KR20150102000A - 폴리펩티드 및 이미징 방법 - Google Patents

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고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠
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Abstract

GLP-1R의 이미징 프로브로서 사용할 수 있는 펩티드를 제공한다. 일 태양에 있어서, 하기 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3)(서열 번호 3)
식(3)에 있어서, Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X'기가 결합한 아스파라긴산이고, X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(1,4,7-triazacyclononnane-N,N',N''-triacetic acid(NOTA))이고, Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커이다.

Description

폴리펩티드 및 이미징 방법{POLYPEPTIDE AND IMAGING METHOD}
본 개시는, 표지 전구체로 되는 폴리펩티드, 방사성 표지된 폴리펩티드, 이미징용 조성물, 키트, 그들의 사용, 및 이미징 방법에 관한 것이다.
GLP-1(클루카곤 유사 펩티드-1)은, 글루코오스 대사 그리고 소화관 분비 및 대사에 있어서 제어적 기능을 갖는 중요한 소화관 호르몬이다. GLP-1의 수용체가 GLP-1R이며, 7회 막관통형의 G-단백질 공역 수용체이다.
GLP-1R을 표적 분자로 하는 이미징용 분자 프로브로서, GLP-1, 엑센딘(Exendin)-3, 엑센딘-4, 엑센딘(9-39) 등의 펩티드 또는 그 개변체에 표지화 분자가 결합한 펩티드가 검토되고 있다(예를 들면, 특허문헌 1).
일본국 특허4642920호 공보
GLP-1R은 인슐리노마(insulinoma)에 과잉 발현해 있는 것 및 췌도(膵島) 세포에 발현해 있는 것 등을 이용해서 GLP-1R을 표적 분자로 한 GLP-1R 및/또는 인슐리노마의 이미징이 시도되고 있다. GLP-1R에 대한 친화성이 높은 향상된 프로브가 요구되어, 엑센딘 골격을 이용한 방사성 프로브의 연구가 다수 행해지고 있다. 그래서, 본 개시는, GLP-1R의 이미징 프로브로서 사용할 수 있는 펩티드로서, GLP-1R에 대한 친화성이 높은 펩티드를 제공한다.
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(1)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (1)(서열 번호 1)
[식(1)에 있어서,
Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X기가 결합한 아스파라긴산이고,
X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)(1,4,7-triazacyclononnane-N,N',N''-triacetic acid(NOTA))이고,
Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(2)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00001
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3)(서열 번호 3)
[식(3)에 있어서,
Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X'기가 결합한 아스파라긴산이고,
X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종(金屬核種)을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00002
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(5)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (5)(서열 번호 5)
[식(5)에 있어서,
Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00003
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(7)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (7)(서열 번호 7)
[식(7)에 있어서,
Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00004
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(19)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(19)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실(缺失), 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(19)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성(相同性)을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드에 관한 것이다.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (19)(서열 번호 19)
[식(19)에 있어서,
Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(20)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(20)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00005
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(21)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(21)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(21)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드에 관한 것이다.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (21)(서열 번호 21)
[식(21)에 있어서,
Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
본 개시는, 일 태양에 있어서, 하기 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(22)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(22)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드에 관한 것이다.
Figure pct00006
본 개시는, 그 밖의 태양에 있어서, 본 개시에 따른 폴리펩티드를 함유하는 이미징용 조성물에 관한 것이다. 본 개시는, 그 밖의 태양에 있어서, 본 개시에 따른 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함하는 이미징 방법에 관한 것이다. 본 개시는, 그 밖의 태양에 있어서, 본 개시에 따른 폴리펩티드의 사용에 관한 것이다.
본 개시에 따르면, GLP-1R의 이미징 프로브로서 사용할 수 있는 펩티드로서, GLP-1R에 대한 친화성이 높은 펩티드를 제공할 수 있다.
도 1은, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 블로킹 스터디(Blocking Study)의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 2는, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 SPECT 화상.
도 3은, 바인딩 어세이(Binding Assay)의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 4는, 식(2)으로 표시되는 폴리펩티드의 마우스의 혈장 중에 있어서의 안정성 평가의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 5는, 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드의 블로킹 스터디의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 6은, 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드의 마우스의 혈장 중에 있어서의 안정성 평가의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 7은, 래트 인슐리노마 세포주 INS-1을 사용한 세포 도입 어세이의 결과의 일례를 나타내는 그래프.
도 8은, 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드의 SPECT/CT 화상.
[표지 전구체로 되는 폴리펩티드]
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 표지 전구체로 될 수 있는 폴리펩티드로서, 하기 식(1)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (1)(서열 번호 1)
식(1)에 있어서, Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X기가 결합한 아스파라긴산이다. X는, 킬레이트부로서, DTPA 또는 NOTA이다. Y는, 식(1)으로 표시되는 폴리펩티드 N말단에 위치하는 아스파라긴산의 N말단의 α-아미노기에 결합하는 링커로서, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커이다. Y는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, -CH2-(C6H4)-, 및 -NH-C(=S)-를 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-를 포함하고, 더 바람직하게는 -CH2-(C6H4)-NH-C(=S)-NH-(CH2)5-C(=O)-이다. 즉, 식(1)에 있어서, Xaa1은, DTPA 또는 NOTA와 상기 링커를 갖는 아스파라긴산으로서, 링커의 일단이 아스파라긴산의 N말단의 α-아미노기에 결합하고, 타단이 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 표지 전구체로 될 수 있는 폴리펩티드로서, 하기 식(5)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (5)(서열 번호 5)
식(5)에 있어서, Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이다. X는 킬레이트부로서, DTPA 또는 NOTA이고, Y는 리신의 측쇄의 아미노기에 결합하는 링커로서, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커이다. 즉, 식(5)에 있어서, Xaa4는, DTPA 또는 NOTA와 상기 링커를 갖는 리신 잔기로서, 링커의 일단이 리신 잔기의 측쇄의 아미노기에 결합하고, 타단이 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 표지 전구체로 될 수 있는 폴리펩티드로서, 하기 식(19)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (19)(서열 번호 19)
식(19)에 있어서, Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이다. X는 킬레이트부로서 DTPA 또는 NOTA이다. Y는 리신의 측쇄의 아미노기에 결합하는 링커로서, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커이다. 즉, 식(19)에 있어서, Xaa12는, DTPA 또는 NOTA와 상기 링커를 갖는 리신 잔기로서, 링커의 일단이 리신 잔기의 측쇄의 아미노기에 결합하고, 타단이 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 표지 전구체로 될 수 있는 폴리펩티드로서, 상기 식(19)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드에 관한 것이다. 상기 식(19)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(19)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 표지 전구체로 될 수 있는 폴리펩티드로서, 상기 식(19)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드에 관한 것이다. 여기에서, 상기 상동성이란, 당업자가 통상 사용하는 알고리즘, 예를 들면, BLAST 또는 FASTA 등으로 산출되는 것이면 되며, 또는, 비교하는 2개의 폴리펩티드의 동일 아미노산 잔기의 수를 한쪽의 폴리펩티드 전장(全長)으로 나누어 얻어지는 수에 의거해도 된다(이하, 같음). 상동성은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 또는 95%를 포함할 수 있다. 당해 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(19)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 하기 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드, 하기 식(20)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드, 또는 하기 식(20)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드에 관한 것이다. 상동성은 상술한 바와 같다.
Figure pct00007
식(20)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드, 및 상기 식(20)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(20)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, C말단의 카르복시기가 아미드화되어 있다. 본 실시형태의 폴리펩티드는, 혈액 클리어런스가 우수할 수 있다.
본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, GLP-1R에 결합 가능하다. 본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, GLP-1R에 대하여 비표지의 엑센딘(9-39)보다도 높은 친화성을 나타낸다. 따라서, 본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, GLP-1R 양성의 세포의 이미징 및 정량(定量), GLP-1R의 발현이 관여하는 질환의 진단 및 치료 등에 이용할 수 있는 방사성 표지 시약의 표지 전구체로서 사용할 수 있다.
본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드의 제조 방법은, 특히 한정되지 않는다. 본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, 예를 들면, 실시예에 개시하는 방법을 참조해서 제조할 수 있다.
[방사성 표지된 폴리펩티드]
본 개시는, 그 밖의 태양에 있어서, 방사성 금속핵종에 의하여 방사성 표지된 폴리펩티드로서, 하기 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3)(서열 번호 3)
식(3)에 있어서, Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X'기가 결합한 아스파라긴산이다. X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함한다. 킬레이트부는, DTPA, 또는 NOTA이다. 방사성 금속핵종으로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 99 mTc, 111In, 및 186Re 등을 들 수 있다. Y는, 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드 N말단에 위치하는 아스파라긴산의 N말단의 α-아미노기에 결합하는 링커로서, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커이다. Y는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, -CH2-(C6H4)-, 및 -NH-C(=S)-를 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-를 포함하고, 더 바람직하게는 -CH2-(C6H4)-NH-C(=S)-NH-(CH2)5-C(=O)-이다. 즉, 식(3)에 있어서, Xaa1은, 방사성 금속핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 링커를 갖는 아스파라긴산으로서, 링커의 일단이 아스파라긴산의 N말단의 α-아미노기에 결합하고, 타단이 방사성핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다.
