CN104854126B - 多肽及成像方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种肽，所述肽能够作为GLP‑1R的成像探针使用。在一方式中，提供以式(3)表示的多肽。Xaa1‑Leu‑Ser‑Lys‑Gln‑Met‑Glu‑Glu‑Glu‑Ala‑Val‑Arg‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu‑Trp‑Leu‑Lys‑Asn‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser‑Ser‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser (3)(序列编号3)在式(3)中，Xaa1是‑Y‑X′基结合在α‑氨基上的天冬氨酸，X′包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7‑三氮杂环十二烷‑N,N’,N”‑三乙酸(NOTA)，Y是包括从由‑CH2‑(C6H4)‑、‑NH‑C(＝S)‑和‑NH‑(CH2)5‑C(＝O)‑、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。

Description

多肽及成像方法
技术领域
本公开涉及成为标记前体的多肽、被放射性标记了的多肽、成像用组合物、试剂盒、它们的使用、及成像方法。
背景技术
GLP-1(胰高血糖素样肽-1)是在葡萄糖代谢以及消化管分泌和代谢中具有控制功能的重要的消化管激素。GLP-1的受体是GLP-1R，是7次膜渗透型的G-蛋白质偶联受体。
作为将GLP-1R作为靶标分子的成像用分子探针，研究了GLP-1、Exendin-3、Exendin-4、Exendin(9-39)等肽或其变体上结合有标记分子的肽(例如，专利文献1)。
在先技术文献
专利文献
专利文献1:专利4642920号公报
发明内容
发明所要解决的问题
利用GLP-1R在胰岛瘤中过剩表达和在胰岛细胞表达等来尝试将GLP-1R作为靶标分子对GLP-1R和/或胰岛瘤进行成像。寻求对GLP-1R的亲和性进一步高的探针，进行了很多利用Exendin骨架的放射性探针的研究。因此，本公开提供能够作为GLP-1R的成像探针使用的肽，即对GLP-1R亲和性高的肽。
用于解决问题的手段
本公开在一方式中涉及以下式(1)表示的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(1)(序列编号1)
[在式(1)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X基的天冬氨酸，
X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA，diethylenetriaminepentaaceticdianhydride)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’N”-三乙酸(NOTA，1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N”-triacetic acid)，
Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中涉及以下式(2)表示的多肽。
[化1]
本公开在一个方式中涉及以下式(3)表式的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(3)(序列编号3)
[在式(3)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X'基的天冬氨酸，
X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中涉及以下式(4)表示的多肽。
[化2]
本公开在一方式中涉及以下式(5)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(5)(序列编号5)
[在式(5)中，
Xaa4是侧链的氨基结合有-Y-X基的赖氨酸残基，
所述X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中涉及以下式(6)表示的多肽。
[化3]
本公开在一方式中涉及以下式(7)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(7)(序列编号7)
[在式(7)中，
Xaa4是侧链的氨基结合有-Y-X'基的赖氨酸残基，
所述X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中以下式(8)表示的多肽。
[化4]
本公开在一方式中涉及所述多肽是以下式(19)表示的多肽；
从下式(19)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(19)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(19)(序列编号19)
[在式(19)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基，
所述X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中涉及以下式(20)表示的多肽；
从下式(20)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(20)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽、所述多肽能够与GLP-1R结合。
[化5]
本公开在一方式中涉及以下式(21)表示的多肽；
从下式(21)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(21)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(21)(序列编号21)
[在式(21)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X'基的赖氨酸残基，
所述X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
本公开在一方式中涉及以下式(22)表示的多肽；
从下式(22)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(22)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
[化6]
本公开在其它方式中涉及包含本公开所涉及的多肽的成像用组合物。本公开在其它方式中涉及包括从本公开所涉及的多肽被给药了的被测体检测所述多肽的放射性信号的成像方法。本公开在其它方式中涉及本公开所涉及的多肽的使用。
发明的效果
根据本公开，能够提供能够作为GLP-1R的成像探针使用的肽，即对GLP-1R的亲和性高的肽。
附图说明
图1是示出以式(4)表示的多肽的抑制(blocking)研究的结果的一例的图表；
图2是以式(4)表示的多肽的SPECT图像；
图3是示出结合试验的结果的一例的图表；
图4是示出以式(2)表示的多肽的小鼠的血浆中的稳定性评价的结果的一例的图表；
图5是示出以式(22)表示的多肽的抑制研究的结果的一例的图表；
图6是示出以式(23)表示的多肽的小鼠的血浆中的稳定性评价的结果的一例的图表；
图7示出使用了大鼠胰岛瘤株INS-1的细胞摄入试验的结果的一例的图表；
图8是以式(22)表示的多肽的SPECT/CT图像。
具体实施方式
[成为标记前体的多肽]
本公开在一个或多个实施方式中，涉及能成为标记前体的多肽，即以下式(1)表示的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(1)(序列编号1)
在式(1)中，Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X基的天冬氨酸。X是螯合部、是DTPA或NOTA。Y是在位于以式(1)表示的多肽N末端的天冬氨酸的N末端的α-氨基上结合的连接子，是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。在一种或多种实施方式中，Y优选为包括-CH2-(C6H4)-和-NH-C(＝S)-，更优选为包括-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-，进一步优选为是-CH2-(C6H4)-NH-C(＝S)-NH-(CH2)5-C(＝O)-。即，在式(1)中，Xaa1是具有DTPA或NOTA和上述连接子的天冬氨酸，连接子的一端结合在天冬氨酸的N末端的α-氨基上，另一端与DTPA或NOTA结合。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及能成为标记前体的多肽，即以下式(5)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(5)(序列编号5)
