CN104808003A - 肺结核疗效评价试剂盒及其应用 - Google Patents

肺结核疗效评价试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104808003A
CN104808003A CN201510218954.4A CN201510218954A CN104808003A CN 104808003 A CN104808003 A CN 104808003A CN 201510218954 A CN201510218954 A CN 201510218954A CN 104808003 A CN104808003 A CN 104808003A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
pulmonary tuberculosis
fcn2
arhgdib
apoa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510218954.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104808003B (zh
Inventor
李继承
王冲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201510218954.4A priority Critical patent/CN104808003B/zh
Publication of CN104808003A publication Critical patent/CN104808003A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104808003B publication Critical patent/CN104808003B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种肺结核疗效评价试剂盒，包括五种酶标板、蛋白标准品组合物，生物素标记抗体组合物；其中所述酶标板分别包被有抗ALB抗体、抗APOA抗体、抗C3抗体、抗ARHGDIB抗体、抗FCN2抗体五种酶标板；所述蛋白标准品组合物包括ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品；所述生物素标记抗体组合物包括所述生物素标记的抗ALB抗体、生物素标记的抗APOA抗体、生物素标记的抗ARHGDIB抗体、生物素标记的抗C3抗体和生物素标记的抗FCN2抗体。该肺结核疗效评价试剂盒可以高效、准确的评价肺结核病患者的治疗效果。

Description

肺结核疗效评价试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及疾病疗效评价领域，特别是指一种肺结核疗效评价试剂盒及其应用。
背景技术
肺结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性肺部感染性疾病，其感染率及病死率较高。目前我国尚无无明确的肺结核病疗效评价指标，容易过度治疗，造成患者毒副反应增加，并经济负担加重，医药资源浪费等。因此，迫切需要研究肺结核病疗效评价的特异生物标志物，从而缓解肺结核病给个人、家庭、社会带来的负担。
目前，对肺结核病的疗效评价主要通过临床医生的经验判断和痰培养实验结果鉴别肺结核病患者是否治愈。然而通过患者精神状态、胸部X片/CT影像学改变等临床判断方法主观性太强，容易误诊；痰培养检查又耗时太长，需要4-8周，分辨功效差，特异性仅为57.8％。因此，现在亟需发现一种非培养、高效、定量的评价肺结核病治疗效果的新方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提出一种肺结核疗效评价试剂盒，可以高效、准确的评价肺结核病患者的治疗效果。
基于上述目的本发明提供的肺结核疗效评价试剂盒，包括酶标板、蛋白标准品组合物，生物素标记抗体组合物；其中所述酶标板分别包被有抗ALB抗体、抗APOA抗体、抗C3抗体、抗ARHGDIB抗体、抗FCN2抗体的五种酶标板；所述蛋白标准品组合物包括ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品；所述生物素标记抗体组合物包括所述生物素标记的抗ALB抗体、生物素标记的抗APOA抗体、生物素标记的抗ARHGDIB抗体、生物素标记的抗C3抗体和生物素标记的抗FCN2抗体。
较佳的，所述ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品浓度分别为80-120μg/mL，40-60ng/mL，1000-1800pg/mL，25-35μg/mL，12-20ng/mL。
较佳的，所述肺结核疗效评价试剂盒还包括辣根过氧化物酶标记亲和素，稀释液，洗涤液，底物溶液，终止液，酶标板贴纸。
较佳的，所述稀释液是含有8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.15-1.8g/LNa2HPO4·2H2O或2.71g/L Na2HPO4·7H2O或3.58g/L Na2HPO4·12H2O、0.2-0.24g/L KH2PO4的水溶液；
所述洗涤液是含有8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.15-1.8g/L Na2HPO4·2H2O或2.71g/L Na2HPO4·7H2O或3.58g/L Na2HPO4·12H2O、0.2-0.24g/L KH2PO4、0.5-1mL/L的吐温20的水溶液；
所述底物溶液是含有体积比0.8-1.2％的3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液；
