CN104825432A - 肉桂酸在制备治疗癌症的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了肉桂酸在制备治疗癌症的药物中的用途，其中，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。肉桂酸能够有效地促进恶性肿瘤细胞的凋亡，调整恶性肿瘤细胞的增殖周期，对恶性肿瘤细胞的增殖起到一定的抑制作用；并且，肉桂酸能够作用于STAT3的信号通路并显著地降低STAT3基因的表达，有效地抑制前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌、结直肠癌的恶性肿瘤在小鼠体内的生长。本发明有益于从细胞凋亡和组织细胞增殖周期的角度研发具有抗癌活性的新药，有益于探索与STAT3相关的各种恶性肿瘤的防治，并为各种恶性肿瘤的治疗提供新的思路。

Description

肉桂酸在制备治疗癌症的药物中的用途

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，更具体地讲，涉及肉桂酸在制备治疗前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌、前列腺癌或结直肠癌的药物中的用途。

背景技术

肉桂酸，又名β-苯丙烯酸或3-苯基-2-丙烯酸。是从肉桂皮或安息香中分离出的有机酸，其主要用于香精香料、食品添加剂、医药工业、美容、农药、有机合成等方面。

恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地危害着人类的健康，并已渐渐成为当今时代人类的第一杀手。不同的恶性肿瘤，其发生和进展的情况具有很大的差别，然而它们也具有共同的特点，那就是肿瘤的发生和发展很大程度上不仅是细胞增殖失控的结果，也是由于细胞凋亡的受阻，即细胞增殖与凋亡的失衡决定了肿瘤的生长速率。如何通过药物的干预，使癌症的恶性肿瘤细胞的增殖和凋亡趋于平衡，对于癌症的控制和治疗具有非常积极的意义。

细胞凋亡是指为了维持内环境的稳定，细胞所发生的由基因控制的自主、有序的死亡。恶性肿瘤细胞之所以可以无限的增殖，这是与其被抑制的凋亡系统具有一定的联系，因此，如何能够促进肿瘤细胞的凋亡是探索新的抗癌药物不断努力的方向。

细胞周期是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所历经的整个过程，由DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)、DNA合成后期(G2期)和有丝分裂期(M期)构成。G1期发展到一定程度时，细胞就进入S期，细胞内的DNA开始复制并形成两套完整的染色体组，之后进入有丝分裂期前的准备期。恶性肿瘤细胞的增殖与其细胞周期息息相关，寻找合适的阻滞剂并产生细胞阻滞使得恶性肿瘤细胞无法进入快速增殖的周期也显得至关重要。

STATs蛋白质家族由七种蛋白构成，STAT3是其中的一种。STAT3具有调节许多细胞和生长因子的功能并且其在许多不同类型的癌症中都表现出过度激活的状态。前期的研究已经证明，STAT3对于细胞增殖、分化、凋亡等多种生理功能均产生重要影响，并参与炎症性疾病、肿瘤的发生发展和免疫反应等多种病理生理功能的调控，故STAT3则被认为是一个潜在的肿瘤药物作用分子靶标。

现已经报道的肉桂酸有多种作用，但在治疗前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌、前列腺癌或结直肠癌等癌症方面还鲜有报道。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供了肉桂酸的一种新用途，具体为在制备治疗癌症的药物中的用途，其中，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。

作为可选方式，在上述用途中，所述药物能够促进前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤细胞凋亡。

作为可选方式，在上述用途中，所述药物能够调节前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤细胞的增殖周期。

作为可选方式，在上述用途中，所述药物能够作用于STAT3的信号通路并抑制STAT3基因的表达。

作为可选方式，在上述用途中，所述药物能够抑制前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤生长。

本发明还提供了一种治疗癌症的药物，所述药物的活性成分包括有效量的肉桂酸，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。

作为可选方式，所述药物是以肉桂酸为有效成分并加入一种或多种药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成。

作为可选方式，所述药物中每制剂单位含有肉桂酸1～1000mg。

作为可选方式，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用透皮给药制剂。

本发明还提供了一种肉桂酸与其他常用药物在制备治疗癌症的联合用药中的用途，其中，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。