在式(5)中，Xaa4是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基。X是螯合部、是DTPA或NOTA，Y是结合在赖氨酸的侧链的氨基上的连接子，是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。即，在式(5)中，Xaa4是具有DTPA或NOTA和上述连接子的赖氨酸残基，连接子的一端结合在赖氨酸残基的侧链的氨基上，另一端与DTPA或NOTA结合。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及能成为标记前体的多肽，即以下式(19)表示的多肽。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(19)(序列编号19)
在式(19)中，Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基。X是螯合部、是DTPA或NOTA。Y是在赖氨酸的侧链的氨基上结合的连接子，是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。即，在式(19)中，Xaa12是具有DTPA或NOTA和上述连接子的赖氨酸残基，连接子的一端结合在赖氨酸残基的侧链的氨基上，另一端与DTPA或NOTA结合。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及能成为标记前体的多肽，并且是从上式(19)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽。从上式(19)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选为具有与上式(19)的多肽同样的作用效果。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及能成为标记前体的多肽，并且是与上式(19)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽。此处，所述同源性可以是以本领域技术人员通常使用的算法、例如以BLAST或FASTA等计算出的，或者也可以基于将进行比较的2个多肽的相同氨基酸残基的数目除以一个多肽全长而得到的数目(以下，相同)。同源性在一种或多种实施方式中，能包括85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％。具有该85％以上的同源性的多肽在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选为具有与上式(19)的多肽同样的作用效果。
本公开在一种或多种实施方式中，是以下式(20)表示的多肽，涉及从下式(20)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽、或者与下式(20)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽。同源性如上所述。
[化7]
从式(20)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽、以及与上式(20)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选具有与上式(19)的多肽同样的作用效果。
本公开所涉及的成为标记前体的多肽在一种或多种实施方式中，C末端的羧基被酰胺化了。本实施方式的多肽血液清除率优良。
本公开所涉及的成为标记前体的多肽能够结合到GLP-1R上。本公开所涉及的成为标记前体的多肽在一种或多种实施方式中，对GLP-1R示出比非标记的exendin(9-39)高的亲和性。因而，本公开所涉及的成为标记前体的多肽在一种或多种实施方式中，能够作为能够用于GLP-1R阳性的细胞的成像和定量、GLP-1R的表达相关疾病的诊断和治疗等的放射性标记试剂的标记前体使用。
本公开所涉及的成为标记前体的多肽的制造方法不被特别限定。本公开所涉及的成为标记前体的多肽例如能够参考在实施例中公开的方法来制造。
[被放射性标记了的多肽]
本公开在其它方式中，是由放射性金属核素放射性标记了的多肽，其中涉及以下式(3)表示的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(3)(序列编号3)
在式(3)中，Xaa1是在α-氨基上结合有-Y-X'基的天冬氨酸。X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素。螯合部是DTPA或NOTA。作为放射性金属核素，在一种或多种实施方式中，可以举出62Cu、64Cu、67Ga、68Ga、82Rb、99mTc、111In和186Re等。Y是在位于以式(3)表示的多肽N末端的天冬氨酸的N末端的α-氨基上结合的连接子，是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。在一种或多种实施方式中，Y优选为包括-CH2-(C6H4)-和-NH-C(＝S)-，更优选为包括-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-，进一步优选为是-CH2-(C6H4)-NH-C(＝S)-NH-(CH2)5-C(＝O)-。即，在式(3)中，Xaa1是具有螯合了放射性金属核素的DTPA或NOTA和连接子的天冬氨酸，连接子的一端结合在天冬氨酸的N末端的α-氨基上，另一端与螯合了放射性核素的DTPA或NOTA结合。
本公开在其它方式中，是由放射性金属核素放射性标记了的多肽，其中涉及以下式(7)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(7)(序列编号7)
在式(7)中，Xaa4是侧链的氨基上结合有-Y-X'基的赖氨酸残基。X'包括作为DTPA或NOTA的螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，Y是在赖氨酸的侧链的氨基上结合的连接子。即，在式(7)中，Xaa4是具有螯合了放射性金属核素的DTPA或NOTA和连接子的赖氨酸残基，连接子的一端结合在赖氨酸残基的侧链的氨基上，另一端与螯合了放射性核素的DTPA或NOTA结合。放射性金属核素和连接子与上式(3)相同。
本公开在一种或多种实施方式中，是由放射性金属核素放射性标记了的多肽，涉及以下式(21)表示的多肽。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(21)(序列编号21)
在式(21)中，Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X'基的赖氨酸残基。X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素。Y是在赖氨酸的侧链的氨基上结合的连接子。即，在式(21)中，Xaa12是具有螯合了放射性金属核素的DTPA或NOTA和连接子的赖氨酸残基，连接子的一端结合在赖氨酸残基的侧链的氨基上，另一端与螯合了放射性核素的DTPA或NOTA结合。放射性金属核素和连接子与上式(3)相同。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及由放射性金属核素放射性标记了的多肽，并且是从上式(21)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽。从上式(21)的多肽缺失、添加或取代了的多肽1、2或3个氨基酸在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选为具有与上式(21)的多肽同样的作用效果。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及与上式(21)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽。同源性在一种或多种实施方式中，能包括85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％。具有该85％以上的同源性的多肽在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选为具有与上式(21)的多肽同样的作用效果。
本公开在一种或多种实施方式中，涉及以下式(22)表示的多肽；从下式(22)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够结合到GLP-1R上的多肽；或者与下式(22)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，能够结合到GLP-1R上的多肽。同源性如上所述。
[化8]
从式(22)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，以及与上式(22)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，在一种或多种实施方式中，包括Xaa12且能够结合到GLP-1R上，优选具有与上式(22)的多肽同样的作用效果。
本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中，C末端的羧基被酰胺化了。本实施方式的多肽血液清除率优良。
本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的制造方法不被特别限定。本公开所涉及的被放射性标记了的多肽例如能够参考在实施例中公开的方法来制造。
本公开所涉及的被放射性标记了的多肽能够结合到GLP-1R上。本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中，对GLP-1R示出比非标记的exendin(9-39)高的亲和性。因而，本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中能够在GLP-1R阳性的细胞的成像和定量、GLP-1R的表达相关的疾病的诊断和治疗等中利用。作为GLP-1R阳性的细胞的成像，在一种或多种实施方式中，可以举出胰岛的成像。虽然GLP-1R的表达相关的疾病不被特别限定，但是在一种或多种实施方式中，是神经内分泌瘤(NET)。神经内分泌瘤不被特别限定，在一种或多种实施方式中，从胰岛瘤、小细胞支气管癌和胰腺癌中选择。因而，本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中，能够用于胰岛瘤的成像和定量、胰岛瘤的诊断和治疗等。
本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中，能够作为用于上述的各种成像的组合物、成像用试剂、造影剂、图像诊断剂等使用，其中，上述的各种成像的组合物、成像用试剂、造影剂、图像诊断剂等作为有效成分包含本公开所涉及的被放射性标记了的多肽。虽然作为它们的组合物、图像诊断剂等的获取的形态不被特别限制，但是在一种或多种实施方式中是溶液或粉末，当考虑放射性核素的半衰期和放射能衰减等时，在一种或多种实施方式中是溶液，在一种或多种实施方式中是注射液。
[成像用组合物]
本公开作为其它方式，还涉及成像用组合物，所述成像用组合物包含本公开所涉及的被放射性标记了的多肽或成为其前体的多肽。虽然成像用组合物的形态不被特别限定，在一种或多种实施方式中是溶液或粉末。在包含本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的情况下，当考虑放射性核素的半衰期和放射能衰减等时，成像用组合物的形态在一种或多种实施方式中是溶液，在一种或多种实施方式中是注射液。在包含前体肽的情况下，从操作提高的观点来看，成像用组合物的形态在一种或多种实施方式中是粉末，在一种或多种实施方式中是被冷冻干燥了的粉末(冷冻干燥制剂)。
成像用组合物也可以包含载体等医药品添加物。在本公开中医药品添加物是在日本药典、美国药典和/或欧洲药典等中作为医药品添加物受到许可认可的化合物。作为载体，例如可以使用水性溶剂和非水性溶剂。作为水性溶剂，例如可举出磷酸钾缓冲液、生理盐水、林格氏液和蒸馏水等。作为非水性溶剂，例如可举出聚乙二醇、植物性油脂、乙醇、甘油、二甲亚砜和丙二醇等。
[试剂盒]
本公开作为其它方式，还涉及试剂盒，所述试剂盒包含本公开所涉及的成为标记前体的多肽和放射性金属核素。另外，涉及包含本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的试剂盒。本公开的试剂盒在一种或多种实施方式中被从用于制造本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的试剂盒、用于进行GLP-1R的成像的试剂盒、用于进行胰岛瘤的成像的试剂盒、用于进行GLP-1R阳性的细胞的定量的试剂盒、以及用于进行胰岛瘤的预防或治疗或诊断的试剂盒中选择。试剂盒在一种或多种实施方式中，这些各方式中包括对应各自的形态的操作说明书。操作说明书可以与试剂盒同包装，也可以在网络上提供。试剂盒在一种或多种实施方式中还包括用于放入本公开所涉及的被放射性标记了的多肽及其前体的容器。作为容器，例如可举出注射器或管型瓶等。本公开的试剂盒在一种或多种实施方式中还包含选自用于调制缓冲剂和渗透压调节剂等分子探针的成分、以及注射器等用于多肽的给药的器具的1个以上。
本公开作为其它方式，还涉及成像方法，其是用于对GLP-1R成像的方法，所述成像方法包括：从被给药了本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的被测体检测所述多肽的放射性信号。虽然被测体不被特别限定，但是在一种或多种实施方式中选自人类、人类以外的哺乳类、培养细胞和GLP-1R可能存在的对象。
本公开所涉及的成像方法作为第一方式，包括从被预先给药了本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的被测体检测该多肽的放射性信号。信号的检测例如优选为：在给药多肽体后、对信号的检测足够的时间经过后进行。
本公开所涉及的成像方法在一种或多种实施方式中，包括：对被检测出的信号进行重构处理而转换成图像并显示，和/或对被检测出的信号进行数值化而提示累积量。在本公开中“显示”在一种或多种实施方式中包括在监视器中显示和/或印刷。在本公开中“提示”在一种或多种实施方式中包括保存计算出的累积量和/或输出到外部。
信号的检测能够根据使用的多肽的放射性核素的种类适宜决定，例如能够使用PET和SPECT等来进行。SPECT例如包括通过伽马照相机测定从被给药了本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的被测体放出的γ射线。由伽马照相机进行的测定例如包括以一定时间单位测定被从多肽的放射性核素放出的放射线(γ射线)，优选包括以一定时间单位测定放出放射线的方向和放射线数量。本公开所涉及的成像方法可以还包括将由放射线的测定得到的被测定的多肽的分布作为截面图像表示、和对所得到的截面图像进行重构。
PET例如可以包括：以PET用检测器从被给药了多肽的被测体对通过正电子和电子的湮灭产生的伽马射线同时计数，还包括基于计测的结果描绘放出正电子的放射性核素的位置的三维分布。
可以结合由SPECT或PET进行的测定来进行X线CT和/或MRI的测定。由此，例如能够得到使由SPECT或PET得到的图像(功能图像)和由CT或MRI得到的图像(形态图像)融合的融合图像。
本公开所涉及的成像方法作为第二形态，包括：将本公开所涉及的被放射性标记了的多肽向被测体给药，和从被给药了的被测体检测多肽的放射性信号。信号的检测和重构处理等能够与第一方式同样地进行。
向被测体的多肽的给药可以是局部的，也可以是全身的。给药途径能够根据被测体的状态等适宜决定，例如可举出向静脉、动脉、皮内、腹腔内的注射或输液等。多肽的给药量(用量)不被特别限制，只要给药为了获得用于成像所希望的对比度而足够的量即可，在一种或多种实施方式中可以是1μG以下。本公开所涉及的被放射性标记了的多肽在一种或多种实施方式中被与载体等医药品添加物一起给药。作为医药品添加物，如上所述。从给药到测定的时间例如能够根据多肽与GLP-1R的结合时间、多肽的种类和多肽的分解时间等而适宜决定。
第二方式的成像方法在一种或多种实施方式中包括：基于使用了本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的成像结果判定GLP-1R的表达的状态。判定GLP-1R的表达的状态在一种或多种实施方式中包括：通过解析GLP-1R的成像图像判断GLP-1R的表达的有无，和/或判断GLP-1R阳性细胞的增减。
本公开作为其它方式，还涉及胰岛瘤细胞量的测定方法，所述测定方法包括：从被给药了本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的被测体检测所述多肽的放射性信号，以及由检测出的多肽的信号计算出胰岛瘤细胞量。胰岛瘤细胞量的计算例如能够通过分析检测出的信号的量、对信号进行重构而得到的成像图像等进行。另外，由成像的结果进行成像的对象物的定量如果是本领域技术人员的话，例如能够使用校正线或适当的程序容易地进行。胰岛瘤细胞量的测定方法可以还包括显示和/或提示计算出的胰岛瘤细胞量。
[糖尿病的预防、治疗、诊断方法]
本公开作为其它方式，还涉及糖尿病的预防或治疗或诊断方法。在糖尿病的发病过程中，胰岛量(尤其是胰β细胞量)比耐糖能异常先减少，等到功能异常被检测出、察觉到的阶段，糖尿病已经变为难以治疗的阶段。然而，根据使用本公开的被放射性标记了的多肽的成像方法和/或胰岛量的测定方法，能够及早地发现胰岛量和/或胰β细胞量的减少，进而能够构建新的糖尿病的预防·治疗·诊断法。作为糖尿病的预防·治疗·诊断的对象(被测体)，可举出人类和/或人类以外的哺乳类。
本公开的糖尿病的诊断方法包括：使用本公开的被放射性标记了的多肽来进行胰β细胞的成像，以及基于所得到的胰岛的图像和/或胰岛量判定胰岛的状态，还可以包括基于判定结果进行糖尿病的诊断。胰岛的状态的判定例如包括通过比较所得到的胰岛的图像和作为基准的胰岛的图像、比较所得到的胰岛量和作为基准的胰岛量等判定胰岛量的增减或变化。另外，胰岛的状态的判定可以使用信息处理装置进行，优选为：在判定为胰岛量减少时提示其信息，并且在判定为胰岛量増加或被维持时提示其信息。基于判定结果的糖尿病的诊断例如包括：判定糖尿病发病的风险、判断为糖尿病、判断糖尿病的进行程度等。
本公开的糖尿病的治疗方法除了基于使用本公开的被放射性标记了的多肽的胰岛的成像和成像结果的糖尿病的诊断之外，包括基于诊断治疗糖尿病。胰岛的成像和糖尿病的诊断能够与本公开的糖尿病的诊断方法同样地进行。治疗方法能够包括着眼于胰岛量的变化来评价包括对对象所进行的投药或饮食疗法的治疗效果。另外，本公开的糖尿病的治疗方法能够包括：通过本公开的方法来进行胰岛的成像和/或胰岛量的测定，以及基于所得到的胰岛的图像和/或胰岛量评价胰岛的功能恢复。
本公开的糖尿病的预防方法包括基于使用本公开的被放射性标记了的多肽的胰岛的成像和成像结果判定胰岛的状态从而判定糖尿病发病的风险。本公开的糖尿病的预防方法例如能够包括定期地进行胰岛量的测定并检查有无胰岛量的减少倾向。
本公开作为优选的其它方式，涉及糖尿病的超早期诊断方法。本公开的糖尿病的超早期诊断方法例如能够包括：在综合体检、健康诊断中通过本公开的方法进行胰岛的成像和/或胰岛量的测定，以及基于所得到的胰岛的图像和/或胰岛量判定胰岛的状态。
[胰岛瘤的预防、治疗、诊断方法]
本公开作为其它方式，还涉及胰岛瘤的预防或治疗或诊断方法。根据使用本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的成像方法和/或胰岛瘤细胞量的测定方法，具有能够及早发现胰岛瘤，进而能够构建胰岛瘤的预防·治疗·诊断法的可能性。作为胰岛瘤的预防·治疗·诊断的对象(被测体)可举出人类和/或人类以外的哺乳类。
胰岛瘤的诊断方法在一种或多种实施方式中包括：使用本公开所涉及的被放射性标记了的多肽来进行GLP-1R的成像，以及基于所得到的GLP-1R阳性细胞的图像和/或GLP-1R阳性细胞量判定胰岛瘤的存在。胰岛瘤的存在的判定在一种或多种实施方式中通过从比较所得到的GLP-1R阳性细胞的图像和作为基准的图像，以及比较所得到的GLP-1R阳性细胞量和作为基准的GLP-1R阳性细胞量中选择进行。另外，胰岛瘤的存在的判定在一种或多种实施方式中可以使用信息处理装置进行，优选为：在判定为GLP-1R阳性细胞量增加时提示其信息，并且在判定为GLP-1R阳性细胞减少或被维持时提示其信息。基于判定结果的胰岛瘤的诊断在一种或多种实施方式中包括从判定胰岛瘤发病的风险、判断为胰岛瘤、以及判断胰岛瘤的进行程度中选择。
本公开的胰岛瘤的治疗方法除了使用本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的GLP-1R的成像和基于成像结果的胰岛瘤的诊断之外，包括基于诊断治疗胰岛瘤。治疗方法在一种或多种实施方式中包括着眼于GLP-1R阳性细胞量的变化来评价对对象所进行的投药的治疗效果。
本公开的胰岛瘤的预防方法包括使用本公开所涉及的被放射性标记了的多肽的GLP-1R的成像和基于成像结果判定GLP-1R的表达的状态从而判定胰岛瘤发病的风险。本公开的胰岛瘤的预防方法例如能够包括定期地进行GLP-1R阳性细胞量的测定，并且检查有无GLP-1R阳性细胞量的减少倾向。
本公开作为优选的其它方式，涉及胰岛瘤的超早期诊断方法。本公开的胰岛瘤的超早期诊断方法例如能够包括：在综合体检、健康诊断中通过本公开的方法进行GLP-1R的成像和/或GLP-1R阳性细胞量的测定，以及基于所得到的GLP-1R阳性细胞的图像和/或GLP-1R阳性细胞量判定GLP-1R的表达的状态。
[标记方法]
本公开作为其它方式，还涉及标记结合了螯合部的多肽的方法。本公开的标记方法包括：在古德氏缓冲液或包含非离子性表面活性剂的缓冲液中溶解所述多肽，以及使溶解了的所述多肽与[111In]铟盐反应。根据本公开的标记方法，即使在进行标记的多肽的浓度低的情况下，也能够以高的放射化学产率标记多肽。与[111In]铟盐反应时的被结合了螯合部的多肽的浓度在一种或多种实施方式中是0.1～100μM，优选为是0.1～50μM、0.1～10μM或1～10μM。
作为螯合部被结合了的多肽，在一种或多种实施方式中可举出上述的成为标记前体的多肽，在不被特别限定的一种或多种实施方式中可举出以式(1)、(2)、(5)或(6)表示的多肽。作为螯合部被结合了的多肽，在一种或多种实施方式中可举出以式(19)或(20)表示的多肽。
作为缓冲液，在一种或多种实施方式中可举出古德氏缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、酒石酸缓冲液、磷酸缓冲液和三羟甲基氨基甲烷缓冲液等。作为古德氏缓冲液，在一种或多种实施方式中可举出N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、2-吗啉乙磺酸(MES)、双(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二醋酸(ADA)、哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、3-吗啉基-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸(TES)、2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N,N-二(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、N-环己-2-氨基乙磺酸(CHES)、N-环己基-3-氨基-2-羟基丙磺酸(CAPSO)和N-环己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)等。
作为非离子性表面活性剂，在一种或多种实施方式中可举出聚氧乙烯-p-t-辛基苯基醚(Triton系表面活性剂等)、以及聚乙烯脱水山梨糖醇烷基酯(Tween系表面活性剂等)、聚氧乙烯烷基醚(Brij系表面活性剂等)等，在不被特别限定的一种或多种实施方式中，可举出聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(Tween80(商品名))。
本公开能涉及以下的一种或多种实施方式；
〔1〕以下式(1)表示的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(1)(序列编号1)
[在式(1)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X基的天冬氨酸，
X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔2〕以下式(2)表示的多肽。
[化9]
〔3〕以下式(3)表示的多肽。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(3)(序列编号3)
[在式(3)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X'基的天冬氨酸，
X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔4〕所述放射性金属核素是111In的〔3〕所述的多肽。
〔5〕以下式(4)表示的多肽。
[化10]
〔6〕以下式(5)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(5)(序列编号5)
[在式(5)中，
Xaa4是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基，
所述X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔7〕以下式(6)表示的多肽。
[化11]
〔8〕以下式(7)表示的多肽。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(7)(序列编号7)
[在式(7)中，
Xaa4是侧链的氨基上结合有-Y-X'基的赖氨酸残基，
所述X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔9〕所述放射性金属核素是111In的〔8〕所述的多肽。
〔10〕以下式(8)表示的多肽。
[化12]
〔11〕包括〔3〕至〔5〕和〔8〕至〔10〕中的任一项所述的多肽的成像用组合物。
〔12〕包括〔1〕、〔2〕、〔6〕或〔7〕所述的多肽和放射性金属核素的试剂盒。
〔13〕一种成像方法，是用于对GLP-1受体成像的方法，其中，包括：
从〔3〕至〔5〕和〔8〕至〔10〕中的任一项所述的多肽被给药了的被测体检测所述多肽的放射性信号。
〔14〕 〔13〕所述的成像方法，包括：对所述被检测出的信号进行重构处理从而转换成图像显示。
〔15〕 〔3〕至〔5〕和〔8〕至〔10〕中的任一项所述的多肽，所述多肽用于〔13〕或〔14〕所述的成像方法。
〔16〕根据〔3〕至〔5〕和〔8〕至〔10〕中的任一项所述的多肽的使用，所述多肽用于对GLP-1受体成像。
〔17〕用于成像用组合物的制造的〔1〕、〔2〕、〔6〕或〔7〕所述的多肽的使用，所述成像用组合物用于〔13〕或〔14〕所述的成像方法。
〔18〕标记方法，是对被结合了螯合部的多肽进行标记的方法，包括：
在古德氏缓冲液或包含非离子性表面活性剂的缓冲液中溶解所述多肽；以及
使溶解了的所述多肽与[111In]铟盐反应。
〔19〕以下式(19)表示的多肽；
从下式(19)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(19)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(19)(序列编号19)
[在式(19)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基，
所述X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔20〕以下式(20)表示的多肽；
从下式(20)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(20)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
[化13]
〔21〕以下式(21)表示的多肽；
从下式(21)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(21)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(21)(序列编号21)
[在式(21)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X’基的赖氨酸残基，
所述X'包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是包括从由-CH2-(C6H4)-、-NH-C(＝S)-和-NH-(CH2)5-C(＝O)-、以及它们的组合构成的组中选择的基的连接子。]
〔22〕以下式(22)表示的多肽；
从下式(22)的多肽缺失、添加或取代了1、2或3个氨基酸的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合；或者
与下式(22)的多肽的氨基酸序列具有85％以上的同源性的多肽，所述多肽能够与GLP-1R结合。
[化14]
〔23〕成像用组合物，包括〔21〕或〔22〕所述的多肽。
〔24〕试剂盒，包括〔19〕或〔20〕所述的多肽和放射性金属核素。
〔25〕成像方法，是用于对GLP-1受体成像的方法，其中，包括：
从〔21〕或〔22〕所述的多肽被给药了的被测体检测所述多肽的放射性信号。
〔26〕〔25〕所述的成像方法，包括：对所述被检测出的信号进行重构处理从而转换成图像显示。
〔27〕〔21〕或〔22〕所述的多肽，所述多肽用于〔25〕或〔26〕所述的成像方法。
〔28〕用于对GLP-1受体成像的〔21〕或〔22〕所述的多肽的使用。
〔29〕用于成像用组合物的制造的〔19〕或〔20〕所述的多肽的使用，所述成像用组合物用于〔25〕或〔26〕所述的成像方法。
〔30〕制造方法，是〔3〕至〔5〕、〔8〕至〔10〕、〔21〕和〔22〕中任一项所述的多肽的制造方法，其中，包括：
将〔1〕、〔2〕、〔6〕、〔7〕、〔19〕或〔20〕所述的多肽溶解在包含非离子性表面活性剂的缓冲液或古德氏缓冲液中，以及
使溶解了的所述多肽与[111In]铟盐反应。
〔31〕〔30〕所述的制造方法，包括将所述多肽溶解在包含非离子性表面活性剂的古德氏缓冲液中。
以下，使用实施例进一步对本公开进行说明。但是，本公开不被限定于以下的实施例地进行解释。
实施例
在本公开中，使用以下的简称。
Bn：苯甲基
Ahx：6-氨基己酸
OtBu：tert-丁氧基
Fmoc：9-芴甲氧羰基
HBTU：1-[双二甲氨基亚甲基]-1H-苯并三氮唑-3-氧化物-六氟磷酸酯
NaOAc：乙酸钠
Trt：三苯甲基
TIS：三异丙基硅烷
DT：十二硫醇
另外，氨基酸如果不特别提到，使用L体。
[制造例1]
以下述步骤调制以式(2)表示的多肽。
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(2)(序列编号2)
(1)保护肽树脂的合成
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(9)(序列编号9)
以上式(9)表示的保护肽树脂的合成使用Applied Biosystems公司制的肽自动合成机(431A)按照附带的软件通过逐个使氨基酸从羰基末端侧结合的方法(固相合成法)进行。
将Rink Amide MBHA Resin(0.25mmol scale)作为起始树脂载体使用，将Fmoc-氨基酸衍生物设置在上述肽合成机的反应容器中，按照合成机所附带的软件，使作为活化剂的1-[双二甲氨基亚甲基]-1H-苯并三氮唑-3-氧化物-六氟磷酸酯(HBTU)和1-羟基苯并三唑(HOBt)溶解到二甲基甲酰胺(DMF)中并添加到反应器中反应。在含哌啶的N-甲基吡咯烷酮中缓慢地搅拌所得到的树脂除去Fmoc基以进行到下一个的氨基酸衍生物的缩合。使用了的Fmoc氨基酸衍生物之中，在侧链上有官能基的氨基酸分别使用Asp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)和Asn(Trt)。
按照序列依次延伸氨基酸而得到以式(10)表示的保护肽树脂B。
Fmoc-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(10)(序列编号10)
以HBTU-HOBt法将Fmoc-Ahx-OH导入到保护肽树脂B中而得到以式(11)表示的保护肽树脂C。
Fmoc-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(11)(序列编号11)
在从保护肽树脂C除去了Fmoc基之后，通过p-SCN-Bn-DTPA(Macrocyclics公司制)和DIEA的反应得到以式(9)表示的保护肽树脂。在式(9)、(10)和(11)中，省略了侧链的保护基的标记。
(2)脱保护和从树脂切出
在使用三氟乙酸的常规的TFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5,v/v)脱保护条件下室温处理所得到的保护肽树脂2小时，同时进行脱保护和从树脂切出肽。从反应液滤出载体树脂后馏除TFA。向残渣加入乙醚过滤取得所得到的粗生成物的沉淀。
(3)目标肽的分离提纯
使用岛津制LC-8A的HPLC分离装置(柱：ODS 30×250mm)以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系对所得到的粗生成肽进行分离提纯，得到目标的肽的成分，在馏除乙腈之后，作为冷冻干燥粉末，将目标物作为三氟乙酸盐得到。
[制造例2]
以下述步骤调制以式(12)表示的多肽。
(Bn In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(12)(序列编号12)
使以式(2)表示的多肽(2.7mg)溶解在包含0.1％Tween80的0.01MMES Buffer(pH5.5)100μL中，加入1M InCl3溶液20μL。在室温下静置5分钟用ESI-MASS确认以式(12)表示的多肽的生成，使用岛津制LC-20A的HPLC分析装置(柱：ODS 10×250mm)以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系进行分离提纯，得到目标的肽的成分，在馏除乙腈之后，制成冷冻干燥粉末，将以式(12)表示的多肽作为三氟乙酸盐得到。
[制造例3]
以下述步骤调制以式(6)表示的多肽。
DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(6)(序列编号6)
(1)保护肽树脂的合成
Boc-DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(13)(序列编号13)
以上式(13)表示保护肽树脂的合成使用Applied Biosystems公司制的肽自动合成机(431A)按照附带的软件通过逐个使氨基酸从羰基末端侧结合的方法(固相合成法)进行。
