CN104830871A

CN104830871A - 一种水稻基因OsAP2-6及制备方法和应用

Info

Publication number: CN104830871A
Application number: CN201310731026.9A
Authority: CN
Inventors: 余四斌; 孙文强; 高大伟; 王重荣
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2014-02-12
Filing date: 2014-02-12
Publication date: 2015-08-12
Anticipated expiration: 2034-02-12
Also published as: CN104830871B

Abstract

本发明公开了一种水稻基因OsAP2-6及制备方法和应用，步骤：A、从水稻品种6W39中分离到基因OsAP2-6；B、把基因OsAP2-6的CDS与载体PU1301连接构建超表达载体；C、把基因OsAP2-6的CDNA片段与载体pDS1301连接构建抑制表达载体；D、利用根癌农杆菌将重组载体导入水稻，获得转基因植株；E、利用聚合酶链式反应对T0代转化植株进行阳性检测，收获种子；F、将选留的T0代阳性单株的种子种成T1代家系，阳性检测；G、继续种植T1代阳性单株种子成T2代家系，超表达基因OsAP2-6可以增加水稻品种中花11的谷粒长度和宽度，抑制基因OsAP2-6可以增加水稻品种中花11冠根数和生物量。H、将来源于日本晴和野生稻ACC10的OsAP2-6等位基因导入珍汕97B可以显著增加珍汕97B的粒长、长宽比、冠根数目和生物量。

Description

一种水稻基因OsAP2-6及制备方法和应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域。更具体涉及一种水稻基因OsAP2-6，同时还涉及一种水稻基因OsAP2-6的制备方法，还涉及一种水稻基因OsAP2-6的用途。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，经历了矮化育种和杂种优势利用这两个阶段后，水稻单产在有了很大的飞跃，长期的高产目标使得对稻米品质的重视不够，近年来，在保持高产的基础上进一步提升水稻品质成为主要目标。

水稻品质主要分为加工品质、外观品质、蒸煮食味品质以及营养品质，其中外观品质中的粒型尤为重要，粒型一般用粒长、粒宽、长宽比以及谷粒面积来表示，粒型对外观品质和产量的影响很大，因此，科学家们对水稻粒型的遗传研究较为深入，目前已经克隆了包括GS3、GW5/qSW5、GS5、GW8和qGL3.1等主效基因（Fan et al.,2006；Song et al.,2007；Ayahiko et al.,2008；Weng et al.,2008；Li et al.,2011；Wang et al.,2012；Zhanget al.,2012）。其中除了GS5正调控粒型外，其余几个基因均负调控粒型，而且GW2、qSW5/GW5和GW8对粒型和产量的效应相反，即增加产量会降低品质，因此发掘新的粒型基因对改良稻米外观品质尤为重要。

在高产目标的驱动下，化肥的大量使用不仅使水稻对土壤肥料的利用效率下降，增加生产成本，而且会造成土壤板结、环境污染，因此，培育新品种、改良水稻的根系以增强水稻对土壤营养物质的吸收利用，成为低投入、高产出、保护环境的主要手段。水稻根系属于须根系，由种根、冠根和侧根组成，其中冠根是水稻固着、吸收养分和水分的主要器官，是决定水稻产量的重要因子。因此，增加根系的冠根数目是改良水稻对土壤营养物质吸收利用的一种方法。

目前，水稻冠根发生发育的相关基因和机制并不清楚。通过筛选水稻突变体鉴定到几个影响冠根发育的基因。Crown rootless1(crl1)基因由于一个碱基的替换导致其编码的蛋白的改变，影响生长素的信号转导，使得冠根原基不能发生，从而抑制的冠根的发生（Inukaiet al.,2005）；WOX11参与了生长素和细胞分裂素的信号转导过程，它的T-DNA插入突变体表现为冠根发生受到抑制（Zhao et al.,2009）,CROWN ROOTLESS5（CRl5）同样也参与生长素和细胞分裂素的信号转导，突变体crl5由于该基因突变导致编码氨基酸提前终止、功能丧失，冠根不能发生（Kitomi et al.,2011）。这些突变体都是功能缺失型，基因突变导致功能丧失，严重抑制冠根发生；还未发现冠根数目增加的突变体。目前通过筛选突变体可能很难获得理想根系的材料。应用基因工程的手段可以调控水稻体内目标基因的表达，调控植物地下冠根的形成和发育，但水稻冠根发生发育的相关目标基因较少。

本发明的目的是克隆一个影响水稻根系和粒型的基因OsAP2-6，利用该基因的编码序列（CDS），构建该基因的超表达载体转化水稻，获得改良粒型的材料；利用水稻基因OsAP2-6的一段cDNA片段，构建OsAP2-6抑制表达载体转化水稻，创造增加水稻冠根数目，提高植物生物量的改良新材料。

本发明在国内外未见报道，所在课题组也未公开发表涉及本发明内容的文章，本发明在国内外公众未知。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种水稻基因OsAP2-6，该基因可以增加水稻品种中花11的谷粒长度和宽度，可以增加水稻品种中花11的冠根数目和生物量。

本发明的另一个目的是在于提供了一种水稻基因OsAP2-6的制备方法，利用聚合酶链式反应（PCR）扩增得到基因OsAP2-6，该方法简便，快捷，可行。

本发明的再一个目的是在于提供了一种水稻基因OsAP2-6在改良水稻品种珍汕97B的粒型及根系中的应用，利用来源于日本晴和ACC10的OsAP2-6基因可以增加水稻品种珍汕97B的粒型、根系和生物量。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种水稻基因OsAP2-6及其制备方法，其步骤是：

1、利用聚合酶链式反应（PCR）从水稻品种6W039（来源于国际水稻研究所，编号：IR65482-4-136-2-2，见遗传资源披露表）中扩增得到基因OsAP2-6，基因全长5791个碱基，包括1786个碱基的启动子，3365个碱基的基因以及640个碱基的基因下游序列，所示的核苷酸序列SEQ ID NO.1。基因的编码序列（CDS）由1407个碱基组成，所示的核苷酸序列SEQ ID NO.2，编码469个氨基酸，所示的氨基酸序列SEQ ID NO.4。

2、将步骤1中得到的基因OsAP2-6的CDS（SEQ ID NO.2）与超表达载体PU1301（Zhao Y etal.,2009）连接，构建OsAP2-6超表达载体；

