CN104846050B - 一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法。取葡糖酸醋酸杆菌GD‑BC‑1进行发酵培养，得到含有细菌纤维素的发酵液，再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌，细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵，得到含有纤维素团的菌液，取出纤维素团，放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。本发明通过混合多重发酵方法，在细菌纤维素合成的过程中包裹产抗菌肽的细菌。通过转换发酵培养基，使抗菌肽的细菌合成抗菌肽，并挂载在细菌纤维素上，制成具有抗菌性能的细菌纤维素。解决了直接加入抗菌剂对产细菌纤维素菌的毒害作用。简化传统抗菌细菌纤维素的繁复制备过程。
Description
技术领域：
本发明属于微生物领域，具体涉及一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法。
背景技术：
细菌纤维素是一种由细菌分泌出的高聚物。它除了具有一般纤维素的特点，还具有众多独特性质。其具有一个三维的网络结构。使细菌纤维素具有很高的结合水能力；表面积要比植物纤维大，具有更高的化学吸附能力；较好的机械性能，其具有高弹性，高回弹性及高拉伸强度。这众多优点使细菌纤维素具有作为伤口的贴料的潜力。
细菌纤维素的成份只为纤维素，其没有抗菌的功能。为了让细菌纤维素具有抗菌的功能，目前采用浸泡方式和化学接枝方式。制备过程通过多个步骤，过程繁复。并且目前国内没有通过混合多重发酵方式制备出具有抗菌性能的细菌纤维素的报道。
发明内容：
本发明的目的是提供一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法，利用该制备方法能够制备得到具有抗菌性能的细菌纤维素。该制备方法还具有简单易行，成本低廉的优点。
本发明的具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149进行发酵培养，得到含有细菌纤维素的发酵液，再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌，细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵，得到含有纤维素团的菌液，取出纤维素团，放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
优选，所述的具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法，具体步骤如下：
将葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液按照5～10％v/v的接种量，接入发酵培养基中，28～32℃往复式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为20～80r/m，冲程为65～75mm或28～32℃旋转式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为20～120r/m，得到发酵液；
在发酵液中加入产抗菌肽的细菌菌液，接种量为1.9～10％v/v，28～32℃往复式摇床振荡培养2～5天，摇床转速为20～60r/m，冲程为65～75mm或28～32℃旋转式摇床振荡培养2～5天，摇床转速为20～80r/m，细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌一起发酵，得到含有纤维素团的菌液，取出菌液中的纤维素团，放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
所述的发酵培养基优选为：每升含有葡萄糖20～50g，酵母膏5～12g，蛋白胨5～10g，柠檬酸1～2g，磷酸氢二钠1.5～3g，余量为水，pH值6.0～7.0；或葡萄糖20～60g，酵母膏0.8～1.2g，蛋白胨6～8g，磷酸氢二钠6～10g，生化级玉米浆4～8g，乙酸0.8～1.2g，无水乙醇2～12g，余量为水，pH值5.8～6.2。
所述的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液是通过以下方法获得的：葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCCM208149接种于液体活化培养基中，在28～32℃往复式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为80～110r/m，冲程为65～75mm，由此获得葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液，所述的液体活化培养基配方为，每升含有葡萄糖或甘露醇20～50g，酵母膏5～12g，蛋白胨5～10g，柠檬酸1～2g，磷酸氢二钠1.5～3g，余量为水，pH值6.0～7.0。
所述的产抗菌肽的细菌优选为乳酸链球菌(Lactococcus lactis sp.)、片球菌属(Pediococcus sp.)的细菌、明串球菌属(Leuconostoc sp.)的细菌、乳球菌属(Lactococcus sp.)的细菌或乳杆菌属(Lactobacillus sp.)的细菌，这些细菌都能产生抗菌肽。这些菌株都属于现有技术中的常用菌株，可以从保藏机构，或者试剂公司购买到。
所述的放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗优选为将纤维素团放入MRS培养基中，37℃静止培养2～5天，或37℃厌氧静止培养2～5天，然后用无菌水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
所述的MRS培养基，其中文名称为：乳酸细菌培养基，其是现有技术中的培养基，能够购买到。其配方为：每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，pH值6.5。
本发明通过混合多重发酵方法，在细菌纤维素合成的过程中包裹产抗菌肽的细菌。通过转换发酵培养基，使抗菌肽的细菌合成抗菌肽，并挂载在细菌纤维素上，制成具有抗菌性能的细菌纤维素。解决了直接加入抗菌剂对产细菌纤维素菌的毒害作用。简化传统抗菌细菌纤维素的繁复制备过程。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
以下实施例中所使用的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCCM208149，于2008年10月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，编号为：CCTCC NO：M208149。该菌株在专利号为：200810218500.7，发明名称为：细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法中也公开过。
实施例1：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，28℃，100r/m，冲程为65mm振荡培养36h，得到种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母膏5g，磷酸氢二钠2.7g，柠檬酸1.15g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值为6.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取5mL种子液加入装有500mL三角瓶装有50mL发酵培养基中，28℃往复式摇床振荡培养36小时，摇床转速为60r/m，冲程为75mm，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖20g，酵母膏5g，蛋白胨10g，柠檬酸1g，磷酸氢二钠1.5g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值为7.0，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得干酪乳杆菌(Lactobacillus caseisp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值为6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)活化菌液中取2.5mL加入步骤(2)的发酵液中，28℃往复式摇床振荡培养2天，摇床转速为30r/m，冲程为65mm，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的含有纤维素团的菌液中取出发酵所得的纤维素团放入100mL MRS培养基中，37℃静止培养3天，然后再取出细菌纤维素放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichiacoli ATCC 8795)，再倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值7，灭菌备用)凝固后，取0.4cm的具有抗菌性能的细菌纤维素，置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素周边产生抗菌圈，抗菌圈直径为1cm。
实施例2：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，28℃，100r/m，冲程为65mm振荡培养24h，得种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母膏5g，磷酸氢二钠2.7g，柠檬酸1.15g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值为6.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取5mL种子液加入装有500mL三角瓶装有80mL发酵培养基中，28℃旋转式摇床振荡培养18小时，摇床转速为20r/m，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖40g，酵母膏1g，蛋白胨8g，磷酸氢二钠8g，生化级玉米浆6g，乙酸1g，无水乙醇10g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值6.2，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得到干酪乳杆菌(Lactobacillus caseisp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述混合均匀，调pH值6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)活化菌液中取2.5mL加入步骤(2)的发酵液中，32℃旋转式摇床振荡培养3天，摇床转速为40r/m，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的含有纤维素团的菌液中取出发酵所得的纤维素团放入50mL MRS培养基中，37℃厌氧静止培养3天，然后再取出细菌纤维素，将得到的细菌纤维素放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中分别加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichia coli ATCC 8795)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)，再各倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值7，灭菌备用)凝固后，含大肠杆菌平板的，取1.7cm的具有抗菌性能的细菌纤维素置于皿中。含金黄色葡萄球菌平板的，取1.3cm的具有抗菌性能的细菌纤维素置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素都产生抗菌圈，含大肠杆菌的平板中的抗菌圈直径为2.9cm，含金黄色葡萄球菌的平板中的抗菌圈直径为3.6cm。
实施例3：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，32℃，80r/m，冲程为75mm振荡培养18h，得种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：葡萄糖50g，蛋白胨10g，酵母膏8g，磷酸氢二钠1.5g，柠檬酸1g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值为6.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取3mL种子液加入装有500mL三角瓶装有60mL发酵培养基中，32℃往复式摇床振荡培养18小时，摇床转速为20r/m，冲程为65mm，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖60g，酵母膏0.8g，蛋白胨8g，磷酸氢二钠10g，生化级玉米浆4g，乙酸1.2g，无水乙醇8g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值6.2，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将乳酸链球菌(Lactococcus lactis sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得到乳酸链球菌(Lactococcus lactissp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)的乳酸链球菌(Lactococcus lactis sp.)活化菌液中取1.2mL加入步骤(2)的发酵液中，32℃往复式摇床振荡培养5天，摇床转速为20r/m，冲程为75mm，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的含有纤维素团的菌液中取出发酵所得的纤维素团放入100mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，然后取出细菌纤维素，放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichiacoli ATCC 8795)再倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值7，灭菌备用)凝固后，取0.8cm的具有抗菌性能的细菌纤维素置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素周围产生抗菌圈，该抗菌圈直径为1.3cm。
实施例4：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，30℃，110r/m，冲程为70mm振荡培养30h，得种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母膏12g，磷酸氢二钠3g，柠檬酸2g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值为6.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取4mL种子液加入装有500mL三角瓶装有50mL发酵培养基中，30℃往复式摇床振荡培养30小时，旋转速为20r/m，冲程为70mm，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖20g，酵母膏1.2g，蛋白胨6g，磷酸氢二钠6g，生化级玉米浆8g，乙酸0.8g，无水乙醇2g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值5.8，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将冷明串珠菌(Leuconostoc gelidum sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得到冷明串珠菌(Leuconostoc gelidumsp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)中的冷明串珠菌(Leuconostoc gelidumsp.)活化菌液中取5mL加入步骤(2)的发酵液中，30℃往复式摇床振荡培养3天，摇床转速为60r/m，冲程为65mm，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的含有纤维素团的菌液中取出发酵所得的纤维素团放入100mL MRS培养基中，37℃静止培养5天，然后去除细菌纤维素，放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichiacoli ATCC 8795)再倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值7，灭菌备用)凝固后，取0.5cm的具有抗菌性能的细菌纤维素，置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素周边产生抗菌圈，该抗菌圈直径为1.1cm。