作为起始树脂载体使用Rink Amide MBHA Resin(0.25mmol scale)，将Fmoc-氨基酸衍生物设置在上述肽合成机的反应容器中，按照合成机所附带的软件，使作为活化剂的1-[双二甲氨基亚甲基]-1H-苯并三氮唑-3-氧化物-六氟磷酸酯(HBTU)和1-羟基苯并三唑(HOBt)溶解到二甲基甲酰胺(DMF)中并添加到反应器中反应。在含哌啶的N-甲基吡咯烷酮中缓慢地搅拌所得到的树脂除去Fmoc基以前进到接下来的氨基酸衍生物的缩合。使用了的Fmoc氨基酸衍生物之中，在侧链上有官能基的氨基酸分别使用Asp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)和Asn(Trt)。
按照序列依次延伸氨基酸而得到以式(14)表示的保护肽树脂B。
Boc-DLSK(Mmt)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(14)(序列编号14)
在以1.5％TFA/5％TIS/93.5％DCM处理而从K12(第4个赖氨酸残基)的侧链除去保护基(Mmt基)之后，以HBTU-HOBt法导入Fmoc-Ahx-OH而得到以式(15)表示的保护肽树脂C。
Boc-DLSK(-Ahx-Fmoc)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA(15)(序列编号15)
并且在除去K(-Ahx-Fmoc)12的Fmoc基之后，通过iPhonep-SCN-Bn-DTPA(Macrocyclics公司制)和DIEA的反应得到以式(13)表示的保护肽树脂。在式(13)、(14)和(15)中，省略了侧链的保护基的标记。
(2)脱保护和从树脂切出
在使用三氟乙酸的常规的TFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5,v/v)脱保护条件下室温处理所得到的保护肽树脂2小时，同时进行脱保护和从树脂的切出肽。从反应液滤出载体树脂后馏除TFA。向残渣加入乙醚过滤取得所得到的粗生成物的沉淀。
(3)目标肽的分离提纯
使用岛津制LC-8A的HPLC分离装置(柱：ODS 30×250mm)以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系对所得到的粗生成肽进行分离提纯，得到目标的肽的成分，在馏除乙腈之后，制成冷冻干燥粉末，将目标物作为三氟乙酸盐得到。
[制造例4]
以下述步骤调制以式(16)表示的多肽。
DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(16)(序列编号16)
使以式(6)表示的多肽(2.3mg)溶解在包含0.1％Tween80的0.01MMES Buffer(pH5.5)100uL中，加入1M InCl3溶液20μL。在室温下静置5分钟用ESI-MASS确认以式(16)表示的多肽的生成，使用岛津制LC-20A的HPLC分析装置(柱：ODS 10×250mm)以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系进行分离提纯，得到目标的肽的成分，在馏除乙腈之后，成冷冻干燥粉末，将以式(16)表示的多肽作为三氟乙酸盐得到。
研究以下述步骤调制以式(8)表示的多肽的条件。
DLSK(-Ahx-Bn[111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(8)(序列编号8)
向使以式(6)表示的多肽溶解在各种溶剂中的溶液(1-100μM)20μL加入日本医药公司制[111In]InCl3(0.02M HCl)20μL。在室温下静置30分钟，使用岛津制LC-20A的HPLC分析装置(柱：ODS 10×250mm)以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系确认以式(8)表示的多肽。将其结果的一例示于表1。
[表1]
(表1)
a)反应浓度；前体量/[111In]InCl3溶液量＝1/1，r.t.，30分钟
b)放射化学产率由RP-HPLC分析确定
如表1所示，在使用以式(6)表示的多肽溶液(100μM)的情况下，定量地得到了以式(8)表示的多肽(Entry 1,2)。在使用以式(6)表示的多肽溶液(10μM)的情况下，与使用0.4MNaOAc(pH5.0)作为溶剂的情况相比使用0.01-1.0M MES(pH5.5)的情况是良好的放射化学产率。另外，作为可溶化剂添加了0.1％Tween80的情况与不添加的条件相比有良好的放射化学产率(Entry 3-12)。在使用以式(6)表示的多肽溶液(1μM)的情况下，在使用0.4MNaOAc(pH5.0)作为溶剂的情况下，以式(8)表示的多肽得不到(Entry 13)，即使在使用0.01-1.0M MES(pH5.5)的情况下也有1-2％的放射化学产率(Entry 14-16)。在作为可溶化剂添加了0.1％Tween80 0.01MMES(pH5.5)的情况下，有86.4％的良好的放射化学产率(Entry 21)。
另外，在使用以式(17)表示的多肽以与上述表1所示的条件相同的条件进行多肽的标记时，同样能够调制以式(18)表示的多肽。
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(17)(序列编号17)
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn[111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(18)(序列编号18)
[结合试验的步骤]
混合Binding Buffer(50mM HEPES,5mM MgCl2,0.2％BSA,pH7.4)155μL、要评价的多肽水溶液(0,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5M)20μL、PerkinElmer公司制[125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM)20μL、Millipore公司制Membrane Preparation Recombinant HumanGLP-1(200units/1mL)5μL，在室温下震荡2小时。震荡了的液体使用玻璃纤维滤纸进行B/F分离，以Wash Buffer(25mM HEPES,0.5M NaCl,0.1％BSA,pH7.4)洗净滤纸。使用PerkinElmer公司制Wallac1480WIZARD(R)3的γ计数器来测定残留在滤纸上的放射能。所得到的测定结果使用GraphPad Software公司制GraphPad Prism version 5.03分析。将其结果的一例示于图3的图表。
以式(2)表示的多肽的IC50是6.86nM，与相对于非标记的exendin(9-39)的GLP-1R的亲和性(30.2nM)相比被确认了一个数位以上亲和性的提高。并且，导入了铟的以式(12)表示的多肽(In-DTPA9-Ex(9-39))的IC50是2.5nM，通过导入铟亲和性被进一步提高。以式(6)表示的多肽的IC50是26.25nM，被确认到与非标记的exendin(9-39)对GLP-1R的亲和性(30.2nM)同等的亲和性。并且，导入了铟的以式(16)表示的多肽(In-DTPA12-Ex(9-39))的IC50是31.27nM，即使通过导入铟也确认到同等的亲和性。
[在鼠类血液中的稳定性的体外评价]
混合从ddY小鼠(6周龄、雌性)采集的血浆200μL和111In-DTPA9-Ex(9-39)(1.85MBq)20μL，在37℃下孵育30、60、120、240分钟。其后，加入甲醇100μL，使血浆中蛋白成分凝集，进行5分钟离心(4℃,10000×g)，得到上清。上清使用Millex-GV(13mm)过滤，以HPLC分析。将其结果的一例示于图4的图表。如图4所示，111In-DTPA9-Ex(9-39)即使在240分钟孵育后也有91％作为未变化体存在。也就是说，能够确认111In-DTPA9-Ex(9-39)非常稳定。
[制造例5]
以下述步骤调制以式(4)表示的多肽。
(Bn[111In]In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(4)(序列编号4)
向使以式(2)表示的多肽溶解在包含0.1％Tween80的0.01M MES Buffer(pH5.5)中的溶液(10μM)20μL加入日本医药公司制[111In]InCl3(0.02M HCl)20μL。在室温下静置30分钟，使用岛津制LC-20A的HPLC分析装置(柱：ODS 10×250mm)来以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系确认以式(4)表示的多肽并使用。
[制造例6]
以下述步骤调制以式(8)表示的多肽。
DLSK(-Ahx-Bn[111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(8)(序列编号8)
