CN104873553A - 一种沙棘活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种沙棘活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用，按如下步骤：（1）取烘干或自然晒干的沙棘，粉碎机粉碎；（2）称取沙棘粉末，加入质量分数为50-95%的乙醇回流提取，沙棘和乙醇的料液质量体积（kg/L）比为1:5~1:25，50-70℃，水浴提取1~3h，提取1~2次，得沙棘提取液；（3）将沙棘提取液合并，趁热过滤，离心，收集上层清液，抽滤；（4）将45℃滤液浓缩，用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1kg/L，巴氏灭菌后冷却，4℃密封保存。本发明沙棘活性提取物，具有抑制幽门螺杆菌的作用，是一种天然的、植物源性的活性提取物，可以作为原料或者产品应用于保健食品、药品等方面；制备工艺简单，成本低。
Description
技术领域
本发明属于医药制备技术领域。
背景技术
现代社会生活节奏加快、工作压力大以及饮食习惯不健康，加剧了相关胃肠道疾病的发生率，其中胃癌的发病率和死亡率长期居高不下，极大地威胁着人们的健康。幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）简称Hp，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。幽门螺杆菌感染是慢性胃炎、溃疡以及胃黏膜相关淋巴组织瘤的主要致病因素，特别是越来越多的研究数据表明幽门螺杆菌感染和胃癌发病有很强的相关性。因此，寻找或者研发有效的幽门螺杆菌抑制剂具有很好的应用前景，特别是从天然产物来源资源中筛选功效成分。
沙棘是一种落叶性灌木，耐寒、抗风沙，沙棘是植物和其果实的统称。沙棘是一种药食两用资源，具有较好的止咳化痰、健胃消食、治疗胃溃疡和预防冠状动脉硬化等功效。中国专利CN103421873B公开了一种具有抑菌作用的沙棘籽多肽的制备方法，该多糖对大肠杆菌、沙门氏菌等常见细菌具有良好的抑制作用。中国专利CN102755359B公开了一种具有抑制脂肪酸酶活性的沙棘提取物及其制备方法，中国专利CN102657686B公开了沙棘籽油在制备预防和/或治疗抑郁药物中的应用。但是，有关沙棘及其提取物在抑制幽门螺杆菌方面的研究，尚未见文献报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种沙棘活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用。
本发明通过以下技术方案实现。
本发明所述的一种沙棘活性提取物的制备方法，其特征是按如下步骤。
（1）取一定量烘干或自然晒干的沙棘（果实），经粉碎后待用。
（2）称取步骤（1）所制备得到的沙棘粉末，加入质量分数为50-95%的乙醇回流提取，沙棘和乙醇的料液比为1:5~1:25（kg/L，质量体积比），于50-70℃温度下水浴提取1~3 h，提取次数为1~2次，得沙棘提取液。
（3）将步骤（2）中的提取液合并，趁热过滤，然后于4800 r /m转速下离心15 min，收集上层清液并再次进行抽滤。
（4）将步骤（3）中的滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45℃，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1 kg/L。经巴氏灭菌后冷却，于4℃条件下密封保存，即可获得沙棘活性提取物。
本发明所述的沙棘活性提取物在抑制幽门螺杆菌中的应用。
本发明的优点是：提供了含有沙棘活性提取物的制备方法，沙棘是一种传统的药食两用资源，本发明制备得到的提取物可以作为原料或者产品应用于相关保健食品、药品等方面，有利于沙棘开发和价值提升；制备得到的沙棘提取物具有较好地抑制幽门螺杆菌生长的作用，是一种天然的、植物源的活性提取物；制备工艺简单，成本低，具有广阔的开发前景。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。在不脱离本发明上述思想、方法的情况下，根据本领域普通技术知识和常规手段做出的各种替换方法或变更，均包含在本发明之内。
实施例1。
取一定量烘干或自然晒干的沙棘，经中药粉碎机粉碎后待用。称上述制备的沙棘粉末70 g，加入95%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:10（kg/L，质量体积比），于70℃温度下水浴回流提取2 h，提取次数为2次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800 r /m转速下离心15 min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45℃，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1 kg/L。经巴氏灭菌后冷却，于4℃条件下密封保存，即可获得沙棘活性提取物A。
实施例2。
取一定量烘干或自然晒干的沙棘，经中药粉碎机粉碎后待用。称取上述制备的沙棘粉末20 g，加入60%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:25（kg/L，质量体积比），于50℃温度下水浴回流提取1 h，提取次数为2次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800 r /m转速下离心15 min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45℃，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1 kg/L。经巴氏灭菌后冷却，于4℃条件下密封保存，即可获得沙棘活性提取物B。
实施例3。
取一定量烘干或自然晒干的沙棘，经中药粉碎机粉碎后待用。称取上述制备的沙棘粉末20 g，加入75%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:5（kg/L，质量体积比），于60℃温度下水浴回流提取3 h，提取次数为1次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800 r /m转速下离心15 min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45℃，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1 kg/L。经巴氏灭菌后冷却，于4℃条件下密封保存，即可获得沙棘活性提取物C。
下面结合具体实验说明本方法制备得到的沙棘活性提取物体外抑制幽门螺杆菌的作用。
1、幽门螺杆菌来源。
选择来自门诊胃病患者胃粘膜标本，实验室保存的国际标准菌株ATCC11637。
经电子胃镜检查，取胃窦小弯侧距幽门口约5 cm处胃黏膜组织1块，进行胃黏膜组织幽门螺杆菌（Hp）培养，在Hp培养阳性的患者中，加做药物敏感试验。
2、Hp培养及鉴定。
将胃组织置于灭菌的组织研磨器中研磨成混匀液，用灭菌滴管，吸取组织混匀液，接种于含10%绵羊全血哥伦比亚琼脂平板上，37℃，在5％O2、10％CO2和85％N2的环境中培养4天，观察结果。结果判定标准：革兰染色阴性，氧化酶试验阳性，触酶试验阳性，尿素酶试验阳性，氯化三苯四氮唑试验在斜面培养基上菌落呈现金属光泽，符合以上全部者为Hp阳性。
3、药物作用实验。
选取分离的临床菌株，将菌株进行传代3~4次，扩大培养至实验所需，接种于含10%绵羊全血哥伦比亚琼脂平板上，打孔，加入沙棘乙醇提取物继续培养3天后观察药敏实验结果，测量抑菌圈直径。
4、实验结果。
表1 沙棘活性提取物对幽门螺杆菌体外抑制作用（n=3）
| A | B | C | 25%乙醇对照组 | |
| 抑菌圈大小（mm） | 27.7±3.8 | 23.0±2.8 | 30.0±7.1 | 13.5±2.1 |
实验结论：采用不同乙醇浓度提取得到的沙棘提取物A、B和C，与25%乙醇对照组相比，体外实验中均具有较好的抑制幽门螺杆菌生长的作用。
Claims (2)
1.一种沙棘活性提取物的制备方法，其特征是按如下步骤：
（1）取一定量烘干或自然晒干的沙棘，经粉碎机粉碎后待用；
（2）称取步骤（1）所制备得到的沙棘粉末，加入质量分数为50-95%的乙醇回流提取，沙棘和乙醇的料液质量体积（kg/L）比为1:5~1:25，于50-70℃温度下水浴提取1~3 h，提取次数为1~2次，得沙棘提取液；
（3）将步骤（2）中的提取液合并，趁热过滤，然后于4800 r/m转速下离心15 min，收集上层清液并再次进行抽滤；
（4）将步骤（3）中的滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45℃，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为1 kg/L，经巴氏灭菌后冷却，于4℃条件下密封保存，即可获得沙棘活性提取物。
2.权利要求1所述的沙棘活性提取物在抑制幽门螺杆菌中的应用。
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