3、将基因OsAP2-6的一段262个碱基的cDNA，其编码为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列（片段）与抑制载体pDS1301（Chu ZH et al.,2006）连接构建OsAP2-6抑制表达载体；

4、利用根癌农杆菌EHA105（购于Takara公司，公开产品）介导的转基因方法将超表达和抑制载体导入水稻品种中花11（中国公开品种）中，获得转基因植株；

5、利用聚合酶链式反应（PCR）对步骤4产生的T0代超表达转基因植株进行阳性检测，通过半定量PCR（RT-PCR）检测阳性转基因植株中OsAP2-6的表达，选择OsAP2-6表达量显著升高的转基因植株，收获单株自交种子；

6、将步骤5选留的转基因植株的种子种成T1代家系，继续利用PCR对T1代单株进行阳性检测，利用RT-PCR对阳性单株检测转入片段的表达，考察阳性转基因单株和对照（CK）野生型中花11的粒型，阳性转基因植株谷粒长度和宽度与对照相比均显著增大，结合田间表现选择表现优良的转基因单株，自交留种；

7、继续种植步骤6中选留的目标单株成T2代家系，利用PCR对T2代单株进行阳性检测，对阳性单株和对照进行粒型考察，阳性转基因植株谷粒长度和宽度与对照相比均显著增大，从中选择农艺性状有较大改善的纯合单株，自交留种；

8、利用PCR对步骤4产生的T0代抑制表达转基因植株进行阳性检测，通过RT-PCR检测阳性转基因植株中OsAP2-6的表达，选择OsAP2-6表达量显著下降的转基因植株，收获单株自交种子；

9、将步骤8选留的转基因植株的种子种成T1代家系，继续利用PCR对T1代单株进行阳性检测，利用RT-PCR对阳性单株检测转入片段的表达，考察植株生长30天后阳性转基因单株和对照（CK）野生型中花11的冠根数和植株生物量，阳性转基因植株的冠根数目、地上部苗干重和千粒重与对照相比均显著增加，结合田间表现选择表现优良的转基因单株，自交留种。

该基因OsAP2-6所编码蛋白的分子量为50117道尔顿，富含丙氨酸（13%）、甘氨酸（10.9%）和丝氨酸（11.1%）；脂肪系数为56.09；等电点为6.43；疏水指数为-0.536，表明亲水性较强；

一种水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11、水稻品种珍汕97B的粒型及根系改良中的应用，其步骤是：

1、将来源于水稻品种6W039的基因OsAP2-6的CDS在水稻品种中花11中超表达，转基因植株的粒长变长、粒宽变宽，谷粒面积增加，水稻品种中花11的粒型得到改良。

2、将来源于水稻品种6W039的基因OsAP2-6的一段CDNA片段在水稻品种中花11中表达，抑制中花11的基因OsAP2-6的表达，转基因植株冠根数增加，生物量增加，水稻品种中花11的根系得到改良，生物量得到提高。

3、以珍汕97B为母本，以日本晴、明恢63和野生稻ACC10为父本（珍汕97B、日本晴、和明恢63为中国公开品种，ACC10来源于国际水稻研究所，编号为：IRGC105491，见遗传资源披露表），分别杂交1次，再与珍汕97B回交4次，利用分子标记从中选择基因OsAP2-6分别来源于日本晴、明恢63和野生稻ACC10的近等基因系，命名为NIL^NIP、NIL^MH63和NIL^ACC10。

4、将选育出来的NIL^NIP、NIL^MH63和NIL^ACC10与轮回亲本珍汕97B一起种植于大田，考察植株生长30天后的冠根数目、植株生物量和植株成熟后的千粒重，NIL^NIP和NIL^ACC10与珍汕97B相比粒型和生物量显著增加，日本晴和ACC10中OsAP2-6的等位基因可以很好的改良水稻品种珍汕97B。

本发明克服已有技术的不足，将水稻OsAP2-6基因在水稻品种中花11中超表达，转基因植株OsAP2-6表达量上升,粒型变大；将中花11中OsAP2-6基因抑制，转基因植株OsAP2-6表达量下降，冠根数目增加，生物量和千粒重增加；将来源于粳稻日本晴和野生稻ACC10的OsAP2-6的等位基因导入到珍汕97B中可以显著地增加珍汕97B的粒长、长宽比、冠根数目和生物量。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1、本发明克隆了一个控制粒型的新基因OsAP2-6，该基因正调控粒型，超表达该基因粒型变大；

2、本发明克隆了一个控制冠根发育的新基因OsAP2-6，该基因负调控冠根发育，抑制该基因，冠根数目增加，植株生物量增加；

3、本发明发掘了OsAP2-6基因在自然界中的优异等位基因，利用来源于粳稻日本晴和野生稻ACC10的OsAP2-6的等位基因可以增加珍汕97B的粒型、根系以及植株生物量。

4、本发明所产生的材料由于转入的片段均来源于水稻，能够直接应用于水稻育种。

附图说明

图1为一种超表达载体构建示意图。

将基因OsAP2-6的CDS连接到表达载体PU1301上形成超表达重组载体，该CDS由1407个碱基组成。

图2为一种抑制表达载体构建示意图。

将基因OsAP2-6的一段262个碱基的cDNA片段连接到表达载体pDS1301上形成中间载体，再将同一段cDNA片段与中间载体反向连接形成抑制重组载体。

图3为一种超表达T0代转基因植株阳性检测及基因OsAP2-6表达量检测示意图。

胶图第1排为用超表达载体上的报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)的特异引物进行PCR检测结果。第2排为用RT-PCR检测基因OsAP2-6表达量，第3排为对照Actin的表达量。

图4为一种超表达T1代转基因家系中部分单株阳性检测及基因OsAP2-6表达量检测。

胶图第1排为用超表达载体上的报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)的特异引物进行PCR检测结果。第2排为用RT-PCR检测基因OsAP2-6表达量，第3排为对照Actin的表达量。1-5泳道为家系OX7T1分离出的5个单株，6-10泳道为家系OX9T1分离出的5个单株。

图5为一种抑制表达T0代转基因植株的阳性检测及表达量检测示意图。

胶图第1排为用抑制表达载体上的潮霉素标记Hn的特异引物进行PCR检测结果。第2排为用RT-PCR检测基因OsAP2-6表达量，第3排为对照Actin的表达量。

图6为一种抑制表达T1代转基因家系中部分单株阳性检测及基因OsAP2-6表达量检测示意图。

胶图第1排为用抑制表达载体上的潮霉素标记Hn的特异引物进行PCR检测结果。第2排为用RT-PCR检测基因OsAP2-6表达量，第3排为对照Actin的表达量。1-7泳道为家系R8T1分离出的7个单株，8-14泳道为家系R16T1分离出的7个单株。

具体实施方式

本发明通过以下详细的实施例给出。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用各种用途和条件。

实施例1：

基因OsAP2-6的克隆：

抽取水稻品种6W39（来源于国际水稻研究所，编号：IR65482-4-136-2-2）的DNA,用引物（引物序列为：CCGGAATTCTCAGACATACATGTGCCAATATCC和CCCAAGCTTCTATTCTGAACCCTGGCGGATT由上海生工合成）进行聚合酶链式反应（PCR），将得到的PCR产物进行测序得到基因OsAP2-6的基因序列，由5791个碱基组成，所示的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。PCR程序:94℃预变性5分钟；35个循环（94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸6分钟），72℃延伸10分钟。抽取水稻品种6W39（来源于国际水稻研究所，编号：IR65482-4-136-2-2）根系的RNA,反转录成cDNA，用引物（引物序列为：CGGGATCCATCGATCATATCTATCGCCATG和CGGGATCCAGAGCCAGTAAGTCCACCTACT)进行聚合酶链式反应（PCR），将得到的PCR产物进行测序得到基因OsAP2-6的编码序列（CDS），由1407个碱基组成，所示的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。PCR程序:94℃预变性5分钟；35个循环（94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸2分钟），72℃延伸7分钟。利用Primer3软件（http://frodo.wi.mit.edu/）翻译编码序列（CDS）获得氨基酸序列，编码469个氨基酸，其序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

上述引物由上海生工合成，序列测定由华大基因测定。DNA、RNA抽提，PCR及试剂配方参照J.萨姆布鲁克等，分子克隆实验指南，第三版，金冬雁等(译)，科学出版社，2002。实施例2：

重组载体的构建和转化农杆菌的建立：

（1）、根据图1的技术路线，将实施例1得到的CDS（SEQ ID NO.2所示）用BamHI酶切，分离回收目标产物，与用BamHI酶切过的PU1301载体（Zhao Y et al.,2009）用T4连接酶连接形成超表达载体。上述引物由上海生工合成，限制性内切酶BamHI和T4连接酶均购于Takara公司；

（2）根据图2的技术路线,将实施例1得到的CDS用引物（引物序列为：AAAGAGCTCGGATCCCGTCGGAGAAGGACTACTGG和AAAACTAGTGGTACCCTGTTGCTCTGCTTGTTGCT)进行聚合酶链式反应（PCR）分离得到基因OsAP2-6的一段262个碱基的cDNA片段，其序列为SEQ ID NO.3所示。PCR程序:94℃预变性5分钟；35个循环（94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸30秒），72℃延伸7分钟。将目标片段先用BamHI和KpnI酶切，分离回收目标产物，与用BamHI和KpnI酶切过的pDS1301载体（Chu ZH et al.,2006）用T4连接酶连接形成中间载体1，再将目标片段用SacI和SpeI酶切，分离回收后,与用SacI和SpeI酶切过的中间载体1用T4连接酶连接形成抑制表达载体。上述引物由上海生工合成，限制性内切酶（BamHI、KpnI、Sac和SpeI）和T4连接酶均购于Takara公司；

（3）、将超表达载体和抑制载体转化农杆菌EHA105（Takara公司产品）中，超表达载体转化后的菌株命名为OX；RNA抑制载体转化后的菌株命名为R；

上述RNA抽提，RNA反转录成cDNA，PCR，酶切连接等分子克隆方法及试剂配方参照J.萨姆布鲁克等，分子克隆实验指南，第三版，金冬雁等(译)，科学出版社，2002。

实施例3：

农杆菌介导的遗传转化：

（1）、诱导：

将成熟的水稻品种（中花11，中国公开的粳稻品种）种子去壳，然后依次用70%体积比的乙醇处理1分钟，0.15%浓度的氯化汞（HgCl₂）种子表面消毒15分钟；

用灭菌水洗种子4-5次；将种子放在粳稻诱导培养基上；将接种后的培养基置于黑暗处培养4周，温度25±1℃。

（2）、继代：

挑选亮黄色、紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻继代培养基上黑暗下培养2-3周，温度25±1℃。

（3）、预培养：

挑选紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻预培养基上黑暗下培养4-5天，温度25±1℃。

（4）、农杆菌培养：

在带有卡那霉素抗性（上海生工公司产品)选择的LA培养基（LA培养基的配制参照J.萨姆布鲁克等，分子克隆实验指南，第三版，金冬雁等(译)，科学出版社，2002）上预培养农杆菌株OX和R两天，温度28℃；刮取农杆菌至悬浮培养基中悬浮培养，温度28℃。

（5）、侵染：

将预培养的愈伤转移至灭好菌的瓶子内；调节农杆菌OX和R的悬浮液至OD₆₀₀0.8-1.0；将愈伤在农杆菌悬浮液中浸泡30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；然后放置在粳稻共培养基上培养3天，温度19-20℃。

（6）、筛选：

用灭菌水洗涤愈伤8遍；浸泡在含400毫克/L羧苄青霉素（CN）（上海生工公司产品）的灭菌水中30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；转移愈伤至含有250mg/L羧苄青霉素（CN）、50mg/L潮霉素（Hn）（Roche公司产品）粳稻选择培养基上选择培养2-3次，每次2周。

