CN1048321A

CN1048321A - 含苯甲酰胺衍生物的药物组合物的制备方法

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Publication number: CN1048321A
Application number: CN 90104997
Authority: CN
Inventors: 乌特·韦尔肖森; 格哈特·萨特津格; 卡尔-奥托·沃尔默; 沃尔夫区·赫曼
Original assignee: Gedek AG
Current assignee: Gedek AG; Goedecke GmbH
Priority date: 1986-04-22
Filing date: 1987-04-22
Publication date: 1991-01-09
Also published as: CN1015417B

Abstract

本发明提供一种抗肿瘤药物组合物的制备方法，该组合物至少含有一种活性物质为式II所示的苯甲酰胺衍生物。式II中R可以是低级酰氨基或用羟基取代的低级酰氨基。该方法包括将式II的活动物质与固体或液体的药物稀释剂或载体混合。

Description

本发明涉及新的N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺衍生物、其制备方法，含它们的药物组合物及其应用于对抗肿瘤疾病。

德意志联邦共和国专利说明书3305755号介绍过通式Ⅰ的化合物

其中R¹、R²和R³可以相同或不同，它们各代表氢原子或甲基。它们有效地对抗恶性的、增生的和自身免疫的疾病，而4-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺及其N-一甲基的衍生物据说是特别有效。

出人意料地，我们现在已发现最初被认为是药物学上必要的碱性的对-氨基官能团，其实与这些化合物的治疗效力并无关系，反而没有它存在或以非碱性基通过取代作用或置换作用将其转变为中性的反应基团，却可产生适合性极佳的有效化合物。

因此，本发明提供可对付恶性的、增生的和自身免疫的疾病的新的具有通式Ⅱ的N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺衍生物。

其中R是卤原子或低级酰氨基，而这些低级酰氨基包括那些至多含4个碳原子并可任意用羟基取代的低级酰氨基。

含低级酰氨基R的通式（Ⅱ）之优选化合物包括：

1）4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，

2）4-异丁酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，

3）4-甲酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，

4）4-（β-羟基丙酰氨基）-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，

5）4-乙醇酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，

4-酰氨基化合物1）至5），和以上提及的其它的用卤原子取代的通式（Ⅱ）的N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺衍生物，都是新的。虽然，其中R是氢原子的化合物有过介绍（见Beilstein，13，Main Work，第20页），但并无提及它的药理作用。

因此，本发明也涉及R可以是氢原子的通式（Ⅱ）的化合物可用以对抗肿瘤疾病。

制备通式（Ⅱ）的化合物可用通式Ⅲa化合物与通式Ⅲb的化合物作用，得通式Ⅳ的化合物，再还原或把保护基分离使它转化为通式Ⅱ的化合物

式Ⅲa中R的含意与上述相同而A是活性酸基，

式Ⅲb中X是含有保护基的氨基或硝基，

式（Ⅳ）中X和R的含意与上述相同。

通式Ⅲa的化合物与通式Ⅲb的化合物按已知方法进行反应。活性酸基A，更详细的说是那些可以和氨基起反应的酰基卤、酸酐、咪唑化物（imidazolide）或酯基。因此，A优选是卤原子或是咪唑基、酰基或低级烷氧基。

用作X的保护基是肽化学中习用的一种基团，例如苄基或苄酯基。利用适当的催化剂，如铂或钯，以氢气进行还原，于是，一方面，游离的硝基给还原为伯氨基，另一方面，氨基上的保护基在氢解作用下分离。

本发明的活性物质适宜以药物组合物形式给药。所含的活性物质可作单体形式或与适当的有机或无机固体或液体的药物载体料，作成混合剂的形式，它们可以局部的、肠内的、如口的或直肠的给药，也可以肠外的、如肌内的或静脉内的给药。这些组合物的制备，可用那些不与本发明的新化合物起反应的原料，如明胶、乳糖、淀粉、十八烷醇、硬脂酸镁、滑石、植物油、苄醇、丙二醇、石油膏或其它的药物载体。

药物组合物的类型可为，如片剂、糖衣药丸、胶囊、栓剂、软膏或乳剂，或以液体形式如悬浮液或乳浊液。若有需要，它们可作消毒和/或包含佐药，如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、加溶剂或用以改变渗透压的盐类或缓冲剂。它们也可包含其它活性物质。

使用的剂量取决于要治疗疾病的性质和个人的因素。一般是是给予由10至300毫克，尤其是由20至50毫克的剂量，特别情况下，个别的剂量亦可以重些。

下述实施例用以说明本发明：

例1

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺30克（0.1摩尔）N-（2′-硝中，在标准状态下进行氢化。移去催化剂后，将滤液浓缩至约为其体积的四分之一。所得的沉淀物用吸力过滤。若有需要，产物可以从甲醇/四氢呋喃（1∶1体积/体积）再结晶。产量是18.6克（理论值的69%）;熔点为243.7℃。

用作原材料的N-（2′-硝基苯基）-4-乙酰氨基-苯甲酰胺的制备如下：41.3克（0.33摩尔）的草酰氯，在0-5℃，并排除湿气下，滴加于60.3克（0.83摩尔）二甲基甲酰胺在1.5升无水乙酸乙酯的溶液中。在这温度下搅拌30分钟后，加入44.8克（0.25摩尔）4-乙酰氨基苯甲酸及27.7克（0.35摩尔）吡啶，并移去冰浴。在室温下搅拌3小时后，将反应混合物混合于38克（0.28摩尔）邻-硝基苯胺和27.7克（0.35摩尔）吡啶在30毫升无水乙酸乙酯的溶液中。在室温下搅拌15小时后，将反应混合于500毫升1N氢氧化钠水溶液中。将物相分开，并用150毫升乙酸乙酯三次将水相摇出。合并的有机相用水洗至中性，通过无水硫酸钠干燥后，浓缩至约三分之一。所得沉淀物用吸力过滤，并用再结晶或柱色谱法纯化。产量为15克（理论值的20%）;熔点为205.8℃。

例2

4-（β-羟基丙酰基）-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺

2克（4.76毫摩尔）N-（2′-硝基苯基）-4-（3-苄氧基丙酰基氨基）-苯甲酰胺溶解于300毫升乙醇中，并在1克5%钯-木炭的存在下和80℃时，在压热器中进行氢化6小时。过滤后，移去溶剂，残余物则用柱色谱（硅胶;二氯甲烷/甲醇9∶1体积/体积）纯化。产量为0.8克（理论值的56%）;溶点为198.7℃。

用作原材料的化合物的制备方法如下：

4-（3-苄氧基丙酰基氨基）-苯甲酸：

8.09（59毫摩尔）对-氨基苯甲酸，与4.98克（63毫摩尔）吡啶一同溶解于100毫升二烷中，并与在2毫升烷中的11.7克（59毫摩尔）3-苄氧基丙酰氯（见J.C.S，Perkin I，1976，2229）在15℃下混和。在室温下搅拌3小时后，反应混合物用200毫升水混和。所得沉淀物用吸力过滤、水洗和干燥。产物不需再纯化便可在下一个步骤上使用。产量为15.7克（理论值的89%）;熔点为162-164℃熔结，＞200℃分解。

N-（2′-硝基苯基）-4-（3-苄氧基丙酰基氨基）-苯甲酰胺的制备类似实施例一，但用12克（40.1毫摩尔）4-（3-苄氧基丙酰基氨基）-苯甲酸、6.6克（0.13毫摩尔）草酰氯、9.7克（0.13摩尔）二甲基甲酰胺、2×4.5克吡啶、6.1克（44.1毫摩尔）邻-硝基苯胺和280毫升无水乙酸乙酯。粗制品用柱色谱（硅胶;乙酸乙酯/正己烷1∶5-1∶1体积/体积）纯化。产量为3.5克（理论值的21%）;熔点为140℃。

例3

4-异丁酰氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺

13.1克（40毫摩尔）N-（2′-硝基苯基）-4-异丁酰-氨基苯甲酰胺在10%钯-木炭存在下，于400毫升四氢呋喃中、在标准状态下进行氢化。将溶剂浓缩至120毫升之后，沉淀的结晶用吸力过滤。产量为10.2克（理论值的86%）;熔点为247.6℃。

用作原材料的化合物的制备方法如下：

4-异丁酰氨基苯甲酸：

将50克（0.36摩尔）对-氨基苯甲酸及30克（0.38摩尔）吡啶溶解于600毫升二烷中，并在150℃与排除湿气下，逐滴混和于40.5克（0.38摩尔）异丁酰氯之中。在室温下搅拌2小时后，在剧烈搅拌下加入500毫升水。所得沉淀物用吸力过滤、用水洗涤、干燥及从二异丙醚/乙酸乙酯（3∶4体积/体积）再结晶。产量为22克（理论值的30%）;熔点为241℃。

N-（2′-硝基苯基）-4-异丁酰氨基苯甲酰胺是在例5提出的反应条件下制备：加入吡啶/邻-硝基苯胺之后，反应溶液在室温下给搅拌15小时及在沸点温度下给搅拌5小时。所用的成分如下：54.6克（74.68毫摩尔）二甲基甲酰胺、1.5升无水乙酸乙酯、37.3克（29.42毫摩尔）草酰氯、47克（22.63毫摩尔）4-异丁酰氨基苯甲酸、25.6克（32.36毫摩尔）吡啶及34.4克（24.89）毫摩尔）邻-硝基苯胺。产物从乙酸乙酯再结晶。产量为13.3克（理论值的18%）;溶点为237.6℃。

例4

4-乙醇酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺

将6.08克（15毫摩尔）N-（2′-硝基苯基）-4-苄氧基-乙酰氨基苯甲酰胺溶解于400毫升乙醇和200毫升四氢呋喃中，并在3克5%钯-木炭存在下，80℃及50巴氢气压力下在压热器中进行氢化19小时。当压热器内容物仍然热时，将其过滤及将无色的滤液蒸干。结晶残余物从800毫升甲醇中再结晶。产量为2.6克（理论值的63.2%）;熔点为221-223℃。

所用的原材料的制备方法如下：

4-苄氧基乙酰氨基苯甲酸：

将35.7克1（0.26摩尔）对-氨基苯甲酸与23.7克（0.30摩尔）吡啶一同溶解于420毫升二烷中，并在15℃下逐滴混和于51.7克（0.28摩尔）苄氧基乙酰氯之中（见杂环化学15，601/1978）。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物与300毫升水混和。所得沉淀物用吸力过滤、用水洗涤并干燥。产物不需再纯化便可在下一个步骤上使用。产量为73克（理论值的98.3%），熔点为178-179℃。

N-（2′-硝基苯基）-4-苄氧基-乙酰氨基苯甲酰胺：

将溶于910毫升无水乙酸乙酯的28.5克（0.39摩尔）二甲基甲酰胺在2℃氮气氛下逐滴混和于21.5克（0.17摩尔）草酰氯之中。在2至5℃下搅拌30分钟后，加入37.2克（0.13摩尔）4-苄氧基乙酰氨基苯甲酸与14.4克（0.18摩尔）吡啶在65毫升乙酸乙酯的悬浮液，并移去冰浴。在室温下搅拌2.5小时后，将反应混合物和于19.8克（0.14摩尔）邻-在室温下搅拌2.5小时后，将反应混合物和于19.8克（0.14摩尔）邻-硝基苯胺和14.4克（0.18摩尔）吡啶在65毫升乙酸乙酯的溶液之中。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物加热至沸腾3小时。冷却后，将其与500毫升1N氢氧化钠水溶液混和，并将物相分开。用乙酸乙酯两次将水相摇出。合并的有机相用水洗至中性和用无水硫酸钠干燥。溶剂蒸至150毫升。沉淀的结晶用吸力过滤，并从700毫升乙醇再结晶。产量为13克（理论值的24.7%）;熔点为128-130℃。

例5

N-（2′-氨基苯基）-4-甲酰氨基-苯甲酰胺

1.92克（67.3毫摩尔）N-（2′-硝基苯基）-4-甲酰-酰氨基苯甲酰胺在10%钯-木炭的存在下，于500毫升四氢呋喃中与标准状态下进行氢化。移去催化剂后，在真空中移去溶剂，结晶残余物从四氢呋喃/二异丙醚（1∶1体积/体积）中再结晶;产量为1∶5克（理论值的88.5%）;熔点为196.7℃（分解）。

原材料的制备方法如后：

N-（2′-硝基苯基）-4-甲酰-酰氨基苯甲酰胺：

将7.9克（0.11摩尔）二甲基甲酰胺与80毫升无水乙酸乙酯混合后，在0至5℃和氮气氛下，滴加于5.9克（46.8毫摩尔）草酰氯之中。在这温度下搅拌30分钟后，将反应混合物混于5.95克（36毫摩尔）甲酰-4酰氨基苯甲酸（见Chem，Ber.，23，3625/1890;Beilsteins Handbuch der Organischen Chemie Pub Springer Verleg，1931，Vol.P.432）和4.3克（54毫摩尔）吡啶之中，同时移去冰浴。在室温下搅拌3小时后，将溶液混与5.47克（39.6毫摩尔）邻-硝基苯胺在15毫升无水乙酸乙酯中混合，然后在室温下搅拌15小时，随后用氨使溶液变为碱性、用水洗涤及以无水硫酸钠干燥。移去溶剂之后，剩下的晶状残余物从乙酸乙酯中再结晶。产量为1.5克（理论值的14.6%）;熔点为237.6℃。

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺乃用作本发明的化合物的一个例子，并与作为标准的4-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺比较。已知该标准化合物对抗在试管内和在体内各种实验上的肿瘤有显著的抑制作用。用L1210和乳房腺癌16C的肿瘤细胞，以“细胞毒性比色测定”，在试管内进行试验。在这试验系统上，IC的值小于或等于250微克/毫升的物质被评定为在抑制细胞上有效。

按本发明的活性物质4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺，它显示（见下例表1）出：

1.在抑制细胞上表现突出;

