CN104818250B - 比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 - Google Patents
比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104818250B CN104818250B CN201510228510.9A CN201510228510A CN104818250B CN 104818250 B CN104818250 B CN 104818250B CN 201510228510 A CN201510228510 A CN 201510228510A CN 104818250 B CN104818250 B CN 104818250B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- bisacody
- central memory
- vitro
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 8
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 7
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 2
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- KHOITXIGCFIULA-UHFFFAOYSA-N Alophen Chemical compound C1=CC(OC(=O)C)=CC=C1C(C=1N=CC=CC=1)C1=CC=C(OC(C)=O)C=C1 KHOITXIGCFIULA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000503 bisacodyl Drugs 0.000 description 1
- 239000000799 cathartic agent Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000002052 colonoscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002650 habitual effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002310 reflectometry Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了比沙可啶对中央记忆性T细胞在体外扩增上的应用，所述比沙可啶的浓度为5~40uM，最适浓度为20uM，所述中央记忆性T细胞为CD4+ T细胞。本发明中首次公开了比沙可啶在体外T细胞培养中的应用，方法安全有效，成本低廉，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持。
Description
技术领域
本发明属于中央记忆性T细胞体外扩增技术领域，更具体地，涉及比沙可啶对中央记忆性T细胞体外扩增中的应用。
背景技术
比沙可啶（英语：BISACODYL），是一种临床上通常用于缓解便秘，神经源性肠道功能障碍的管理以及诸如结肠镜检查等医学检查前的肠道清洁。比沙可啶刺激大肠神经末梢，引起肠反射性蠕动增加而导致排便。它也是一种接触性泻药，可抑制结肠内钠、氯及水分的吸收，使肠内容积增大，引起反射性排便。比沙可啶对小肠的作用可忽略不计；刺激性泻药主要作用于大肠。
由于T细胞在免疫系统中起着重要的作用，越来越多的研究小组尝试运用T细胞的过继治疗的方式来进行肿瘤治疗。中央记忆性T细胞（TCM）具有自我更新的能力，而且应答时间短，作用时间长，对人体的副作用小。今年来，多个研究组报道，发现具有记忆功能的T细胞回输肿瘤患者体内以后，治疗效果明显并且持续治疗时间长，可以减少患者的痛苦以及降低细胞体外培养次数过多的生物安全风险。但是在人体内相对数量较少，且由于体外长时间培养的T细胞会使T细胞失去活力，绝大部分细胞分化为终末分化的效应细胞，使得回输体内的T细胞存活时间过短，无法产生持续的杀伤肿瘤细胞的功能，因此如何在体外获得大量的记忆性T细胞是细胞免疫治疗的一个新的研究热点。
目前，国外的许多研究小组通过构建人工抗原提呈细胞，将其应用于T细胞的体外培养，提高T细胞的存活时间，用于过继免疫治疗，但要获得足够量的T细胞，技术要求复杂，培养的成功率较低。在进行T细胞治疗时，主要策略是先通过克隆扩增，得到足够量的具有杀伤功能的T细胞，可以与DC等提呈细胞共培养，也可以直接用相关肿瘤抗原刺激细胞克隆扩增，得到具有特定肿瘤抗原特异性的T细胞。此种办法培养得到的T细胞未经过任何转基因修饰，安全性较高。但这种肿瘤高反应性的细胞需要扩增至临床需要的109-1011治疗剂量的数量数，过程持续时间比较长，对于肿瘤患者来说时间也是一个需要更多考虑的因素。而且体外培养的时间长，细胞容易变老，活力下降，多为终末分化的细胞，在体外有较好的效果，但是在体内存活时间较短，治疗效果受影响。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有中央记忆性T细胞体外扩增技术的不足，提供比沙可啶对中央记忆性T细胞体外扩增中的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了比沙可啶对中央记忆性T细胞在体外扩增上的应用。
优选地，所述比沙可啶的浓度为5~40uM。
更优选地，所述比沙可啶的浓度为20uM。
优选地，所述中央记忆性T细胞为CD4+ T细胞。
优选地，所述中央记忆性T细胞的提取方法是先将外周成分血与含2% BSA和0.5%EDTA的PBS按1:4混合均匀；然后将稀释后的血液缓慢加入淋巴细胞分离液的上方，二者的比例为1:1；离心300×g 30 min；小心吸取单核细胞，置入另一离心管中，加入5倍体积的含0.5% BSA和2% EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 15 min；重复上一步骤一次；孵育CD4+ T细胞阴选一抗，15 min；用10倍体积的含0.5% BSA和2% EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 12 min；孵育带有磁珠的二抗，30 min；过柱进行细胞分选，得到CD4+ T细胞。
优选地，所述中央记忆性T细胞的培养方法是在5% CO2、饱和湿度及37oC条件下将5×105个/孔的CD4+ T细胞置于1 mL含10%胎牛血清的RPMI1640中培养。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
本发明首次公开了比沙可啶在体外T细胞培养中的应用，方法安全有效，成本低廉，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持。
附图说明
图1为比沙可啶浓度为20uM时对CD4+ T细胞中CD4+ TCM所占比例的检测。
图2为不同浓度的比沙可啶对中央记忆性CD4+ T细胞的比例扩增效果。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1
1、试验材料准备
人的外周成分血由广州市血液中心提供，试验中随机选取了24份正常人的血液样本。
主要试剂：胎牛血清购自于GIBCO公司；RPMI1640培养基购自于INVERTROGEN公司；比沙可啶购自于INVERTROGEN公司；流式细胞仪检测抗体anti-CD45RA-Texas Red、anti-CCR7-AF700\ anti-CD62L-PE-cy7购自于BD公司；淋巴细胞分离液购自于天津灏阳生物制品有限责任公司；CD4+ T细胞阴性选择磁珠购自于BD公司。
主要的实验仪器：台式高速离心机（Eppendorf Centrifuge 5810R）、流式细胞仪（Beckman Coulter公司）、CO2细胞培养箱（Thermo SCIENTIFIC）、生物安全柜（ThermoSCIENTIFIC）、倒置生物显微镜（Leica）、磁珠分选磁力架（BD Pharmigen）。
细胞培养
2.1细胞提取分离
将外周成分血与PBS缓冲液（含2% BSA、0.5% EDTA）按1:4混合均匀；然后将稀释后的血液缓慢加入淋巴细胞分离液的上方，二者的比例为1:1；离心300×g 30 min；小心吸取单核细胞，置入另一离心管中，加入5倍体积的PBS（含0.5% BSA、2% EDTA）稀释，混合均匀后，300×g 15 min；重复上一步骤一次；孵育CD4+ T细胞阴选一抗，15 min；10倍体积的PBS（含0.5% BSA、2% EDTA）稀释，混合均匀后，300×g 12 min；孵育带有磁珠的二抗，30 min；过柱进行细胞分选，得到CD4+ T细胞，加入含10%胎牛血清的RPMI1640重悬细胞，计数细胞后调整细胞至所需浓度。
2.2培养条件
在5% CO2、饱和湿度及37oC下，将5×105个/孔的CD4+ T细胞置于1 mL含10%胎牛血清的RPMI1640中培养。
细胞铺板及加药处理
3.1铺板
将分选出来的CD4+T细胞铺在12孔板中，按照实验设计，每孔预期的细胞数为5×105。
3.2加药处理
对铺板后的CD4+T细胞进行5种不同的处理，每种处理设置三个复孔作为平行对照，并在细胞培养的第4天，第7天，第10天，第13天施加相应刺激。
细胞亚群分析及细胞数量的检测
细胞培养15 天后，分别吸取不同供体（n=24）的培养孔中的细胞，用细胞计数仪进行计数；从相对应的培养孔中吸取5×105个细胞、300×g 15 min，用PBS洗涤细胞两次，孵育检测CD4+ TCM的流式抗体（CD45RA、CCR7、CD62L）半个小时；洗掉流式抗体，加入PBS稀释到相应浓度，运用流式细胞仪检测。对照组与实验组均为同一供体的CD4+ T 细胞，每个时间点分别取不同供体的细胞进行检测。
统计学软件及统计方法
采用SPSS13.0分析软件进行统计学分析。计量资料所有结果均用均数±标准差表示。实验组与对照组比较采用t检验，P<0.01为有显著性差异。
实验结果
6.1 比沙可啶对CD4+TCM在CD4+T细胞中所占比例的流式检测
为了确定加入比沙可啶刺激的CD4+ T细胞中TCM的起始比例，将CD4+ T cells以5×106个/孔铺于24孔板中，加入anti-CD3抗体、anti-CD28抗体、IL-7以及IL-15。对照组和实验组在15 d时使用流式抗体标记细胞，然后将样本通过流式细胞仪进行检测。从CD45RA阴性的细胞中，选取CD62L与CCR7双阳性的细胞为所要观察的CD4+ TCM。按照上述通过流式细胞仪分选CD4+ TCM的方法，对CD4+ TCM在CD4+ T细胞中的比例进行检测，如图1所示。
6.2 不同浓度的比沙可啶对于CD4+ T细胞扩增效果的检测
选取比沙可啶处理第15天的时间点进行检测，不加入比沙可啶的对照组的CD4+TCM细胞占总CD4+ T细胞的比例为 16.06%；比沙可啶浓度为5uM比例为28.09%；比沙可啶浓度为10uM的比例为29.20%；比沙可啶浓度为20uM的比例为33.49%；比沙可啶浓度为40uM的比例为34.76%。实验结果表明，不同浓度的比沙可啶对于CD4+ T细胞的扩增作用在低于20uM的情况下存在剂量依赖的趋势，如图2所示。
结果分析
我们首次利用小分子药物比沙可啶促进CD4+ TCM细胞在体外的扩增。实验组较对照组相比CD4+ TCM细胞的比例在CD4+ T细胞中有显著的抬高。
T细胞的免疫过继治疗当中，如果大量的过继转移T细胞会产生过激反应，在实验过程中，我们找到了在T细胞总数不变的情况下，将大量的初始T细胞转化为CD4+ TCM细胞的方法。实验中我们也进一步找出了比沙可啶可促进CD4+ TCM在体外扩增的最适浓度：20uM。我们发现，使用较低剂量的比沙可啶处理细胞后，CD4+ TCM细胞在CD4+ T细胞中的比例上抬存在显著的剂量依赖趋势；而当比沙可啶的浓度达到20uM时，比例上抬效果明显趋于平缓（图2），这可能是由于药物浓度过大使得细胞的生长环境发生了较大的改变而影响了细胞的正常生长。在本实验中，选取比沙可啶处理细胞的15天以后进行计数和检测是由于在外周血中CD4+ TCM的起始数量非常少，CD4+ T细胞需要较长的时间才能在anti-CD3与anti-CD28共同刺激下逐渐形成较多的CD4+ TCM。实验结果也表明选择培养较长时间后方进行检测可获得更好的效果（图2）。
比沙可啶作为一种临床上常用于治疗急、慢性便秘和习惯性便秘。本发明中首次阐述了比沙可啶在体外T细胞培养中全新的应用，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持，其分子机制有待后续的进一步研究。
Claims (5)
1.比沙可啶对中央记忆性T细胞在体外扩增上的应用，所述中央记忆性T细胞为CD4+ T细胞。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述比沙可啶的浓度为5~40μM。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述比沙可啶的浓度为20μM。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中央记忆性T细胞的提取方法是先将外周成分血与含2% BSA和0.5% EDTA的PBS按1:4混合均匀；然后将稀释后的血液缓慢加入淋巴细胞分离液的上方，二者的比例为1:1；离心300×g 30 min；小心吸取单核细胞，置入另一离心管中，加入5倍体积的含0.5% BSA和2% EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 15min；重复上一步骤一次；孵育CD4+ T细胞阴选一抗，15 min；用10倍体积的含0.5% BSA和2%EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 12 min；孵育带有磁珠的二抗，30 min；过柱进行细胞分选，得到CD4+ T细胞。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中央记忆性T细胞的培养方法是在5%CO2、饱和湿度及37oC条件下将5×105个/孔的CD4+ T细胞置于1 mL含10%胎牛血清的RPMI1640中培养。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510228510.9A CN104818250B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510228510.9A CN104818250B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104818250A CN104818250A (zh) | 2015-08-05 |
| CN104818250B true CN104818250B (zh) | 2017-09-19 |
Family
ID=53728731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510228510.9A Expired - Fee Related CN104818250B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104818250B (zh) |
-
2015