所述终止液是1.5-3mol/L的H2SO4水溶液。
基于相同的发明构思，本发明还提供一种所述肺结核疗效评价试剂盒的应用，具体是指将所述肺结核疗效评价试剂盒用于评估肺结核病患者治疗效果的评价。
较佳的，所述肺结核疗效评价试剂盒的应用包括以下步骤：
(1)采集外周血、离心、吸上清；
(2)将步骤(1)所得上清用所述稀释液稀释，分别加入所述五种酶标板，孵育；
(3)拍干酶标板，分别加入稀释的生物素标记抗体，孵育，用所述洗涤液洗涤；
(4)加入稀释的辣根过氧化物酶标记亲和素，孵育后用所述洗涤液洗涤；
(5)各反应孔中加入新配制的TMB底物溶液，避光孵育；
(6)各反应孔中加入终止液终止反应，在ELISA检测仪上检测各孔OD值；
(7)计算各样本蛋白浓度，带入Logistic逐步模型的回归方程，经计算后评价肺结核病治疗效果。
较佳的，所述Logistic逐步模型的回归方程为：
Logit(p)＝-0.1617+0.04934×(ALB蛋白浓度)+0.003786×(APOA蛋白浓度)-0.0189×(ARHGDIB蛋白浓度)-0.001431×(C3蛋白浓度)-0.06697(FCN2蛋白浓度)
获得Logit(p)值，通过P＝exp[Logit(p)]/(1+exp[Logit(p)])换算得到P值，以0.5为界，判定肺结核病治疗效果。
本肺结核疗效评价试剂盒的原理为：
采用ELISA方法检测血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3、FCN2五种蛋白表达水平：其中，
白蛋白(ALB,Albumin,SwissProt:P02768)可以运输激素、脂肪酸、其它化合物，并缓冲剂血液的pH，其在炎症状态时下调；
载脂蛋白(APOA,Lipoprotein A,SwissProt:P08519)是一种亲水型糖蛋白，可和低密度脂蛋白一起组装成LPA；其和纤维蛋白溶酶原具有高度的同源性，因此还具有一部分凝血系统功能；
Rho家族GDP解离抑制剂2(ARHGDIB，Rho GDP dissociation inhibitor 2,SwissProt:P52566)是Rho家族的GTP酶调节酶，其不仅在炎症、免疫中有所作用，还与多种细胞的侵袭性相关；
补体C3(Complement C3,SwissProt:P01024)属于补体系统，在病原体入侵机体早期即发挥清除作用；
纤维胶凝蛋白2(FCN2,Ficolin-2,SwissProt:Q15485)能识别病原体上的PAMPs，激活补体系统中的凝集素级联反应，从而清除病原体；
根据物种蛋白的特性，将五种蛋白表达量带入Logistic逐步回归模型，经计算后，即可判定是否治愈肺结核病。
从上面所述可以看出，本发明提供的肺结核疗效评价试剂盒采用血清蛋白组合物的方式鉴别治愈肺结核病，具有较高的敏感性和特异性，且操作简便，效率高，优于目前临床所采用的痰培养，为肺结核病的疗效评价提供了一种新的评估方法。
附图说明
图1为本发明实施例未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中ALB的表达水平比较示意图；
图2为本发明实施例本发明实施例未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中APOA的表达水平比较示意图；
图3为本发明实施例本发明实施例未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中ARHGDIB的表达水平比较示意图；
图4为本发明实施例本发明实施例未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中C3的表达水平比较示意图；
图5为本发明实施例本发明实施例未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中FCN2的表达水平比较示意图；
图6为本发明实施例血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3、FCN2和组合物的ROC曲线示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。
实施例1：肺结核疗效评价试剂盒的组成
在本实施例中，所述肺结核疗效评价试剂盒，包括酶标板，蛋白标准品组合物，生物素标记抗体组合物，辣根过氧化物酶标记亲和素，稀释液，洗涤液，底物溶液，终止液，酶标板贴纸。
所述酶标板包括：抗ALB抗体包被的酶标板、抗APOA抗体包被的酶标板、抗C3抗体包被的酶标板，以上酶标板购自Abcam艾美捷科技有限公司。还包括抗ARHGDIB抗体包被的酶标板、抗FCN2抗体包被的酶标板，购自武汉华美生物工程有限公司。
在本实施例中，所述蛋白标准品组合物包括：ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2五种蛋白标准品。其中，所述ALB、APOA、ARHGDIB蛋白标准品购自Abcam艾美捷科技有限公司；C3和FCN2蛋白标准品购自武汉华美生物工程有限公司。
在本实施例中，所述生物素标记抗体组合物包括：生物素标记的抗ALB抗体、生物素标记的抗APOA抗体、生物素标记的抗ARHGDIB抗体、生物素标记的抗C3抗体和生物素标记的抗FCN2抗体。其中生物素标记的抗ALB抗体、抗APOA抗体、生物素标记的抗ARHGDIB抗体购自Abcam艾美捷科技有限公司；生物素标记的抗C3抗体和生物素标记的抗FCN2抗体购自C3和FCN2蛋白标准品购自武汉华美生物工程有限公司。
在本实施例中，所述辣根过氧化物酶标记亲和素购自Abcam艾美捷科技有限公司和武汉华美生物工程有限公司，分别用于对应公司的酶标板。
在本实施例中，所述肺结核疗效评价试剂盒还包括：
稀释液：