2.有和比较标准大约相同或更好的抑制细胞的效能。

表1

L1210 细胞毒性比色测定

试验物质 IC 微克/毫升

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 3.75

4-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 2.78

4-甲基氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 4.04

乳房腺癌 16C细胞毒性比色测定

试验物质 IC微克/毫升

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 0.73

4-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 0.69

4-异丁酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 0.32

4-甲酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 0.40

4-（β-羟基丙酰基）氨基-N-（2′-氨基苯基）

-苯甲酰胺 0.77

4-乙醇酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 0.62

出人意料地，我们发现本发明的活性物质4-乙酰氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺在急性的胃内投药的情况下，较参比标准的毒性小得多。一个对雄性小鼠作七天观察期测定半数致死量（LD）的定向实验已表明这事实。结果显示在下列表2：

表2

雄性小鼠的急性的胃内毒性

试验物质 IC 毫克/千克

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺 1600

4-氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺 625

在对老鼠的药物动力学的实验中，可以排除减少再吸收可能引起本发明的活性物质比标准制剂对急性适合性有实质的改进：这物质的肠内再吸收迅速地，完全地和剂量一直线地进行。

本发明的活性物质的生物利用度是100%。对老鼠以静脉内投药与胃内投药10毫克/千克之后血药浓度时间曲线下的面积（AUC值）在统计学上没有重大的差别。这可显示于附图中的图1。

除了它的较好的适合性外，本发明的活性物质，与标准制剂相比较，其特征是有较长的半寿期（见附图中的图（2）及图（3）），因此可以在较长期间里维持抑制细胞的有效水平。

4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺在体内的效能则试验于出生后第50天、第71天和第92天的雌性标准差（SD）老鼠，分别由三次静脉内施以甲基亚硝基脲以诱发初期的乳腺癌。当肿瘤体积达到或大于0.8立方厘米时，随意选择试验的老鼠，并开始给于治疗。化合物施于胃内，剂量分别为7.5、10.0、与12.5毫克/千克/天，每周5次，共5周。每周测定肿瘤体积的中位数，并与未治疗的对照组比较。由图4可以证明依赖一定程度的4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺剂量影响肿瘤的增长，而在最高的剂量组别中，肿瘤的增长几乎完全受到抑制。

因此，本发明的化合物，与作为参比标准的4-氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺比较，在重要的生物学上的参数中，是明显地改进了的抑制细胞药物。同时，它也是对抗L 1210白血病细胞同样有效的抑制细胞药物，而且可以更有效地对抗乳腺癌16C。

所以，本发明的新化合物具有治疗的价值。它们是全身和/或局部治疗恶性肿瘤的药剂。可用作良性的增生的疾病的治疗及用作细胞的和体液的免疫系统失调的治疗。

此外，还包括与其它治疗结合的可能性，并预料这些治疗可加强和有利地影响所期望的效果。

附图说明如下：

图1说明把4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺施于老鼠后，其血药浓度时间曲线下的面积（AUC）。图中＊表示胃内投药（2毫克/千克、10毫克/千克、50毫克/千克）;表示静脉内投药（10毫克/千克）。

图2说明10毫克/千克的单剂量投药于老鼠胃内之后，血浆中4-氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺的平均水平（n＝4）。而其半寿期（t 1/2）约为15分钟。

图3说明10毫克/千克的单剂量投药于老鼠静脉内之后，血浆中4-乙酰氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺的平均水平（n＝5），图中0表示2毫克/千克剂量于胃内投药后（n＝5），表示10毫克/千克剂量于胃内投药后（n＝6），表示50毫克/千克剂量于胃内投药后（n＝5），半寿期（t 1/2）约为4.2至4.5小时。

图4说明4-乙酰氨基-N-（2′氨基苯基）-苯甲酰胺对抗由甲基亚硝基脲在SD老鼠诱发的乳腺癌的效能。

Claims

1、至少含有一种活性物质为式Ⅱ所示的苯甲酰胺衍生物的抗肿瘤药物组合物的制备方法，式Ⅱ为：

其中R可以是低级酰氨基或用羟基取代的低级酰氨基，该方法包括将通式Ⅰ的活性物质与固体或液体的药物稀释剂或载体混合。

2、根据权利要求1的方法，其中所用的活性物质是4-乙酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺。

3、根据权利要求1的方法，其中所用的活性物质是4-（β-羟基丙酰氨基）-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺。

4、根据权利要求1的方法，其中所用的活性物质是4-异丁酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺。

5、根据权利要求1的方法，其中所用的活性物质是4-乙醇酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺。

6、根据权利要求1的方法，其中所用的活性物质是4-甲酰氨基-N-（2′-氨基苯基）-苯甲酰胺。