CN107372613A - 一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法 - Google Patents

一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，其特征在于，步骤(一)，发酵冰核活性细菌；其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物。本发明发酵得到了大量的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌，能够有效防控农业害虫的危害，特别是在越冬期间对于害虫幼虫具有高效的灭杀功能。本发明降低害虫幼虫的过冷点，使害虫幼虫在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤。本发明方法简单，使用后不产生抗药性，无污染，而且长期有效。

Description

一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法
技术领域
本发明涉及农业作物防控虫害领域，具体涉及一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法。
背景技术
农作物虫害是影响作物增产增收的重要的限制因素。例如，油菜螟危害茴香、甜菜、白菜、油菜、荠菜、萝卜、甘蓝、芥菜等植物。
对于病虫害的防治手段，现有技术一般通过喷洒化学农药的方式，这种方式存在显著的缺陷，虽然短期药效高，但是化学农药的残毒期长，长期使用后害虫产生抗药性，防治病虫害的效果大打折扣。
而且，化学农药的大量投入和长期使用带来了许多问题，由于大量施用化学农药，空气、水源、土壤和食物受到了污染，毒物积累在家畜和人体当中引起中毒等。而且，由于生物富集作用而使以这些农作物为食的动物体内残毒加大，影响整条生物链的安全。
因此开发一种安全、高效、无污染的一种防控虫害方法尤为重要。
本领域中，过冷却点是害虫耐寒性的主要判断指标。害虫幼虫过冷却点在整个越冬期内的变化显著随着气温的降低而降低，升高而升高，表明其过冷却能力可以适应当地冬李的低温胁迫，害虫幼虫一般具备一定的耐寒性。冰核活性细菌能够通过降低害虫的过冷却点，而实现干扰害虫的耐寒性的目的。但是，现有技术中相关的报道非常少，仅有的冰核活性细菌防治害虫的方案仅能对单一的害虫起到作用，不能推广使用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提出一种防控虫害的冰核活性细菌组合物；降低害虫幼虫的过冷点，使害虫幼虫在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤，减少其下一年虫源，实现安全、高效、无污染的防治虫害的效果。
本发明的技术方案如下。
一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖12-20g/L，蛋白胨5-9g/L，牛肉浸取物2-7g/L，土豆粉5-10g/L，玉米粉1-10g/L，MgSO4·7H2O 0.01-0.1g/L，K2HPO4 0.01-0.3g/L，NaCl 0.01-0.03g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵5-12天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；
其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶1-3复配而成。
优选的，所述的液体培养基组分为：葡萄糖15g/L，蛋白胨6g/L，牛肉浸取物6g/L，土豆粉6g/L，玉米粉8g/L，MgSO4·7H2O 0.02g/L，K2HPO4 0.03g/L，NaCl 0.02g/L。
优选的，所述的发酵时间为10天。
优选的，所述的月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶1复配而成。
本发明的另一个方面请求保护上述一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法制备得到的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物。
本发明进一步请求保护一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的应用，将所述的组合物与乳化剂、蒸馏水按照质量比1-2∶0.2-0.5∶100-300混合均匀，喷洒于农田后翻耕。
优选的，所述的乳化剂为吐温80。
本发明取得了显著的进步。
本发明中，所述的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌均为市售产品，通过商业途径购买得到。本发明针对现有技术中杀害虫存在污染等问题，创造性的选取了丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌进行发酵，并通过发酵的方式产生了大量的冰核活性细菌；本发明的冰核活性细菌组合物能够通过降低害虫的过冷却点，而实现干扰害虫的耐寒性的目的，灭杀害虫种类多，几乎涵盖了所有的农业土壤害虫，在越冬期间对于害虫幼虫的灭杀率在80％以上，产品高效，无需再使用额外的杀虫剂，且本发明的产品有效期长，一次施用，可以3-5年(理论值)仍然有效。
本发明发酵得到了大量的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌，之后与复配表面活性剂混合，本发明选定的特定的表面活性剂使得上述菌种相互分散隔离，避免之间的竞争关系，保护了菌种，而起上述的表面活性剂在喷洒时，能够很好的起到分散菌种的作用，使得喷洒均匀，从而提高了杀害虫幼虫的效果。
本发明制备得到的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物，能够有效防控农业害虫的危害，特别是在越冬期间对于害虫幼虫具有高效的灭杀功能。本发明降低害虫幼虫的过冷点，使害虫幼虫在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤，减少其下一年虫源，实现安全、高效、无污染的防治虫害的效果。本发明方法简单，使用后不产生抗药性，无污染，而且长期有效。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明的技术方案进行进一步的详细说明。
实施例1
一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖20g/L，蛋白胨9g/L，牛肉浸取物7g/L，土豆粉10g/L，玉米粉10g/L，MgSO4·7H2O 0.1g/L，K2HPO4 0.3g/L，NaCl 0.03g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵10天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶1复配而成。
实施例2
一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖12g/L，蛋白胨5g/L，牛肉浸取物2g/L，土豆粉5g/L，玉米粉1g/L，MgSO4·7H2O 0.01g/L，K2HPO4 0.01g/L，NaCl 0.01g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵12天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；
其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶3复配而成。
实施例3
一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖15g/L，蛋白胨6g/L，牛肉浸取物6g/L，土豆粉6g/L，玉米粉8g/L，MgSO4·7H2O 0.02g/L，K2HPO4 0.03g/L，NaCl 0.02g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵6天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；
其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶2复配而成。
实施例4
一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖15g/L，蛋白胨6g/L，牛肉浸取物6g/L，土豆粉6g/L，玉米粉8g/L，MgSO4·7H2O 0.02g/L，K2HPO4 0.03g/L，NaCl 0.02g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌、以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵12天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；
其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶2复配而成。
将实施例1-4的防控虫害的冰核活性细菌组合物用于与乳化剂吐温80、蒸馏水按照质量比1-2∶0.2-0.5∶100-300混合均匀，喷洒于农田后翻耕。
实施例1-4防控虫害的冰核活性细菌组合物的能够有效防控农业害虫的危害，特别是在越冬期间对于害虫幼虫具有高效的灭杀功能，降低害虫幼虫的过冷点，使害虫幼虫在越冬期间，于相对较高的温度下冻死或冻伤，减少其下一年虫源，实现安全、高效、无污染的防治虫害的效果。
以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换或变型，因此所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要求所限定。

