CN104830865A - 长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 - Google Patents
长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104830865A CN104830865A CN201510304553.0A CN201510304553A CN104830865A CN 104830865 A CN104830865 A CN 104830865A CN 201510304553 A CN201510304553 A CN 201510304553A CN 104830865 A CN104830865 A CN 104830865A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lncrna
- dric
- colorectal cancer
- cancer cell
- cell metastasis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA(即lncRNA-DRIC)及其在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。lncRNA-DRIC的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。实验表明,lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中表达下调,过表达lncRNA-DRIC可以抑制结直肠癌细胞迁移。本发明首次发现一个长链非编码RNA lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中的特异性表达,并证明其抑制结直肠癌细胞的迁移,为结直肠癌转移的辅助诊断提供了新的有力工具,也提供了一个具有基因治疗潜力的RNA过表达载体,具有重要的意义和极大的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于基因工程领域,具体涉及一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA(即lncRNA-DRIC)及其在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。
背景技术
根据资料显示,2014年全球结直肠癌(colorectal cancer,CRC)新发病例占全部癌症的8%,发病率和死亡率均排第3位。在中国,结直肠癌已成为最常见的十大恶性肿瘤之一,近年来发病率持续上升。据统计,我国2010年大肠癌的发生率为20.9/105,死亡率为10.05/105,分别位居我国肿瘤发生率的第6位和死亡率的第5位。因此,阐明大肠癌的发生、发展的分子机制,寻找新的诊断和治疗靶点,将有助于其早期诊断、预后预测及提高治疗效果。
长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们几乎不编码蛋白,由RNA聚合酶II转录并经可变剪切形成,转录水平低于蛋白质编码基因,曾一度被认为是基因组转录的“噪音”。近来研究证实,lncRNA能在表观遗传学、转录调控、转录后调控等多种层面上调控基因的表达水平,参与生物体的发育、分化等基本生命过程,其表达或功能异常与人类心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等疾病的发生发展密切相关。lncRNA有望成为肿瘤诊断、预测预后的标志物,同时也为肿瘤的治疗提供了新的靶点。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA——lncRNA-DRIC,lncRNA-DRIC有可能成为结直肠癌转移的标志物。
本发明的另一目的在于提供lncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA,是lncRNA-DRIC,其转录本序列如SEQ ID NO:1所示。
lncRNA-DRIC在结直肠癌中的表达水平明显低于正常肠上皮。进一步构建其表达载体plNCX2-lncRNA-DRIC,转染结直肠癌细胞HCT116后,发现相较于对照组,lncRNA-DRIC过表达可以抑制结直肠癌细胞的迁移。因此,lncRNA-DRIC可以用于制备抑制结直肠癌细胞转移的药物。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
本发明首次发现一个长链非编码RNA lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中的特异性表达,并证明其抑制结直肠癌细胞的迁移,为结直肠癌转移的辅助诊断提供了新的有力工具,也提供了一个具有基因治疗潜力的RNA过表达载体,具有重要的意义和极大的应用价值。
附图说明
图1是lncRNA-DRIC在79例结直肠癌组织及配对的正常肠上皮组织的表达量示意图(N代表正常组织,T代表肝癌组织)。
图2是过表达lncRNA-DRIC的HCT116细胞及对照细胞的迁移实验结果示意图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
lncRNA-DRIC的克隆,包括以下步骤:
1.临床组织样本收集
收集中山大学附属肿瘤医院2004-2009年期间存档的结直肠癌冰冻新鲜组织标本及其配对正常肠上皮组织共79对。以上标本用于科学研究均获得患者的知情同意。
2.lncRNA定量PCR实验:
(1)RNA抽提
利用Trizol从冰冻组织中抽提总RNA,用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。
(2)逆转录反应
①在PCR管中加入以下试剂:
总RNA 2ug
随机引物(0.5ug/ul) 1ul
无RNA酶双蒸灭菌水 补至10ul
②置PCR仪中70℃、5min,立即放入冰中静置至少2min;
③再在上述PCR管中依次加入以下试剂:
④置PCR仪中42℃、1h;
(3)以SEQ ID NO:1为对象设计引物
lncRNA-DRIC:F:5’-AGGGCGTGTCTGAGATTGTG-3’(SEQ ID NO:2)
R:5’-TAGGAGTTCCACCGACGTGA-3’(SEQ ID NO:3)
β-actin:F:5’-TGGCACCCAGCACAATGAA-3’(SEQ ID NO:4)
R:5’-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3’(SEQ ID NO:5)
(4)实时定量PCR实验检测lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中的表达量反应体系如下(15μL):
热循环参数:
实验结果见图1(N代表正常组织,T代表肝癌组织),可以看出lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中呈低表达。
实施例2
建立稳定表达lncRNA-DRIC的HCT116细胞株
(1)病毒包装
合成lncRNA-DRIC cDNA序列,XhoI和NotI双酶切插入逆转录病毒载体plNCX2中,构建成功后进行测序验证,结果正确并将该质粒命名为plNCX2-lncRNA-DRIC。
应用293T细胞系包装病毒。293T细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液,37℃,5%CO2培养细胞至70-80%融合后,按照Lipofectamine(Invitrogen)转染试剂说明书,将携带质粒plNCX2-lncRNA-DRIC和包装质粒PVSV-G共转染,48h后收集病毒上清。
(2)感染细胞及嘌呤霉素筛选
直接将上述病毒上清感染结直肠癌HCT116细胞,感染两天后加G418筛选两周,以获得最大感染效率的稳定表达lncRNA-DRIC或对照的细胞株,分别命名为HCT116-plNCX2-lncRNA-DRIC和HCT116-NC。
实施例3
细胞迁移实验
(1)采用Transwell方法。Transwell小室购自BD公司,孔径0.8μm,聚碳酸脂微孔滤膜封闭。
(2)胰酶消化细胞,用无血清DMEM重悬上述稳定株细胞HCT116-plNCX2-lncRNA-DRIC和HCT116-NC至浓度为5×105cells/mL。
(3)Transwell小室上室加200uL以上细胞悬液,下室加入700μL含10%FBS的细胞培养基,每组3复孔,37℃,5%CO2培养细胞。
(4)24小时后,取出Transwell小室,PBS漂洗,棉签擦去上室上面未发生侵袭的细胞,移去Transwells,倒置,风干。
(5)染色:24孔板中加入500μL含0.1%结晶紫甲醇溶液,将小室置于其中,使膜浸没在培养基中,室温染色10分钟,取出,PBS清洗,风干。
(6)计数:直径上取6个视野,照相,计数。
结果见图2,可以看出稳定过表达lncRNA-DRIC的HCT116细胞的迁移能力比对照株的显著降低,说明lncRNA-DRIC有抑制结直肠癌细胞转移的功能。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA,是lncRNA-DRIC,其转录本序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种重组质粒,其特征在于:含有权利要求1所述的lncRNA-DRIC的序列,并且能在哺乳动物细胞中表达lncRNA-DRIC。
3.权利要求1所述的lncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的lncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用,其特征在于:所述的药物中含有权利要求1所述的lncRNA-DRIC的序列和/或含有权利要求2所述的重组质粒。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510304553.0A CN104830865B (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510304553.0A CN104830865B (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104830865A true CN104830865A (zh) | 2015-08-12 |
CN104830865B CN104830865B (zh) | 2018-06-26 |
Family
ID=53809065
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510304553.0A Active CN104830865B (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104830865B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106755293A (zh) * | 2016-09-23 | 2017-05-31 | 宁波大学 | 一种与肺癌辅助诊断相关的lncRNA标志物及其应用 |
CN107043823A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-08-15 | 郴州市第人民医院 | 一种结直肠癌相关的肿瘤标志物及应用 |
CN112795655A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-14 | 青岛市中心医院 | 一种结直肠癌诊断标志物及其诊断试剂盒 |
-
2015
- 2015-06-05 CN CN201510304553.0A patent/CN104830865B/zh active Active