向使以式(6)表示的多肽溶解到包含0.1％Tween80的0.01M MES Buffer(pH5.5)中的溶液(10μM)20μL加入日本医药公司制[111In]InCl3(0.02M HCl)20μL。在室温下静置30分钟，使用岛津制LC-20A的HPLC分析装置(柱：ODS 10×250mm)来以包含0.1％三氟乙酸的水-乙腈体系确认以式(8)表示的多肽并使用。
[分布]
将调制的以式(4)表示的多肽(0.8-1.2μCi)通过静脉注射(尾静脉)对无麻醉下的6周龄ddY小鼠(雄性、体重25g)给药。在给药5分钟后、15分钟后、30分钟后、60分钟后、120分钟后摘出各脏器(n＝5)。测定各脏器的重量和放射能，从每单位重量的放射能算出累积量(％dose/g)。将其结果的一例示于下述表2。
[表2]
(表2)
数值被平均(n＝5)并衰减校正。
如表2所示，以式(4)表示的多肽的向胰脏的累积，在给药5分种后是12.69％dose/g、在给药15分钟后是9.55％dose/g、在给药30分钟后是5.74％dose/g、在给药60分钟后是4.04％dose/g、在给药120分钟后是2.64％dose/g。另外，教导了：以式(4)表示的多肽在给药后5～120分钟之间，与作为胰脏的邻接脏器的肝脏、胃、脾脏、小肠相比胰脏累积得多，得到在观察上充分的对比度的SPECT图像。
[分布]
将调制的以式(6)表示的多肽(0.8-1.2μCi)通过静脉注射(尾静脉)对无麻醉下的6周龄ddY小鼠(雄性、体重25g)给药。在给药5分钟后、15分钟后、30分钟后、60分钟后、120分钟后摘出各脏器(n＝5)。测定各脏器的重量和放射能，由每单位重量的放射能算出累积量(％dose/g)。将其结果的一例示于下述表3。
[表3]
(表3)
数值被平均(n＝5)并衰减校正。
如表3所示，以式(6)所示的多肽的向胰脏的累积在给药5分钟后是8.78％dose/g、在给药15分钟后是4.47％dose/g、在给药30分钟后是3.27％dose/g、在给药60分钟后是1.41％dose/g、在给药120分钟后是0.70％dose/g。发现了与以式(4)表示的多肽相比向胰脏的累积的降低，教导了由于与GLP-1R的亲和性的不同带来的影响。另外，教导了：以式(6)表示的多肽在给药后5～30分钟之间，与作为胰脏的邻接脏器的肝脏、胃、脾脏、小肠相比胰脏累积得多，得到在观察上充分的对比度的SPECT图像。
[分布]
将调制的以式(4)表示的多肽(0.8-1.2μCi)通过静脉注射(尾静脉)对无麻醉下的大鼠胰岛瘤细胞株INS-1移植BALB/c nu/nu小鼠(雌性、体重20g)给药。在给药15分钟后、30分钟后、60分钟后、120分钟后、360分钟后摘出各脏器(n＝5)。测定各脏器的重量和放射能，由每单位重量的放射能算出累积量(％dose/g)。将其结果的一例示于下述表4。
[表4]
(表4)
数值被平均(n＝5)并衰减校正。
如表4所示，以式(4)表示的多肽向INS-1肿瘤的累积在给药15分钟后是14.60％dose/g、在给药30分钟后是7.83％dose/g、在给药60分钟后是4.40％dose/g、在给药120分钟后是2.32％dose/g、在给药240分钟后是1.87％dose/g、在给药360分钟后是1.94％dose/g。另外，以式(4)表示的多肽在给药后15～360分钟之间，与作为胰脏的邻接脏器肝脏、胃、脾脏、小肠相比胰脏累积得多，特别地INS-1肿瘤/胰脏比在给药15分钟后是2.06、在给药30分钟后是2.52、在给药60分钟后是2.70、在给药120分钟后是2.46、在给药240分钟后是2.86、在给药360分钟后是2.25。通过这些结果，教导了：得到在观察INS-1肿瘤上充分的对比度的SPECT图像。
[抑制研究]
通过静脉注射(尾静脉)向Ex(9-39)amide(20μg)的无麻醉下的大鼠胰岛瘤细胞株INS-1移植BALB/c nu/nu小鼠(雌性、体重20g)给药。30分钟后给药调制的以式(4)表示的多肽(0.8-1.2μCi)，60分钟后摘出各脏器(n＝5)。测定各脏器的重量和放射能，从每单位重量的放射能计算出累积量(％dose/g)。将其结果的一例示于图1。
如图1所示，当相对于给药了Ex(9-39)amide(20μg)的胰岛瘤细胞株INS-1移植BALB/c nu/nu小鼠的以式(4)表示的多肽的累积量(％dose/g)比较没有给药Ex(9-39)amide(20μg)的胰岛瘤细胞株INS-1移植BALB/c nu/nu小鼠的以式(4)表示的多肽的累积量(％dose/g)时，就INS-1肿瘤而言，累积量减少75.7％，就胰脏而言，累积量减少67.7％，所以确认了以式(4)表示的多肽GLP-1R特异性地累积。
[SPECT研究]
将调制的以式(4)表示的多肽(538μCi)通过静脉注射(尾静脉)向无麻醉下的大鼠胰岛瘤细胞株INS-1移植BALB/c nu/nu小鼠(雌性、体重20g)给药。从给药后30分钟到1小时30分钟以小动物用SPECT/CT(FX-3300)摄像。将其结果的一例示于图2。
图2是尾侧的横截面像，在图2中以箭头表示膀胱，以三角表示肿瘤部分。如图2所示，能够清楚地描绘使用了以式(4)表示的多肽的INS-1肿瘤，能够进行三维成像。从而，教导了：本发明的成像用分子探针，成为了以GLP-1R为靶标的非侵袭成像探针。
[制造例7]
以与制造例3同样的步骤，调制以式(20)表示的多肽。在使用的Fmoc氨基酸衍生物之中，在侧链上有官能基的氨基酸分别使用His(Trt)、Asp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Lys(Mmt)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)和Asn(Trt)。
[制造例8]
除了使用以式(20)表示的多肽代替以式(6)表示的多肽以外，以与制造例4同样的步骤调制以式(23)表示的多肽(以下，称作“In-DTPA12-Ex4”)。
HGEGTFTSDLSK DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(23)(序列编号23)
[制造例9]
除了使用以式(20)表示的多肽代替以式(2)表示的多肽以外，以与制造例5同样的步骤调制以式(22)表示的多肽(以下，称作“111In-DTPA12-Ex4”)(放射化学产率：64.3％、放射化学纯度：＞99％)。
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn[111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(22)(序列编号22)
[使用GLP-1膜制备的抑制试验]
混合Binding Buffer(50mM HEPES,5mM MgCl2,0.2％BSA,pH7.4)155μL、In-DTPA12-Ex4的水溶液(0,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5M)20μL、PerkinElmer社制[125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM)20μL、Millipore公司制Membrane Preparation RecombinantHuman GLP-1(200units/1mL)5μL，在25℃下震荡2小时。震荡了的液体进行使用玻璃纤维滤纸的B/F分离，以Wash Buffer(25mM HEPES,0.5M NaCl,0.1％BSA,pH7.4)洗净滤纸。使用PerkinElmer公司制Wallac1480WIZARD(R)3的γ计数器来测定残留在滤纸上的放射能。所得到的测定结果使用GraphPad Software公司制GraphPad Prism version 5.03分析，测定50％抑制浓度(IC50)。将其结果的一例示于图5的图表。确认了：In-DTPA12-Ex4的IC50是0.43nM(95％confidence interval:0.24-0.78)，具有与非标记的exendin4(IC50：0.19nM(95％confidence interval:0.11-0.32))同程度的GLP-1R结合亲和性。
[在鼠类血浆中的稳定性的体外评价]
混合从ddY小鼠(6周龄、雌性)采集的血浆200μL和111In-DTPA12-Ex4(1.85MBq)20μL，在37℃下孵育30、60、120、240分钟。其后，加入甲醇100μL，使血浆中蛋白成分凝集，进行5分钟离心(4℃,10000×g)，得到上清。上清使用Millex-GV(13mm)过滤，以HPLC分析。将其结果的一例示于图6的图表。如图6所示，111In-DTPA12-Ex4即使在240分钟孵育后也有98.8％作为未变化体存在。也就是说，能够确认111In-DTPA12-Ex4非常稳定。
[使用INS-1肿瘤细胞的细胞摄入试验]