Claims (7)

1.一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，其特征在于，包括，
步骤(一)，发酵冰核活性细菌；
其中，所述的冰核活性细菌包括丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌以及黄单胞菌；
发酵方法是：
步骤I，液体培养基配制：培养基组分为：葡萄糖12-20g/L，蛋白胨5-9g/L，牛肉浸取物2-7g/L，土豆粉5-10g/L，玉米粉1-10g/L，MgSO4·7H2O 0.01-0.1g/L，K2HPO4 0.01-0.3g/L，NaCl 0.01-0.03g/L；
步骤II，将部分步骤I的液体培养基滴入培养瓶中，振荡，使培养瓶内的丁香假单胞菌、菠萝欧文氏菌以及黄单胞菌与液体培养基充分混合；
步骤III，使用紫外线照射发酵反应器，之后使用氮气吹扫反应器，提供无菌环境，然后将步骤II处理的物料以及步骤I剩余的液体培养基一同加入到发酵反应器中，发酵5-12天，分离后即得冰核活性细菌；
步骤(二)，所得到的冰核活性细菌与复合表面活性剂混合均匀，即得所述的防控虫害的冰核活性细菌组合物；
其中，所述的复合表面活性剂为月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶1-3复配而成。
2.根据权利要求1所述的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，其特征在于，所述的液体培养基组分为：葡萄糖15g/L，蛋白胨6g/L，牛肉浸取物6g/L，土豆粉6g/L，玉米粉8g/L，MgSO4·7H2O 0.02g/L，K2HPO4 0.03g/L，NaCl 0.02g/L。
3.根据权利要求1所述的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，其特征在于，所述的发酵时间为10天。
4.根据权利要求1所述的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的制备方法，其特征在于，所述的月桂醇硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵按照质量比1∶1复配而成。
5.一种防控虫害的冰核活性细菌组合物，其特征在于，其由权利要求1-4任意一项所述的制备方法得到。
6.权利要求5所述的一种防控虫害的冰核活性细菌组合物的应用，其特征在于，将所述的组合物与乳化剂、蒸馏水按照质量比1-2∶0.2-0.5∶100-300混合均匀，喷洒于农田后翻耕。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的乳化剂为吐温80。
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