- 2015-05-07 CN CN201510228510.9A patent/CN104818250B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Alterations in the colonic flora and intestinal permeability and evidence of immune activation in chronic constipation;I.L. Khalif et al.;《Digestive and Liver Disease》;20051231;第37卷;全文 * |
| 比沙可啶合成工艺研究;张奕华 等;《中国药师》;19991231;第2卷(第1期);全文 * |
| 比沙可啶的合成;李锦玉 等;《中国医药工业杂质》;19931231;第24卷(第2期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104818250A (zh) | 2015-08-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wilson | Quantitative studies on the mixed lymphocyte interaction in rats: I. Conditions and parameters of response | |
| CN105087487B (zh) | 一种高效扩增cik的方法 | |
| CN104894065B (zh) | 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法 | |
| CN107083360A (zh) | 一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性t细胞的方法 | |
| Sinsimer et al. | Mycobacterium leprae actively modulates the cytokine response in naive human monocytes | |
| Barrie et al. | Prostaglandin E2 and IL‐23 plus IL‐1β Differentially Regulate the Th1/Th17 Immune Response of Human CD161+ CD4+ Memory T Cells | |
| CN106399243A (zh) | 一种干细胞样记忆性t细胞体外诱导剂及方法 | |
| CN107475192A (zh) | 一种以记忆干t细胞为主要成分的淋巴细胞群及其体外高效扩增方法 | |
| CN108060129A (zh) | 调节性t细胞体外扩增方法 | |
| CN106661551A (zh) | 由淋巴细胞产生多谱系潜能细胞的方法 | |
| US20210032594A1 (en) | Exosome active formulation for inhibiting endothelial cell migration, and preparation method and application | |
| González‐Alvarado et al. | Oligodendrocytes regulate the adhesion molecule ICAM‐1 in neuroinflammation | |
| CN106103701A (zh) | 改造的自然杀手细胞及其组成与用途 | |
| CN104357393B (zh) | 一种鸡肠道上皮γδT细胞的分离培养方法 | |
| CN109749999A (zh) | 肿瘤体外培养方法及临床化疗药物筛选方法 | |
| CN106668034A (zh) | L‑岩藻糖在治疗消化道病变的药品和保健品中应用 | |
| CN101914497B (zh) | 临床用n-cik细胞培养、质量控制鉴定试剂盒及应用 | |
| CN106479973B (zh) | 一种体外iak免疫细胞培养方法 | |
| CN102925411A (zh) | 维生素c对效应记忆性t细胞的数量在体外扩增上的应用 | |
| CN104818250B (zh) | 比沙可啶对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 | |
| CN104830767B (zh) | 头孢尼西钠对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 | |
| CN107119015B (zh) | 外泌体、其制备方法及其在制备治疗肺癌的药物中的应用 | |
| CN113795573A (zh) | 培养同种异体免疫细胞的方法、用该方法获得的免疫细胞培养物和包含其的免疫细胞治疗剂 | |
| CN104830770B (zh) | 氨苄西林对中央记忆性t细胞体外扩增中的应用 | |
| CN116574679A (zh) | 特异性nk细胞的制备方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170919 |