将80g NaCl、2g KCl、11.5-18g Na2HPO4·2H2O或27.1g Na2HPO4·7H2O或35.8g Na2HPO4·12H2O、2.0-2.4g KH2PO4加到1000mL蒸馏水中，调整PH至7.2-7.5为稀释液存储液。使用前用双蒸水将稀释液存储液稀释10倍，成为稀释液使用液。
作为一个较佳的实施例，所述稀释液为80g NaCl、2g KCl、18gNa2HPO4·2H2O、2.4g KH2PO4加到1000mL蒸馏水中，调整PH至7.4为稀释液存储液。使用前用双蒸水将稀释液存储液稀释10倍，成为稀释液使用液。
作为一个可选的实施例，所述稀释液为80g NaCl、2g KCl、27.1gNa2HPO4·7H2O、2.4g KH2PO4加到1000mL蒸馏水中，调整PH至7.4为稀释液存储液。使用前用双蒸水将稀释液存储液稀释10倍，成为稀释液使用液。
作为一个可选的实施例，所述稀释液为80g NaCl、2g KCl、35.8gNa2HPO4·12H2O、2.0g KH2PO4加到1000mL蒸馏水中，调整PH至7.4为稀释液存储液。使用前用双蒸水将稀释液存储液稀释10倍，成为稀释液使用液。
作为一个可选的实施例，所述稀释液为80g NaCl、2g KCl、11.5gNa2HPO4·2H2O、2.0g KH2PO4加到1000mL蒸馏水中，调整PH至7.4为稀释液存储液。使用前用双蒸水将稀释液存储液稀释10倍，成为稀释液使用液。
洗涤液：
用双蒸水稀释上文所述稀释液存储液10倍后，加入0.05-1.00％(体积比，v/v)吐温-20，成为洗涤液。
作为一个较佳的实施例，所述溶液为上文所述稀释液存储液100mL，加到900mL蒸馏水中，混匀后再加入1mL吐温-20，成为洗涤液。
底物溶液：
用无水乙醇将3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)配成0.8-1.2％(v/v)溶液，4℃避光保存。
作为一个较佳的实施例，所述底物溶液是用无水乙醇将3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)配成1％(v/v)溶液，4℃避光保存。
终止液：1.5-3mol/L H2SO4水溶液。作为一个较佳的实施例为2mol/L H2SO4水溶液。
实施例2：肺结核疗效评价试剂盒Logistic逐步回归模型建立
采用肺结核疗效评价试剂盒分别检测未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者、健康对照者血清中ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白的表达水平。
(1)样本收集：
依据中国卫生部发布的肺结核病诊断标准，收集未用药肺结核病患者57例，治愈肺结核病患者59例。同期收集健康对照者60例，HIV检测均为阴性，无乙肝，无糖尿病，无哮喘，无结核病史，肝肾功能正常，无其他先天性疾病，并排除慢性炎症、自身免疫病等其他疾病，不存在其他手术史，年龄、性别无显著差异。
所有参加者血样均为晨起空腹抽取，采用一次性真空不抗凝采血管，采集外周血3.0mL，4小时内离心(3000r/min，10min，4℃)，吸上清后分装成各50μL，保存于-80℃冰箱。
(2)抗原表达量检测：
取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，使用稀释液以1:10000比例稀释，用于检测ALB蛋白；
取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，使用稀释液以1:20000比例稀释，用于检测APOA蛋白；
取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，使用稀释液以1:800比例稀释，用于检测C3蛋白；
取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，使用稀释液以1:4000比例稀释，用于检测FCN2蛋白；
取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，不稀释用于检测ARHGDIB蛋白。
所述ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品浓度分别为80-120μg/mL，40-60ng/mL，1000-1800pg/mL，25-35μg/mL，12-20ng/mL。
作为一个较佳的实施例，所述ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品浓度分别为100μg/mL，50ng/mL，1600pg/mL，30μg/mL，16ng/mL。使用时用稀释液使用液将ALB标准品倍比稀释，建立100μg/mL、25μg/mL、6.25μg/mL、1.563μg/mL、0μg/mL 5个浓度的标准曲线；将APOA标准品倍比稀释，建立50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.563ng/mL、0.781ng/mL、0ng/mL8个浓度的标准曲线；将ARHGDIB标准品倍比稀释，建立1600pg/mL、800pg/mL、400pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、0pg/mL8个浓度的标准曲线；将C3标准品倍比稀释，建立30μg/mL、15μg/mL、7.5μg/mL、3.75μg/mL、1.875μg/mL、0.938μg/mL、0.469μg/mL、0μg/mL8个浓度的标准曲线；将FCN2标准品倍比稀释，建立16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.25ng/mL、0ng/mL8个浓度的标准曲线。
将稀释的待检血清0.1mL分别加入包被抗ALB抗体、抗APOA抗体、抗ARHGDIB抗体、抗C3抗体和抗FCN2抗体的酶标板中，敷上酶标板贴纸，置37℃孵育1小时。
拍干酶标板，于各反应孔中，对应该酶标板包被的抗体，分别加入用所述稀释液使用液以体积比1:100新稀释的生物素标记抗体0.1mL，敷上酶标板贴纸，置37℃孵育1小时，洗涤液0.2mL/孔洗涤3次。
于各反应孔中，加入新稀释用所述稀释液使用液以体积比1:100新稀释的辣根过氧化物酶标记亲和素0.1mL，敷上酶标板贴纸，37℃孵育0.5～1小时，0.2mL/孔洗涤液洗涤5次。
用pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液9.9mL(0.2mol/LNa2HPO410.3mL和0.1mol/L柠檬酸9.7mL混合制备获得)加入0.1mL所述底物溶液，再加入0.75％(v/v)的H2O2水溶液42μL，混匀后立即于各反应孔中加入新配制的TMB底物溶液0.1mL/孔，敷上酶标板贴纸，避光37℃孵育10～30分钟。于各反应孔中加入终止液0.05ml终止反应。
在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。
(3)数据处理与统计分析：
根据酶标板各孔OD值，对照各标准曲线换算为各样本蛋白浓度后，采用SPSS 16.0软件中Nonparametric Mann-Whitney U test进行统计(P<0.05时，具有显著性差异；P<0.01时，具有极显著性差异)，并应用GraphPad Prism 5软件绘制含误差线的散点图(参见图1-图5)。
运用MedCalc软件计算单个血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2鉴别治愈肺结核病的ROC曲线，包括灵敏度、特异性和曲线下面积(AUC)，结果显示血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2的AUC分别是0.716、0.646、0.674、0.714、0.689，敏感性分别是92.31％、55.56％、79.63％、38.00％、87.27％，特异性分别是28.85％、68.00％、61.22％、87.86％、39.29％。结果说明单个血清蛋白鉴别治愈肺结核病的敏感性和特异性都不高。
采用Logistic逐步回归模型计算血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2组合物鉴别治愈肺结核病的ROC曲线，通过数据计算和分析，构建治愈肺结核病组合物的二分类Logistic逐步模型的回归方程：
Logit(p)＝-0.1617+0.04934×(ALB蛋白浓度)+0.003786×(APOA蛋白浓度)-0.0189×(ARHGDIB蛋白浓度)-0.001431×(C3蛋白浓度)-0.06697(FCN2蛋白浓度)
其ROC曲线敏感度为87.10％，特异度为79.49％，曲线下面积(AUC)为0.876(P<0.0001，95％Confidence Interval＝0.775-0.943)(参见图6)具有较高的准确性，同时敏感性高、特异性强。说明血清ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2组合物可用于制备治愈肺结核病的疗效评价试剂盒。
实施例3：肺结核疗效评价试剂盒检测效果的验证及应用
留一法交叉验证：取治愈肺结核病、未用药肺结核病患者、正常对照的血清样本，样本收集及稀释方法同实施例2所述。
将稀释的待检血清0.1mL加入包被抗ALB抗体、抗APOA抗体、抗ARHGDIB抗体、抗C3抗体和抗FCN2抗体的酶标板中，置37℃孵育1小时。
拍干酶标板，于各反应孔中，对应该酶标板包被的抗体，分别加入新鲜稀释的生物素标记抗体0.1mL，置37℃孵育1小时，洗涤液洗涤。
于各反应孔中，加入新鲜稀释的辣根过氧化物酶标记亲和素0.1mL，37℃孵育0.5～1小时，洗涤液洗涤。
于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，避光37℃10～30分钟。于各反应孔中加入终止液0.05ml终止反应。
在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。换算为各样本蛋白浓度后，运用SPSS 16.0统计软件进行Mann-Whitney U检验，验证目的蛋白表达水平。
检测后，将各蛋白质浓度值代入公式，得到Logit(p)值，通过P＝exp[Logit(p)]/(1+exp[Logit(p)])换算得到P值。以0.5为界，P值接近于1的判定为已治愈肺结核病，P值接近于0的判定为未治愈肺结核病。
留一法交叉验证获得模型的阳性预测值(Positive Predictive Value，PPV)为76.67％、阴性预测值(Negative predictive value，NPV)为80.00％，模型正确率为78.57％。
另采用39例肺结核临床样本进行盲法验证，将检测出的蛋白质值代入已构建的治愈肺结核病组合物的二分类Logistic逐步模型的回归方程，获得P值，本模型判定结果的临床符合率为74.36％。表明该特异血清蛋白质组合物诊断治愈肺结核病具有较高的准确性。
可见，本肺结核疗效评价试剂盒具有以下优点：
(1)采用检测肺结核病的特异血清蛋白质组合，进而对肺结核病的治愈进行鉴别，检测技术先进、高通量，组合物的构建方法设计精确、合理可行。
(2)传统的痰培养方法检测需要4-8周，分辨功效差，特异性低，且安全性差，需特定实验室内完成。而本试剂盒操作简便、快捷，仅需2-3小时，且该试剂盒是一种在血清蛋白水平上的检测，安全有效，对治愈肺结核病具有早期鉴别价值。
