CN102657237B - 一种含云芝多糖的抗病毒剂及其配制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含云芝多糖的抗病毒剂，该抗病毒剂由以下原料按重量百分比制成：云芝多糖：5％～7％，表面活性剂：2％～3％，抗冻剂：1％～3％，防腐剂：0.1％～0.5％，稳定剂：1％～3％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。本发明的云芝多糖水剂符合农药制剂质量要求，对黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)具有良好的防治作用，对作物具有促生作用，能够提高作物抗病性；此外，由于其对人畜、环境的高度安全性，是发展高效、绿色、生态农业的理想生物农药。

Description

一种含云芝多糖的抗病毒剂及其配制方法

技术领域

本发明涉及一种植物病毒防治剂及其制备，具体涉及一种含云芝多糖的抗病毒剂及其配制方法，制得的抗病毒剂，能够有效的防止黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)。

背景技术

植物病毒病是农业生产中一类种类繁多、发生普遍、危害严重的病害。其中，黄瓜花叶病毒黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)能侵染千余种单、双子叶植物，可经蚜虫和种子传播，是寄主范围最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一。作物感染CMV后发病流行速度极快，生长发育停滞，严重影响农作物的产量和质量，造成严重的经济损失。

目前，对病毒病害的控制主要通过种植无毒种子、脱毒苗木和繁殖材料，清除感病植株及其传毒介体，加强栽培管理等措施，而至今生产上尚无有效的防治药剂。近20年来，随着天然产物化学、药理学研究的不断深入，对多糖的研究引起国内外学者的极大兴趣。

真菌多糖是指各种真菌的子实体和菌丝体所产生的一类代谢产物，一般由10个以上的单糖通过糖苷键连接而成，具有抗细菌、抗病毒的功能。

云芝多糖作为真菌多糖的一种，具有抑制肿瘤，抗溃疡，抗真菌、霉菌和病毒等多种药理作用。

发明内容

本发明的目在于，提供一种含云芝多糖的抗病毒剂及其配制方法，该抗病毒剂具有无毒、易被降解、对环境无污染的优良特性，是发展高效、绿色、生态农业的理想生物农药。

为了实现上述任务，本发明采用如下的技术解决方案：

一种含云芝多糖的抗病毒剂，其特征在于，该抗病毒剂由以下原料按重量百分比制成：云芝多糖：5％～7％，表面活性剂：2％～3％，抗冻剂：1％～3％，防腐剂：0.1％～0.5％，稳定剂：1％～3％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。

所述的表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类中的其中一种；

所述的抗冻剂为乙二醇或丙二醇；

所述的稳定剂为液体钡锌或液体钙锌；

所述的防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙其中一种。

上述含云芝多糖的抗病毒剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将云芝子实体进行干燥处理，置于高速组织捣碎机中充分捣碎，制成云芝粉，过40目筛；

步骤二，将采过筛后的云芝粉用酶-超声波联用法提取云芝多糖，提取方法是：

称取一定量的云芝粉于20倍体积的水中，加入浓度为1.5％的纤维素酶溶液，在温度为55℃，pH为6.5的条件下，酶解20min，随后超声提取20min；

步骤三，将提取液过滤并减压浓缩，除去蛋白，并用活性炭进行脱色处理，然后将滤液离心得上清液，上清液中加入浓度为95％的乙醇进行沉淀，沉淀物用无水乙醇进行滤洗，真空干燥得到云芝多糖；

步骤四，按配方称取云芝多糖溶解于适量水中，加入配方量的表面活性剂、抗冻剂、防腐剂和稳定剂，并加水补足到100％，搅拌均匀，即得云芝多糖抗病毒剂。

本发明制备的含云芝多糖的抗病毒剂，可用于防治由植物病毒引起的植物病毒病，且能够促进作物生长、提高植物抗病性。经实验证明，该制剂对黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)具有良好的预防和治疗作用，且对人畜、环境高度安全，符合当前农药发展的方向，具有良好的开发应用潜力。

具体实施方式

经申请人的研究表明，云芝多糖作为生物效应调节剂，不仅可以通过诱导植物增强自身防御反应，对病毒产生抗性；而且能和病毒表面蛋白外壳直接结合，从而直接抑制病毒的生长繁殖；还具有无毒、易被降解、对环境无污染的优良特性，这使其有可能作为一种新型绿色农药，在农业生产中发挥重要作用。

以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，需要说明的是，这些实施例仅供本领域的技术人员充分理解本发明，本发明不限于这些实施例。