본 개시는, 그 밖의 태양에 있어서, 방사성 금속핵종에 의하여 방사성 표지된 폴리펩티드로서, 하기 식(7)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (7)(서열 번호 7)
식(7)에 있어서, Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이다. X'는, DTPA 또는 NOTA인 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, Y는 리신의 측쇄의 아미노기에 결합하는 링커이다. 즉, 식(7)에 있어서, Xaa4는, 방사성 금속핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 링커를 갖는 리신 잔기로서, 링커의 일단이 리신 잔기의 측쇄의 아미노기에 결합하고, 타단이 방사성핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다. 방사성 금속핵종 및 링커는 상기 식(3)과 마찬가지이다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 방사성 금속핵종에 의하여 방사성 표지된 폴리펩티드로서, 하기 식(21)으로 표시되는 폴리펩티드에 관한 것이다.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (21)(서열 번호 21)
식(21)에 있어서, Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이다. X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함한다. Y는, 리신의 측쇄의 아미노기에 결합하는 링커이다. 즉, 식(21)에 있어서, Xaa12는, 방사성 금속핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 링커를 갖는 리신 잔기로서, 링커의 일단이 리신 잔기의 측쇄의 아미노기에 결합하고, 타단이 방사성핵종을 킬레이트한 DTPA 또는 NOTA와 결합해 있다. 방사성 금속핵종 및 링커는 상기 식(3)과 마찬가지이다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 방사성 금속핵종에 의하여 방사성 표지된 폴리펩티드로서, 상기 식(21)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드에 관한 것이다. 상기 식(21)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(21)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상기 식(21)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드에 관한 것이다. 상동성은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 또는 95%를 포함할 수 있다. 당해 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(21)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 하기 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드, 하기 식(22)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는 하기 식(22)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드에 관한 것이다. 상동성은 상술한 바와 같다.
Figure pct00008
식(22)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드, 및 상기 식(22)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, Xaa12를 포함하며, 또한, GLP-1R에 결합 가능하고, 바람직하게는 상기 식(22)의 폴리펩티드와 마찬가지의 작용 효과를 갖는다.
본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, C말단의 카르복시기가 아미드화되어 있다. 본 실시형태의 폴리펩티드는, 혈액 클리어런스가 우수할 수 있다.
본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드의 제조 방법은, 특히 한정되지 않는다. 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 예를 들면, 실시예에 개시하는 방법을 참조해서 제조할 수 있다.
본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, GLP-1R에 결합 가능하다. 본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, GLP-1R에 대하여 비표지의 엑센딘(9-39)보다도 높은 친화성을 나타낸다. 따라서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, GLP-1R 양성의 세포의 이미징 및 정량, GLP-1R의 발현이 관여하는 질환의 진단 및 치료 등에 이용할 수 있다. GLP-1R 양성의 세포의 이미징으로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 췌도의 이미징을 들 수 있다. GLP-1R의 발현이 관여하는 질환은, 특히 한정되지 않지만, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 신경내분비 종양(NET)이다. 신경내분비 종양은, 특히 한정되지 않지만, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 인슐리노마, 소세포 기관지암 및 췌암에서 선택된다. 따라서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 인슐리노마의 이미징 및 정량, 인슐리노마의 진단 및 치료 등에 이용할 수 있다.
본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 유효 성분으로서 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 함유하는, 상술하는 각종 이미징에 사용하는 조성물, 이미징용 시약, 조영제(造影劑), 화상진단제(畵像診斷劑) 등으로서 사용할 수 있다. 이들 조성물, 화상진단제 등이 취할 수 있는 형태로서는, 특히 제한되지 않지만, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 용액 또는 분말이고, 방사성핵종의 반감기 및 방사능 감쇠 등을 고려하면, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 용액이고, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 주사액이다.
[이미징용 조성물]
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드 또는 그 전구체로 되는 폴리펩티드를 함유하는 이미징용 조성물에 관한 것이다. 이미징용 조성물의 형태는, 특히 한정되지 않지만, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 용액 또는 분말이다. 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 함유할 경우, 방사성핵종의 반감기 및 방사능 감쇠 등을 고려하면, 이미징용 조성물의 형태는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 용액이고, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 주사액이다. 전구체 펩티드를 함유할 경우, 취급이 향상하는 관점에서는, 이미징용 조성물의 형태는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 분말이고, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 동결 건조된 분말(동결 건조 제제)이다.
이미징용 조성물은, 담체(擔體) 등의 의약품 첨가물을 함유하고 있어도 된다. 본 개시에 있어서 의약품 첨가물은, 일본 약국방(藥局方), 미국 약국방 및/또는 유럽 약국방 등에서 의약품 첨가물로서 인허가를 받고 있는 화합물을 말한다. 담체로서는, 예를 들면, 수성 용매 및 비수성 용매를 사용할 수 있다. 수성 용매로서는, 예를 들면, 인산칼륨 완충액, 생리식염수, 링거액, 및 증류수 등을 들 수 있다. 비수성 용매로서는, 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜, 식물성 유지, 에탄올, 글리세린, 디메틸설폭사이드, 및 프로필렌글리콜 등을 들 수 있다.
[키트]
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 본 개시에 따른 표지 전구체로 되는 폴리펩티드와, 방사성 금속핵종을 함유하는 키트에 관한 것이다. 또한, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 함유하는 키트에 관한 것이다. 본 개시의 키트는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 제조하기 위한 키트, GLP-1R의 이미징을 행하기 위한 키트, 인슐리노마의 이미징을 행하기 위한 키트, GLP-1R 양성의 세포의 정량을 행하기 위한 키트, 및 인슐리노마의 예방 또는 치료 또는 진단을 위한 키트에서 선택된다. 키트는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 이들 각 태양에 있어서, 각각의 형태에 따른 취급 설명서를 포함한다. 취급 설명서는, 키트에 동봉되어도 되고, 웹상에서 제공되어도 된다. 키트는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드 또는 그 전구체를 넣기 위한 용기를 더 포함한다. 용기로서는, 예를 들면, 시린지나 바이알병 등을 들 수 있다. 본 개시의 키트는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 버퍼 및 침투압 조정제 등의 분자 프로브를 조제하기 위한 성분, 그리고, 주사기 등의 폴리펩티드의 투여에 사용하는 기구에서 선택되는 1개 이상을 더 포함한다.
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, GLP-1R을 이미징하기 위한 방법으로서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함하는 이미징 방법에 관한 것이다. 피검체는, 특히 한정되지 않지만, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 인간, 인간 이외의 포유류, 배양 세포, 및 GLP-1R이 존재할 수 있는 대상에서 선택된다.
본 개시에 따른 이미징 방법은, 제1 태양으로서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드가 미리 투여된 피검체로부터 당해 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함한다. 시그널의 검출은, 예를 들면, 폴리펩티드체를 투여 후, 시그널의 검출에 충분한 시간이 경과 후에 행하는 것이 바람직하다.
본 개시에 따른 이미징 방법은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 검출된 시그널을 재구성 처리해서 화상으로 변환하여 표시하는 것, 및/또는 검출된 시그널을 수치화하여 집적량을 제시하는 것을 포함한다. 본 개시에 있어서 「표시하는 것」은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 모니터에 표시하는 것, 및/또는 인자(印字)하는 것을 포함한다. 본 개시에 있어서 「제시하는 것」은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 산출한 집적량을 보존하는 것, 및/또는 외부에 출력하는 것을 포함한다.
시그널의 검출은, 사용하는 폴리펩티드의 방사성핵종의 종류에 따라서 적의(適宜) 결정할 수 있으며, 예를 들면, PET 및 SPECT 등을 사용해서 행할 수 있다. SPECT는, 예를 들면, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 방출되는 γ선을 감마 카메라에 의해 측정하는 것을 포함한다. 감마 카메라에 의한 측정은, 예를 들면, 폴리펩티드의 방사성핵종으로부터 방출되는 방사선(γ선)을 일정 시간 단위로 측정하는 것을 포함하며, 바람직하게는 방사선이 방출되는 방향 및 방사선 수량을 일정 시간 단위로 측정하는 것을 포함한다. 본 개시에 따른 이미징 방법은, 방사선의 측정에 의해 얻어진 측정된 폴리펩티드의 분포를 단면 화상으로서 나타내는 것, 및 얻어진 단면 화상을 재구성하는 것을 더 포함하고 있어도 된다.
PET는, 예를 들면, 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터, 포지트론과 전자와의 쌍소멸에 의해 생성하는 감마선을 PET용 검출기로 동시 계수하는 것을 포함하며, 추가로, 계측한 결과에 의거하여 포지트론을 방출하는 방사성핵종의 위치의 삼차원 분포를 묘사하는 것을 포함하고 있어도 된다.
SPECT 또는 PET에 의한 측정에 아울러서, X선 CT 및/또는 MRI의 측정을 행해도 된다. 이에 따라, 예를 들면, SPECT 또는 PET에 의해 얻어진 화상(기능 화상)과, CT 또는 MRI에 의해 얻어진 화상(형태 화상)을 융합시킨 융합 화상을 얻을 수 있다.
본 개시에 따른 이미징 방법은, 제2 형태로서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 피검체에 투여하는 것, 및 투여된 피검체로부터 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함한다. 시그널의 검출, 및 재구성 처리 등은, 제1 태양과 마찬가지로 행할 수 있다.
피검체에의 폴리펩티드의 투여는, 국소적이어도 되고, 전신적이어도 된다. 투여 경로는, 피검체의 상태 등에 따라서 적의 결정할 수 있지만, 예를 들면, 정맥, 동맥, 피내(皮內), 복강내(腹腔內)에의 주사 또는 수액(輸液) 등을 들 수 있다. 폴리펩티드의 투여량(용량)은, 특히 제한되지 않으며, 이미징을 위하여 원하는 콘트라스트를 얻기 위해 충분한 양을 투여하면 되며, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 1㎍ 이하로 할 수 있다. 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 담체 등의 의약품 첨가물과 함께 투여된다. 의약품 첨가물로서는, 상술한 바와 같다. 투여에서부터 측정까지의 시간은, 예를 들면, 폴리펩티드의 GLP-1R에의 결합 시간, 폴리펩티드의 종류 및 폴리펩티드의 분해 시간 등에 따라서 적의 결정할 수 있다.
제2 태양의 이미징 방법은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 이미징의 결과에 의거하여, GLP-1R의 발현의 상태를 판정하는 것을 포함한다. GLP-1R의 발현의 상태를 판정하는 것은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, GLP-1R의 이미징 화상을 해석함에 의해 GLP-1R의 발현의 유무를 판단하는 것, 및/또는 GLP-1R 양성 세포의 증감을 판단하는 것을 포함한다.
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것, 및, 검출한 폴리펩티드의 시그널로부터 인슐리노마 세포량을 산출하는 것을 포함하는 인슐리노마 세포량의 측정 방법에 관한 것이다. 인슐리노마 세포량의 산출은, 예를 들면, 검출한 시그널의 양, 시그널을 재구성하여 얻어진 이미징 화상을 해석하는 것 등에 의해 행할 수 있다. 또한, 이미징의 결과로부터 이미징의 대상물의 정량을 행하는 것은, 당업자이면, 예를 들면, 검량선이나 적당한 프로그램을 사용해서 용이하게 행할 수 있다. 인슐리노마 세포량의 측정 방법은, 산출한 인슐리노마 세포량을 표시하는 것 및/또는 제시하는 것을 더 포함하고 있어도 된다.
[당뇨병의 예방, 치료, 진단 방법]
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 당뇨병의 예방 또는 치료 또는 진단 방법에 관한 것이다. 당뇨병의 발증 과정에서는, 췌도량(특히, 췌β세포량)이 내당능(耐糖能) 이상에 선행하여 감소하지만, 기능 이상이 검출·자각되는 단계에 이르고 나서는, 당뇨병은 이미 치료가 어려운 단계로 되어 있다. 그러나, 본 개시의 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 이미징 방법 및/또는 췌도량의 측정 방법에 따르면, 췌도량 및/또는 췌β세포량의 감소를 조기에 발견할 수 있으며, 나아가서는, 새로운 당뇨병의 예방·치료·진단법을 구축할 수 있다. 당뇨병의 예방·치료·진단의 대상(피검체)으로서는, 인간 및/또는 인간 이외의 포유류를 들 수 있다.
본 개시의 당뇨병의 진단 방법은, 본 개시의 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용해서 췌β세포의 이미징을 행하는 것, 및, 얻어진 췌도의 화상 및/또는 췌도량에 의거하여 췌도의 상태를 판정하는 것을 포함하고, 추가로, 판정 결과에 의거하여 당뇨병의 진단을 행하는 것을 포함하고 있어도 된다. 췌도의 상태의 판정은, 예를 들면, 얻어진 췌도의 화상과 기준으로 되는 췌도의 화상을 비교하는 것, 얻어진 췌도량과 기준으로 되는 췌도량을 비교하는 것 등에 의해, 췌도량의 증감 또는 변화를 판정하는 것을 포함한다. 또한, 췌도의 상태의 판정은, 정보 처리 장치를 사용해서 행해도 되고, 췌도량이 감소해 있는 것으로 판정했을 때에는, 그 정보를 제시하고, 췌도량이 증가 또는 유지되어 있는 것으로 판정했을 때에는, 그 정보를 제시하는 것이 바람직하다. 판정 결과에 의거한 당뇨병의 진단은, 예를 들면, 당뇨병 발증의 리스크를 판정하는 것, 당뇨병으로 판단하는 것, 당뇨병의 진행 상태를 판단하는 것 등을 포함한다.
본 개시의 당뇨병의 치료 방법은, 본 개시의 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 췌도의 이미징 및 이미징 결과에 의거한 당뇨병의 진단에 더하여, 진단에 의거하여 당뇨병을 치료하는 것을 포함한다. 췌도의 이미징 및 당뇨병의 진단은, 본 개시의 당뇨병의 진단 방법과 마찬가지로 행할 수 있다. 치료 방법은, 대상에 대해서 행해지는 투약이나 식사 요법을 포함하는 치료 효과를 췌도량의 변화에 주목하여 평가하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 본 개시의 당뇨병의 치료 방법은, 본 개시의 방법에 의해 췌도의 이미징 및/또는 췌도량을 측정을 행하는 것, 및, 얻어진 췌도의 화상 및/또는 췌도량에 의거하여 췌도의 기능 회복을 평가하는 것을 포함할 수 있다.
본 개시의 당뇨병의 예방 방법은, 본 개시의 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 췌도의 이미징, 및 이미징 결과에 의거하여 췌도의 상태를 판정하여 당뇨병 발증의 리스크를 판정하는 것을 포함한다. 본 개시의 당뇨병의 예방 방법은, 예를 들면, 정기적으로 췌도량의 측정을 행하여, 췌도량의 감소 경향의 유무를 체크하는 것을 포함할 수 있다.
본 개시는, 바람직한 그 밖의 태양으로서, 당뇨병의 초조기(超早期) 진단 방법에 관한 것이다. 본 개시의 당뇨병의 초조기 진단 방법은, 예를 들면, 휴먼 도크, 건강 진단에 있어서 본 개시의 방법에 의해 췌도의 이미징 및/또는 췌도량의 측정을 행하는 것, 및, 얻어진 췌도의 화상 및/또는 췌도량에 의거하여 췌도의 상태를 판정하는 것을 포함할 수 있다.
[인슐리노마의 예방, 치료, 진단 방법]
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 인슐리노마의 예방 또는 치료 또는 진단 방법에 관한 것이다. 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 이미징 방법 및/또는 인슐리노마 세포량의 측정 방법에 따르면, 인슐리노마를 조기에 발견할 수 있으며, 나아가서는, 인슐리노마의 예방·치료·진단법을 구축할 수 있을 가능성이 있다. 인슐리노마의 예방·치료·진단의 대상(피검체)으로서는, 인간 및/또는 인간 이외의 포유류를 들 수 있다.
인슐리노마의 진단 방법은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용해서 GLP-1R의 이미징을 행하는 것, 및, 얻어진 GLP-1R 양성 세포의 화상 및/또는 GLP-1R 양성 세포량에 의거하여 인슐리노마의 존재를 판정하는 것을 포함한다. 인슐리노마의 존재의 판정은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 얻어진 GLP-1R 양성 세포의 화상과 기준으로 되는 화상을 비교하는 것, 및, 얻어진 GLP-1R 양성 세포량과 기준으로 되는 GLP-1R 양성 세포량을 비교하는 것에서 선택됨에 의해 행해진다. 또한, 인슐리노마의 존재의 판정은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 정보 처리 장치를 사용해서 행해도 되고, GLP-1R 양성 세포량이 증가해 있는 것으로 판정했을 때에는, 그 정보를 제시하고, GLP-1R 양성 세포가 감소 또는 유지되어 있는 것으로 판정했을 때에는, 그 정보를 제시하는 것이 바람직하다. 판정 결과에 의거한 인슐리노마의 진단은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 인슐리노마 발증의 리스크를 판정하는 것, 인슐리노마로 판단하는 것, 및, 인슐리노마의 진행 상태를 판단하는 것에서 선택되는 것을 포함한다.
본 개시의 인슐리노마의 치료 방법은, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 GLP-1R의 이미징 및 이미징 결과에 의거한 인슐리노마의 진단에 더하여, 진단에 의거하여 인슐리노마를 치료하는 것을 포함한다. 치료 방법은, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 대상에 대하여 행해지는 투약의 치료 효과를 GLP-1R 양성 세포량의 변화에 주목해서 평가하는 것을 포함한다.
본 개시의 인슐리노마의 예방 방법은, 본 개시에 따른 방사성 표지된 폴리펩티드를 사용한 GLP-1R의 이미징, 및 이미징 결과에 의거하여 GLP-1R의 발현의 상태를 판정하여 인슐리노마 발증의 리스크를 판정하는 것을 포함한다. 본 개시의 인슐리노마의 예방 방법은, 예를 들면, 정기적으로 GLP-1R 양성 세포량의 측정을 행하여, GLP-1R 양성 세포량의 감소 경향의 유무를 체크하는 것을 포함할 수 있다.
본 개시는, 바람직한 그 밖의 태양으로서, 인슐리노마의 초조기 진단 방법에 관한 것이다. 본 개시의 인슐리노마의 초조기 진단 방법은, 예를 들면, 휴먼 도크, 건강 진단에 있어서 본 개시의 방법에 의해 GLP-1R의 이미징 및/또는 GLP-1R 양성 세포량의 측정을 행하는 것, 및, 얻어진 GLP-1R 양성 세포의 화상 및/또는 GLP-1R 양성 세포량에 의거하여 GLP-1R의 발현의 상태를 판정하는 것을 포함할 수 있다.
[표지 방법]
본 개시는, 또한 그 밖의 태양으로서, 킬레이트부가 결합된 폴리펩티드를 표지하는 방법에 관한 것이다. 본 개시의 표지 방법은, 굿완충액(Good's buffer), 또는 비이온성 계면활성제를 함유하는 완충액에 상기 폴리펩티드를 용해하는 것, 및 용해한 상기 폴리펩티드를, [111In]인듐염과 반응시키는 것을 포함한다. 본 개시의 표지 방법에 따르면, 표지를 행하는 폴리펩티드의 농도가 낮은 경우이어도, 높은 방사화학적 수율로 폴리펩티드를 표지할 수 있다. [111In]인듐염과 반응 시의 킬레이트부가 결합된 폴리펩티드의 농도는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 0.1∼100μM이며, 바람직하게는 0.1∼50μM, 0.1∼10μM, 또는 1∼10μM이다.
킬레이트부가 결합된 폴리펩티드로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상술한 표지 전구체로 되는 폴리펩티드를 들 수 있으며, 특히 한정되지 않는 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 식(1), (2), (5) 또는 (6)으로 표시되는 폴리펩티드를 들 수 있다. 킬레이트부가 결합된 폴리펩티드로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 식(19) 또는 (20)으로 표시되는 폴리펩티드를 들 수 있다.
완충액으로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 굿완충액, 아세트산 완충액, 시트르산 완충액, 타르타르산 완충액, 인산 완충액, 및 트리스 완충액 등을 들 수 있다. 굿완충액으로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, N,N-비스(2-히드록시에틸)-2-아미노에탄설폰산(BES), 2-모르폴리노에탄설폰산(MES), 비스(2-히드록시에틸)이미노트리스(히드록시메틸)메탄(Bis-Tris), N-(2-아세트아미드)이미노이아세트산(ADA), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄설폰산)(PIPES), N-(2-아세트아미드)-2-아미노에탄설폰산(ACES), 3-모르폴리노-2-히드록시프로판설폰산(MOPSO), 3-모르폴리노프로판설폰산(MOPS), N-〔트리스(히드록시메틸)메틸〕-2-아미노에탄설폰산(TES), 2-〔4-(2-히드록시에틸)-1-피페라지닐〕에탄설폰산(HEPES), N-〔트리스(히드록시메틸)메틸〕글리신(Tricine), N,N-비스(2-히드록시에틸)글리신(Bicine), N-트리스(히드록시메틸)메틸-3-아미노프로판설폰산(TAPS), N-시클로헥실-2-아미노에탄설폰산(CHES), N-시클로헥실-3-아미노-2-히드록시프로판설폰산(CAPSO), 및 N-시클로헥실-3-아미노프로판설폰산(CAPS) 등을 들 수 있다.
비이온성 계면활성제로서는, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 폴리옥시에틸렌-p-t-옥틸페닐에테르(Triton계 계면활성제 등), 및 폴리에틸렌소르비탄알킬에스테르(Tween계 계면활성제 등), 폴리옥시에틸렌알킬에테르(Brij계 계면활성제 등) 등을 들 수 있으며, 특히 한정되지 않는 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트(Tween80(상품명))를 들 수 있다.
본 개시는, 이하의 하나 또는 복수의 실시형태에 관련될 수 있다;
〔1〕 하기 식(1)으로 표시되는 폴리펩티드.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (1)(서열 번호 1)
[식(1)에 있어서,
Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X기가 결합한 아스파라긴산이고,
X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔2〕 하기 식(2)으로 표시되는 폴리펩티드.
Figure pct00009
〔3〕 하기 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드.
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3)(서열 번호 3)
[식(3)에 있어서,
Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X'기가 결합한 아스파라긴산이고,
X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔4〕 상기 방사성 금속핵종이, 111In인, 〔3〕에 기재된 폴리펩티드.
〔5〕 하기 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드.
Figure pct00010
〔6〕 하기 식(5)으로 표시되는 폴리펩티드.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (5)(서열 번호 5)
[식(5)에 있어서,
Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔7〕 하기 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드.
Figure pct00011
〔8〕 하기 식(7)으로 표시되는 폴리펩티드.
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (7)(서열 번호 7)
[식(7)에 있어서,
Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔9〕 상기 방사성 금속핵종이, 111In인, 〔8〕에 기재된 폴리펩티드.
〔10〕 하기 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드.
Figure pct00012
〔11〕 〔3〕 내지 〔5〕 및 〔8〕 내지 〔10〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩티드를 함유하는, 이미징용 조성물.
〔12〕 〔1〕, 〔2〕, 〔6〕 또는 〔7〕에 기재된 폴리펩티드와,
방사성 금속핵종을 함유하는, 키트.
〔13〕 GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 방법으로서,
〔3〕 내지 〔5〕 및 〔8〕 내지 〔10〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함하는, 이미징 방법.
〔14〕 상기 검출된 시그널을 재구성 처리해서 화상으로 변환하여 표시하는 것을 포함하는, 〔13〕에 기재된 이미징 방법.
〔15〕 〔13〕 또는 〔14〕에 기재된 이미징 방법에 사용하는 〔3〕 내지 〔5〕 및 〔8〕 내지 〔10〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩티드.
〔16〕 GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 〔3〕 내지 〔5〕 및 〔8〕 내지 〔10〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩티드의 사용.
〔17〕 〔13〕 또는 〔14〕에 기재된 이미징 방법에 사용하는 이미징용 조성물의 제조를 위한 〔1〕, 〔2〕, 〔6〕 또는 〔7〕에 기재된 폴리펩티드의 사용.
〔18〕 킬레이트부가 결합된 폴리펩티드를 표지하는 방법으로서,
굿완충액, 또는 비이온성 계면활성제를 함유하는 완충액에 상기 폴리펩티드를 용해하는 것, 및
용해한 상기 폴리펩티드를, [111In]인듐염과 반응시키는 것을 포함하는, 표지 방법.
〔19〕 하기 식(19)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(19)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(19)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (19)(서열 번호 19)
[식(19)에 있어서,
Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔20〕 하기 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(20)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(20)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
Figure pct00013
〔21〕 하기 식(21)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(21)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(21)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (21)(서열 번호 21)
[식(21)에 있어서,
Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
〔22〕 하기 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드,
하기 식(22)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
하기 식(22)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
Figure pct00014
〔23〕 〔21〕 또는 〔22〕에 기재된 폴리펩티드를 함유하는, 이미징용 조성물.
〔24〕 〔19〕 또는 〔20〕에 기재된 폴리펩티드와,
방사성 금속핵종을 함유하는, 키트.
〔25〕 GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 방법으로서,
〔21〕 또는 〔22〕에 기재된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함하는, 이미징 방법.
〔26〕 상기 검출된 시그널을 재구성 처리해서 화상으로 변환하여 표시하는 것을 포함하는, 〔25〕에 기재된 이미징 방법.
〔27〕 〔25〕 또는 〔26〕에 기재된 이미징 방법에 사용하는 〔21〕 또는 〔22〕에 기재된 폴리펩티드.
〔28〕 GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 〔21〕 또는 〔22〕에 기재된 폴리펩티드의 사용.
〔29〕 〔25〕 또는 〔26〕에 기재된 이미징 방법에 사용하는 이미징용 조성물의 제조를 위한 〔19〕 또는 〔20〕에 기재된 폴리펩티드의 사용.
〔30〕 〔3〕 내지 〔5〕, 〔8〕 내지 〔10〕, 〔21〕 및 〔22〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩티드의 제조 방법으로서,
〔1〕, 〔2〕, 〔6〕, 〔7〕, 〔19〕 또는 〔20〕에 기재된 폴리펩티드를, 비이온성 계면활성제를 함유하는 완충액 또는 굿완충액에 용해하는 것, 및
용해한 상기 폴리펩티드를, [111In]인듐염과 반응시키는 것을 포함하는, 제조 방법.
〔31〕 상기 폴리펩티드를, 비이온성 계면활성제를 함유하는 굿완충액에 용해하는 것을 포함하는, 〔30〕에 기재된 제조 방법.
이하에, 실시예를 사용해서 본 개시를 더 설명한다. 단, 본 개시는 이하의 실시예로 한정하여 해석되지 않는다.
[실시예]
또, 본 개시에 있어서, 이하의 약어(略語)를 사용한다.
Bn : 벤질
Ahx : 6-아미노헥사노익 애시드(aminohexanoic acid)
OtBu : tert-부틸옥시
Fmoc : 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐기
HBTU : 1-[비스디메틸아미노메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨-3-옥사이드-헥사플루오로포스페이트
NaOAc : 아세트산나트륨
Trt : 트리틸
TIS : 트리이소프로필실란(triisopropyl silane)
DT : 도데칸티올(dodecane thiol)
또, 아미노산은, 특히 언급하지 않는 한, L체를 사용했다.
[제조예 1]
하기 수순으로, 식(2)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (2)(서열 번호 2)
(1) 보호 펩티드 수지의 합성
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 Rink Amide MBHA (9)(서열 번호 9)
상기 식(9)으로 표시되는 보호 펩티드 수지의 합성은, Applied Biosystems사제의 펩티드 자동 합성기(431A)를 사용하여 첨부의 소프트웨어에 따라서 1개씩 아미노산을 카르복시 말단측에서부터 결합시켜가는 방법(고상(固相) 합성법)에 의해 행했다.
Rink Amide MBHA 레진(0.25mmol 스케일(scale))을 출발 수지 담체로서 사용하여, Fmoc-아미노산 유도체를 상기 펩티드 합성기의 반응 용기에 세팅하고, 합성기에 첨부되어 있는 소프트웨어에 따라서, 활성화제인 1-[비스디메틸아미노메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨-3-옥사이드-헥사플루오로포스페이트(HBTU) 및 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)을 디메틸포름아미드(DMF)에 용해해서 반응기에 가하여 반응시켰다. 얻어진 수지를 피페리딘 함유 N-메틸피롤리돈 중에서 온화하게 교반하여 Fmoc기를 제거하고 다음의 아미노산 유도체의 축합으로 진행했다. 사용한 Fmoc아미노산 유도체 중, 측쇄에 관능기가 있는 아미노산은 각각 Asp(OBu), Ser(OBu), Lys(Boc), Gln(Trt), Glu(OBu), Trp(Boc), Arg(Pbf) 및 Asn(Trt)을 사용했다.
서열에 따라서 축차 아미노산을 신전(伸展)하여, 식(10)으로 표시되는 보호 펩티드 수지 B를 얻었다.
Fmoc-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA (10)(서열 번호 10)
보호 펩티드 수지 C에 Fmoc-Ahx-OH를 HBTU-HOBt법으로 도입하여, 식(11)으로 표시되는 보호 펩티드 수지 C를 얻었다.
Fmoc-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA (11)(서열 번호 11)
보호 펩티드 수지 C로부터 Fmoc기를 제거한 후, p-SCN-Bn-DTPA (Macrocyclics사제) 및 DIEA와의 반응에 의해, 식(9)으로 표시되는 보호 펩티드 수지를 얻었다. 또, 식(9), (10) 및 (11)에 있어서, 측쇄의 보호기의 표기를 생략했다.
(2) 탈보호와 수지로부터의 잘라내기
얻어진 보호 펩티드 수지를 트리플루오로아세트산을 사용하는 정해진 방법의 TFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5, v/v) 탈보호 조건에서 실온, 2시간 처리하여 탈보호와 수지로부터의 펩티드의 절리를 동시에 행했다. 반응액으로부터 담체 수지를 여과 분별 후, TFA를 증류 제거. 잔사에 에테르를 가하여 얻어지는 조생성물(粗生成物)의 침전을 여과하여 취했다.
(3) 목적 펩티드의 단리(單離) 정제
얻어진 조생성 펩티드를 시마즈제 LC-8A의 HPLC 분취(分取) 장치(칼럼 : ODS 30×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 분취 정제하여, 목적의 펩티드의 분획을 얻고, 아세토니트릴을 증류 제거한 후, 동결 건조 분말로 하여, 목적물을 트리플루오로아세트산염으로서 얻었다.
[제조예 2]
하기 수순으로, 식(12)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
(Bn In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (12)(서열 번호 12)
식(2)으로 표시되는 폴리펩티드(2.7㎎)를 0.1% Tween80을 함유하는 0.01M MES 버퍼(pH 5.5) 100㎖에 용해시키고, 1M InCl3 용액을 20㎕ 가했다. 실온에서 5분간 정치하여 ESI-MASS로 식(12)으로 표시되는 폴리펩티드의 생성을 확인하고, 시마즈제 LC-20A의 HPLC 분석 장치(칼럼 : ODS 10×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 분취 정제하여, 목적의 펩티드의 분획을 얻고, 아세토니트릴을 증류 제거한 후, 동결 건조 분말로 하여, 식(12)으로 표시되는 폴리펩티드를 트리플루오로아세트산염으로서 얻었다.
[제조예 3]
하기 수순으로, 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (6)(서열 번호 6)
(1)보호 펩티드 수지의 합성
Boc-DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 Rink Amide MBHA (13)(서열 번호 13)
상기 식(13)으로 표시되는 보호 펩티드 수지의 합성은, Applied Biosystems사제의 펩티드 자동 합성기(431A)를 사용해서 첨부의 소프트웨어에 따라서 1개씩 아미노산을 카르복시 말단측에서부터 결합시켜가는 방법(고상 합성법)에 의해 행했다.
Rink Amide MBHA 레진(0.25mmol 스케일)을 출발 수지 담체로서 사용하여, Fmoc-아미노산 유도체를 상기 펩티드 합성기의 반응 용기에 세팅하고, 합성기에 첨부되어 있는 소프트웨어에 따라서, 활성화제인 1-[비스디메틸아미노메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨-3-옥사이드-헥사플루오로포스페이트(HBTU) 및 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)을 디메틸포름아미드(DMF)에 용해해서 반응기에 가하여 반응시켰다. 얻어진 수지를 피페리딘 함유 N-메틸피롤리돈 중에서 온화하게 교반하여 Fmoc기를 제거하고 다음의 아미노산 유도체의 축합으로 진행했다. 사용한 Fmoc아미노산 유도체 중, 측쇄에 관능기가 있는 아미노산은 각각 Asp(OBu), Ser(OBu), Lys(Boc), Lys(Mmt), Gln(Trt), Glu(OBu), Trp(Boc), Arg(Pbf) 및 Asn(Trt)을 사용했다.
서열에 따라서 축차 아미노산을 신전하여, 식(14)으로 표시되는 보호 펩티드 수지 B를 얻었다.
Boc-DLSK(Mmt)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA (14)(서열 번호 14)
1.5% TFA/ 5% TIS/ 93.5% DCM로 처리해서 K12(4번째의 리신 잔기)의 측쇄로부터 보호기(Mmt기)를 제거한 후, Fmoc-Ahx-OH를 HBTU-HOBt법으로 도입해서, 식(15)으로 표시되는 보호 펩티드 수지 C를 얻었다.
Boc-DLSK(-Ahx-Fmoc)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA (15)(서열 번호 15)
또한 K(-Ahx-Fmoc)12의 Fmoc기를 제거한 후, p-SCN-Bn-DTPA (Macrocyclics사제) 및 DIEA와의 반응에 의해, 식(13)으로 표시되는 보호 펩티드 수지를 얻었다. 또, 식(13), (14) 및 (15)에 있어서, 측쇄의 보호기의 표기를 생략했다.
(2) 탈보호와 수지로부터의 잘라내기
얻어진 보호 펩티드 수지를 트리플루오로아세트산을 사용하는 정해진 방법의 TFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5, v/v) 탈보호 조건에서 실온, 2시간 처리하여 탈보호와 수지로부터의 펩티드의 절리를 동시에 행했다. 반응액으로부터 담체 수지를 여과 분별 후, TFA를 증류 제거. 잔사에 에테르를 가하여 얻어지는 조생성물의 침전을 여과하여 취했다.
(3) 목적 펩티드의 단리 정제
얻어진 조생성 펩티드를 시마즈제 LC-8A의 HPLC 분취 장치(칼럼 : ODS 30×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 분취 정제하여, 목적의 펩티드의 분획을 얻고, 아세토니트릴을 증류 제거한 후, 동결 건조 분말로 하여, 목적물을 트리플루오로아세트산염으로서 얻었다.
[제조예 4]
하기 수순으로, 식(16)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (16)(서열 번호 16)
식(6)으로 표시되는 폴리펩티드(2.3㎎)를 0.1% Tween80을 함유하는 0.01M MES 버퍼(pH 5.5) 100㎕에 용해시키고, 1M InCl3 용액을 20㎕ 가했다. 실온에서 5분간 정치하여 ESI-MASS로 식(16)으로 표시되는 폴리펩티드의 생성을 확인하고, 시마즈제 LC-20A의 HPLC 분석 장치(칼럼 : ODS 10×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 분취 정제하여, 목적의 펩티드의 분획을 얻고, 아세토니트릴을 증류 제거한 후, 동결 건조 분말로 하여, 식(16)으로 표시되는 폴리펩티드를 트리플루오로아세트산염으로서 얻었다.
하기 수순으로, 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제하는 조건을 검토했다.
DLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (8)(서열 번호 8)
식(6)으로 표시되는 폴리펩티드를 각종 용매에 용해시킨 용액(1-100μM) 20㎕에 니혼메디피직스샤제 [111In]InCl3(0.02M HCl)를 20㎕ 가했다. 실온에서 30분간 정치하고, 시마즈제 LC-20A의 HPLC 분석 장치(칼럼 : ODS 10×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드를 확인했다. 그 결과의 일례를 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure pct00015
표 1에 나타내는 바와 같이, 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드 용액(100μM)을 사용했을 경우, 정량적으로 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드가 얻어졌다(항목(Entry) 1,2). 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드 용액(10μM)을 사용했을 경우, 용매로서 0.4M NaOAc(pH 5.0)를 사용한 경우보다도 0.01-1.0M MES(pH 5.5)를 사용한 경우 쪽이 양호한 방사화학적 수율이었다. 또한, 가용화제(可溶化劑)로서 0.1% Tween80을 첨가한 경우 쪽이 첨가하고 있지 않은 조건보다도 양호한 방사화학적 수율이었다(항목 3-12). 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드 용액(1μM)을 사용했을 경우, 용매로서 0.4M NaOAc(pH 5.0)를 사용한 경우는, 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드는 얻어지지 않고(항목 13), 0.01-1.0M MES(pH 5.5)를 사용한 경우에서도 1-2%의 방사화학적 수율이었다(항목 14-16). 가용화제로서 0.1% Tween80을 첨가한 0.01M MES(pH 5.5)를 사용했을 경우, 86.4%의 양호한 방사화학적 수율이었다(항목 21).
또한, 식(17)으로 표시되는 폴리펩티드를 사용해서 상기 표 1에 나타내는 조건과 같은 조건에서 폴리펩티드의 표지를 행한 바, 마찬가지로 식(18)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제할 수 있었다.
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (17)(서열 번호 17)
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (18)(서열 번호 18)
[바인딩 어세이의 수순]
바인딩 버퍼(Binding Buffer)(50mM HEPES, 5mM MgCl2, 0.2% BSA, pH 7.4) 155㎕, 평가할 폴리펩티드 수용액(0,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 M) 20㎕, PerkinElmer사제 [125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM) 20㎕, Millipore사제 Membrane Preparation Recombinant Human GLP-1(200units/1㎖) 5㎕를 혼합하고, 실온에서 2시간 진탕했다. 진탕한 액은 유리 섬유 여과지를 사용한 B/F 분리를 행하고, 여과지를 워시 버퍼(Wash Buffer)(25mM HEPES, 0.5M NaCl, 0.1% BSA, pH 7.4)로 세정했다. 여과지 위에 남은 방사능을 PerkinElmer사제 Wallac1480WIZARD(R)3의 γ카운터를 사용해서 측정했다. 얻어진 측정 결과는 GraphPad Software사제 GraphPad Prism version 5.03을 사용해서 해석했다. 그 결과의 일례를 도 3의 그래프에 나타낸다.
식(2)으로 표시되는 폴리펩티드의 IC50는 6.86nM이며, 비표지의 엑센딘(9-39)의 GLP-1R에 대한 친화성(30.2nM)보다도 한 자릿수 이상 친화성의 향상이 확인되었다. 또한, 인듐을 도입한 식(12)으로 표시되는 폴리펩티드(In-DTPA9-Ex(9-39))의 IC50는 2.5nM이며, 인듐을 도입함에 의하여 더 친화성이 향상되었다. 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드의 IC50는 26.25nM이며, 비표지의 엑센딘(9-39)의 GLP-1R에 대한 친화성(30.2nM)과 동등한 친화성이 확인되었다. 또한, 인듐을 도입한 식(16)으로 표시되는 폴리펩티드(In-DTPA12-Ex(9-39))의 IC50는 31.27nM이며, 인듐을 도입함에 의해서도 동등한 친화성이 확인되었다.
[뮤린 혈장에의 안정성의 인비트로 평가(In Vitro Evaluation of Stability in Murine Plasma)]
ddY 마우스(6주령, 암컷)로부터 채취한 혈장 200㎕와 111In-DTPA9-Ex(9-39)(1.85 MBq) 20㎕를 혼화하고, 37℃에서 30, 60, 120, 240분간 인큐베이트했다. 그 후, 메탄올 100㎕를 가해, 혈장 중 단백 성분을 응집시키고, 5분 원심(4℃, 10000×g)하여, 상청(上淸)을 얻었다. 상청은 Millex-GV(13㎜)를 사용해서 여과하고, HPLC로 분석했다. 그 결과의 일례를 도 4의 그래프에 나타낸다. 도 4에 나타내는 바와 같이, 111In-DTPA9-Ex(9-39)는, 240분간 인큐베이트한 후이어도, 91%가 미변화체로서 존재해 있었다. 즉, 111In-DTPA9-Ex(9-39)는 매우 안정함을 확인할 수 있었다.
[제조예 5]
하기 수순으로, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
(Bn [111In]In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (4)(서열 번호 4)
식(2)으로 표시되는 폴리펩티드를 0.1% Tween80을 함유하는 0.01M MES 버퍼(pH 5.5)에 용해시킨 용액(10μM) 20㎕에 니혼메디피직스샤제 [111In]InCl3(0.02M HCl)를 20㎕ 가했다. 실온에서 30분간 정치하고, 시마즈제 LC-20A의 HPLC 분석 장치(칼럼 : ODS 10×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드를 확인하고, 사용했다.
[제조예 6]
하기 수순으로, 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다.
DLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (8)(서열 번호 8)
식(6)으로 표시되는 폴리펩티드를 0.1% Tween80을 함유하는 0.01M MES 버퍼(pH 5.5)에 용해시킨 용액(10μM) 20㎕에 니혼메디피직스샤제 [111In]InCl3(0.02M HCl)를 20㎕ 가했다. 실온에서 30분간 정치하고, 시마즈제 LC-20A의 HPLC 분석 장치(칼럼 : ODS 10×250㎜)를 사용해서 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물-아세토니트릴의 계에서 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드를 확인하고, 사용했다.
[분포(Distribution)]
조제한 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드(0.8-1.2μCi)를 무마취 하의 6주령 ddY 마우스(수컷, 체중 25g) 정맥 주사(미정맥(尾靜脈))에 의해 투여했다. 투여 5분 후, 15분 후, 30분 후, 60분 후, 120분 후에 각 장기를 적출했다(n=5). 각 장기의 중량과 방사능을 측정하고, 단위 중량당의 방사능으로부터 집적량(%dose/g)을 산출했다. 그 결과의 일례를 하기 표 2에 나타낸다.
[표 2]
Figure pct00016
표 2에 나타내는 바와 같이, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 췌장에의 집적은 투여 5분 후에서 12.69%dose/g, 투여 15분 후에서 9.55%dose/g, 투여 30분 후에서 5.74%dose/g, 투여 60분 후에서 4.04%dose/g, 투여 120분 후에서 2.64%dose/g이었다. 또한, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드는, 투여 후 5∼120분의 사이에서는, 췌장의 인접 장기인 간장, 위, 비장, 소장보다도 췌장에 많이 집적하여, 관찰하기에 충분한 콘트라스트의 SPECT 화상이 얻어지는 것으로 시사되었다.
[분포]
조제한 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드(0.8-1.2μCi)를 무마취 하의 6주령 ddY 마우스(수컷, 체중 25g) 정맥 주사(미정맥)에 의해 투여했다. 투여 5분 후, 15분 후, 30분 후, 60분 후, 120분 후에 각 장기를 적출했다(n=5). 각 장기의 중량과 방사능을 측정하고, 단위 중량당의 방사능으로부터 집적량(%dose/g)을 산출했다. 그 결과의 일례를 하기 표 3에 나타낸다.
[표 3]
Figure pct00017
표 3에 나타내는 바와 같이, 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드의 췌장에의 집적은 투여 5분 후에서 8.78%dose/g, 투여 15분 후에서 4.47%dose/g, 투여 30분 후에서 3.27%dose/g, 투여 60분 후에서 1.41%dose/g, 투여 120분 후에서 0.70%dose/g이었다. 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드와 비교해서 췌장에의 집적의 저하가 보이지만, GLP-1R에의 친화성의 차이에 따른 영향이 시사되었다. 또한, 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드는, 투여 후 5∼30분의 사이에서는, 췌장의 인접 장기인 간장, 위, 비장, 소장보다도 췌장에 많이 집적하여, 관찰하기에 충분한 콘트라스트의 SPECT 화상이 얻어지는 것으로 시사되었다.
[분포]
조제한 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드(0.8-1.2μCi)를 무마취 하의 래트 인슐리노마(Insulinoma) 세포주 INS-1 이식 BALB/c nu/nu 마우스(암컷, 체중 20g) 정맥 주사(미정맥)에 의해 투여했다. 투여 15분 후, 30분 후, 60분 후, 120분 후, 240분 후, 360분 후에 각 장기를 적출했다(n=5). 각 장기의 중량과 방사능을 측정하고, 단위 중량당의 방사능으로부터 집적량(%dose/g)을 산출했다. 그 결과의 일례를 하기 표 4에 나타낸다.
[표 4]
Figure pct00018
표 4에 나타내는 바와 같이, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 INS-1 종양에의 집적은, 투여 15분 후에서 14.60%dose/g, 투여 30분 후에서 7.83%dose/g, 투여 60분 후에서 4.40%dose/g, 투여 120분 후에서 2.32%dose/g, 투여 240분 후에서 1.87%dose/g, 투여 360분 후에서 1.94%dose/g이었다. 또한, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드는, 투여 후 15∼360분의 사이에서는, 췌장의 인접 장기인 간장, 위, 비장, 소장보다도 췌장에 많이 집적하고, 특히 INS-1 종양/췌장비는 투여 15분 후에서 2.06, 투여 30분 후에서 2.52, 투여 60분 후에서 2.70, 투여 120분 후에서 2.46, 투여 240분 후에서 2.86, 투여 360분 후에서 2.25였다. 이들 결과로부터, INS-1 종양을 관찰하기에 충분한 콘트라스트의 SPECT 화상이 얻어지는 것으로 시사되었다.
[블로킹 스터디]
Ex(9-39)아미드(20㎍)를 투여한 무마취 하의 래트 인슐리노마 세포주 INS-1 이식 BALB/c nu/nu 마우스(암컷, 체중 20g) 정맥 주사(미정맥)에 의해 투여했다. 30분 후 조제한 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드(0.8-1.2μCi)를 투여하고, 60분 후에 각 장기를 적출했다(n=5). 각 장기의 중량과 방사능을 측정하고, 단위 중량당의 방사능으로부터 집적량(%dose/g)을 산출했다. 그 결과의 일례를 도 1에 나타낸다.