实施例5：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，28℃，100r/m，冲程为65mm振荡培养36h，得到种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：甘露醇50g，蛋白胨10g，酵母膏8g，磷酸氢二钠3g，柠檬酸2g，余量为水，将上述组份混合均匀，调pH值为7.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取5mL种子液加入装有500mL三角瓶装有50mL发酵培养基中，32℃旋转式摇床振荡培养36小时，旋转摇床转速为120r/m，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖20，酵母膏8g，蛋白胨10g，柠檬酸1g，磷酸氢二钠1.5g，余量为水，将上述组份混合均匀，调pH值为7.0，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得到乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici sp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)中的乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici sp.)活化菌液取2.5mL加入步骤(2)的发酵液中，28℃旋转式摇床振荡培养5天，旋转摇床转速为80r/m，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的得到含有纤维素团的菌液取出发酵所得的纤维素团放入50mL MRS培养基中，37℃厌氧静止培养5天，然后取出所得到的细菌纤维素，放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichiacoli ATCC 8795)再倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值7，灭菌备用)凝固后，取0.3cm的具有抗菌性能的细菌纤维素，置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素周围产生抗菌圈，该抗菌圈直径为0.7cm。
实施例6：
(1)种子液制备：从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中，28℃，80r/m，冲程为65mm振荡培养36h，得到种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下：甘露醇20g，蛋白胨5g，酵母膏12g，磷酸氢二钠1.5g，柠檬酸1g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值为6.0，灭菌备用)。
(2)细菌纤维素的发酵：取5mL种子液加入装有500mL三角瓶装有50mL发酵培养基中，28℃往复式摇床振荡培养36小时，摇床转速为80r/m，冲程为75mm，得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖50，酵母膏12g，蛋白胨5g，柠檬酸2g，磷酸氢二钠3g，余量为水，将上述成份混合均匀后，调pH值6.0，灭菌备用)。
(3)产抗菌肽的细菌的活化：将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中，37℃静止培养2天，得到干酪乳杆菌(Lactobacillus caseisp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取液5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，七水硫酸镁0.2g，七水硫酸锰0.05g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值6.5，灭菌备用)。
(4)包裹产抗菌肽的细菌：从步骤(3)中的干酪乳杆菌(Lactobacillus caseisp.)活化菌液中取2.5mL加入步骤(2)的发酵液中，28℃旋转式摇床振荡培养2天，旋转摇床转速为20r/m，得到含有纤维素团的菌液。
(5)抗菌肽的发酵：从步骤(4)的含有纤维素团的菌液取出发酵所得的纤维素团放入50mL MRS培养基中，37℃厌氧静止培养2天，然后取出细菌纤维素，放入无菌水中冲洗浸泡3次，即得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
(6)抗菌试验：在直径9cm的平皿中加入0.1mL 106cfu/mL大肠杆菌(Escherichiacoli ATCC 8795)再倒入已经融化的温度约50℃的营养琼脂(该营养琼脂为每升含蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，琼脂15g，余量为水，将上述成份混合均匀，调pH值7，灭菌备用)凝固后，取1.2cm的具有抗菌性能的细菌纤维素，置于皿中。37℃静置培养1天，具有抗菌性能的细菌纤维素周围产生抗菌圈，该抗菌圈直径为2cm。
Claims (6)
1.一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149进行发酵培养，得到含有细菌纤维素的发酵液，再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌，细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵，得到含有纤维素团的菌液，取出纤维素团，放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法，具体步骤如下：
将葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液按照5～10％v/v的接种量，接入发酵培养基中，28～32℃往复式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为20～80r/m，冲程为65～75mm或28～32℃旋转式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为20～120r/m，得到发酵液；
在发酵液中加入产抗菌肽的细菌菌液，接种量为1.9～10％v/v，28～32℃往复式摇床振荡培养2～5天，摇床转速为20～60r/m，冲程为65～75mm或28～32℃旋转式摇床振荡培养2～5天，摇床转速为20～80r/m，细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌一起发酵，得到含有纤维素团的菌液，取出菌液中的纤维素团，放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基为：每升含有葡萄糖20～50g，酵母膏5～12g，蛋白胨5～10g，柠檬酸1～2g，磷酸氢二钠1.5～3g，余量为水，pH值6.0～7.0；或葡萄糖20～60g，酵母膏0.8～1.2g，蛋白胨6～8g，磷酸氢二钠6～10g，生化级玉米浆4～8g，乙酸0.8～1.2g，无水乙醇2～12g，余量为水，pH值5.8～6.2。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液是通过以下方法获得的：葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149接种于液体活化培养基中，在28～32℃往复式摇床振荡培养18～36小时，摇床转速为80～110r/m，冲程为65～75mm，由此获得葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液，所述的液体活化培养基配方为：每升含有葡萄糖或甘露醇20～50g，酵母膏5～12g，蛋白胨5～10g，柠檬酸1～2g，磷酸氢二钠1.5～3g，余量为水，pH值6.0～7.0。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的产抗菌肽的细菌为乳酸链球菌(Lactococcus lactis sp.)、片球菌属(Pediococcus sp.)的细菌、明串球菌属(Leuconostoc sp.)的细菌、乳球菌属(Lactococcus sp.)的细菌或乳杆菌属(Lactobacillus sp.)的细菌。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的放入MRS培养基中进行培养，然后再取出纤维素团，用水漂洗是将纤维素团放入MRS培养基中，37℃静止培养2～5天，然后用无菌水漂洗，得到具有抗菌性能的细菌纤维素。
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| CN102552965A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-11 | 东华大学 | 一种在线培养制备纳米纤维素抗菌复合材料的方法 |
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