其中，上述其他常用药物为抗肿瘤类药物(如5-氟尿嘧啶、多西他赛)。

联合用药是指为了达到治疗目的而采用的两种或两种以上药物同时或先后应用。在本发明中，将肉桂酸与常用的抗肿瘤药物(如5-氟尿嘧啶、多系他赛)联合使用，表现出比单独使用抗肿瘤药物更强的药效和更低的毒性，能够一定程度的提高恶性肿瘤细胞对其它抗肿瘤药物的敏感性。

本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。

本发明的有益效果：

本发明采用肉桂酸作为活性成分制成的药物，用于治疗前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌等癌症。肉桂酸能够有效地促进恶性肿瘤细胞(U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞和Raji细胞)的凋亡，调整恶性肿瘤细胞的增殖周期，对恶性肿瘤细胞的增殖起到一定的抑制作用；并且，肉桂酸能够作用于STAT3的信号通路并显著地降低STAT3基因的表达，有效地抑制前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌、结直肠癌的恶性肿瘤在小鼠体内的生长。本发明有益于从细胞凋亡和组织细胞增殖周期的角度研发具有抗癌活性的新药，有益于探索与STAT3相关的各种恶性肿瘤的防治，并为各种恶性肿瘤的治疗提供的可靠的思路。

附图说明

图1a、图1b、图1c、图1d分别示出了实施例3中U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞在分别给予不同药物后经过RT-PCR定量检测所得的STAT3基因的表达情况对比图。

图2a、图2b、图2c、图2d、图2e分别示出了实施例4中接种U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞的荷瘤小鼠在分别给予不同药物后多次测量异位瘤的肿瘤体积所绘制的瘤体积-时间曲线。

图3a、图3b、图3c、图3d分别示出了实施例6中接种U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞的荷瘤小鼠在分别给予不同药物后测定并计算得到的抑瘤率对比图。

具体实施方式

以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应当将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明的精神和原则之内做的任何修改，以及根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的等同替换或者改进，均应包括在本发明的保护范围内。

实施例1：肉桂酸对恶性肿瘤细胞凋亡的影响

1.实验材料与分组

1.1实验细胞

人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)和非霍奇金淋巴瘤细胞(Raji细胞，即非霍奇金淋巴癌的恶性肿瘤细胞)，按照各种细胞的特点进行常规培养。

1.2实验药品及设备

肉桂酸(阿拉丁)、Annexin-FITC/PI双染试剂盒(碧云天)、高速离心机、流式细胞仪等。

1.3实验分组和步骤

对于每一种恶性肿瘤细胞，均设置三个组，分别命名为肉桂酸组(CA组)、溶剂对照组(NC组)和空白对照组(B组)，将肉桂酸溶解于乙醇中，配制成一定浓度的肉桂酸溶液，待用。具体实验分组如表1所示：

表1 细胞实验的分组和给药浓度(每组均有3个孔，n＝3)

2.实验方法和实验结果

2.1具体的实验方法如下所述：

将恶性肿瘤细胞置于12孔板内进行常规培养；24h之后，将肉桂酸及对应的溶剂加至对应的细胞孔中，进行孵育；孵育结束后，加入完全培养基，继续培养72h；之后按照Annexin-FITC凋亡试剂盒来处理细胞；孔板内的培养基分别收集备用，在孔板内加入适量的0.25％胰酶消化细胞后，加入上述收集的细胞培养液，轻轻吹打下细胞后，在离心机上以1000g/min的速率离心5min，弃去上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数；取1×10⁵个重悬的细胞，在离心机上以1000g/min的速率离心5分钟，弃去上清后加入195μlAnnexin V-FITC结合液轻轻与细胞混合；加入5μl Annexin V-FITC，轻轻混匀，在室温下避光孵育10min；在离心机上以1000g/min的速率离心5min，加入190μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞；加入10μl碘化丙啶染色液，轻轻混匀，冰浴避光放置；分别设置FITC单染组和PI单染组，用于补偿的调节，此两组分别仅单染一种荧光染料；之后利用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期，分析结果。