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JULIA等: "Identification of novel tumor suppressor proteases by degradome profiling of colorectal carcinomas", 《ONCOTARGET》 * |
OSHIKAWA等: "NR_036580", 《NCBI:GENBANK:》 * |
古志强等: "结直肠癌中lincRNAs表达特征的初步研究", 《肿瘤》 * |
胡亮等: "Hsa-miR-9 在结直肠癌组织中的表达水平及意义", 《中国老年学杂志》 * |
苏丽娅等: "结直肠癌相关肿瘤标志物的研究进展", 《医学综述》 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106755293A (zh) * | 2016-09-23 | 2017-05-31 | 宁波大学 | 一种与肺癌辅助诊断相关的lncRNA标志物及其应用 |
CN106755293B (zh) * | 2016-09-23 | 2020-09-04 | 宁波大学 | 一种与肺癌辅助诊断相关的lncRNA标志物及其应用 |
CN107043823A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-08-15 | 郴州市第人民医院 | 一种结直肠癌相关的肿瘤标志物及应用 |
CN107043823B (zh) * | 2017-05-26 | 2020-05-12 | 郴州市第一人民医院 | 一种结直肠癌相关的肿瘤标志物及应用 |
CN112795655A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-14 | 青岛市中心医院 | 一种结直肠癌诊断标志物及其诊断试剂盒 |
CN112795655B (zh) * | 2021-02-08 | 2021-08-24 | 青岛市中心医院 | 一种结直肠癌诊断标志物及其诊断试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104830865B (zh) | 2018-06-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Xie et al. | LncRNA MALAT1 inhibits apoptosis and promotes invasion by antagonizing miR-125b in bladder cancer cells | |
CN102492657A (zh) | 以NF-κB为靶点的药物筛选细胞模型及其构建和应用 | |
CN104830865A (zh) | 长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用 | |
Mulder et al. | AAV8-mediated gene transfer of microRNA-132 improves beta cell function in mice fed a high-fat diet | |
CN111743912B (zh) | 一种用于制备促进结肠癌细胞凋亡和抑制结肠癌细胞迁移的基因抑制剂 | |
CN114432452A (zh) | RNA Hsa_circ_0063865抑制剂在制备抗食管鳞状细胞癌药物中的应用 | |
CN102558336B (zh) | Prr11基因及其编码的蛋白和应用 | |
CN105586391A (zh) | 人gtpbp4基因的用途及其相关药物 | |
CN106754950A (zh) | 一种调节肝再生的c9orf116基因及其siRNA干扰靶点和应用 | |
CN107523566B (zh) | 一种mcm3ap-as1基因的靶向抑制剂及其用途 | |
Li et al. | MiR-218 affects the invasion and metastasis of cervical cancer cells by inhibiting the expression of SFMBT1 and DCUNIDI | |
CN105624159B (zh) | 一种针对人EDIL3基因的siRNA及其应用 | |
CN103952410B (zh) | 一种有效抑制大鼠FoxO3a基因表达的shRNA及其应用 | |
CN101948544A (zh) | FAT10基因siRNA重组模拟病毒及其制备方法和应用 | |
CN102286435B (zh) | 调控性ciapin1基因重组腺病毒及其制备方法和应用 | |
CN112280859B (zh) | 一种乳腺癌标志物及应用 | |
CN106480098A (zh) | 靶向vegfa基因rna干扰重组慢病毒载体及其构建方法 | |
CN108949827A (zh) | 特异抑制肺癌PPARd基因表达的shRNA慢病毒表达载体及其构建方法与应用 | |
CN1896235B (zh) | 一种抑制骨桥蛋白表达的小分子rna药物及其表达系统 | |
CN109097399A (zh) | 长链非编码rna h19的表达载体、表达h19的细胞株及其应用 | |
CN104342440A (zh) | CDKL1基因及其siRNA和应用 | |
CN115813945B (zh) | Dhrsx抑制剂在制备脑胶质瘤药物中的应用 | |
CN104611334B (zh) | 一种用于抑制肿瘤细胞生长的基因表达元件及其应用 | |
CN113373151B (zh) | 环状RNAhsa_circ_0008399的应用 | |
CN114958855B (zh) | 一种促内皮细胞凋亡的siRNA及SIRT6低表达细胞系 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |