能明显提高茴香薄翅野螟越冬幼虫的过冷却点和死亡率。因此，利用生物防控药剂防控茴香薄翅野螟，在生产实践中有实际意义。

本发明一种茴香薄翅野螟幼虫生物防控药剂、制备方法及其使用方法，方法简单，制备得到的生物防控药剂能够有效的杀灭茴香薄翅野螟幼虫，不产生抗药性，而且对农作物、家禽、家畜和人都无毒无害无副作用，无污染。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

(一)一种茴香薄翅野螟幼虫生物防控药剂有效活性成分——冰核活性细菌制备方法

实施例1

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨8g；牛肉浸取物2g；氯化钠3g；蒸馏水1.0L；pH＝6.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取1mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的丁香假单胞菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于50mL培养基中，在相对湿度60％、27℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——丁香假单胞菌。

实施例2

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨8g；牛肉浸取物2g；氯化钠3g；蒸馏水1.0L；pH＝6.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取1mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的欧文氏菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于50mL培养基中，在相对湿度60％、27℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——欧文氏菌。

实施例3

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨14g；牛肉浸取物6g；氯化钠10g；蒸馏水1.0L；pH＝8.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取0.5mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的丁香假单胞菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于200mL培养基中，在相对湿度80％、30℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——丁香假单胞菌。

实施例4

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨14g；牛肉浸取物6g；氯化钠10g；蒸馏水1.0L；pH＝8.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取0.5mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的欧文氏菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于200mL培养基中，在相对湿度80％、30℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——欧文氏菌。

实施例5

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨11g；牛肉浸取物4g；氯化钠6g；蒸馏水1.0L；pH＝7.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取0.7mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的丁香假单胞菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于125mL培养基中，在相对湿度70％、27.5℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——丁香假单胞菌。

实施例6

培养基配制：培养基组分为，蛋白胨11g；牛肉浸取物4g；氯化钠6g；蒸馏水1.0L；pH＝7.0，灭菌，冷却备用；

用无菌吸管吸取0.7mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的欧文氏菌菌体悬浮状溶解；

冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于125mL培养基中，在相对湿度70％、27.5℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌——欧文氏菌。

(二)一种茴香薄翅野螟幼虫生物防控药剂制备方法

(1)微乳剂

实施例7

丁香假单胞菌冰核活性细菌40wt％、蓖麻油聚氧乙烯醚10wt％和丙二醇3wt％，加水补足至100％，制得微乳剂。

实施例8

欧文氏菌冰核活性细菌40wt％、蓖麻油聚氧乙烯醚10wt％和丙二醇3wt％，加水补足至100％，制得微乳剂。

实施例9

由0.1wt％的丁香假单胞菌和99.9wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、蓖麻油聚氧乙烯醚10wt％和丙二醇3wt％，加水补足至100％，制得微乳剂。

实施例10

由50wt％的丁香假单胞菌和50wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、蓖麻油聚氧乙烯醚10wt％和丙二醇3wt％，加水补足至100％，制得微乳剂。

实施例11

由99.9wt％的丁香假单胞菌和0.1wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、蓖麻油聚氧乙烯醚10wt％和丙二醇3wt％，加水补足至100％，制得微乳剂。

(2)水乳剂

实施例12

丁香假单胞菌冰核活性细菌35wt％、脂肪酸甲酯25wt％、正丁醇5wt％和黄原胶5wt％，加水补足至100％，制得水乳剂。

实施例13

欧文氏菌冰核活性细菌35wt％、脂肪酸甲酯25wt％、正丁醇5wt％和黄原胶5wt％，加水补足至100％，制得水乳剂。

实施例14

由0.1wt％的丁香假单胞菌和99.9wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌35wt％、脂肪酸甲酯25wt％、正丁醇5wt％和黄原胶5wt％，加水补足至100％，制得水乳剂。

实施例15

由15wt％的丁香假单胞菌和85wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌35wt％、脂肪酸甲酯25wt％、正丁醇5wt％和黄原胶5wt％，加水补足至100％，制得水乳剂。

实施例16

由99.9wt％的丁香假单胞菌和0.1wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌35wt％、脂肪酸甲酯25wt％、正丁醇5wt％和黄原胶5wt％，加水补足至100％，制得水乳剂。

(3)水悬浮剂

实施例17

丁香假单胞菌冰核活性细菌40wt％、皂角粉3wt％、黄原胶2wt％，加水补足至100％，制得水悬浮剂。

实施例18

欧文氏菌40wt％、皂角粉3wt％、黄原胶2wt％，加水补足至100％，制得水悬浮剂。

实施例19

由0.1wt％的丁香假单胞菌和99.9wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、皂角粉3wt％、黄原胶2wt％，加水补足至100％，制得水悬浮剂。

实施例20

由26wt％的丁香假单胞菌和74wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、皂角粉3wt％、黄原胶2wt％，加水补足至100％，制得水悬浮剂。

实施例21

由99.9wt％的丁香假单胞菌和0.1wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌40wt％、皂角粉3wt％、黄原胶2wt％，加水补足至100％，制得水悬浮剂。

(4)水分散粒剂

实施例22

丁香假单胞菌冰核活性细菌70wt％、十二烷基磺酸钠4wt％、羧甲基淀粉钠6wt％，改性淀粉20wt％，混合，制粒，制得水分散粒剂。

实施例23

欧文氏菌冰核活性细菌70wt％、十二烷基磺酸钠4wt％、羧甲基淀粉钠6wt％，改性淀粉20wt％，混合，制粒，制得水分散粒剂。

实施例24

由0.1wt％的丁香假单胞菌和99.9wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌70wt％、十二烷基磺酸钠4wt％、羧甲基淀粉钠6wt％，改性淀粉20wt％，混合，制粒，制得水分散粒剂。

实施例25

由80wt％的丁香假单胞菌和20wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌70wt％、十二烷基磺酸钠4wt％、羧甲基淀粉钠6wt％，改性淀粉20wt％，混合，制粒，制得水分散粒剂。

实施例26

由99.9wt％的丁香假单胞菌和0.1wt％的欧文氏菌混合而成的冰核活性细菌70wt％、十二烷基磺酸钠4wt％、羧甲基淀粉钠6wt％，改性淀粉20wt％，混合，制粒，制得水分散粒剂。

(三)一种茴香薄翅野螟幼虫生物防控药剂使用方法

实施例27

一种茴香薄翅野螟越冬幼虫的生物防控药剂的使用方法，包括以下步骤：步骤一，按微乳剂与水体积比1∶180配制药剂溶液；步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕。

实施例28

一种茴香薄翅野螟越冬幼虫的生物防控药剂的使用方法，其包括以下步骤：步骤一，按水乳剂与水体积比1∶150配制药剂溶液；步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕；步骤三，翻耕后再次喷洒药剂。

实施例29

一种茴香薄翅野螟越冬幼虫的生物防控药剂的使用方法，其包括以下步骤：步骤一，按水悬浮剂与水体积比1∶180配制药剂溶液；步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕；步骤三，翻耕后再次喷洒药剂。

实施例30

一种茴香薄翅野螟越冬幼虫的生物防控药剂的使用方法，其包括以下步骤：步骤一，按水分散粒剂与水体积比1∶250配制药剂溶液；步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕。

综上，本发明的生物防控药剂能提高茴香薄翅野螟越冬幼虫的过冷却点和死亡率，在生产实践中有实际意义。本发明的药剂、制备方法及其使用方法，制备方法简单，能够有效的杀灭茴香薄翅野螟幼虫，不产生抗药性，而且对农作物、家禽、家畜和人都无毒无害无副作用，无污染。

Claims (5)

1.一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂的 应用，其有效活性成分为冰核活性细菌，所述的冰核活性细菌的含量占总重量的1～90％，其特征在于：

所述的冰核活性细菌生物防控药剂用于茴香薄翅野螟幼虫的防治；

所述的冰核活性细菌为Pseudomonas syringae和Erwinia pyrifoliae二者的混合物或Erwinia pyrifoliae。

2.根据权利要求1所述的一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂的 应用，其特征在于：所述的冰核活性细菌中Pseudomonas syringae为0.1～99.9wt％，Erwinia pyrifoliae为0.1～99.9wt％。

3.根据权利要求1所述的一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂的 应用，其特征在于：所述的冰核活性细菌通过以下步骤制得：

步骤一，培养基配制：培养基组分为，蛋白胨8～14g；牛肉浸取物2～6g；氯化钠3～10g；蒸馏水1.0L；pH＝6.0～8.0，灭菌，冷却备用；

步骤二，用无菌吸管吸取0.5～1mL的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使安瓿瓶内的丁香假单胞菌或欧文氏菌中任意一种或二者的混合的菌体悬浮状溶解；

步骤三，冰核活性细菌培养：吸取菌悬液，移植于50～200mL培养基中，在相对湿度60～80％、27～30℃下培养至对数生长期，干燥即得冰核活性细菌。

4.根据权利要求1所述的一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂的 应用，其特征在于：冰核活性细菌中添加或不添加助剂而制成乳油、微乳剂、水乳剂、水剂、水悬浮剂、油剂、油悬剂、微囊悬浮剂或水分散粒剂。

5.一种含有冰核活性细菌的生物防控药剂的 应用方法，其特征在于：权利要求1～4任意一项所述的生物防控药剂的使用方法包括以下步骤：

步骤一，按药剂与水体积比1∶150～250配制药剂溶液；

步骤二，将配备好的药剂溶液喷洒于农田，翻耕；茴香薄翅野螟虫害严重时，可翻耕后再次喷洒药剂。