在以下的实施例中，首先制备云芝多糖，云芝多糖可按以下步骤制备：

步骤一，将云芝子实体进行干燥处理，置于高速组织捣碎机中充分捣碎，制成云芝粉，过40目筛；

步骤二，将采过筛后的云芝粉用酶-超声波联用法提取云芝多糖，提取方法是：

称取一定量的云芝粉于20倍体积的水中，加入浓度为1.5％的纤维素酶溶液，在温度为55℃，pH为6.5的条件下，酶解20min，随后超声提取20min；

步骤三，将提取液过滤并减压浓缩，除去蛋白(Sevag法)，并用活性炭进行脱色处理，然后将滤液离心得上清液，上清液中加入浓度为95％的乙醇进行沉淀，沉淀物用无水乙醇进行滤洗，真空干燥得到云芝多糖。

或者选择市售的云芝多糖产品直接来配制云芝多糖水剂。

制备实施例1：5％云芝多糖水剂的配制

称取5g云芝多糖溶解于适量水中，再加入表面活性剂2g～3g、抗冻剂1g～3g、防腐剂0.1g～0.5g、稳定剂1～3％、水补足至100g，配制成5％云芝多糖水剂。

本实施例中，表面活性剂选择辛基酚聚氧乙烯醚，抗冻剂选择乙二醇，稳定剂选择液体钡锌，防腐剂选择苯甲酸钠。

制备实施例2：7％云芝多糖水剂的配制

称取7g云芝多糖溶解于适量水中，再加入表面活性剂2g～3g、抗冻剂1g～3g、防腐剂0.1g～0.5g、稳定剂1～3％、水补足至100g，配制成7％云芝多糖水剂。

本实施例中，表面活性剂选择壬基酚聚氧乙烯醚，抗冻剂选择丙二醇，稳定剂选择液体钙锌，防腐剂选择山梨酸。

当然，以上的实施例中的防腐剂还可以选择苯甲酸、山梨酸钾、丙酸钙其中一种，均可以得到合格的云芝多糖水剂。

实验实施例1：云芝多糖水剂抗病毒活性研究

2.1云芝多糖水剂对CMV体外钝化试验

采用枯斑法测定了不同浓度云芝多糖水剂对CMV的体外钝化作用，结果见表1。从表1可以看出，浓度为500mg/L的云芝多糖水剂对CMV表现出明显的钝化作用，在钝化处理0.5h、1h、2h后，对CMV的抑制率分别为57.32％、73.71％、76.89％，抑制效果优于对照药剂；且云芝多糖水剂对CMV钝化作用表现出时间效应，随钝化时间的延长，钝化效果逐渐增强。

表1：云芝多糖水剂和对照药剂对CMV体外钝化试验测定结果

注：寄主材料为三生烟；右半叶为药剂处理，左半叶为对照；表中数据均为3次重复的平均值。

2.2云芝多糖水剂对CMV初侵染抑制作用试验

采用枯斑法测定了云芝多糖水剂对CMV初侵染的抑制作用，结果见表2。从表2可以看出，云芝多糖水剂对CMV的初侵染具有一定的抑制作用，其中，浓度为500mg/L的云芝多糖水剂，在施药24h、48h后接种CMV，其对CMV的抑制效果分别为43.38％和56.42％。

表2：云芝多糖水剂和对照药剂对CMV初侵染抑制作用测定结果

注：同表1。

2.3云芝多糖水剂对CMV增殖抑制作用试验

采用枯斑法测定了云芝多糖水剂对CMV增殖的抑制作用，结果见表3。从表3中可以看出，云芝多糖对CMV的增殖具有一定的抑制作用，浓度为500mg/L时，对CMV的抑制率为51.78％。

表3：云芝多糖水剂和对照药剂对CMV增殖抑制作用测定结果

注：同表1。

2.4室内防治烟草黄瓜花叶病毒病试验结果

根据以下分级标准记录发病情况：

0级：全株无病；

1级：心叶脉明或轻微花叶，或上部三分之一叶片花叶但不变形，植株无明显矮化；

2级：三分之一至二分之一叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，植株矮化为正常株高的三分之二以上；

3级：二分之一至三分之一叶片花叶，或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常株高的三分之二至二分之一；

4级：全株叶片花叶，严重变形或坏死，病株矮化为正常植株高度的二分之一以上至三分之一。

病情指数＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×最高分级数)×100

防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100

2.4.1云芝多糖水剂对烟草黄瓜花叶病毒病的保护作用测定结果

云芝多糖水剂对黄瓜花叶病毒病的保护作用测定结果见表4。从表中可以看出，云芝多糖对黄瓜花叶病毒病具有很好的保护作用，在14d和21d的保护效果分别为74.95％和67.97％。