2.2实验结果

利用Annexin-FITC/PI双染的方法，考察了肉桂酸对各种恶性肿瘤细胞凋亡的影响，实验数据如表2所示：在各种恶性肿瘤细胞中，与对照组相比，肉桂酸能显著地促进各种肿瘤细胞的凋亡。

表2 肉桂酸对各种恶性肿瘤细胞凋亡的影响(mean±SD，％)

3.实验结论

近年来的研究显示，恶性肿瘤的发展很大程度是因为恶性肿瘤细胞的增殖和凋亡之间的失衡所致，即由于恶性肿瘤细胞的增殖速度大于凋亡速度而最终导致恶性肿瘤细胞的无限增殖，因此有效地诱导恶性肿瘤细胞的凋亡对于恶性肿瘤的治疗将具有极大的意义。

本实施例采用体外细胞培养的方式，考察了肉桂酸对恶性肿瘤细胞(U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞和Raji细胞)的作用，并利用经典的Annexin-FITC/PI双染的方法检测了细胞凋亡实验的结果。实验结果表明，肉桂酸能够显著地诱导实验中的各种恶性肿瘤细胞的凋亡。

实施例2：肉桂酸对恶性肿瘤细胞增殖周期的影响

1.实验材料与分组

1.1实验细胞

人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)和非霍奇金淋巴瘤细胞(Raji细胞，即非霍奇金淋巴癌的恶性肿瘤细胞)，按照各种细胞的特点进行常规培养。

1.2实验药品及设备

肉桂酸(阿拉丁)、PI染料(碧云天)、70％乙醇、高速离心机、流式细胞仪等。

1.3实验分组和步骤

对于每一种恶性肿瘤细胞，均设置三个组，分别命名为肉桂酸组(CA组)、溶剂对照组(NC组)和空白对照组(B组)，将肉桂酸溶解于乙醇中，配制成一定浓度的肉桂酸溶液，待用。具体实验分组如表3所示：

表3 细胞实验的分组和给药浓度(每组均有3个孔，n＝3)

细胞种类

CA组

NC组

B组

	(浓度mg/L)
				U87MG细胞	3	等量溶剂	/
PC-3细胞	3	等量溶剂	/
				SKOV-3细胞	3	等量溶剂	/
HCCT-116细胞	3	等量溶剂	/
				Raji细胞	3	等量溶剂	/

2.实验方法和实验结果

2.1实验方法

将实验所需的各种恶性肿瘤细胞接种于12孔板内，培养24h后，弃去原培养基，加入一定浓度的肉桂酸，培养24h后收集各组细胞的上清液；收集细胞，合并细胞及上清液，于离心机上以3000g/min的速率离心5min，收集细胞并加入PBS缓冲液重悬各组细胞，再在离心机上以3000g/min的速率离心5min，收集细胞并向每组细胞中加入70％乙醇，吹打均匀后于-20℃下冻存过夜。之后，弃去乙醇，加入PBS缓冲液重悬细胞，在离心机上以3000g/min的速率离心5min，收集细胞沉淀并向每组细胞中加入80μM的PI染料，在室温下避光孵育15min。最后，向每组细胞中加入500mlPBS，终止反应，之后利用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期，分析结果。

2.2实验结果

利用流式细胞仪对肉桂酸作用后的各组细胞进行增殖周期的检测，实验结果如表4所示。

表4 肉桂酸对各种恶性肿瘤细胞的增殖周期的影响(mean±SD，％)

对于各组细胞而言，肉桂酸均能显著地增大细胞在G0/G1期的比例，从而阻滞细胞的增殖，实现调节试验中各种恶性肿瘤细胞的增殖周期的作用。

实施例3：肉桂酸对STAT3信号通路的作用

1.实验材料

1.1实验材料

人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)，按照各种细胞的特点进行常规培养。

1.2实验药品及设备

肉桂酸(阿拉丁)、AG490(Gene operation)、mRNA提取试剂盒(天根)、cDNA第一链合成试剂盒(天根)、PCR仪等。其中，本实施例采用α-氰基-(3，4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG490)作为阳性对照药物，考察肉桂酸对于STAT3信号通路的作用情况。其中，AG490是STAT3信号通路的特异性抑制剂。

1.3实验分组

对于每一种恶性肿瘤细胞，均设置3个组，分别命名为肉桂酸组(CA组)、空白对照组(B组)和阳性对照组(AG490组)，将肉桂酸和AG490分别溶解于乙醇溶液中，配制成一定浓度的药液，待用。具体实验分组如表5所示：

表5 细胞实验的分组和给药浓度(每组均有3个孔，n＝3)

2.实验方法和结果

2.1实验方法

按照每组3个复孔的标准将各种恶性肿瘤细胞接种于96孔板内培养，培养24h之后按照实验分组，分别加入对应浓度的对应药物，在无血清的条件下继续培养4h；之后弃去培养基，换用新鲜的完全培养基继续培养各组细胞48h后，按照以下步骤，对STAT3基因进行检测：

(1)恶性肿瘤细胞中总mRNA的提取

利用RNA prep Pure培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒(离心柱型)提取细胞内的总RNA，具体提取步骤简述如下：

1.向每份细胞样品中加入300μl的预先加有β-巯基乙醇的裂解液RL；

2.将所得液体在12,000rpm的条件下离心5min，小心吸取上清液使用；

3.向上清液中缓慢加入0.5倍体积的无水乙醇，混匀后转移至吸附柱CR3中并在12,000rpm的条件下离心1min，弃去废液，留吸附柱；

4.加入去蛋白液RW1至吸附柱中，去除蛋白，之后离心1min，弃去废液；

5.加入DNase I工作液，去除柱体上的DNA；

6.用去蛋白液和漂洗液分别清洗吸附柱后，将吸附柱放于收集管中，充分挥干上面的残留液体；

7.向吸附柱中加入60μlRNase free ddH2O，放置2min后，在12,000rpm的条件下离心2min，即得mRNA样品；

(2)mRNA的逆转录

利用cDNA第一链合成试剂盒和上述提取得到的RNA溶液合成对应的第一链cDNA。具体逆转录过程按照说明书操作进行即可。

(3)RT-PCR定量检测

由于EvaGreen荧光染料与双链的DNA结合会产生很强的荧光，通过检测最终的荧光强度可以得到反应生成DNA的总量。即，在试管中加入荧光染料、第(1)和(2)步中所合成的cDNA产物、STAT3引物混合均匀后进行RT-PCR检测。每个样品均设β-actin引物组为相对值，进行相对定量。

2.2实验结果

经过RT-PCR定量检测之后，各种细胞的STAT3基因的表达情况如图1a、图1b、图1c、图1d所示。

其中，在人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞)和人源前列腺癌细胞(PC-3细胞)的实验组中，与空白对照组相比，肉桂酸能够有效地抑制STAT3基因的表达，并且肉桂酸的抑制STAT3基因的效果与阳性对照药物AG490比较相当，二者之间没有显著性差异(p>0.05)。而在人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞)和人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞)的实验组中，肉桂酸也能一定程度地抑制STAT3基因的表达，但抑制效果与AG490相比，两组均尚有显著性差异(p＜0.05)。根据本实施例可见，在不同的细胞株中，肉桂酸对于STAT3基因均有一定程度的抑制作用，且在某些特定的细胞株(如U87MG细胞和PC-3细胞)中，这种抑制作用非常强烈，与选择性的STAT3抑制剂AG490的抑制效果相当。

2.3实验结论

本实施例利用RT-PCR的方法，以U87MG、SKOV-3、HCCT-116和PC-3细胞作为模型细胞，考察了肉桂酸对于STAT3信号通路的调节作用。结果显示，肉桂酸能够显著地在基因层面抑制STAT3表达并抑制STAT3的信号通路，这一实验结果为与STAT3相关的肿瘤问题提供了新的思路。

实施例4：肉桂酸的体内抗恶性肿瘤药效学考察

1.实验动物和器材

1.1实验动物和材料

2周龄的裸鼠90只；人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)和非霍奇金淋巴瘤细胞(Raji细胞，即非霍奇金淋巴癌的恶性肿瘤细胞)，按照各个细胞的特点进行常规培养。