도 1에 나타내는 바와 같이, Ex(9-39)아미드(20㎍)를 투여한 인슐리노마 세포주 INS-1 이식 BALB/c nu/nu 마우스의 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 집적량(%dose/g)에 대해서, Ex(9-39)아미드(20㎍)를 투여하고 있지 않은 인슐리노마 세포주 INS-1 이식 BALB/c nu/nu 마우스의 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드의 집적량(%dose/g)을 비교하면, INS-1 종양에서는 집적량이 75.7% 감소하고, 췌장에서는 집적량이 67.7% 감소했으므로, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드가 GLP-1R 특이적으로 집적해 있음이 확인되었다.
[SPECT 스터디(Study)]
조제한 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드(538μCi)를 무마취 하의 래트 인슐리노마 세포주 INS-1 이식 BALB/c nu/nu 마우스(암컷, 체중 20g) 정맥 주사(미정맥)에 의해 투여했다. 투여 후 30분에서부터 1시간 30분까지 소동물용 SPECT/CT(FX-3300)로 촬상했다. 그 결과의 일례를 도 2에 나타낸다.
도 2는, 꼬리측의 횡단면상이며, 도 2에 있어서 방광을 화살표로 나타내고, 종양 부분을 화살촉으로 나타낸다. 도 2에 나타내는 바와 같이, 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드를 사용한 INS-1 종양을 명료하게 묘출(描出)하는 것이 가능하며, 삼차원 이미징이 가능해졌다. 따라서, 본 발명의 이미징용 분자 프로브이면, GLP-1R을 표적으로 한 비침습적 이미징 프로브로 되는 것이 시사되었다.
[제조예 7]
제조예 3과 마찬가지의 수순으로, 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드를 조제했다. 또, 사용한 Fmoc아미노산 유도체 중, 측쇄에 관능기가 있는 아미노산은 각각 His(Trt), Asp(OBu), Ser(OBu), Lys(Boc), Lys(Mmt), Gln(Trt), Glu(OBu), Trp(Boc), Arg(Pbf) 및 Asn(Trt)을 사용했다.
[제조예 8]
식(6)으로 표시되는 폴리펩티드 대신에 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드를 사용한 이외는, 제조예 54와 마찬가지의 수순으로, 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드(이하, 「In-DTPA12-Ex4」라고도 함)를 조제했다.
HGEGTFTSDLSK DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (23)(서열 번호 23)
[제조예 9]
식(6)으로 표시되는 폴리펩티드 대신에 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드를 사용한 이외는, 제조예 5와 마찬가지의 수순으로, 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드(이하, 「111In-DTPA12-Ex4」라고도 함)를 조제했다(방사화학적 수율 : 64.3%, 방사화학적 순도 : >99%).
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (22)(서열 번호 22)
[GLP-1 막 표본을 사용한 저해 어세이(Inhibition Assay Using GLP-1 Membrane Preparation)]
바인딩 버퍼(50mM HEPES, 5mM MgCl2, 0.2% BSA, pH 7.4) 155㎕, In-DTPA12-Ex4의 수용액(0, 10-11, 10-10, 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 M) 20㎕, PerkinElmer사제 [125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM) 20㎕, Millipore사제 Membrane Preparation Recombinant Human GLP-1(200units/1㎖) 5㎕를 혼합하고, 25℃에서 2시간 진탕했다. 진탕한 액은 유리 섬유 여과지를 사용한 B/F 분리를 행하고, 여과지를 워시 버퍼(25mM HEPES, 0.5M NaCl, 0.1% BSA, pH 7.4)로 세정했다. 여과지 위에 남은 방사능을 PerkinElmer사제 Wallac1480WIZARD(R)3의 γ카운터를 사용해서 측정했다. 얻어진 측정 결과는 GraphPad Software사제 GraphPad Prism version 5.03을 사용해서 해석하여, 50% 저해 농도(IC50)를 측정했다. 그 결과의 일례를 도 5의 그래프에 나타낸다. In-DTPA12-Ex4의 IC50는 0.43nM(95% 신뢰 구간(confidence interval) : 0.24-0.78)이며, 비표지의 엑센딘4(IC50 : 0.19nM(95% 신뢰 구간 : 0.11-0.32))와 같은 정도의 GLP-1R 결합 친화성을 가짐이 확인되었다.
[뮤린 혈장에서의 안정성의 인비트로 평가(In Vitro Evaluation of Stability in Murine Plasma)]
ddY 마우스(6주령, 암컷)로부터 채취한 혈장 200㎕와 111In-DTPA12-Ex4(1.85 MBq) 20㎕를 혼화하고, 37℃에서 30, 60, 120, 240분간 인큐베이트했다. 그 후, 메탄올 100㎕를 가해, 혈장 중 단백 성분을 응집시키고, 5분 원심(4℃, 10000×g)하여, 상청을 얻었다. 상청은 Millex-GV(13㎜)를 사용해서 여과하고, HPLC로 분석했다. 그 결과의 일례를 도 6의 그래프에 나타낸다. 도 6에 나타내는 바와 같이, 111In-DTPA12-Ex4는, 240분간 인큐베이트한 후이어도, 98.8%가 미변화체로서 존재해 있었다. 즉, 111In-DTPA12-Ex4는 매우 안정함을 확인할 수 있었다.
[INS-1 종양 세포를 사용한 세포 흡수 어세이(Cellular Uptake Assay Using INS-1 Tumor Cells)]
래트 인슐리노마 세포주 INS-1을 24-웰 플레이트(well plate)에 파종하여 종야(終夜) 배양(37℃, 5% CO2)한 후, 111In-DTPA12-Ex4(37kBq/20㎕)를 첨가하고, 37℃에서 30, 60, 120, 240분간 인큐베이트했다. 비특이적 결합의 평가는, 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드와 함께 과잉량의 엑센딘-(9-39)을 첨가함에 의해 행했다. 인큐베이트후, 냉PBS(-)에 의해 세정을 행한 후, 0.1N NaOH 수용액에 의해 세포를 용해했다. 세포막 획분에 결합한 방사능은, 애시드 버퍼(Acid Buffer)(50mM 글리신(Glycine), 0.1M NaCl, pH 2.8)를 가하여 4℃에서 10분간 정치한 후에 세정, 세포 용해의 조작을 행함으로써 제거했다. 세포 용해액의 방사능은 BCA 단백 정량에 의해 보정했다. 그 결과의 일례를 도 7에 나타낸다. 도 7에 있어서, 총 흡수(Total Uptake)는 세포에 도입된 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드의 도입량(방사능)을 나타내고, 내재화(Internalization)은 세포막 획분에 결합한 방사능의 제거 후의 도입량(방사능)을 나타내고, 블로킹(Blocking)은 비특이적 결합의 평가의 결과를 나타낸다. 도 7에 나타내는 바와 같이, 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드의 세포에의 도입량은 경시적(經時的)으로 증가하며, 그 도입은 과잉한 엑센딘-(9-39)의 첨가에 의해 저해되었다. 또한, GLP-1R에 결합한 식(23)으로 표시되는 폴리펩티드는, 거의 모두 내재화해 있는 것이 시사되었다.
[인비보 바이오디스트리뷰션(In Vivo Biodistribution)]
ddY 마우스(6주령, 수컷)에, 111In-DTPA12-Ex4(18.5kBq/100㎕)를 마우스 미정맥으로부터 투여했다. 투여 후, 5, 15, 30, 60, 120분에 도살하고, 각 장기(췌장, 혈액, 심장, 폐, 위, 소장, 대장, 간장, 비장, 신장)를 적출했다(n=5). 각 장기의 중량과 방사능을 측정하고, 각 장기에의 집적량(%주입 투여량(injection dose)/g)을 산출했다. 그 결과의 일례를 하기 표 5 및 6에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00019
[표 6]
Figure pct00020
표 5에 나타내는 바와 같이, 111In-DTPA12-Ex4는, GLP1-R 발현 조직인 췌장 및 폐에 높은 집적을 나타냈다. 표 6에 나타내는 바와 같이, 111In-DTPA12-Ex4는, 췌장/혈액비가 투여 후 조기에서 2를 넘는 값을 나타내어, 양호한 혈액 클리어런스를 나타냄과 함께, 췌장/간장비도 매우 높았다. 이렇게 췌장에의 집적량이 높은 한편, 췌장/간장비가 높고, 혈액 클리어런스가 우수한 폴리펩티드에 따르면, 췌β세포의 이미징, 바람직하게는 췌β세포의 GLP-1R의 이미징을 행했을 때에, 명료한 화상이 얻어지는 것이 시사되었다.
[ddy 마우스에서의 SPECT/CT 스터디(SPECT/CT Study in ddY Mice)]
ddY 마우스(6주령, 수컷)에, 111In-DTPA12-Ex4(9.62MBq/150㎕)를 마우스 미정맥으로부터 투여했다. 투여 후 20분부터 이소플루란(2.5%) 흡인 마취하고 투여 후 38분에서부터 SPECT/CT 장치(GMI, FX-3300)를 사용해서 48분간 촬상했다. 그 후, CT 촬상(60㎸, 310㎂)을 행했다. 그 결과를 도 8에 나타낸다.