(3)本发明对治愈肺结核病检测的灵敏度为87.10％、特异性为79.49％，具有较高的准确性，可实现对治愈肺结核病的早期鉴别，为肺结核病的疗效评价提供了新的方法。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种肺结核疗效评价试剂盒，其特征在于，包括酶标板、蛋白标准品组合物，生物素标记抗体组合物；其中所述酶标板分别包被有抗ALB抗体、抗APOA抗体、抗C3抗体、抗ARHGDIB抗体、抗FCN2抗体的五种酶标板；所述蛋白标准品组合物包括ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品；所述生物素标记抗体组合物包括所述生物素标记的抗ALB抗体、生物素标记的抗APOA抗体、生物素标记的抗ARHGDIB抗体、生物素标记的抗C3抗体和生物素标记的抗FCN2抗体。
2.根据权利要求1所述的肺结核疗效评价试剂盒，其特征在于，所述ALB、APOA、ARHGDIB、C3和FCN2蛋白标准品浓度分别为80-120μg/mL，40-60ng/mL，1000-1800pg/mL，25-35μg/mL，12-20ng/mL。
3.根据权利要求1所述的肺结核疗效评价试剂盒，其特征在于，还包括辣根过氧化物酶标记亲和素，稀释液，洗涤液，底物溶液，终止液，酶标板贴纸。
4.根据权利要求3所述的肺结核疗效评价试剂盒，其特征在于，
所述稀释液是含有8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.15-1.8g/L Na2HPO4·2H2O或2.71g/L Na2HPO4·7H2O或3.58g/L Na2HPO4·12H2O、0.2-0.24g/L KH2PO4的水溶液；
所述洗涤液是含有8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.15-1.8g/L Na2HPO4·2H2O或2.71g/L Na2HPO4·7H2O或3.58g/L Na2HPO4·12H2O、0.2-0.24g/L KH2PO4、0.5-1mL/L的吐温20的水溶液；
所述底物溶液是含有体积比0.8-1.2％的3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液；
所述终止液是1.5-3mol/L的H2SO4水溶液。
5.一种使用如权利要求1-4中任意一项所述的肺结核疗效评价试剂盒的应用，其特征在于，将所述肺结核疗效评价试剂盒用于评估肺结核病患者治疗效果的评价。
6.根据权利要求5所述的肺结核疗效评价试剂盒的应用，其特征在于包括以下步骤：
(1)采集外周血、离心、吸上清；
(2)将步骤(1)所得上清用所述稀释液稀释，分别加入所述五种酶标板，孵育；
(3)拍干酶标板，分别加入稀释的生物素标记抗体，孵育，用所述洗涤液洗涤；
(4)加入稀释的辣根过氧化物酶标记亲和素，孵育后用所述洗涤液洗涤；
(5)各反应孔中加入新配制的TMB底物溶液，避光孵育；
(6)各反应孔中加入终止液终止反应，在ELISA检测仪上检测各孔OD值；
(7)计算各样本蛋白浓度，带入Logistic逐步模型的回归方程，经计算后评价肺结核病治疗效果。
7.根据权利要求6所述的肺结核疗效评价试剂盒的应用，其特征在于，所述Logistic逐步模型的回归方程为：
Logit(p)＝-0.1617+0.04934×(ALB蛋白浓度)+0.003786×(APOA蛋白浓度)-0.0189×(ARHGDIB蛋白浓度)-0.001431×(C3蛋白浓度)-0.06697(FCN2蛋白浓度)
获得Logit(p)值，通过P＝exp[Logit(p)]/(1+exp[Logit(p)])换算得到P值，以0.5为界，判定肺结核病治疗效果。
CN201510218954.4A 2015-04-30 2015-04-30 肺结核疗效评价试剂盒及其应用 Active CN104808003B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510218954.4A CN104808003B (zh) 2015-04-30 2015-04-30 肺结核疗效评价试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510218954.4A CN104808003B (zh) 2015-04-30 2015-04-30 肺结核疗效评价试剂盒及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104808003A true CN104808003A (zh) 2015-07-29
CN104808003B CN104808003B (zh) 2016-05-18

Family

ID=53693008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510218954.4A Active CN104808003B (zh) 2015-04-30 2015-04-30 肺结核疗效评价试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104808003B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106884052A (zh) * 2017-03-23 2017-06-23 李继承 一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途
CN108303545A (zh) * 2017-12-21 2018-07-20 李继承 肺结核病强化治疗后疗效评价和预后评估试剂盒及其用途
CN113192552A (zh) * 2021-03-31 2021-07-30 上海市公共卫生临床中心 活动性结核病标志物、试剂盒、检测方法及模型构建方法
CN113252900A (zh) * 2021-06-19 2021-08-13 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 基于ApoA的慢性淋巴细胞白血病预后风险评估系统及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013175459A2 (en) * 2012-05-25 2013-11-28 Stellenbosch University Method for diagnosing tuberculosis disease
WO2014133855A1 (en) * 2013-02-28 2014-09-04 Caprion Proteomics Inc. Tuberculosis biomarkers and uses thereof
US20140315740A1 (en) * 2004-04-01 2014-10-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antigen array and diagnostic uses thereof
CN104220453A (zh) * 2012-04-03 2014-12-17 诺沃姆德治疗公司 人源化的嵌合抗因子c3抗体及其用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0510511D0 (en) * 2005-05-23 2005-06-29 St Georges Entpr Ltd Diagnosis of tuberculosis

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140315740A1 (en) * 2004-04-01 2014-10-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antigen array and diagnostic uses thereof
CN104220453A (zh) * 2012-04-03 2014-12-17 诺沃姆德治疗公司 人源化的嵌合抗因子c3抗体及其用途
WO2013175459A2 (en) * 2012-05-25 2013-11-28 Stellenbosch University Method for diagnosing tuberculosis disease
WO2014133855A1 (en) * 2013-02-28 2014-09-04 Caprion Proteomics Inc. Tuberculosis biomarkers and uses thereof

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMR S.ALBANNA ET AL: "Serum lipids as biomarkers for therapeutic monitoring of latent tuberculosis infection", 《EUR RESPIR J》, vol. 42, no. 2, 31 August 2013 (2013-08-31) *
J. PETER CEGIELSKI ET AL: "Nutritional Risk Factors for Tuberculosis Among Adults in the United States", 《AMERICAN JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY ADVANCE ACCESS》, vol. 176, 11 July 2012 (2012-07-11) *
JIYAN LIU ET AL: "Screening and identification of potential biomarkers and establishment of the diagnostic serum proteomic model for the Traditional Chinese Medicine Syndromes of tuberculosis", 《J ETHNOPHARMACOL.》, vol. 155, no. 2, 11 September 2014 (2014-09-11) *
MAYA GROYSMAN ET AL: "Vav1 and Ly-GDI Two Regulators of Rho GTPases, Function Cooperatively as Signal Transducers in T Cell Antigen Receptor-induced Pathways", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》, vol. 277, no. 51, 20 December 2002 (2002-12-20) *
VALERIA L. RUNZA ET AL: "Ficolins: Novel pattern recognition molecules of the innate immune response", 《IMMUNOBIOLOGY》, vol. 213, 31 December 2008 (2008-12-31) *
周德玫等: "血行播散型肺结核患者血清白蛋白水平测定结果分析", 《广西医学》, vol. 25, no. 8, 31 August 2003 (2003-08-31) *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106884052A (zh) * 2017-03-23 2017-06-23 李继承 一种基于血清miRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途