（7）、分化：

将抗性愈伤转移至粳稻分化培养基上，光照下培养，温度26℃。

（8）、生根：

剪掉再生苗分化时产生的根；然后将其转移至生根培养基中光照下培养2-3周，温度26℃。

（9）、移栽：

洗掉再生植株根上的残留培养基，移入钵中盆栽，同时在最初的几天保持水分湿润，待植株存活健壮后移入大田。

实施例4：

由实施例2和实施例3获得的OsAP2-6超表达T0代转基因植株共21株，分别命名为OX1至OX21，取TO代转基因植株叶片抽提DNA，用超表达载体PU1301上报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)的引物（引物序列为：CGTCTGTTGACTGGCAGGT和TTTTTGTCACGCGCTATCAG，ZhaoY et al.,2009）进行PCR检测阳性转化植株，PCR程序:94℃预变性5分钟；35个循环（94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1.5分钟），72℃延伸7分钟；）能扩增出1.2kb大小条带的单株即为阳性转化植株；抽提叶片RNA,进行半定量PCR（RT-PCR），以看家基因Actin（引物序列为：TATGGTCAAGGCTGGGTTCG；CCATGCTCGATGGGGTACTT,Zhao Y et al.,2009）为对照，检测OsAP2-6基因（引物序列为：CGTCGGAGAAGGACTACTGG和CTGTTGCTCTGCTTGTTGCT）的表达量变化，其中OX1至OX13、OX19和OX20这15个转化单株中基因OsAP2-6的表达量显著升高（图3）；收获其单株自交种子。

以上引物序列均由上海生工合成。DNA抽提、RNA抽提、RNA反转录成cDNA和PCR反应体系等相关技术参照J.萨姆布鲁克等，分子克隆实验指南，第三版，金冬雁等(译)，科学出版社，2002。

实施例5：

一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11粒型改良中的应用，其步骤是：

（1）、在实施例4中获得了将基因OsAP2-6在水稻品种中花11中超表达的转基因株系后，根据转基因植株生长状态和结实情况，从实施例4水稻基因OsAP2-6表达量显著上升的阳性植株中，选取OX7和OX9这两个转基因单株种植成T1代转基因家系，命名为OX7T1和OX9T1。由于T1代会分离，因此进一步利用PCR(方法同实施例4)检测各家系中的阳性单株，对阳性单株抽提叶片RNA进行RT-PCR检测转入基因OsAP2-6的表达（方法同实施例4，图4），从家系OX7T1和OX9T1选取表达量明显上升的阳性单株，以野生型中花11为对照（CK），考察粒型，OX7T1和OX9T1家系中阳性单株的谷粒面积、粒长、粒宽与对照野生型中花11相比显著增加，长宽比不变（表1）。水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11中超表达后，转基因阳性单株的粒型谷粒变长、变宽，面积及增加，水稻品种中花11的粒型得到改良。

粒型测定使用大米外观品质检测仪（东孚久恒公司，北京）测定。

表1T1代超表达转基因家系OX7T1和OX9T1与CK粒型比较

注：***，T测验P<0.001；**，T测验P<0.01

（2）、从实施例5步骤1的OX7T1和OX9T1家系中各选取基因OsAP2-6表达量显著升高且粒型变大的阳性单株OX7T1-5和OX9T1-5(图4)自交收种，将种子种植成T2代家系，命名为OX7PT2和OX9PT2，继续利用PCR(方法同实施例4)检测家系OX7PT2和OX9PT2中的阳性单株，以野生型中花11为对照，考察OX7PT2和OX9PT2家系中阳性单株的粒型（同实施例5），两个家系的阳性单株的谷粒面积和粒长与对照野生型中花11相比均显著增加，OX7PT2家系粒宽显著增加，长宽比不变，而OX9PT2家系粒宽不变，长宽比显著增加（表2）。水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11中超表达后，转基因阳性单株的粒型谷粒变长、变宽，面积及增加，水稻品种中花11的粒型得到改良。

表2T2代超表达家系OX7PT2和OX9PT2与CK粒型比较

注：***，T测验P<0.001；**，T测验P<0.01

实施例6：

从实施例2和3中获得OsAP2-6抑制表达T0代转基因植株共18株，命名R1至R18，取T0代转化单株叶片提取DNA,用抑制载体pDS1301上的筛选标记潮霉素（Hn）的引物（引物序列为：AGAAGAAGATGTTGGCGACCT和GTCCTGCGGGTAAATAGCTG,Zhao Y et al.,2009）进行PCR,PCR程序:94℃预变性5分钟；35个循环（94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸40秒），72℃延伸7分钟；检测阳性转化植株，能扩增出480bp大小条带的单株即为阳性转化单株(图5)。抽提叶片RNA,进行RT-PCR，，以看家基因Actin（引物序列为：TATGGTCAAGGCTGGGTTCG；CCATGCTCGATGGGGTACTT,Zhao Y et al.,2009）为对照，检测OsAP2-6基因（引物序列为：CGTCGGAGAAGGACTACTGG和CTGTTGCTCTGCTTGTTGCT）的表达量变化，其中R2、R3、R5、R8、R12、R15和R16这7个抑制转化植株中基因OsAP2-6的表达量显著下降（图5）。DNA抽提、RNA抽提、RNA反转录成cDNA和PCR反应体系等相关技术参照J.萨姆布鲁克等，分子克隆实验指南，第三版，金冬雁等(译)，科学出版社，2002。

实施例7：

一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11中根系改良中应用，其步骤是：

在实施例6中得到水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11中的抑制表达转基因植株后，结合转基因植株生长状态和结实情况，从实施例6中收获水稻基因OsAP2-6表达量显著下降的转基因单株R8和R16的种子，种成T1代家系，命名为R8T1和R16T1，继续利用PCR(方法同实施例6)检测各家系中的阳性单株，用RT-PCR（同实施例6）检测阳性单株的表达量（图6）；幼苗生长30天后，考察转基因阳性家系中阳性单株和对照中花11的冠根数目、地上部苗干重，植株成熟后考察千粒重等。R8T1和R16T1家系中阳性单株的冠根数、地上部苗干重和千粒重与对照野生型中花11相比均显著增加（表3）。水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11中抑制表达之后，水稻品种中花11的冠根数目增加，生物量增加，根系得到改良

表3抑制转基因家系R8PT1和R16PT1的冠根数目、苗干重和千粒重

注：***，T测验P<0.001；**，T测验P<0.01

实施例8：

一种水稻基因OsAP2-6在水稻品种珍汕97B根系和生物量改良中的应用，其步骤是：

（1）、以珍汕97B为受体，以日本晴、明恢63和普通野生稻ACC10（珍汕97B、日本晴和明恢63为中国公开品种，ACC10来源于国际水稻研究所，种质编号:IRGC105491）为供体，通过杂交1次、与轮回亲本珍汕97B回交4次，结合分子标记辅助选择构建以珍汕97B为背景，基因OsAP2-6分别来源于日本晴、明恢63和ACC10的近等基因系（NIL），分别命名为NIL^NIP、NIL^MH63和NIL^ACC10。NIL^NIP构建过程中分子标记辅助选择检测OsAP2-6所在区域的筛选标记为RM528和RM340；NIL^MH63构建所用筛选标记为RM6071和RM400；NIL^ACC10构建所用筛选标记为RM528和RM7243，上述标记引物序列信息来源于公开数据库网站http://www.gramene.org，由上海生工合成，PCR检测（程序同实施例7）。

（2）、获得3份不同来源OsAP2-6的近等基因系，考察这3份近等基因系与对照珍汕97B（CK）幼苗生长30天后的冠根数目、地上部苗干重。NIL^NIP的冠根数和苗干重不变；NIL^MH63冠根数目和苗干重显著增加；NIL^ACC10冠根数和苗干重显著增加（表4）。明恢63和ACC10来源的OsAP2-6等位基因对改善水稻品种珍汕97B的根系和生物量具有较好的增加效果，其中ACC10来源的OsAP2-6等位基因增加冠根数和苗干重的效果最好。

表4近等基因系冠根数以及苗干重分析

注：***，T测验P<0.001；**，T测验P<0.01；*，T测验P<0.05。

实施例9：

一种水稻基因OsAP2-6在水稻籼稻品种珍汕97B粒型改良中的应用，其步骤是：

以实施例8获得的3份不同来源OsAP2-6的近等基因系，考察这3份近等基因系与对照珍汕97B（CK）在大田种植成熟后的粒型和千粒重。NIL^NIP谷粒面积、粒长和长宽比均显著增加，千粒重不变；NIL^MH63谷粒面积和粒宽变小，长宽比增加，千粒重增加。NIL^ACC10粒长变长，粒宽变窄，长宽比增加，谷粒面积不变，千粒重不变（表5）。日本晴和ACC10来源的OsAP2-6等位基因对增加水稻品种珍汕97B的粒长、长宽比具有较好的增加效果，其中ACC10来源的OsAP2-6等位基因的增加效果最好；明恢63来源的OsAP2-6等位基因对增加水稻品种珍汕97B的千粒重具有较好的增加效果。

表5近等基因系粒型效应分析

注：***，T测验P<0.001；**，T测验P<0.01；*，T测验P<0.05。

本发明所用到的遗传转化的培养基及其配制的方法如下所述：

（1）试剂和溶液缩写

本发明中培养基所用到的植物激素的缩写表示如下：

6-BA（6-BenzylaminoPurine，6-苄基腺嘌呤）；

CN（Carbenicillin，羧苄青霉素）；

KT（Kinetin，激动素）；

NAA（Napthalene acetic acid，萘乙酸）；

IAA（Indole-3-acetic acid，吲哚乙酸）；

2,4-D（2,4-Dichlorophenoxyacetic acid，2,4-二氯苯氧乙酸）；

AS（Acetosringone，乙酰丁香酮）；

CH（Casein Enzymatic Hydrolysate，水解酪蛋白）；

HN（Hygromycin B，潮霉素）；

DMSO（Dimethyl Sulfoxide，二甲基亚砜）；

N6max（N6大量元素成分溶液）；

N6mix（N6微量元素成分溶液）；

MSmax（MS大量元素成分溶液）；

MSmix（MS微量元素成分溶液）

（2）主要溶液配方

1）N6培养基大量元素母液（按照10倍浓缩液（10X）配制）：

将上述试剂逐一溶解，然后室温下用蒸馏水定容至1000毫升。

2）N6培养基微量元素母液（按照100倍浓缩液（100X）配制

将上述试剂在室温下溶解并用蒸馏水定容至1000毫升。

3）铁盐（Fe₂EDTA）贮存液（按照100X浓缩液配制）

将3.73克乙二铵四乙酸二钠（Na₂EDTA·2H₂O）和2.78克FeSO₄·7H₂O分别溶解，混合并用蒸馏水定容至1000毫升，至70℃温浴2小时，4℃保存备用。

4）维生素贮存液（按照100X浓缩液配制）

加蒸馏水定容至1000毫升，4℃保存备用。

5）MS培养基大量元素母液（MSmax母液）(按照10X浓缩液配制)

将上述试剂在室温下溶解，并用蒸馏水定容至1000毫升。

6）MS培养基微量元素母液（MSmin母液）(按照100X浓缩液配制)

将上述试剂在室温下溶解，并用蒸馏水定容至1000毫升。

7）2,4-D贮存液（1毫克/毫升）的配制：

秤取2,4-D100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，于室温下保存。

8）6-BA贮存液（1毫克/毫升）的配制：

秤取6-BA100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，室温保存。

9）萘乙酸（NAA）贮存液（1毫克/毫升）的配制：

秤取NAA100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，4℃保存备用。

10）吲哚乙酸（IAA）贮存液（1毫克/毫升）的配制：

秤取IAA100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，4℃保存备用。

11）葡萄糖贮存液（0.5克/毫升）的配制：

秤取葡萄糖125克，然后用蒸馏水溶解定容至250毫升，灭菌后4℃保存备用。

12）AS贮存液的配制：

秤取AS0.392克，加入DMSO10毫升溶解，分装至1.5毫升离心管内，4℃保存备用。13）1N氢氧化钾贮存液

秤取氢氧化钾5.6克，用蒸馏水溶解定容至100毫升，室温保存备用。

（3）用于水稻遗传转化的培养基配方

1）诱导培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶（25毫升/瓶），封口后按常规方法灭菌（例如121℃下灭菌25分钟，下述的培养基灭菌方法与本培养基的灭菌方法相同）。

2）继代培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶（25毫升/瓶），封口，按上述方法灭菌。

3）预培养基

加蒸馏水至250毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口，按上述方法灭菌。

使用前加热溶解培养基并加入5毫升葡萄糖贮存液和250微升AS贮存液，分装倒入培养皿中（25毫升/皿）。

4）共培养基

使用前加热溶解培养基并加入5毫升葡萄糖贮存液和250微升AS贮存液，分装倒入培养皿中（25毫升/每皿）。

5）悬浮培养基

加蒸馏水至100毫升，调节pH值到5.4，分装到两个100毫升的三角瓶中，封口，按上述方法灭菌。

使用前加入1毫升无菌葡萄糖贮存液和100微升AS贮存液。

6）选择培养基

加蒸馏水至250毫升，调节pH值到6.0，封口，按上述方法灭菌。

使用前溶解培养基，加入250微升HN（50毫克/毫升）和400微升CN（250毫克/毫升）分装倒入培养皿中（25毫升/皿）。（注：第一次选择培养基羧苄青霉素浓度为400毫克/升，第二次及以后选择培养基羧苄青霉素浓度为250毫克/升）。

7）预分化培养基

加蒸馏水至250毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，封口，按上述方法灭菌。

使用前溶解培养基，250微升HN（50毫克/毫升）250微升CN（250毫克/毫升），分装倒入培养皿中（25毫升/皿）。

8）分化培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到6.0。

煮沸并用蒸馏水定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶（50毫升/瓶），封口，按上述方法灭菌。

9）生根培养基

加蒸馏水至900毫升，用1N氢氧化钾调节pH值到5.8。

煮沸并用蒸馏水定容至1000毫升，分装到生根管中（25毫升/管），封口，按上述方法灭菌。

SEQUENCE LISTING

<110> 华中农业大学

<120> 一种水稻基因OsAP2-6及制备方法和应用

<130> 一种水稻基因OsAP2-6及制备方法和应用

<160> 4

<170> PatentIn version 3.1

<210> 1

<211> 5791

<212> DNA

<213> 水稻

<400> 1

actatgttga ctatagatat agcccaactc acctttaact gttcagtttg aaacaaatgt 60

gagcagcccg taacttgctt tcccacaaac atttccaaaa ctagtcaaaa actgacggtt 120

gtttccctct ttcacatcat ggaagtattt gaaaaagggc ttggcgaaaa agtatttgaa 180

aaaggcaaaa atgatttggt cacgctgaaa aattatgact ttagctttat accatagaaa 240

gttatgggta cactttaatg ccactaaaga gatcatatta ttcaatttta tgctattcca 300

ttcactaata ttagaagtgt gtcttgttta tcttttttca tgaaacccgc taaacaaaat 360

aacaccatta tcacactgtt agccattctc tgttcactat gaacactatc actctctcaa 420

agcacataac agaatggtat atctttatta atataaaaac aatgttgttc tccttccgtc 480

tcctcccacc gcaagataga accagtaaag aaactcttag cccatcccca ataaggacct 540

tgaagcccat tccattggta tagactgtta caatgcacaa aggcttagta actggaaaaa 600

tgtaaaattt gagtgacact aaagtgcaac catgttttcc aatggtaata gtatactatg 660

aacctaaggt gatgatattt gtgtgtaaca aactaatcaa aatttccctc caaaactgct 720

gttgattaga atgtccattt tgtgaagact ttgcatttct ccaagtattg gacagtagaa 780

ctactgtcca tgagccagtc tagctgcgta cccagattat ggcagctatc tattcgtcag 840

aactcaggat tgcaacttgc aatatggtgg ggagtgttca cacttcacaa aattcagatc 900

atctgcgcgg aatccaatat acagactgct gctgctcctc cacggtagta ctaagagcaa 960

gtttaacagt atagccaaag tttaacagta tagtcaactg ttggctttaa ttatttatat 1020

ttaatttaat agctaattta tacaatagtt ttatattgtc tgatctcacc tatcatgtac 1080

acatgtatct tatagtctgt gctacaggta gctataagtt tgtagcccgc tgttatcttt 1140

ttaaaatatg tttatagctt atttataatc tgctactgta cgtgctctaa ctccactcgc 1200

gcagagagca aacaaaaagc aagctagcta gggctgcatg cgagggaaca gcggcctagc 1260

tccattttgg tcaaggagac cgcccatagg accccatgaa acgcctccac gttgtcgacc 1320

attactactc acacctcctc ctctttagat tcgcaaaaca aggctaggtt ttaaagtatt 1380

tccctacttt gctcttatcc ctaaatcact ctctttaaat taatcaaact catcttggcc 1440

tttgtgctct ccctctatct cctctctcct ctctagttct tggacgtatt cgttacagcc 1500

cagcaattgc atgtaacatt aattccaaaa tgcacaaatt gtggacagct gagagagaga 1560

gagtagctag cagtcagcca ctcatgttac tcagcagtgt atgtcgcaca ttcaacttca 1620

ttccaatcta tatataacac acacttgggt attctctcat tctctcctta gcacaacact 1680

ggtctacatc gatcaatagc tttatagtta tccttccctc tcataagctc aaacaaacgc 1740

tggtcaagtg ctcttcaaga tcggcgcatc gatcatatct atcgccatgg acatggacat 1800

gagctcggct tatcctcacc attggctctc cttctccctc tctaacaact accaccatgg 1860

cctccttgag gccctctcta ccacatctgc acctccactt ggtaatatat gagcatctca 1920

aataatgcac tattcataat ctttcatgtg catgcatgtt tgctaaacta atgccatgtg 1980

gattagtagg gcatgcatct gtgttcatca tcactaagta tcattatttt tctgtgtttt 2040

ctggtgtagg agaggagggg ccagcggagg gcgctccgaa gatggaggat ttcctcggcg 2100

gcctaggcgg aggcggcggc gccgtcgccg ccgctccggc agctgccccg gaggatcagc 2160

tcagctgcgg cgagcttggt agcatcgccg ccgggttctt gcgccggtac ccagcgcctg 2220

agaacgccgg cggggtgacc atcgcaatgg cgaccgacgc ggcggcggag ctggccgatc 2280

cggcgaggag gaccgccgag acgttcgggc aacggacgtc catctaccgt ggtgtcacta 2340

ggtatatata ttttgcgata acacatggat ccatagagat gatctatcta tctaatctag 2400

ctactcgatc ccagctctca cagcgcccaa atagctaggt gcatgcatgc atatagttag 2460

ttatactact agcagtacac taacgacact agtagtcgtt catggttaaa atgtcatttt 2520

aacttatagc taaaaataat catgcaagca tgacaatgag ctgaaaaata atataatcaa 2580

caagtttttg ataagggatg ttgggtattg ggaaaatgca tcaggcaccg gtggacgggg 2640

aggtacgagg cgcacctgtg ggacaatagc tgccgccggg aaggccaaag ccgcaaaggc 2700

cgccaaggtt tgtgcatgca tgtcataacc catatccaac aaattaatct gcaaatttta 2760

gcatatggac gttacattgt tgatcactaa ttaacatttg tacctgcttt tctccaacct 2820

aatttctcgc ctgttggcgg accgccggtg atgatactcc atcagtctac ttaggtatgt 2880

cgtcattatt tgcaacatct atatatctta attagttagt ttcttttcca ttcgttcacc 2940

ttgagactta ctgtaaaagt tgggggatta aacaaaactt tcaggaggtt atgataagga 3000

ggagaaggcc gcaagagctt acgacctcgc cgccctaaag tactggggtc caaccaccac 3060