在将大鼠胰岛瘤细胞株INS-1播种到24-well plate中进行整夜培养(37℃,5％CO2)之后，添加111In-DTPA12-Ex4(37kBq/20μL)，在37℃下孵育30、60、120、240分钟。非特异结合的评价通过与以式(23)表示的多肽一起添加过剩量的Exendin-(9-39)来进行。在孵育后、通过冷PBS(-)进行洗净之后，通过0.1N NaOH水溶液溶解细胞。结合在细胞膜成分中的放射能通过在加入Acid Buffer(50mM Glycine,0.1M NaCl,pH2.8)在4℃下静置10分钟之后洗净，进行细胞溶解的操作来去除。细胞溶解液的放射能通过BCA蛋白定量来校正。将其结果的一例示于图7。在图7中，总摄入(Total Uptake表示被细胞摄入的以式(23)表示的多肽的摄入量(放射能)，内化(Internalization)表示去除结合在细胞膜成分中的放射能后的摄入量(放射能)，抑制(Blocking)表示非特异结合的评价的结果。如图7所示，以式(23)表示的多肽的向细胞的摄入量随时间增加，其摄入被过剩的exendin-(9-39)的添加而被抑制。另外，教导了：在GLP-1R上结合的以式(23)表示的多肽大概全部内化。
[体内生物分布]
通过小鼠尾静脉对ddY小鼠(6周龄、雄性)给药111In-DTPA12-Ex4(18.5kBq/100μL)。给药后，在5、15、30、60、120分杀死，摘出各脏器(胰脏、血液、心脏、肺、胃、小肠、大肠、肝脏、脾脏、肾脏)(n＝5)。测定各脏器的重量和放射能，计算出向各脏器的累积量(％injection dose/g)。将其结果的一例示于下述表5和6。
[表5]
(表5)
数值被平均(n＝5)并衰减校正。
[表6]
(表6)
如表5所示，111In-DTPA12-Ex4在作为GLP1-R表达组织的胰脏和肺中示出高的累积。如表6所示，111In-DTPA12-Ex4中，胰/血比在给药后早期示出超过2的值，显示出良好的血液清除率，并且胰/肝比非常高。这样教导了：向胰脏的累积量高，另一方面胰/肝比高，通过血液清除率优异的多肽，在进行胰β细胞的成像、优选为胰β细胞的GLP-1R的成像时，得到清晰的图像。
[在ddY小鼠中的SPECT/CT研究]
通过小鼠尾静脉向ddY小鼠(6周龄、雄性)给药111In-DTPA12-Ex4(9.62MBq/150μL)。从给药后20分种开始进行异氟烷(2.5％)吸引麻酔，从给药后38分钟开始使用SPECT/CT装置(GMI,FX-3300)进行48分钟摄影。其后，进行CT摄影(60kV,310μA)。将其结果示于图8。
＜SPECT摄影条件＞
方法：Tomo
瞄准仪：4-head N5F75A10(1.0-mm直径，7.5-mm焦距)
旋转半径：35mm
重构：3D-OSEM(迭代次数：5，子集合：8)
在图8中按从左到右的顺序示出横截像(transverse view)、冠状截像(coronalview)和矢状截像(sagittal view)。在图8中以白线圈出的位置示出胰脏的位置。如图8所示，通过使用111In-DTPA12-Ex4的SPECT/CT摄影，能够在正常小鼠(ddy小鼠)中描绘胰脏。这样教导了：在与人类相比胰脏尺寸小且脏器密集的小鼠中成功进行了胰脏的描绘，因此如果是与小鼠相比胰脏尺寸大且脏器不密集的人类，例如能够更明确地判别胰脏的位置和尺寸，还能够测定结合在胰β细胞的GLP-1R上的肽衍生物的量。
由这些结果显示，111In-DTPA12-Ex4作为GLP-1R结合型胰β细胞成像探针有用。
工业上的利用可能性
本公开所涉及的多肽例如在医学研究领域、医疗领域、非治疗和诊断的领域、分子成像领域、涉及胰岛瘤的领域等中有用。
序列编号1：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号2：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号3：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号4：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号5：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号6：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号7：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号8：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号9：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号10：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号11：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号12：在实施例中被使用了的多肽(冷体)的一实施方式
序列编号13：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号14：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号15：在一实施方式中被使用的保护肽树脂
序列编号16：在实施例中被使用了的多肽(冷体)的一实施方式
序列编号17：以实施例调制的多肽
序列编号18：以实施例调制的多肽
序列编号19：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号20：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号21：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号22：本公开所涉及的多肽的一实施方式
序列编号23：在实施例中被使用的多肽(冷体)的一实施方式

Claims (13)

1.以下式(21)表示的多肽，
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (21) (序列编号21)
在式(21)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X’基的赖氨酸残基，
所述X’包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是-C(＝O)-(CH2)5-NH-C(＝S)-NH-(C6H4)-CH2-。
2.如权利要求1所述的多肽，其中，所述放射性金属核素是111In。
3.以下式(22)表示的多肽，
4.以下式(19)表示的多肽，
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (19) (序列编号19)
在式(19)中，
Xaa12是侧链的氨基上结合有-Y-X基的赖氨酸残基，
所述X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
所述Y是-C(＝O)-(CH2)5-NH-C(＝S)-NH-(C6H4)-CH2-。
5.以下式(20)表示的多肽，
6.以下式(3)表示的多肽，
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3) (序列编号3)
在式(3)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X’基的天冬氨酸，
X’包括螯合部和在所述螯合部被螯合了的放射性金属核素，所述螯合部是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
Y是-C(＝O)-(CH2)5-NH-C(＝S)-NH-(C6H4)-CH2-。
7.如权利要求6所述的多肽，其中，所述放射性金属核素是111In。
8.以下式(4)表示的多肽，
9.以下式(1)表示的多肽，
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (1) (序列编号1)
在式(1)中，
Xaa1是α-氨基上结合有-Y-X基的天冬氨酸，
X是二乙烯基三胺基五乙酸二酐(DTPA)或1,4,7-三氮杂环十二烷-N,N’,N”-三乙酸(NOTA)，
Y是-C(＝O)-(CH2)5-NH-C(＝S)-NH-(C6H4)-CH2-。
10.以下式(2)表示的多肽，
11.成像用组合物，包括权利要求1至3和6至8中任一项所述的多肽。
12.试剂盒，包括：
权利要求4、5、9或10所述的多肽，和
放射性金属核素。
13.制造权利要求1至3和6至8中任一项所述的多肽的方法，其中，所述方法包括：
在古德氏缓冲液或包含非离子性表面活性剂的缓冲液中溶解权利要求4、5、9和10中任一项所述的多肽，以及
使溶解了的所述多肽与铟盐反应，
其中，所述铟盐中的铟是111In。
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