1.2实验器材

2mL注射器、游标卡尺、生理盐水等。

2.实验建模与方法

本实验采用接种异位瘤的方式，建立各种恶性肿瘤细胞的裸鼠荷瘤模型，同时采用阳性药物紫杉醇(PTX)作为对照，考察肉桂酸对于各种小鼠体内异位瘤的抑制情况。

具体地，将各种恶性肿瘤细胞稀释至浓度为5×10⁶个/L并将其分别接种于裸鼠的腋下，并将每种恶性肿瘤细胞的荷瘤小鼠进行随机分组，每组3只小鼠，分别为肉桂酸组(CA组)、空白对照组(B组)和阳性对照组(PTX组)，按照表6进行腹腔注射给药。

表6 接种各种恶性肿瘤细胞的荷瘤小鼠的分组和给药情况(n＝3)

细胞种类	CA组(mg/kg)	B组	PTX组(mg/kg)
				U87MG细胞	40	等量生理盐水	10
PC-3细胞	50	等量生理盐水	10
				SKOV-3细胞	50	等量生理盐水	10
HCCT-116细胞	50	等量生理盐水	10
				Raji细胞	50	等量生理盐水	10

以接种当天作为第0天，于接种第一天对每组的三只小鼠分别腹腔注射对应浓度的肉桂酸、生理盐水和紫杉醇，连续给药30天，并在实验的第7天、第14天、第21天和第28天对各组小鼠的异位瘤进行测量，并按照瘤体积的测定公式：V＝(L×W²)/2(V：肿瘤体积；L：肿瘤长径；W：肿瘤短径)计算荷瘤小鼠的肿瘤体积，之后绘制小鼠的瘤体积-时间曲线。

3.实验结果

3.1各组小鼠异位瘤的生长曲线

于给药的第7天、第14天、第21天和第28天对小鼠的异位瘤体积进行测定并绘制的小鼠的瘤体积-时间变化曲线如图2a、图2b、图2c、图2d和图2e所示。

3.2实验结论

在本实施例中，采用小鼠异位瘤的体内建模方法，考察了肉桂酸的体内抗肿瘤药效。

实验结果表明，在各组恶性肿瘤细胞构建的荷瘤小鼠模型中，与对照组相比，肉桂酸能有效地延缓肿瘤的生长，其肿瘤的生长曲线相对于注射生理盐水的对照组的生长曲线得到了显著的抑制。

实施例5：肉桂酸与常用抗肿瘤药物联合使用对恶性肿瘤细胞敏感性影响的考察

1.实验材料

1.1实验材料

人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)和非霍奇金淋巴瘤细胞(Raji细胞，即非霍奇金淋巴癌的恶性肿瘤细胞)，按照各个细胞的特点进行常规培养。

1.2实验药品及设备

CCK-8试剂盒(Dojindo Molecular Technologies)、RPMI-1640(Gibco)、96孔细胞培养板、紫杉醇(PTX，江苏恒瑞)、5-FU(5-氟尿嘧啶，杭州赛诺菲安万特民生制药)、酶标仪(Bio-Rad)、CO₂恒温培养箱等。

2.实验方法和结果

2.1实验方法

本实施例采用经典的CCK-8试验法，对不同给药组相对于不同恶性肿瘤细胞株的敏感性进行考察。

将肉桂酸、5-FU和PTX分别配制成一定浓度梯度的药液，待用；具体的分组和药物浓度如表7所示，取对数期生长的U87MG细胞、PC-3细胞、SKOV-3细胞、HCCT-116细胞和Raji细胞均按照6000个/孔的密度接种于96孔板中，常规培养24h；待各组细胞均贴壁后，按照表7的实验分组，按照PTX单用组、5-FU单用组、PTX+CA联用组和5-FU+CA联用组分别进行给药。将各组药液加入到96孔板内并作用72h，每个组设置3个复孔；72h后弃去96孔板中的培养基，每孔加入100Μlcck-8测定液，以仅含CK-8测定液的无细胞孔为空白调零孔；于37℃下避光孵育0.5～4h，分别于0.5h、1h、2h、3h和4h在酶标仪上测定吸收值，测定波长为450nm且参比波长为630nm；将得到的吸收值绘制对应的药物浓度—细胞增殖曲线，得到每组细胞在不同药物作用下的IC₅₀。

实施例中所用的药物的100％测试药物浓度为按国人药物常规用量，在药物的药代动力学指导下测出的血液最高药物浓度值(PPC)，其中5-FU为189.935μmol/L，PTX为11.875μmol/L。其中，按照敏感指数＝IC₅₀/PPC的公式，计算不同给药组在不同细胞株上的敏感性。

表7 不同细胞株对应的不同药物组合

2.2实验结果

通过各组用药后药物的增殖情况曲线图计算各组药物对不同细胞株的IC₅₀值，再由公式：敏感指数＝IC₅₀/PPC得到各组药物对于不同恶性肿瘤细胞株的敏感指数，实验结果如表8所示。

单独使用紫杉醇(PTX)和联合使用紫杉醇和肉桂酸(PTX+CA)时相比，联合用药能够增加各恶性肿瘤细胞株对于紫杉醇(PTX)的敏感性，其中U89MG细胞、SKOV-3细胞和HCCT-116细胞对于紫杉醇的敏感度在各细胞株中表现出较高的增强程度。而单独使用5-FU和联合使用5-FU+CA相比，联合用药也增加了恶性肿瘤细胞株对于5-FU的敏感性，其中PC-3细胞、HCCT-116细胞对5-FU的敏感性在联合给药组中有了显著的增强。实验结果还显示，肉桂酸联合其它抗肿瘤药物使用能够一定程度的增加恶性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

表8 不同给药组对应各肿瘤细胞株的敏感指数

在U87MG细胞、SKOV-3细胞和HCCT-116细胞中，紫杉醇(PTX)与肉桂酸(CA)联合使用，在各种细胞中的敏感指数有了较大提高，其分别与单独使用PTX相比，均具有显著性差异*：p<0.05；在PC-3细胞和HCCT-116细胞中，5-FU与肉桂酸(CA)联合使用，在各种细胞中的敏感指数也有了一定程度的提高，其分别与单独使用5-FU相比，均具有显著性差异#：p<0.05。

实施例6：肉桂酸与常用抗肿瘤药物联合使用对荷瘤小鼠体内的药效学考察

1.实验动物和器材

1.1实验动物和材料

2周龄的裸鼠90只；人源恶性胶质母细胞(U87MG细胞，即胶质母细胞癌的恶性肿瘤细胞)、人源前列腺癌细胞(PC-3细胞，即前列腺癌的恶性肿瘤细胞)、人源卵巢癌细胞(SKOV-3细胞，即卵巢癌的恶性肿瘤细胞)、人源结直肠癌细胞(HCCT-116细胞，即结直肠癌的恶性肿瘤细胞)，按照各种细胞的特点进行常规培养。

1.2实验器材

2mL注射器、电子天平、生理盐水等。

2.实验建模与方法

本实验采用接种异位瘤的方式，建立各种恶性肿瘤细胞的裸鼠荷瘤模型，分别采用单独使用5-氟尿嘧啶以及肉桂酸与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合给药的方式对各种小鼠体内异位瘤进行治疗，具体给药方案和分组如表9所示。

具体地，将各种恶性肿瘤细胞稀释至浓度为5×10⁶个/L并将其分别接种于裸鼠的腋下，并将每种恶性肿瘤细胞的荷瘤小鼠进行随机分组，每组3只小鼠，分别为5氟尿嘧啶组(5-FU组)、空白对照组(B组)和联合给药组(5-FU+CA组)，按照表9进行灌胃给药。

表9 接种各种恶性肿瘤细胞的荷瘤小鼠的分组和给药情况(n＝3)

以接种当天作为第0天，于接种第一天对每组的三只小鼠分别灌胃给予对应浓度的药物或生理盐水，连续给药30天后将各组小鼠处死，用电子天平对各组小鼠的瘤块进行称重，按照公式抑瘤率％＝(1-实验组瘤块重量/对照组瘤块重量)×100％来计算各组药物的抑瘤率。

3.实验结果

对不同给药组的荷瘤小鼠测定抑瘤率后的实验结果如图3a、图3b、图3c、图3d所示，其中，B组数据未在图中示出，因为其是作为参比使用的，根据B组数据得到的值在计算时已经利用，而B组数据本身的计算值为0。

与单独使用5-FU相比，肉桂酸联合给药对各恶性肿瘤细胞株构建的小鼠异位瘤有更强的抑制作用，联合给药的各组小鼠抑瘤率均分别高于5-FU单独给药组，即肉桂酸能够与其它抗癌药物联合使用并达到增效的作用；其中，在PC-3细胞和HCCT-116细胞构建的小鼠异位瘤的动物模型里，肉桂酸与5-FU联合使用的小鼠抑瘤率与单独使用5-FU的抑瘤率相比，均具有显著性差异(p<0.05)。此外，实验终点还发现，联合给药组的小鼠生活状态明显优于单独给药组的小鼠，这提示肉桂酸联合给药后，在增强化疗药物疗效的同时，减轻了化疗药带来的毒副作用。

其中，以上实施例1-6的数据处理具体为：连续型变量形式的实验数据以表示，2组数据间的比较用两样本t检验。采用SPSS13.0统计软件，P<0.05代表具有统计学意义。

实施例7：肉桂酸散剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸1000g，无菌分装成含肉桂酸1000mg/瓶或1000mg/袋的散剂。

实施例8：肉桂酸口服丸剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸1g，加50g淀粉、10g羟丙纤维素并混合均匀；之后加如聚维酮K30乙醇溶液，制粒、加糖浆包衣，制成含肉桂酸1mg/粒丸剂。

实施例9：肉桂酸口服液的制备

合成的肉桂酸。取肉桂酸200g，加亚硫酸氢钠10g，溶解于适量注射用水中，过滤后无菌灌装成含绿原酸200mg/瓶的口服液。

实施例10：肉桂酸片剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸100g，加淀粉100g、糊精200g并混合均匀；之后加聚维酮K30水溶液制粒、干燥、整粒后加硬脂酸镁混合均匀，压片成含肉桂酸100mg/片的片剂。

实施例11：肉桂酸胶囊剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸50g，加淀粉100g并混合均匀；利用80％乙醇溶液制粒、干燥，然后填装胶囊成含肉桂酸50mg/粒的胶囊剂。

实施例12：肉桂酸冲剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸600g、甘露醇200g、乳糖200g并混合均匀；然后加聚维酮K30溶液制粒、干燥、整粒，装成含肉桂酸600mg/袋的冲剂。

实施例13：肉桂酸冻干粉针剂的制备

肉桂酸由肉桂皮中提取、纯化得到。取肉桂酸60g、甘露醇80g、亚硫酸氢钠5g，完全溶解于注射用水，过滤并灌装冻干成含肉桂酸60mg/支的冻干粉针剂。

尽管上面已经结合示例性实施例描述了本发明的肉桂酸在制备治疗前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌、前列腺癌或结直肠癌的药物中的用途，但是本领域普通技术人员应该清楚，在不脱离权利要求的精神和范围的情况下，可以对上述实施例进行各种修改和变化。

Claims (10)

1.肉桂酸在制备治疗癌症的药物中的用途，其中，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物能够促进前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤细胞凋亡。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物能够调节前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤细胞的增殖周期。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物能够作用于STAT3的信号通路并抑制STAT3基因的表达。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物能够抑制前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌的恶性肿瘤生长。

6.一种治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括有效量的肉桂酸，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物是以肉桂酸为有效成分并加入一种或多种药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成。

8.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物中每制剂单位含有肉桂酸1～1000mg。

9.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用透皮给药制剂。

10.肉桂酸与其他常用药物在制备治疗癌症的联合用药中的用途，其中，所述癌症为前列腺癌、非霍奇金淋巴癌、胶质母细胞癌、卵巢癌或结直肠癌。