gacgaacttc cctgtaagta cttgttgcaa cagtcaactt attattgcca gccccatcaa 3120

ttaatacatt attcgatctt tacacatatg gcatgcatgt atgtgcttat cctggtcgct 3180

gatgagatag tagagtacta gttatataca gtcaacgttc atacatgtat tatacgatgt 3240

actacgatac gtgtactcgt acattcgtac ttacctagtg ataaatttac ctgcaccgat 3300

cgatgactgt aggttgccaa ctacgagacg gagctggagg agatgaagtc catgacgcgg 3360

caggagttca tcgcgtcgct gcgcaggtga gacgaaacag tagtcatccg gaaagtttat 3420

ttatttattt attttggaga agcagcagta atccagagag tcacatgctt aggagaaaca 3480

acccttttcc acgtacacac cttgccatac gcgtgtacgc gtgcgtgcac gtacggctgc 3540

gcactgcttt tactgttctc acacttgtca catgttgacc tcattgtgtg ggttcctact 3600

ctgttttctt tttttttttc aggaagagca gcggcttctc aagaggggct tccatctaca 3660

gaggagtaac aaggtataag attgagttac aacaataaat atctccctga aatacttagt 3720

atggtagtat caagttgcat cattcggagc actagctact actaggtaag tatattctgc 3780

tgggtcacat attcggtcaa aaccatcaaa taaatgaaaa tctataataa ctagatctgt 3840

tttaacctaa aatttgtctt ttcacctaaa agttgagtat agatttgaga tttagtacaa 3900

atgaatttta tgcctagatt tatctccaat aattttttca tcaatttaaa gaatttgtag 3960

gtacgacttt catggatttt cacttattcg attgttaatt ttcactagat attccccatc 4020

ctatactacg gtaaaaaaaa cattagtcct ccttctcttc ccttatcctg tgtataaaaa 4080

aaccgctaca gaaacaaacc ggtgcatccg tgattagcca agaaaaaaaa attaaaaaat 4140

ttaaaacctt atctcccata tcaaattaaa ccacgttcta taaattccgt tataccacac 4200

gggcatgcga ctagtttggg gacaaaattc tagaagttct agtttttgaa ctctagtatc 4260

aagttgcagc attcagagcc gctcttcttt ttttttttct tttcttagta aaaaaaaact 4320

gtgacaatgg gagcctaatg tttggagtgc agacatcatc agcacggccg gtggcaagcg 4380

aggatcggca gggtggccgg aaacaaggac ctgtacttgg gcactttcag taagctagcc 4440

tcgatctttt caaatacata taaacaaacg ctaagaccat tgagatgcat ggttgttggc 4500

aaattttcct aaatgtccca tgcaccgcgc gcaggcacgc aggaggaggc tgccgaggcg 4560

tacgacattg ccgctatcaa gttcaggggg ctcaacgccg tcaccaactt cgacatgagc 4620

cgctacgacg tcgacagcat cctcaacagc gacctgccgg taggcggcgg agccgccacg 4680

cgcgcctcta agttcccctc tgacccatcg ctgccgctgc cgtcgcctgc cataccaccg 4740

tcggagaagg actactggtc cctccttgcc ctgcactacc accaccacca gcagcagcag 4800

cagcagcagt ttcctgcttc tgcatttgac acctacggct gctcctccgg cgtgaacgtg 4860

gacttcacaa tggggactag cagccacagc ggcagcaaca gcaacagcag cagcagcagc 4920

gccatatggg gcacagccgc cggcgcagcg atggggaggc agcaaaacgg cggcagcagc 4980

aacaagcaga gcaacagcta ctccggtaac aacattcctt atgctgctgc agcagctatg 5040

acttctggat cagcactcta cgggggctcc accggtagca acgggacatg ggtggcgagt 5100

aacacgagca cggctcccca cttctacaac tatttgtttg ggatggagta ggtggactta 5160

ctggctctat tagcttcatt agctgaaacg agtggtaggc ctaggactga catggaactg 5220

atcaaaagtt ttggctgctg atgcatgcag gaatgcaatg caatgcatcc ttaagattat 5280

tcttttcctt ccctgacata gtcctgtagc agagaaactc atgtatcacc agtgtttcta 5340

attcaagcac atttttttaa ctagttccat tgtcagctac tccatttgtt tcatattata 5400

agttattttg atgttttttt ctagttaaat ttctttaaat ttgaccgagt tcatagaaaa 5460

atatagcaac attgtcaacc caaacaaata tattatcaaa atatattcaa tattacattt 5520

agcgaaacta aattggttat gtagatattg ttaatttttt ctataaactt aatcaaatct 5580

aaaaaaattt gactagaaaa aaaatcaaca cgacttataa tatgaaacgg tggaagtaca 5640

acataagtgt gtttgaaaat gtgtatccat ctatatgaaa acgtttcgaa tttccatgcc 5700

aggtgaataa cagtaaaaga actttcaaga taattagata atggtgcata cttgaagtca 5760

aattttgtcg cgggggaatc cgccagggtt c 5791

<210> 2

<211> 1407

<212> DNA

<213> 水稻

<400> 2

atggacatgg acatgagctc ggcttatcct caccattggc tctccttctc cctctctaac 60

aactaccacc atggcctcct tgaggccctc tctaccacat ctgcacctcc acttggagag 120

gaggggccag cggagggcgc tccgaagatg gaggatttcc tcggcggcct aggcggaggc 180

ggcggcgccg tcgccgccgc tccggcagct gccccggagg atcagctcag ctgcggcgag 240

cttggtagca tcgccgccgg gttcttgcgc cggtacccag cgcctgagaa cgccggcggg 300

gtgaccatcg caatggcgac cgacgcggcg gcggagctgg ccgatccggc gaggaggacc 360

gccgagacgt tcgggcaacg gacgtccatc taccgtggtg tcactaggca ccggtggacg 420

gggaggtacg aggcgcacct gtgggacaat agctgccgcc gggaaggcca aagccgcaaa 480

ggccgccaag tctacttagg aggttatgat aaggaggaga aggccgcaag agcttacgac 540

ctcgccgccc taaagtactg gggtccaacc accacgacga acttccctgt tgccaactac 600

gagacggagc tggaggagat gaagtccatg acgcggcagg agttcatcgc gtcgctgcgc 660

aggaagagca gcggcttctc aagaggggct tccatctaca gaggagtaac aagacatcat 720

