CN104878071A - 多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其步骤为：在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材；将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成的供试液；用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜后，取供试液10ml，经薄膜过滤器过滤；取出滤膜，滤膜的菌面朝上贴于培养基；取供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中；将贴有滤膜的培养基和接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于培养箱中，观察结果。本发明建立的微生物限度检测方法，提高了多层共挤输液用膜的质量标准，填补了其微生物限度检测的空白。
Description
技术领域
本发明属于微生物检测技术领域，具体地说，涉及一种对于多层共挤输液用膜的微生物限度的检测方法。
背景技术
多层共挤输液用膜主要用于输液软袋。因输液产品是一种安全性要求极高的品种，多层共挤输液用膜作为生产不洗即用药包材，从安全角度出发，国家食品药品监督管理局在YBB00102005三层共挤输液用膜(Ⅰ)、袋和YBB00102005五层共挤输液用膜(Ⅰ)、袋标准中明确了控制其细菌内毒素项目的检测，但没有对微生物限度进行控制。对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测，有利于产品生产期间生物污染程度的控制。
目前，药品包装用的复合膜，其微生物限度的检测方法采用擦拭法，该擦拭法的步骤为：无菌棉签沾无菌生理盐水在复合膜内层面上往返擦抹5次，再换棉签再擦抹5次，每个位置用2支棉签共擦抹10次，共100cm2；对剪短后的棉签进行供试液的制备，用于检测。整个操作环节繁琐且不易操作，存有二次污染的风险，对实验结果有影响。因此，在进行多层共挤输液用膜的微生物限度检测时，需要研究一种有效、科学、合理且操作性强的检测方法，在对产品取样和制备环节减少操作对检测结果的影响，使检测结果真实、有效、可靠。
发明内容
本发明针对现有多层共挤输液用膜无微生物限度检查项目的控制、传统的检测方法易造成二次污染等上述不足，提供了一种简单、易操作、检测结果真实有效的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法。
本发明的技术方案是：一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其具体检测步骤为：
(1)在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材，相当于单层面积100cm2。
(2)将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，剪成5cm×0.5cm的小块，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成供试液。
(3)为了使滤膜平整，先用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜，再取供试液10ml，经薄膜过滤器过滤。
(4)取出过滤器中的滤膜，菌面朝上贴于培养基。
(5)取步骤(2)中的供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中，用于大肠埃希菌检测。
(6)将贴有滤膜的培养基和接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于培养箱中，观察结果。
(7)步骤(6)中大豆酪蛋白消化肉汁培养液经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如培养液出现浑浊，按步骤(8)继续进行试验。
(8)取步骤(7)中的浑浊培养液1ml接种至100ml麦康凯肉汁培养基中，经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如出现浑浊，按步骤(9)继续进行试验。
(9)挑取步骤(8)中的浑浊培养液划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，培养后观察结果，如有大肠埃希菌典型菌落或通过鉴定确定为大肠埃希菌，则为检出。
作为优选，步骤(3)中，10ml供试液取两次，分别经薄膜过滤器过滤；步骤(4)中，取其中一次滤膜，将该滤膜的菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数；取另一次滤膜，将滤膜的菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。
进一步的，步骤(6)中，将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天；将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为20-25℃的培养箱中培养5天。
进一步的，步骤(4)中，滤膜的菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数。
进一步的，步骤(6)中，将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天。
进一步的，步骤(4)中，滤膜的菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。
进一步的，步骤(6)中，将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为20-25℃的培养箱中培养5天。
进一步的，步骤(5)中，将接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于温度为30-35℃的培养箱中培养1天。
进一步的，步骤(8)中，将接种后的麦康凯肉汁培养基置于温度为42-44℃的培养箱中培养2天。
进一步的，步骤(9)中，将划线接种于麦康凯肉汁培养基平板置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天。
本发明的有益效果是：
(1)本发明建立的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，提高了多层共挤输液用膜的质量标准，填补了多层共挤输液用膜微生物限度检测的空白。
(2)本发明采用薄膜过滤法，与现有的擦拭法不同，本发明取样简单，便于操作，取样过程避免了操作过程对浸提液的二次污染，提高了微生物的检出率，更好地保证了实验结果；取样、制备供试液、过滤，在操作上更容易实施，降低了实验物品成本及操作次数，优化了实验过程，提高了实验效率，实验结果准确可靠。
(3)本发明公开的检测方法实现了多层共挤输液用膜微生物限度的控制，在供试液制备及培养过程中，缩短了取样时间，减少污染的几率，是检验污染了由原来的15％-20％降低至5％以下，且采用大豆蛋白消化琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，使检出率提高了1％-5％。
具体实施方式
以下对本发明作进一步说明。
实施例一：
一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其具体检测步骤为：
(1)在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材，相当于单层面积100cm2，。
(2)将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，剪成5cm×0.5cm的小块，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成供试液。
(3)为了使滤膜平整，先用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜，再取取供试液10ml两次，分别经薄膜过滤器过滤。
(4)取其中一次滤膜，将该滤膜的菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数；取另一次滤膜，将滤膜的菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。
(5)取步骤(2)中的供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中，用于大肠埃希菌检测。
(6)将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为33℃的培养箱中培养3天，将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为22℃的培养箱中培养5天，观察结果；将接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于温度为33℃的培养箱中培养1天，观察结果。
(7)接种后的大豆酪蛋白消化肉汁培养液经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如培养液浑浊，按步骤(8)继续进行试验。
(8)取步骤(7)中的浑浊培养液1ml接种至100ml麦康凯肉汁培养基中，置于温度为43℃的培养箱中培养2天，经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如出现浑浊，按步骤(9)继续进行试验。
(9)挑取步骤(8)中的浑浊培养液划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，置于温度为32℃的培养箱中培养3天，观察结果，如有大肠埃希菌典型菌落或通过鉴定确定为大肠埃希菌，则为检出。
本实施例中采用的方法与采用现有的擦拭法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测的实验结果对比如表1所示。
表1
由表1可知，本实施例采用的方法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测，与现有的擦拭方法相比，其取样用时短，该法取样操作仅一次，擦拭法取样操作10次，后者操作不当极易污染，污染率是前者的4倍。本发明采用的方法操作过程简捷，优化了实验步骤。本发明方法采用直接浸提制得供试液，降低了操作过程对取样面积的二次污染，提高微生物的检出率，可更好保证实验结果；在操作上更容易实施，比原来的操作方法降低实验物品成本及减少实验人员操作，优化了实验过程保证了实验结果的准确性可靠性。与传统检测方法相比，本发明公开的检测方法实现了直接取得浸提液，避免了多次擦拭与外界多次接触，在防止微生物污染上起到了很大的作用。同时在操作时间上，缩短了很大的实验操作时间，大大提高了该供试品微生物限度检查的检验效率，使检验污染率由原来的16％降低到4％。
实施例二：
一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其具体检测步骤为：
(1)在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材，相当于单层面积100cm2。。
(2)将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，剪成5cm×0.5cm的小块，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成供试液。
(3)为了使滤膜平整，先用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜，再取供试液10ml，经薄膜过滤器过滤。
(4)取出过滤器中的滤膜，菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数。
(5)取步骤(2)中的供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中，用于大肠埃希菌检测。
(6)将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为33℃的培养箱中培养3天，将接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于温度为32℃的培养箱中培养1天，观察结果。
(7)接种后的大豆酪蛋白消化肉汁培养液经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如培养液浑浊，按步骤(8)继续进行试验。
(8)取步骤(7)中的浑浊培养液1ml接种至100ml麦康凯肉汁培养基中，置于温度为43℃的培养箱中培养2天，经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如出现浑浊，按步骤(9)继续进行试验。
(9)挑取步骤(8)中的浑浊培养液划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，置于温度为33℃的培养箱中培养3天，观察结果，如有大肠埃希菌典型菌落或通过鉴定确定为大肠埃希菌，则为检出。
本实施例中采用的方法与采用现有的擦拭法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测的实验结果对比如表2所示。
表2
由表2可知，本实施例采用的方法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测，与现有的擦拭方法相比，其取样用时短，该法取样操作仅一次，擦拭法取样操作10次，后者操作不当极易污染，污染率是前者的4倍。本发明采用的方法操作过程简捷，优化了实验步骤。本发明方法采用直接浸提制得供试液，降低了操作过程对取样面积的二次污染，提高微生物的检出率，可更好保证实验结果；在操作上更容易实施，比原来的操作方法降低实验物品成本及减少实验人员操作，优化了实验过程，保证了实验结果的准确性可靠性。与传统检测方法相比，本发明公开的检测方法实现了直接取得浸提液，避免了多次擦拭与外界多次接触，在防止微生物污染上起到了很大的作用。同时在操作时间上，缩短了很大的实验操作时间，大大提高了该供试品微生物限度检查的检验效率，使检验污染率由原来的20％降低到5％。
实施例三：
一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其具体检测步骤为：
(1)在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材，相当于单层面积100cm2。
(2)将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，剪成5cm×0.5cm的小块，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成供试液。
(3)为了使滤膜平整，先用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜，再取供试液10ml，经薄膜过滤器过滤。
(4)取出过滤器中的滤膜，菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。。
(5)取步骤(2)中的供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中，用于大肠埃希菌检测。
(6)将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为23℃的培养箱中培养5天，观察结果；将接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于温度为32℃的培养箱中培养1天，观察结果。
(7)接种后的大豆酪蛋白消化肉汁培养液经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如培养液浑浊，按步骤(8)继续进行试验。
(8)取步骤(7)中的浑浊培养液1ml接种至100ml麦康凯肉汁培养基中，置于温度为43℃的培养箱中培养2天，经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如出现浑浊，按步骤(9)继续进行试验。
(9)挑取步骤(8)中的浑浊培养液划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，置于温度为33℃的培养箱中培养3天，观察结果，如有大肠埃希菌典型菌落或通过鉴定确定为大肠埃希菌，则为检出。
本实施例中采用的方法与采用现有的擦拭法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测的实验结果对比如表3所示。
表3
由表3可知，本实施例采用的方法对多层共挤输液用膜进行微生物限度检测，与现有的擦拭方法相比，其取样用时短，该法取样操作仅一次，擦拭法取样操作10次，后者操作不当极易污染，污染率是前者的4.5倍。本发明采用的方法操作过程简捷，优化了实验步骤。本发明方法采用直接浸提制得供试液，降低了操作过程对取样面积的二次污染，提高微生物的检出率，可更好保证实验结果；在操作上更容易实施，比原来的操作方法降低实验物品成本及减少实验人员操作，优化了实验过程保证了实验结果的准确性可靠性。与传统检测方法相比，本发明公开的检测方法实现了直接取得浸提液，避免了多次擦拭与外界多次接触，在防止微生物污染上起到了很大的作用。同时在操作时间上，缩短了很大的实验操作时间，大大提高了该供试品微生物限度检查的检验效率，使检验污染率由原来的18％降低到4％。
上述实施例用来解释本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权力要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：其具体检测步骤为：
(1)在无菌环境下，取多层共挤输液用膜，用无菌生理盐水冲洗多层共挤输液用膜外层面至少3次，在中间部位取50cm2的膜材；
(2)将所取的50cm2膜材用无菌剪刀剪碎，剪成5cm×0.5cm小块，置于无菌锥形瓶中，加入pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，制成供试液；
(3)用10ml pH为7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿薄膜过滤器的滤膜后，取供试液10ml，经薄膜过滤器过滤；
(4)取出过滤器中的滤膜，菌面朝上贴于培养基；
(5)取步骤(2)中的供试液10ml接种至100ml大豆酪蛋白消化肉汁中，用于大肠埃希菌检测；
(6)将贴有滤膜的培养基和接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于培养箱中，观察结果；
(7)步骤(6)中大豆酪蛋白消化肉汁培养液经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如培养液出现浑浊，按步骤(8)继续进行试验；
(8)取步骤(7)中的浑浊培养液1ml接种至100ml麦康凯肉汁培养基中，经培养后如澄清，即为未检查大肠埃希菌；如出现浑浊，按步骤(9)继续进行试验；
(9)挑取步骤(8)中的浑浊培养液划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，培养后观察结果。
2.据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(3)中，10ml供试液取两次，分别经薄膜过滤器过滤；步骤(4)中，取其中一次滤膜，将该滤膜的菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数；取另一次滤膜，将滤膜的菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。
3.根据权利要求2所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(6)中，将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天；将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为20-25℃的培养箱中培养5天。
4.根据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(4)中，滤膜的菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼脂培养基，用于总需氧菌计数。
5.根据权利要求4所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(6)中，将贴有滤膜的大豆酪蛋白消化琼脂培养基置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天。
6.根据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(4)中，滤膜的菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于总酵母菌和霉菌计数。
7.根据权利要求6所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(6)中，将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基置于温度为20-25℃的培养箱中培养5天。
8.根据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(6)中，将接种后的大豆酪蛋白消化肉汁置于温度为30-35℃的培养箱中培养1天。
9.根据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(8)中，将接种后的麦康凯肉汁培养基置于温度为42-44℃的培养箱中培养2天。
10.根据权利要求1所述的多层共挤输液用膜的微生物限度检测方法，其特征在于：步骤(9)中，将划线接种于麦康凯肉汁培养基平板置于温度为30-35℃的培养箱中培养3天。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150902 |