CN104833667A - 一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，涉及煎炸食品检测。1)配制试剂：配制100μg/mL丙烯酰胺储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐缓冲溶液；2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、TPO浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；3)丙烯酰胺的聚合及检测。提高了丙烯酰胺转化成聚丙烯酰胺的效率；采用室温光照条件下将丙烯酰胺聚合成聚丙烯酰胺，避免高温反应，提高了方法的安全性及稳定性；利用荧光增敏剂，不仅可以保护荧光胺与聚丙烯酰胺生成的绿色荧光物质，还可以提高荧光强度，增大了方法的灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及煎炸食品检测，具体是涉及一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法。
背景技术
丙烯酰胺是一种强极性小分子化合物，不易挥发，无气味，易溶于水、乙醇、丙酮等极性溶剂，在油炸、烧烤以及烘焙的淀粉类食品中含量较高。丙烯酰胺可与动物血液中的血红蛋白发生加成反应，导致遗传物质损伤和基因突变，对动物体具有致癌性、神经毒性、基因毒性和遗传毒性。2002年4月，瑞典国家食品管理局和斯德哥尔摩大学研究人员发现，在一些油炸和烘烤的淀粉类食品如炸薯条、炸薯片中含有大量的丙烯酰胺，引起了国际社会的高度关注(Mottram D.S.,Wedzicha B.L.,Dodson A.T.Food chemistry:acrylamide isformed in the Maillard reaction[J].Nature,2002,419(6906):448-449；Stadler R.H.,Blank I.,Varga N.,et al.Food chemistry:acrylamide from Maillard reaction products[J].Nature,2002,419(6906):449-450；Friedman M.Chemistry,biochemistry,and safety of acrylamide.A review[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2003,51(16):4504-4526)。丙烯酰胺的单体毒性大，但其易在外界条件下聚合成无毒的聚丙烯酰胺。目前，最常用的检测丙烯酰胺的方法是气相色谱-质谱联用或者液相色谱-质谱/质谱方法联用，但是这些方法的样品前处理过程复杂繁琐，消耗大量有机溶剂，还需要专业操作人员，因此不能满足快速安全的检测要求。
自1928年，Jette和West研制出第一台光电荧光仪以来，荧光分析法在理论和应用方面一直备受人们的广泛关注，近几十年来，在其他科学技术迅猛发展的影响下，激光、微处理器、电子学、光导纤维和纳米材料等新技术的引入，大大推动了荧光分析法在理论和应用方面的进展。荧光分析法除了快速、简便、灵敏度较高的优势外，还可通过对荧光仪器内部器件的改造实现仪器的小型化，可为现场检测提供理想的仪器。目前的荧光快速法测丙烯酰胺的较少，其中与高效薄层色谱联用的方法所用的衍生试剂毒性较大，过程复杂(Alpmann A.,Morlock G.Rapid and sensitive determination of acrylamide in drinking water by planarchromatography and fluorescence detection after derivatization with dansulfinic acid[J].Journal ofseparation science,2008,31(1):71-77)；另一种荧光检测分析法基于霍夫曼降解反应，将丙烯酰胺在90℃高温衍生为乙烯胺的方法也可定量检测丙烯酰胺，但是衍生温度高，易加速丙烯酰胺单体的挥发及检测溶液体系体积的改变，试验条件不安全，且结果稳定性不好(Liu C.C.,Luo F.,Chen D.M.,et al.Fluorescence determination of acrylamide in heat-processed foods[J].Talanta,2014,123:95-100.)。因此，急需寻找价格便宜，能在室温快速稳定地检测丙烯酰胺荧光分析法。
发明内容
本发明的目的在于针对一些油炸、烧烤以及烘焙的淀粉类食品中产生的丙烯酰胺的定量检测，提供快速稳定的一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法。
本发明包括以下步骤：
1)配制试剂：配制100μg/mL丙烯酰胺(AA)储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐(PBS)缓冲溶液；
2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、TPO浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；
3)丙烯酰胺的聚合及检测，具体方法如下：
将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL聚合剂溶液中,同时加入100μL TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液PBS，pH 8，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
在步骤1)中，所述100μg/mL丙烯酰胺(AA)储备液的配制方法可为：称取10mg丙烯酰胺于10mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得100μg/mL丙烯酰胺(AA)储备液；
所述0.05g/mL聚合剂溶液的配制方法可为：称取5g聚合剂于50mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得0.05g/mL聚合剂溶液；
所述3mM光引发剂的配制方法可为：称取52.25mg光引发剂于10mL容器中，用无水乙醇溶解，并定容于50mL容量瓶中，即得3mM光引发剂；
所述10％荧光增敏剂的配制方法可为：称取5g荧光增敏剂于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到50mL容量瓶中，即得10％荧光增敏剂；
所述5mg/mL荧光胺溶液的配制方法可为：称取50mg荧光胺于10mL容器中，用丙酮溶解，并定容到10mL容量瓶中，即得5mg/mL荧光胺溶液；
所述0.1M的磷酸盐(PBS)缓冲溶液的配制方法可为：称取1.56g磷酸二氢钠二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；另称取3.581g磷酸氢二钠十二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；调节两者配比，配制pH分别为6.0，7.0，8.0，9.0，10.0的0.1M磷酸盐缓冲溶液。
在步骤2)中，所述pH的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.05g/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL不同pH的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述聚合剂浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL浓度分别为0.001，0.005，0.01，0.03，0.05mg/mL五个浓度的聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述TPO浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL浓度分别为0.1，0.5，1.0，2.0，3.0mM五个浓度的TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述Tx-100浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL浓度分别为0％，8％，10％，15％四个浓度的荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述荧光胺浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL浓度分别为0.1，0.3，0.5，1.0，5.0mg/mL五个浓度的荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
所述荧光增敏剂可选自曲拉通Tx-100、十二烷基磺酸钠(SDS)、环糊精(CD)等中的一种。
所述光引发剂可选自(2,4,6-三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦(TPO)、2,4,6-三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯(TPO-L)、1-羟基环己基苯基甲酮、2-羟基-2-甲基-1-苯基丙酮、苯甲酰甲酸甲酯(MBF)等中的一种。
所述聚合剂可选自过硫酸钾(KPS)、过硫酸铵、四甲基二乙胺(TEMED)等中的一种。
本发明的技术方案是将丙烯酰胺在聚合剂过硫酸钾和光引发剂((2,4,6-三甲基苯甲酰基二苯基氧化膦，TPO)在紫外光的照射下高效地聚合成聚丙烯酰胺，同时加入对聚丙烯酰胺响应的荧光探针荧光胺和荧光增敏剂曲拉通Tx-100，通过产生的绿色荧光产物及其荧光强度与丙烯酰胺的浓度呈线性关系，建立检测食品中丙烯酰胺的荧光分析法。
与现有的荧光法相比，本发明所采用的丙烯酰胺的快速荧光法主要有以下特点：
1)同时利用光引发剂和聚合剂KPS，大大提高了丙烯酰胺转化成聚丙烯酰胺的效率。
2)采用室温光照条件下将丙烯酰胺聚合成聚丙烯酰胺，避免高温反应，提高了方法的安全性及稳定性。
3)利用荧光增敏剂Tx-100，不仅可以保护荧光胺与聚丙烯酰胺生成的绿色荧光物质，还可以提高荧光强度，增大了方法的灵敏度。
附图说明
图1为检测体系中pH条件的优化，图A为荧光光谱图，图B为对应pH值的荧光强度图。
图2为聚合剂KPS浓度的优化，图A为荧光光谱图，图B为对应KPS浓度的荧光强度图。
图3为光引发剂TPO浓度的优化，图A为荧光光谱图，图B为对应TPO浓度的荧光强度图。
图4为荧光增敏剂Tx-100浓度的优化，图A为荧光光谱图，图B为对应Tx-100浓度的荧光强度图。
图5为荧光探针荧光胺浓度的优化，图A为荧光光谱图，图B为对应荧光胺浓度的荧光强度图。
图6为荧光强度与AA的线性关系，图A为荧光光谱图，图B为对应AA的线性关系图。
具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。
本发明所述丙烯酰胺单体的聚合法及荧光分析法包括以下步骤：
1.试剂的配置
1)100μg/mL丙烯酰胺(AA)储备液配制：称取10mg AA于10mL烧杯中，用超纯水溶解，然后定容到100mL棕色容量瓶中，4℃下储存备用。
2)0.05g/mL过硫酸钾(KPS)溶液的配置：称取5g KPS于50mL烧杯中，用超纯水溶解，然后定容到100mL棕色容量瓶中，4℃下储存备用。
3)3mM光引发剂TPO配制：称取52.25mg光引发剂TPO于10mL烧杯中，用无水乙醇溶解，并定容于50mL棕色容量瓶中，4℃下储存备用。
4)10％曲拉通Tx-100配制：称取5g Tx-100于50mL烧杯中，用超纯水溶解，并定容到50mL容量瓶中。室温下放置备用。
5)5mg/mL荧光胺溶液配制：称取50mg荧光胺于10mL烧杯中，用丙酮溶解，并定容到10mL棕色容量瓶中，现配现用。
6)0.1M的磷酸盐(PBS)缓冲溶液的配置：称取1.56g磷酸二氢钠二水合物于50mL烧杯中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中。室温下放置备用。称取3.581g磷酸氢二钠十二水合物于50mL烧杯中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中。室温下放置备用。通过调节两者配比，配置pH分别为6.0，7.0，8.0，9.0，10.0的0.1M磷酸盐缓冲溶液。
2.丙烯酰胺各种检测条件的优化
1)pH的优化：将500μL 100μg/mL的AA溶液中加入到10μL 0.05g/mL KPS溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到紫外灯(波长365nm和254nm紫外同时开启)下照射1h。随后加入200μL不同pH的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％Tx-100溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。检测结果如图1所示，pH为8.0时荧光峰最强，后续检测选pH 8.0为检测条件。
2)KPS浓度的优化：步骤同pH的优化，只是在此检测过程中，pH条件固定为8.0，KPS的浓度选择0.001，0.005，0.01，0.03，0.05mg/mL五个浓度，加入量均为10μL。检测结果如图2所示，KPS浓度为0.03mg/mL时荧光峰最强，后续检测选KPS浓度0.03mg/mL为检测条件。
3)TPO浓度的优化：步骤同pH的优化，只是在此检测过程中，pH条件固定为8.0，KPS的浓度固定为0.03mg/mL，TPO的浓度选择0.1，0.5，1.0，2.0，3.0mM五个浓度，加入量均为100μL。检测结果如图3所示，TPO浓度为2mM时荧光峰最强，后续检测选TPO浓度2mM为检测条件。
4)Tx-100浓度的优化：步骤同pH的优化，只是在此检测过程中，pH条件固定为8.0，KPS的浓度固定为0.03mg/mL，TPO的浓度固定为2mM，Tx-100的浓度选择0％，8％，10％，15％四个浓度，加入量均为480μL。检测结果如图4所示，Tx-100浓度为10％时荧光峰最强，后续检测选Tx-100浓度10％为检测条件。
5)荧光胺浓度的优化：步骤同pH的优化，只是在此检测过程中，pH条件固定为8.0，KPS的浓度固定为0.03mg/mL，TPO的浓度固定为2mM，Tx-100的浓度固定为10％，荧光胺的浓度选择0.1，0.3，0.5，1.0，5.0mg/mL五个浓度，加入量均为200μL。检测结果如图5所示，荧光胺浓度为0.5mg/mL时荧光峰最强，后续检测选荧光胺浓度0.5mg/mL为检测条件。
3.丙烯酰胺的聚合及检测
丙烯酰胺的检测条件均在优化后的各条件下进行。
1)将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL KPS溶液中,同时加入100μLTPO溶液，混匀后放到紫外灯(波长365nm和254nm紫外同时开启)下照射1h。
2)随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH 8)，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL Tx-100溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
以下给出具体实施例。
实施例1：标准方法的建立：
将500μL浓度为(0.1，0.2，0.6，1，4，10μg/mL)的AA溶液中加入到10μL KPS溶液中,同时加入100μLTPO溶液，混匀后放到紫外灯(波长365nm和254nm紫外同时开启)下照射1h。随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH 8)，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL Tx-100溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。可以得到荧光强度与AA良好的线性关系，如图6所示，可以得到工作曲线的线性方程为y＝552.76+37.41x，相关系数R＝0.994，线性范围为0.2–10μg/mL，通过三倍噪音计算得的最低检出限为0.15μg/mL。
实施例2：实际样品的检测：
本发明方法中样品预处理步骤。
1)脱脂：选取六种油炸样品粉碎，60℃烘干。称取试剂样品1.0g于50mL离心管中，加入10mL重蒸正己烷脱脂，震荡，超声10min，后放置10min，过滤取滤渣，再用10mL正己烷加入到滤渣中，重复上述实验步骤。
2)萃取：将操作1)中的滤渣用超纯水萃取，向滤渣中加入10mL超纯水，超声10min，离心分离(10000rpm)10min，过滤取上清液。再向滤渣中加入10mL超纯水，重复上述操作，合并萃取液。
3)丙烯酰胺聚合及检测：将500μL含10μg/mL的标准AA溶液的萃取溶液中加入到10μL KPS溶液中,同时加入100μLTPO溶液，混匀后放到紫外灯(波长365nm和254nm紫外同时开启)下照射1h。随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH 8)，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL Tx-100溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。可以得到AA的含量，实际样品中AA的含量、回收率(n＝3)及与行业标准的对比如表1所示。
表1
本发明包括将丙烯酰胺转化为聚丙烯酰胺以及所采用的荧光检测方法。本发明将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL聚合剂KPS溶液中,同时加入100μL光引发剂TPO溶液，混匀后放到紫外灯(波长365nm和254nm紫外同时开启)下照射1h。随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH 8)，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL Tx-100溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
本发明将丙烯酰胺在聚合剂KSP和光引发剂TPO在紫外光的照射下高效地聚合成聚丙烯酰胺，同时加入对聚丙烯酰胺响应的荧光探针荧光胺和荧光增敏剂曲拉通Tx-100，通过产生的绿色荧光产物及其荧光强度与丙烯酰胺的浓度呈线性关系，建立检测食品中丙烯酰胺的荧光分析法。此方法同时利用光引发剂TPO和聚合剂KPS，大大提高了丙烯酰胺转化成聚丙烯酰胺的效率。本发明克服了现有的丙烯酰胺的检测方法，如气相色谱-质谱联用或者液相色谱-质谱/质谱方法联用等方法的样品前处理过程复杂繁琐，消耗大量有机溶剂，需要专业操作人员等一系列不利于快速安全的检测的缺点。同时克服了现有的荧光法的衍生温度过高，检测不稳定等缺点，提供一种快速稳定的丙烯酰胺荧光分析方法，这种方法操作方便，有利于在食品快速检测及食品品质判断方面的推广应用。
Claims (6)
1.一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)配制试剂：配制100μg/mL丙烯酰胺储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐缓冲溶液；
2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、TPO浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；
3)丙烯酰胺的聚合及检测，具体方法如下：
将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL聚合剂溶液中,同时加入100μL TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液PBS，pH 8，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
2.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述100μg/mL丙烯酰胺储备液的配制方法为：称取10mg丙烯酰胺于10mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得100μg/mL丙烯酰胺储备液；
所述0.05g/mL聚合剂溶液的配制方法可为：称取5g聚合剂于50mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得0.05g/mL聚合剂溶液；
所述3mM光引发剂的配制方法可为：称取52.25mg光引发剂于10mL容器中，用无水乙醇溶解，并定容于50mL容量瓶中，即得3mM光引发剂；
所述10％荧光增敏剂的配制方法可为：称取5g荧光增敏剂于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到50mL容量瓶中，即得10％荧光增敏剂；
所述5mg/mL荧光胺溶液的配制方法可为：称取50mg荧光胺于10mL容器中，用丙酮溶解，并定容到10mL容量瓶中，即得5mg/mL荧光胺溶液；
所述0.1M的磷酸盐缓冲溶液的配制方法可为：称取1.56g磷酸二氢钠二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；另称取3.581g磷酸氢二钠十二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；调节两者配比，配制pH分别为6.0，7.0，8.0，9.0，10.0的0.1M磷酸盐缓冲溶液。
3.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述pH的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.05g/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL不同pH的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述聚合剂浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL浓度分别为0.001，0.005，0.01，0.03，0.05mg/mL五个浓度的聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述TPO浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL浓度分别为0.1，0.5，1.0，2.0，3.0mM五个浓度的TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述Tx-100浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL浓度分别为0％，8％，10％，15％四个浓度的荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；
所述荧光胺浓度的优化方法可为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL浓度分别为0.1，0.3，0.5，1.0，5.0mg/mL五个浓度的荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。
4.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于所述荧光增敏剂选自曲拉通Tx-100、十二烷基磺酸钠、环糊精中的一种。
5.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于所述光引发剂选自(2,4,6-三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦、2,4,6-三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯、1-羟基环己基苯基甲酮、2-羟基-2-甲基-1-苯基丙酮、苯甲酰甲酸甲酯中的一种。
6.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于所述聚合剂选自过硫酸钾、过硫酸铵、四甲基二乙胺中的一种。
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