cagcacggcc ggtggcaagc gaggatcggc agggtggccg gaaacaagga cctgtacttg 780

ggcactttca gcacgcagga ggaggctgcc gaggcgtacg acattgccgc tatcaagttc 840

agggggctca acgccgtcac caacttcgac atgagccgct acgacgtcga cagcatcctc 900

aacagcgacc tgccggtagg cggcggagcc gccacgcgcg cctctaagtt cccctctgac 960

ccatcgctgc cgctgccgtc gcctgccata ccaccgtcgg agaaggacta ctggtccctc 1020

cttgccctgc actaccacca ccaccagcag cagcagcagc agcagtttcc tgcttctgca 1080

tttgacacct acggctgctc ctccggcgtg aacgtggact tcacaatggg gactagcagc 1140

cacagcggca gcaacagcaa cagcagcagc agcagcgcca tatggggcac agccgccggc 1200

gcagcgatgg ggaggcagca aaacggcggc agcagcaaca agcagagcaa cagctactcc 1260

ggtaacaaca ttccttatgc tgctgcagca gctatgactt ctggatcagc actctacggg 1320

ggctccaccg gtagcaacgg gacatgggtg gcgagtaaca cgagcacggc tccccacttc 1380

tacaactatt tgtttgggat ggagtag 1407

<210> 3

<211> 262

<212> DNA

<213> 水稻

<400> 3

cgtcggagaa ggactactgg tccctccttg ccctgcacta ccaccaccac cagcagcagc 60

agcagcagca gcagtttcct gcttctgcat ttgacaccta cggctgctcc tccggcgtga 120

acgtggactt cacaatgggg actagcagcc acagcggcag caacagcaac agcagcagca 180

gcagcgccat atggggcaca gccgccggcg cagcgatggg gaggcagcaa aacggcggca 240

gcagcaacaa gcagagcaac ag 262

<210> 4

<211> 468

<212> PRT

<213> 水稻

<400> 4

Met Asp Met Asp Met Ser Ser Ala Tyr Pro His His Trp Leu Ser Phe

1 5 10 15

Ser Leu Ser Asn Asn Tyr His His Gly Leu Leu Glu Ala Leu Ser Thr

20 25 30

Thr Ser Ala Pro Pro Leu Gly Glu Glu Gly Pro Ala Glu Gly Ala Pro

35 40 45

Lys Met Glu Asp Phe Leu Gly Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ala Val

50 55 60

Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Glu Asp Gln Leu Ser Cys Gly Glu

65 70 75 80

Leu Gly Ser Ile Ala Ala Gly Phe Leu Arg Arg Tyr Pro Ala Pro Glu

85 90 95

Asn Ala Gly Gly Val Thr Ile Ala Met Ala Thr Asp Ala Ala Ala Glu

100 105 110

Leu Ala Asp Pro Ala Arg Arg Thr Ala Glu Thr Phe Gly Gln Arg Thr

115 120 125

Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu

130 135 140

Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Ser Arg Lys

145 150 155 160

Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Glu Lys Ala Ala

165 170 175

Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Thr Thr Thr

180 185 190

Thr Asn Phe Pro Val Ala Asn Tyr Glu Thr Glu Leu Glu Glu Met Lys

195 200 205

Ser Met Thr Arg Gln Glu Phe Ile Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser

210 215 220

Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His His

225 230 235 240

Gln His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly Arg Val Ala Gly Asn Lys

245 250 255

Asp Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Glu Ala

260 265 270

Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn

275 280 285

Phe Asp Met Ser Arg Tyr Asp Val Asp Ser Ile Leu Asn Ser Asp Leu

290 295 300

Pro Val Gly Gly Gly Ala Ala Thr Arg Ala Ser Lys Phe Pro Ser Asp

305 310 315 320

Pro Ser Leu Pro Leu Pro Ser Pro Ala Ile Pro Pro Ser Glu Lys Asp

325 330 335

Tyr Trp Ser Leu Leu Ala Leu His Tyr His His His Gln Gln Gln Gln

340 345 350

Gln Gln Gln Phe Pro Ala Ser Ala Phe Asp Thr Tyr Gly Cys Ser Ser

355 360 365

Gly Val Asn Val Asp Phe Thr Met Gly Thr Ser Ser His Ser Gly Ser

370 375 380

Asn Ser Asn Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ile Trp Gly Thr Ala Ala Gly

385 390 395 400

Ala Ala Met Gly Arg Gln Gln Asn Gly Gly Ser Ser Asn Lys Gln Ser

405 410 415

Asn Ser Tyr Ser Gly Asn Asn Ile Pro Tyr Ala Ala Ala Ala Ala Met

420 425 430

Thr Ser Gly Ser Ala Leu Tyr Gly Gly Ser Thr Gly Ser Asn Gly Thr

435 440 445

Trp Val Ala Ser Asn Thr Ser Thr Ala Pro His Phe Tyr Asn Tyr Leu

450 455 460

Phe Gly Met Glu

465

Claims

1.一种分离的水稻基因OsAP2-6，其编码为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.一种分离的水稻基因OsAP2-6，其编码为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3.一种分离的水稻基因OsAP2-6，其编码为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

4.一种分离的水稻基因OsAP2-6，其序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

5.权利要求2所述的一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11粒型改良中的应用。

6.权利要求3所述的一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种中花11根系改良中的应用。

7.权利要求1所述的一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种珍汕97B根系改良中的应用。

8.权利要求1所述的一种分离的水稻基因OsAP2-6在水稻品种珍汕97B粒型改良中的应用。