表4：云芝多糖水剂和对照药剂对CMV保护作用测定结果

注：小写字母表示P≤0.05水平显著差异。

2.4.2云芝多糖水剂对烟草黄瓜花叶病毒病的治疗作用测定结果

云芝多糖水剂对黄瓜花叶病毒病的治疗作用测定结果见表5。从表中可以看出，云芝多糖对黄瓜花叶病毒病具有一定的治疗作用，在14d和21d的治疗效果分别为67.14％和48.44％。

表5：云芝多糖水剂和对照药剂对CMV治疗作用测定结果

注：同表4

2.5云芝多糖水剂田间药效试验

2.5.1供试作物与防治对象

供试作物：烟草(Nicotiana tabacum)，品种为“K326”；

防治对象：黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)。

2.5.2试验地块的选择与试验处理

(1)试验地块的选择：此试验在陕西省咸阳市泾阳县试验站进行，选择CMV常发烟田作为试验地；

(2)试验处理与小区设计：供试药剂为云芝多糖水剂，对照药剂病毒必克乳剂、宁南霉素水剂、病毒A以及空白对照(清水)。每种处理面积为35m2，处理间隔随机排列。

(3)施药方法：分别配制浓度均为500mg/L的云芝多糖水剂和病毒必克乳剂、宁南霉素水剂以及病毒A，用背负式手动喷雾器进行叶面喷雾，于2011年5月7日进行首次喷药，5天后进行第二次喷药。

(4)调查方法：每处理随机5点取样，每点调查20株，共100株。于第二次喷药后每7天调查一次发病情况，共调查3次。

2.5.3结果与分析

云芝多糖水剂防治烟草黄瓜花叶病毒病药效结果见表6，从表中可以看出，施用云芝多糖水剂后，在较长的一段时间内对CMV表现出较高的防效；在第7d、14d、21d，云芝多糖对CMV的防效分别达74.30％、68.07％、62.03％。

表6：云芝多糖水剂对CMV田间药效试验结果

注：同表4

2.6小结

通过以上研究表明，本发明的云芝多糖水剂对CMV的体外钝化作用效果明显，且对CMV初侵染和复制增殖具有一定的抑制作用。在室内盆栽试验中，云芝多糖水剂对CMV表现出良好的保护和治疗作用，且保护效果优于治疗效果。施药14d、21d后，云芝多糖的保护效果分别为74.95％和67.97％，治疗效果分别为67.14％和48.44％。田间药效试验表明，云芝多糖水剂对CMV具有较好的防治作用，在第7d、14d、21d，云芝多糖对CMV的防效分别达74.30％、68.07％、62.03％。

Claims (2)

1.一种含云芝多糖的抗病毒剂，其特征在于，制得的该含云芝多糖的抗病毒剂用于黄瓜花叶病毒病（Cucumber mosaic virus，CMV）预防和治疗，它由以下原料按重量百分比制成：云芝多糖：5%～7%，表面活性剂：2%～3%，抗冻剂：1%～3%，防腐剂：0.1%～0.5%，稳定剂：1%～3%，余量为水，原料的重量百分比之和为100%；

所述的表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类中的其中一种；

所述的抗冻剂为乙二醇或丙二醇；

所述的稳定剂为液体钡锌或液体钙锌；

所述的防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙其中一种。

2.权利要求1所述的含云芝多糖的抗病毒剂的制备方法，制得的该含云芝多糖的抗病毒剂用于黄瓜花叶病毒病（Cucumber mosaic virus，CMV）预防和治疗，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将云芝子实体进行干燥处理，置于高速组织捣碎机中充分捣碎，制成云芝粉，过40目筛；

步骤二，将采过筛后的云芝粉用酶-超声波联用法提取云芝多糖，提取方法是：

称取一定量的云芝粉于20倍体积的水中，加入浓度为1.5%的纤维素酶溶液，在温度为55℃，pH为6.5的条件下，酶解20min，随后超声提取20min；

步骤三，将提取液过滤并减压浓缩，除去蛋白，并用活性炭进行脱色处理，然后将滤液离心得上清液，上清液中加入浓度为95%的乙醇进行沉淀，沉淀物用无水乙醇进行滤洗，真空干燥得到云芝多糖；

步骤四，按配方称取云芝多糖溶解于适量水中，加入配方量的表面活性剂、抗冻剂、防腐剂和稳定剂，并加水补足到100%，搅拌均匀，即得云芝多糖抗病毒剂；

所述的抗冻剂为乙二醇或丙二醇；

所述的稳定剂为液体钡锌或液体钙锌；

所述的防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙其中一种。