CN108303545A (zh) * 2017-12-21 2018-07-20 李继承 肺结核病强化治疗后疗效评价和预后评估试剂盒及其用途
CN108303545B (zh) * 2017-12-21 2020-04-21 李继承 肺结核病强化治疗后疗效评价和预后评估试剂盒及其用途
CN113192552A (zh) * 2021-03-31 2021-07-30 上海市公共卫生临床中心 活动性结核病标志物、试剂盒、检测方法及模型构建方法
CN113192552B (zh) * 2021-03-31 2023-10-13 上海市公共卫生临床中心 活动性结核病标志物、试剂盒、检测方法及模型构建方法
CN113252900A (zh) * 2021-06-19 2021-08-13 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 基于ApoA的慢性淋巴细胞白血病预后风险评估系统及其应用
CN113252900B (zh) * 2021-06-19 2022-04-08 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 基于ApoA的慢性淋巴细胞白血病预后风险评估系统及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104808003B (zh) 2016-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Emmerechts et al. Air pollution‐associated procoagulant changes: the role of circulating microvesicles
CN104808003A (zh) 肺结核疗效评价试剂盒及其应用
CN101819205A (zh) 人n端b型利钠肽原免疫分析试剂盒及其制备方法
CN103389375B (zh) 一种用于肺癌诊断的液相芯片试剂盒
CN103575891A (zh) 一种综合检测he4、ca125的试剂盒及其应用
Heilmann et al. Development and analytic validation of an immunoassay for the quantification of canine S100A12 in serum and fecal samples and its biological variability in serum from healthy dogs
CN103033611A (zh) 致敏性变应原化学发光法诊断试剂盒及其制备方法
CN110646624A (zh) 一种基质素2的elisa试剂诊断盒及其使用方法
CN109444421A (zh) 一种nse检测试纸条的制备方法、试纸条、检测卡及nse检测试剂盒
AU2013211346A1 (en) Anti-HBc quantitative detection method and uses thereof in monitoring and controlling disease progression of chronic hepatitis B patient and in predicting therapeutic effect
CN103383395B (zh) 一种用于检测肺癌自身抗体的液相芯片试剂盒
CN103901188B (zh) 一种吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法
CN104569429B (zh) 一种快速定量检测脑钠肽的均相荧光免疫试剂组及其制备方法
CN105699665A (zh) 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂盒
CN102735835A (zh) 一种一次性全血尿酸检测试纸条及其制造方法
de Pouyade et al. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for equine neutrophil elastase measurement in blood: preliminary application to colic cases
CN102964428A (zh) 检测可溶性白细胞分化抗原40配体的试剂盒及多肽配体
AU752093B2 (en) Method of detecting an antibody in a liquid sample
Krasteva et al. Salivary acute phase proteins as biomarker in oral and systemic disease
CN104730231B (zh) 一种用于荧光免疫定量检测的样本缓冲液及其应用
CN103713121A (zh) 人血管炎诊断试剂盒及其制备方法
CN202837303U (zh) Ngal荧光免疫层析定量检测试纸条
US9625451B2 (en) Method for diagnosing chronic sinusitis
CN101368956A (zh) 一种检测单纯疱疹病毒Ⅰ型IgG抗体的化学发光免疫分析试剂盒
CN108267594A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的st2检测试剂盒、制备及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant