CN104857038A - 长果种黄麻种子提取物的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及长果种黄麻种子提取物的制备方法及应用，将长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂；脱脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液对长果种黄麻种子进行回流提取1～3次，每次1～3h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存，该提取物应用于对人膀胱癌细胞增殖的抑制。与现有技术相比，本发明对人膀胱癌细胞株T24的生长抑制更高效，且对正常膀胱上皮细胞影响小，对膀胱癌治疗、我国黄麻种质资源的综合利用及增加麻农收入均具有重要意义。

Description

长果种黄麻种子提取物的制备方法及应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其是涉及一种长果种黄麻种子提取物的制备方法及应用。

背景技术

膀胱癌(Bladder Cancer)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，发病率居世界恶性肿瘤第九位、居我国泌尿系统恶性肿瘤第一位。虽然70-80％的初发膀胱癌为非浸润性(也称为表浅性)，但术后易复发，其复发率高达70％，并有约15％的患者发展为浸润性膀胱癌。目前临床上主要采用经尿道膀胱肿瘤切除术(TUR-BT)后定期膀胱灌注丝裂霉素(MMC)等化疗药物来预防非浸润性膀胱癌的复发与进展，但存在有效率低(仅为30-50％)和毒副作用大等问题。因此，迫切需要开发新的高效低毒的抗膀胱癌药物来提高膀胱癌的化疗效果并降低毒副作用。

从植物中提取的紫杉醇、喜树碱、长春新碱等抗癌药物由于作用机制独特、抗癌疗效显著已成为许多癌症治疗的首选药，约占抗癌药30％的市场份额。因此从植物资源中寻找新型抗癌药或先导化合物，已成为当今癌症治疗研究领域的热点之一。从有毒植物中寻找抗癌新药被视为一条捷径。

长果种黄麻(Corchorus capsularis)属椴树科黄麻属韧皮纤维作物，为一年生草本植物，别名火麻、绿麻、络麻、水络麻、野洋麻、长果黄麻、长蒴黄麻、苦麻叶、牛泥茨、三珠草、天紫苏和麻骨头等。长果种黄麻原产亚洲热带，中国长江以南广泛栽培，其韧皮纤维具有吸湿性能好、散失水分快等特点，主要用于纺织麻袋、粗麻布等。长果种黄麻种子有毒，在民间有被作为治疗腹泻痢疾和疮疖肿毒，具有清热解暑、拔毒消肿的功效。

经文献检索，迄今尚未见有长果种黄麻种子提取物用于抑制膀胱癌细胞增殖及其相关疾病方面的报道。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种疗效更好、且对正常膀胱上皮细胞影响小的长果种黄麻种子提取物的制备方法及应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

长果种黄麻种子提取物的制备方法，采用以下步骤：

(1)将长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂；

(2)脱脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液对长果种黄麻种子进行回流提取1～3次，每次1～3h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存。

粉碎后的长果种黄麻种子在石油醚中浸提脱脂48h。

利用乙醇水溶液在室温下密闭浸泡脱脂后的长果种黄麻种子2h，然后水浴加热至回流温度进行回流，过滤后用旋转蒸发仪浓缩获得浸膏。

所述的乙醇水溶液的体积分数为60-90％。

优选地，采用的乙醇水溶液的体积分数为70-80％。

所述的长果种黄麻种子为野生或栽培长果种黄麻种子。

制备得到长果种黄麻种子提取物可以应用于对人膀胱癌细胞增殖的抑制，采用以下步骤：

(1)处于对数生长期的细胞：将人膀胱癌细胞T24以每孔10000个细胞浓度接种于96孔板中；

(2)过夜贴壁后，以0.1、0.5、1、5和10ug/ml浓度的长果种黄麻种子乙醇提取物给药，并以5、10、50和100ug/ml丝裂霉素为阳性对照，每个处理设6个重复孔，重复实验3次；

(3)在给药24h后采用MTT法检测人膀胱癌T24细胞增殖生长率，并计算IC50值，并与丝裂霉素的结果进行比较，获得长果种黄麻种子提取物对人膀胱癌细胞T24增殖的抑制结果。

所述的人膀胱癌细胞T24购买自中国科学院细胞库。

与现有技术相比，本发明通过体外MTT抗癌活性评价发现，长果种黄麻种子提取物对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用比临床一线药物丝裂霉素更高效，且对正常膀胱上皮细胞影响小。因此长果种黄麻种子提取物能用于制备抗膀胱癌药物，具有良好的开发应用前景。

长果种黄麻种子提取物在制备抗膀胱癌药物中的用途属于首次公开，且长果种黄麻种子乙醇提取物对膀胱癌细胞的生长抑制率比目前临床一线药物丝裂霉素更高效，并对正常膀胱上皮细胞影响小。因此长果种黄麻种子乙醇提取物能用于制备高效低毒的抗膀胱癌药物，具有良好的开发应用前景，对膀胱癌治疗、我国黄麻种质资源的综合利用及增加麻农收入均具有重要意义，在制备过程中采用石油醚浸提脱脂使得生长抑制率有进一步的提高。

附图说明

图1为长果种黄麻种子提取物及丝裂霉素作用T24细胞24h后的IC50值。

图2为5ug/ml长果种黄麻种子提取物及丝裂霉素作用24h后对T24细胞生长的抑制情况。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

制备长果种黄麻种子的乙醇提取物

取100g长果种黄麻种子，粉碎，加500ml的石油醚室温浸提脱脂48h，再用1000ml70％的乙醇水溶液，室温下密闭浸泡2h后，水浴加热到回流，每次回流提取3h，共回流提取2次。收集2次的乙醇提取物，过滤后用旋转蒸发仪浓缩得浸膏。收集浸膏(即为长果种黄麻种子的乙醇提取物)，-20℃保存备用。

实施例2

长果种黄麻种子乙醇提取物对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用实验

处于对数生长期的细胞：人膀胱癌细胞T24(购买自中国科学院细胞库)以每孔10000个细胞浓度接种于96孔板中。

过夜贴壁后，以0.1、0.5、1、5和10ug/ml浓度的长果种黄麻种子乙醇提取物给药，并以5、10、50和100ug/ml丝裂霉素为阳性对照。每个处理设6个重复孔，重复实验3次。

在给药24h后采用MTT法检测人膀胱癌T24细胞增殖生长率，并计算IC50值。

图1为长果种黄麻种子提取物及丝裂霉素作用T24细胞24h后的IC50值，如图所示，作用T24细胞24h后，长果种黄麻种子提取物的IC50(生长半抑制)剂量为1.20ug/ml，只是丝裂霉素14.70ug/ml的8.2％，达到极显著差异。

图2为5ug/ml长果种黄麻种子提取物及丝裂霉素作用24h后对T24细胞生长的抑制情况，如图所示，作用24h后，5ug/ml长果种黄麻种子提取物对T24细胞的生长抑制率为71.56％，是丝裂霉素30.39％的2.35倍，达到极显著差异。以上结果说明长果种黄麻种子提取物的抗膀胱癌活性比目前临床一线药物丝裂霉素更高效，能用于制备抗膀胱癌药物，具有良好的开发应用前景。

实施例3

长果种黄麻种子提取物的制备方法，采用以下步骤：

(1)将野生长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂48h；

(2)脱脂完成后，利用5倍重量，体积分数为90％乙醇水溶液在室温下密闭浸泡脱脂后的长果种黄麻种子2h，然后水浴加热至回流温度进行回流提取1次，提取时间为3h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存。

实施例4

长果种黄麻种子提取物的制备方法，采用以下步骤：

(1)将栽培长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂48h；

(2)脱脂完成后，利用10倍重量，体积分数为60％乙醇水溶液在室温下密闭浸泡脱脂后的长果种黄麻种子2h，然后水浴加热至回流温度进行回流提取1次，提取时间为3h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存。

实施例5

长果种黄麻种子提取物的制备方法，采用以下步骤：

(1)将栽培长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂48h；

(2)脱脂完成后，利用8倍重量，体积分数为80％乙醇水溶液在室温下密闭浸泡脱脂后的长果种黄麻种子2h，然后水浴加热至回流温度进行回流提取2次，提取时间为2h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存。

最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：

(1)将长果种黄麻种子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室温条件下浸提脱脂；

(2)脱脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液对长果种黄麻种子进行回流提取1～3次，每次1～3h，收集所得到的浸膏，即为长果种黄麻种子的乙醇提取物，于-20℃保存。

2.根据权利要求1所述的长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，粉碎后的长果种黄麻种子在石油醚中浸提脱脂48h。

3.根据权利要求1所述的长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，利用乙醇水溶液在室温下密闭浸泡脱脂后的长果种黄麻种子2h，然后水浴加热至回流温度进行回流，过滤后用旋转蒸发仪浓缩获得浸膏。

4.根据权利要求1或3所述的长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液的体积分数为60-90％。

5.根据权利要求1或3所述的长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液的体积分数为70-80％。

6.根据权利要求1所述的长果种黄麻种子提取物的制备方法，其特征在于，所述的长果种黄麻种子为野生或栽培长果种黄麻种子。

7.如权利要求1所述的制备方法制备得到长果种黄麻种子提取物的应用，其特征在于，该提取物应用于对人膀胱癌细胞增殖的抑制。

8.根据权利要求7所述的长果种黄麻种子提取物的应用，其特征在于，采用以下步骤：

(1)处于对数生长期的细胞：将人膀胱癌细胞T24以每孔10000个细胞浓度接种于96孔板中；

(2)过夜贴壁后，以0.1、0.5、1、5和10ug/ml浓度的长果种黄麻种子乙醇提取物给药，并以5、10、50和100ug/ml丝裂霉素为阳性对照，每个处理设6个重复孔，重复实验3次；

(3)在给药24h后采用MTT法检测人膀胱癌T24细胞增殖生长率，并计算IC50值，并与丝裂霉素的结果进行比较，获得长果种黄麻种子提取物对人膀胱癌细胞T24增殖的抑制结果。

9.根据权利要求8所述的长果种黄麻种子提取物的应用，其特征在于，所述的人膀胱癌细胞T24购买自中国科学院细胞库。