<SPECT 촬상 조건>
방법 : 단층상(Tomo)
분광기(Collimators) : 4-헤드(head) N5F75A10(1.0-㎜ 지름(diameter), 7.5-㎜ 초점 거리(focal length))
회전 반경(Radius of rotation) : 35㎜
복원(Reconstruction) : 3D-OSEM(반복(Iterations) : 5, 서브셋(Subsets) : 8)
도 8에 있어서 왼쪽에서부터 차례로, 횡단상(transverse view), 관상단상(coronal view), 및 시상단상(sagittal view)을 나타낸다. 도 8에 있어서 흰선으로 둘러싼 위치가 췌장의 위치를 나타낸다. 도 8에 나타내는 바와 같이, 111In-DTPA12-Ex4를 사용한 SPECT/CT 촬상에 의하여, 정상 마우스(ddy 마우스)에 있어서 췌장을 묘사할 수 있었다. 이렇게, 인간보다도 췌장의 사이즈가 작으며, 또한 장기가 밀집해 있는 마우스에 있어서 췌장의 묘사에 성공했으므로, 마우스보다도 췌장의 사이즈가 크며, 또한 장기가 밀집해 있지 않은 인간이면, 예를 들면, 췌장의 위치 및 사이즈를 보다 명확히 판별할 수 있으며, 또한, 췌β세포의 GLP-1R에 결합하는 펩티드 유도체의 양을 측정할 수 있는 것이 시사되었다.
이들의 결과로부터, 111In-DTPA12-Ex4는, GLP-1R 결합형 췌β세포이미징 프로브로서 유용한 것이 나타났다.
본 개시에 따른 폴리펩티드는, 예를 들면, 의학 연구 분야, 의료 분야, 치료 및 진단이 아닌 분야, 분자 이미징 분야, 인슐리노마에 관한 분야 등에서 유용하다.
[서열표 프리 텍스트]
서열 번호 1 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 2 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 3 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 4 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 5 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 6 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 7 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 8 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 9 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 10 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 11 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 12 : 실시예에 사용된 폴리펩티드(콜드체)의 일 실시형태
서열 번호 13 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 14 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 15 : 일 실시형태에 사용된 보호 펩티드 수지
서열 번호 16 : 실시예에 사용된 폴리펩티드(콜드체)의 일 실시형태
서열 번호 17 : 실시예에서 조제한 폴리펩티드
서열 번호 18 : 실시예에서 조제한 폴리펩티드
서열 번호 19 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 20 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 21 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 22 : 본 개시에 따른 폴리펩티드의 일 실시형태
서열 번호 23 : 실시예에 사용된 폴리펩티드(콜드체)의 일 실시형태
SEQUENCE LISTING <110> Kyoto University ARKRAY, Inc. <120> POLYPEPTIDE AND IMAGING METHOD <130> H4168 <150> JP2012-262908 <151> 2012-11-30 <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is asparagine acid in which -Y-X group bonded to the alfa-amino group. <400> 1 Xaa Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 2 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is bonded to DTPA via Ahx-Bn <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 2 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 3 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is asparagine acid in which -Y-X' group bonded to the alfa-amino group. <400> 3 Xaa Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 4 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is bonded to [111In]-DTPA via Ahx-Bn <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 4 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 5 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is lysine in which -Y-X group bonded to the amino group at its side chain. <400> 5 Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 6 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The amino group of the side chain is bonded to DTPA via Ahx-Bn. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 6 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 7 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is lysine in which -Y-X' group bonded to the amino group at its side chain. <400> 7 Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 8 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The amino group of the side chain is bonded to [111In]-DTPA via Ahx-Bn. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 8 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 9 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is bonded to DTPA via Ahx-Bn. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 9 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 10 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is protected by a Fmoc. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 10 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 11 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is bonded to -Ahx-Fmoc. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 11 Lys Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile 1 5 10 15 Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 12 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of cold of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is bonded to In-DTPA via -Ahx-Bn- <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 12 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 13 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is protected by a Boc. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The amino group of the side chain is bonded to DTPA via -Ahx-Bn-. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 13 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 14 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is protected by a Boc. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The functional group of the side chain is protected by a Mmt. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 14 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 15 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A protected peptide resin used in one of embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> The alfa-amino group of the N-terminus is protected by a Boc. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The functional group of the side chain is bonded to -Ahx-Fmoc. <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The functional group of the side chain is protected by a Pdf. <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> The functional group of the side chain is protected by a Boc. <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> The functional group of the side chain is protected by a Trt. <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(25) <223> The functional group of the side chain is protected by a OBu. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> The carboxyl group of the C-terminus is bound to Rink Amide MBHA. The functional group of the side chain is protected by a OBu. <400> 15 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 16 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of cold of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The amino group of side chain is bonded to In-DTPA via -Ahx-Bn-. <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 16 Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu 1 5 10 15 Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 20 25 30 <210> 17 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A polypeptide produced in Example <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The amino group of the side chain is bonded to DTPA via -Ahx-Bn-. <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 17 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 18 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A polypeptide produced in Example <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The amino group of the side chain is bonded to [111In]-DTPA via -Ahx-Bn-. <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 18 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 19 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Xaa is lysine in which -Y-X group bonded to the amino group at its side chain. <400> 19 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 20 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The amino group of the side chain is bonded to DTPA via Ahx-Bn. <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 20 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 21 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Xaa is lysine in which -Y-X' group bonded to the amino group at its side chain. <400> 21 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 22 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The amino group of the side chain is bonded to [111In]-DTPA via Ahx-Bn. <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 22 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 23 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> One of embodiments of cold of the disclosed polypeptides <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> The amino group of side chain is bonded to In-DTPA via -Ahx-Bn-. <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 23 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

Claims (22)

  1. 하기 식(1)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (1)(서열 번호 1)
    [식(1)에 있어서,
    Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X기가 결합한 아스파라긴산이고,
    X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(1,4,7-triazacyclononnane-N,N',N''-triacetic acid(NOTA))이고,
    Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  2. 하기 식(2)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Figure pct00021
  3. 하기 식(3)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (3)(서열 번호 3)
    [식(3)에 있어서,
    Xaa1은, α-아미노기에 -Y-X'기가 결합한 아스파라긴산이고,
    X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종(金屬核種)을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
    Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  4. 제3항에 있어서,
    상기 방사성 금속핵종이, 111In인, 폴리펩티드.
  5. 하기 식(4)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Figure pct00022
  6. 하기 식(5)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (5)(서열 번호 5)
    [식(5)에 있어서,
    Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
    상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
    상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  7. 하기 식(6)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Figure pct00023
  8. 하기 식(7)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (7)(서열 번호 7)
    [식(7)에 있어서,
    Xaa4는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
    상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
    상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  9. 제8항에 있어서,
    상기 방사성 금속핵종이, 111In인, 폴리펩티드.
  10. 하기 식(8)으로 표시되는 폴리펩티드.
    Figure pct00024
  11. 제3항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 폴리펩티드를 함유하는, 이미징용 조성물.
  12. 제1항, 제2항, 제6항 또는 제7항에 기재된 폴리펩티드와,
    방사성 금속핵종을 함유하는, 키트.
  13. GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 방법으로서,
    제3항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 폴리펩티드가 투여된 피검체로부터 상기 폴리펩티드의 방사성 시그널을 검출하는 것을 포함하는, 이미징 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 검출된 시그널을 재구성 처리해서 화상으로 변환하여 표시하는 것을 포함하는, 이미징 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 기재된 이미징 방법에 사용하는 제3항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 폴리펩티드.
  16. GLP-1 수용체를 이미징하기 위한 제3항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 폴리펩티드의 사용.
  17. 제13항 또는 제14항에 기재된 이미징 방법에 사용하는 이미징용 조성물의 제조를 위한 제1항, 제2항, 제6항 또는 제7항에 기재된 폴리펩티드의 사용.
  18. 킬레이트부가 결합된 폴리펩티드를 표지하는 방법으로서,
    굿완충액(Good's buffer), 또는 비이온성 계면활성제를 함유하는 완충액에 상기 폴리펩티드를 용해하는 것, 및
    용해한 상기 폴리펩티드를, [111In]인듐염과 반응시키는 것을 포함하는, 표지 방법.
  19. 하기 식(19)으로 표시되는 폴리펩티드,
    하기 식(19)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실(缺失), 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
    하기 식(19)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성(相同性)을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
    His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (19)(서열 번호 19)
    [식(19)에 있어서,
    Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X기가 결합한 리신 잔기이고,
    상기 X는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
    상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  20. 하기 식(20)으로 표시되는 폴리펩티드,
    하기 식(20)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
    하기 식(20)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
    Figure pct00025
  21. 하기 식(21)으로 표시되는 폴리펩티드,
    하기 식(21)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
    하기 식(21)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
    His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (21)(서열 번호 21)
    [식(21)에 있어서,
    Xaa12는, 측쇄의 아미노기에 -Y-X'기가 결합한 리신 잔기이고,
    상기 X'는, 킬레이트부와 상기 킬레이트부로 킬레이트된 방사성 금속핵종을 포함하며, 상기 킬레이트부는, 디에틸렌트리아민펜타아세틱 디언하이드라이드(DTPA), 또는 1,4,7-트리아자시클로노난-N,N',N''-트리아세틱 애시드(NOTA)이고,
    상기 Y는, -CH2-(C6H4)-, -NH-C(=S)-, 및 -NH-(CH2)5-C(=O)-, 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 포함하는 링커임]
  22. 하기 식(22)으로 표시되는 폴리펩티드,
    하기 식(22)의 폴리펩티드로부터 1, 2 또는 3개의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환한 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드, 또는,
    하기 식(22)의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드로서, GLP-1R에 결합 가능한 폴리펩티드.
    Figure pct00026
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