CN104800446A - 一种哈黑里里方提取物纳米乳原位凝胶制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含有哈黑里里方提取物的鼻用纳米乳原位凝胶及其制备方法。该制剂由油相、乳化剂、助乳化剂、凝胶剂、增稠剂、其他附加剂和水组成，其在体外为流动性良好的低黏度液体，与人工鼻液混合后迅速转变为凝胶状态。本发明所得制剂乳滴平均粒径小于200nm，有利于透过鼻黏膜吸收入脑，同时能显著延长制剂在给药局部的滞留时间，改善药物生物利用度；且本制剂对鼻黏膜无刺激性及毒副作用，质量稳定可控，患者使用顺应性良好。

Description

一种哈黑里里方提取物纳米乳原位凝胶制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种回药哈黑里里方剂提取物的鼻用纳米乳原位凝胶及其制备方法。

技术背景

哈黑里里方载于回医药学典籍《回回药方》众风门下，由乳香、胡椒、没药、五倍子、西红花、扁豆、阿魏、芦荟、白荜拨、麝香、海狗肾组成，将上述药材碾成粉末与勿忘草水调和，滴鼻用。研究证实，哈黑里里方能够改善缺血性脑卒中后遗症患者症状，并能有效地干预该症病理进程。

哈黑里里方虽然对脑卒中有良好的治疗效果，但原方用法是将药材粉末调和后直接滴入鼻内，使用不便且可能刺激鼻黏膜引发不适，存在起效慢、生物利用度低、有效成分难以通过血脑屏障等缺点，严重限制了该处方的发展。因此，充分利用鼻腔生理特点，进行制剂处方改良的研究，对鼻脑靶向治疗脑卒中具有重要的意义。

发明内容

本发明目的针对现有技术哈黑里里方的用法的不足，提供一种治疗脑卒中的鼻腔用纳米乳原位凝胶制剂，该方法所得制剂给药后能在鼻腔内迅速发生相转变而凝胶化，不易被鼻纤毛清除，延长药物在鼻黏膜滞留时间，增加了药物的生物利用度，药物易于经鼻黏膜吸收后入脑、提高制剂脑靶向性，患者顺应性良好，从而提高疗效。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

一种哈黑里里方提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：其处方组份质量百分比：提取物0.05～1％，乳化剂0.5～5％，助乳化剂0.1～5％，凝胶材料1～5％，增稠剂0.1～5％，其他附加剂0.2～8％，水余量；

上述哈黑里里方原药材提取方法为CO₂超临界萃取法，提取物呈暗红色粘稠状油体、气味芳香，所制得纳米乳为有蓝色乳光半透明的液体；

上述乳化剂为吐温、Triton X-100、TPGS、硬脂酸甘油酯和Cremophor中的一种或几种的混合物；

上述助乳化剂为甘油、1,2-丙二醇、PEG-400、乙醇、聚甘油酯中的一种或几种的混合物；

上述凝胶材料为去乙酰结冷胶、壳聚糖、甘油磷酸、卡拉胶、文莱胶、黄原胶中的一种或几种的混合物；

上述增稠剂为海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、卡波姆、聚维酮中的一种或几种的混合物；

上述其他附加剂是渗透压调节剂和/或pH调节剂；渗透压调节剂为甘露醇、山梨醇、枸橼酸钠、氯化钠中的一种或几种的混合物；pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、三乙醇胺、硼酸、枸橼酸、硼酸钠、枸橼酸纳的中一种或几种的混合物；

上述提取物鼻用纳米乳原位凝胶的制备方法：取提取物作为油相，将油相与乳化剂和助乳化剂混匀；将水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将其余处方成分加入到一定量水中，再加入凝胶基质，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，制得提取物的鼻用纳米乳原位凝胶；

上述方法所制备的纳米乳平均粒径低于200nm，多分散指数(PolydispersityIndex，PI)不大于0.3；

上述提取物鼻用纳米乳原位凝胶的应用，凝胶制剂以滴鼻形式通过鼻腔给药，与人工鼻液混合后30s内转变为凝胶状态，凝胶溶蚀时间大于60min。

本发明的有益效果：

本发明综合利用纳米乳和原位凝胶制剂技术，先将提取物制成纳米乳，极大地提高药物的分散性，促进药物透过黏膜吸收，进而制备成原位凝胶液供滴鼻用。原位凝胶系统在体外为低黏度的流体，而在生理条件下(如温度、pH值等)将发生溶液-凝胶的相转变，从而延长制剂在鼻内的滞留时间，有利于进一步改善药物吸收。本发明提供的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，遵照原方用法仍以滴鼻形式给药，但本制剂给药后能在鼻腔内迅速发生相转变而凝胶化，不易被鼻纤毛清除，延长药物在鼻黏膜滞留时间，增加了药物的生物利用度，药物易于经鼻黏膜吸收后入脑、提高制剂脑靶向性，患者顺应性良好。与普通滴鼻剂和普通凝胶剂相比，本发明制得的纳米乳原位凝胶有以下优点：(1)纳米乳平均粒径小于200nm，有利于透过鼻黏膜吸收入脑；(2)载纳米乳的原位凝胶剂体系黏度小，滴入鼻腔后可瞬间转变为凝胶，便于使用；(3)所选用的高分子材料乳化剂和助乳化剂等对鼻腔几乎无刺激性和副作用。

本滴鼻剂在4℃条件下贮藏稳定，含量均一。通过胶凝作用延长制剂在鼻部滞留时间，同时起到缓释作用，提高药物局部生物利用度及患者的顺应性。

附图说明

图1为本发明一种哈黑里里方提取物的照片；

图2为本发明纳米乳原位凝胶与人工鼻液混合前后的照片；

图3为本发明实例1制得的纳米乳通过激光粒度仪测得的粒径分布图

具体实施方式

以下结合附图通过实例对本发明的技术方案做进一步说明：

实施例1：

称取0.67g提取物作为油相，加入2.50g吐温-80和2.50g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将0.20g海藻酸钠、0.10g山梨醇加入到50ml水中，再加入1.00g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml即得。

测得上述体系中纳米乳记为样品1，具体参数见表1。

实施例2：

称取0.05g提取物作为油相，加入0.50g吐温-80和1.00g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋混匀，制成纳米乳；将0.50g羟丙甲基纤维素醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入0.50g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml即得。

测得上述体系中纳米乳记为样品2，具体参数见表1。

实施例3：

称取1.00g提取物作为油相，加入5.00g吐温-80和2.50g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将5.00g卡波姆、8.00g甘露醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入5.00g壳聚糖，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品3，具体参数见表1。

实施例4：

精密称取0.50g提取物，作为油相；将油相与2.80g吐温-80混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将2.21g聚维酮、2.50g山梨醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入3.00g卡拉胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品4，具体参数见表1。

实施例5：

精密称取0.05g提取物，作为油相；将油相与0.50g吐温-80和混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将0.20g山梨醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入1.00g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品5，具体参数见表1。

实施例6：

精密称取1.00g提取物，作为油相；将油相与1.22g吐温-80和2.48g 1,2-丙二醇混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将0.50g海藻酸钠、0.80g氯化钠加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入0.80g文莱胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品6，具体参数见表1。

实施例7：

精密称取0.98g提取物，作为油相；将油相与4.88g吐温-80和2.40gPEG-400混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将4.55g羧甲基纤维素钠、8.00g山梨醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入5.00g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品7，具体参数见表1。

实施例8：

精密称取0.65g提取物，作为油相；将油相与2.50g Triton-100和1.25g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将2.48g甲基纤维素、4.12g甘露醇加入到50ml水中，再加入4.98g黄原胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品8，具体参数见表1。

实施例9：

精密称取0.06g提取物，作为油相；将油相与0.60g Triton-100和0.60g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将0.20g甲基纤维素、0.40g甘露醇加入到50ml水中，再加入0.20g甘油磷酸，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品9，具体参数见表1。

实施例10：

精密称取0.60g提取物，作为油相；将油相与2.88g硬脂酸甘油酯和1.48g乙醇混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将2.56g海藻酸钠加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入4.66g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品10，具体参数见表1。

实施例11：

精密称取0.98g提取物，作为油相；将油相与4.88g硬脂酸甘油酯和2.39g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将5.00g卡波姆、7.99g甘露醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入1.00g壳聚糖，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品11，具体参数见表1。

实施例12：

精密称取1.00g提取物，作为油相；将油相与4.80g Triton-100和3.0g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；再加入0.50g卡拉胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品12，具体参数见表1。

实施例13：

精密称取0.33g提取物，作为油相；将油相与1.25g TPGS混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将2.00g海藻酸钠、1.02g甘露醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入0.50g壳聚糖，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品13，具体参数见表1。

实施例14：

精密称取0.05g提取物，作为油相；将油相与0.93g Cremophor和0.47g乙醇混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将0.22g羧甲基纤维素钠、0.40g甘露醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入0.61g壳聚糖，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品14，具体参数见表1。

实施例15：

精密称取1.00g提取物，作为油相；将油相与5.00g Cremophor和5.00g甘油混匀；将20ml水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将4.98g海藻酸钠、8.00g山梨醇加入到50ml水中，用0.1N盐酸调节pH至6.0，再加入5.00g去乙酰结冷胶，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，加水至100ml制得提取物的鼻用纳米乳—原位凝胶。

测得上述体系中纳米乳记为样品15，具体参数见表1。

表1样品1-15的平均粒径和多分散指数的实验结果

实施例16

动物实验：

1、实验药物：哈黑里里方原制剂、实施例1制备的哈黑里里方纳米乳原位凝胶、尼莫地平片(山西亚宝药业集团股份有限公司)

2、实验动物

3个月龄SPF级SD大鼠，80只，全雄，290士15g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(宁)2011-0001

实验方法：

1、大鼠MCAO模型制作

大鼠领取后适应观察3天。术前禁食24小时，自由饮水。用7％水合氯醛(0.5ml/100g,ip)麻醉大鼠，将麻醉后的大鼠仰卧位固定。术区常规消毒(先涂碘伏，后用酒精洗掉碘伏)，沿颈正中线切口，用眼科镊钝性分离其下的淋巴组织及腺体。用眼科弯镊分离肌肉筋膜及右侧颈总动脉(CCA)，在近心端结扎右侧颈总动脉；继续分离颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，于分叉处结扎ECA。再沿ICA往内约4mm处小心分离翼腭动脉，并齐分叉处结扎之；ICA近分叉处备线。然后在距CCA分叉处3mm用眼科剪剪一小口，用眼科镊轻轻送入约10mm，再顺势插入到20mm左右，以有抵触感为度，即实现对大脑中动脉的阻断(middlecerebral artery occlussion,MCAO)。结扎CCA远心端的备线以固定线栓。术中保持肛温37士0.5℃，术后保温至动物清醒。MCA阻断2h后，适当抽出线栓约10mm，剪去漏出于皮肤外的线栓，进行再灌注。假手术组大鼠仅在麻醉状态下分离右侧颈总动脉，不插入线栓。凡手术过程中，大鼠死亡，手术失败；造模后评分为0和4分者全部剔除。

2、分组、给药

把大鼠按神经功能评分随机分为假手术组，模型对照组，尼莫地平组，哈黑里里方原制剂组和纳米乳原位凝胶组。再灌注后4h给药一次，以后每天给药一次，连续给药7天。假手术对照组、模型组给予等量的饮用水(1mL/100g体重)，第48h采血浆、处死动物后取脑，备检测指标用。

检测指标：

1、对神经行为学异常的改善作用

于再灌注后4h及1-7天，采用Zea Longa(1989)5级评分法评价神经缺失症状。5级评分法具体症状及分值设置如下：无神经损伤症状(0分)，不能完全伸展左侧前爪(1分)，向左侧转圈(2分)，向左侧倾倒(3分)，不能自发行走、意识丧失(4分)。

2、对脑梗死比率的影响

采用TTC染色称重法，计算大鼠脑梗塞百分比来考察脑损伤程度，评价药物治疗作用。

结果如下：

1、对神经行为学异常的改善作用

与模型对照组相比，哈黑里里方原制剂和纳米凝胶原位凝胶均可以降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分(p<0.05)。哈黑里里方纳米乳原位凝胶剂型降低神经功能评分的作用优于哈黑里里方原制剂。具体结果见表2。

表2哈黑里里方不同剂型对大鼠脑缺血再灌注损伤后7d行为学评分的影响(n＝10)

与模型对照组比较：*p<0.05

2、对脑梗死比率的影响：

与模型对照组比较，哈黑里里方原制剂和微乳凝胶均可以降低脑缺血再灌注大鼠的脑梗死比率(p<0.05)。哈黑里里方微乳凝胶剂型降低脑梗死比率的效果好于原制剂。结果见表3。

表3哈黑里里方不同剂型对大鼠脑缺血再灌注损伤后7d脑梗死比率的影响(n＝10)

与模型对照组比较：*p<0.05，**p<0.01

本发明选用经典的线栓法致大鼠脑缺血模型，测定脑梗死比率和神经行为学评分，直观的说明哈黑里里方原制剂组和微乳凝胶组对脑卒中的改善作用。上述表2表明了哈黑里里方微乳凝胶剂型降低神经功能评分的作用优于哈黑里里方原制剂。上述表3表明了哈黑里里方微乳凝胶剂型降低脑梗死比率的效果好于原制剂。本实验充分验证了哈黑里里方纳米乳原位凝胶制剂较哈黑里里方原制剂增加了药物的生物利用度，药物易于经鼻黏膜吸收后入脑、提高制剂脑靶向性，患者顺应性良好，从而提高疗效。

Claims (10)

1.一种哈黑里里方提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：其处方组份质量百分比：哈黑里里方提取物0.05～1％，乳化剂0.5～5％，助乳化剂0.1～5％，凝胶材料1～5％，增稠剂0.1～5％，其他附加剂0.2～8％，水余量。

2.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：所述提取物采用CO₂超临界萃取法提取，提取物呈暗红色粘稠状油体、气味芳香，所制得纳米乳为有蓝色乳光半透明的液体。

3.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：所述乳化剂为吐温、TritonX-100、TPGS、硬脂酸甘油酯和Cremophor中的一种或几种的混合物。

4.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：所述助乳化剂为甘油、1,2-丙二醇、PEG-400、乙醇、聚甘油酯中的一种或几种的混合物。

5.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：所述凝胶材料为去乙酰结冷胶、壳聚糖、甘油磷酸、卡拉胶、文莱胶、黄原胶中的一种或几种的混合物。

6.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：增稠剂为海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、卡波姆、聚维酮中的一种或几种的混合物。

7.根据权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶，其特征在于：所述的其他附加剂为：渗透压调节剂和/或pH调节剂；所述渗透压调节剂为甘露醇、山梨醇、枸橼酸钠、氯化钠中的一种或几种的混合物；所述pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、三乙醇胺、硼酸、枸橼酸、硼酸钠、枸橼酸纳的中一种或几种的混合物。

8.一种如权利要求1所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶的制备方法，包括以下步骤：取提取物作为油相，将油相与乳化剂和助乳化剂混匀；将水逐渐加入上述混合物中，涡旋振荡均匀，制成纳米乳；将其余处方成分加入到一定量水中，再加入凝胶材料，制成凝胶溶液；将纳米乳加入到凝胶溶液中，混合均匀，制得提取物的鼻用纳米乳原位凝胶。

9.根据权利要求8所述的提取物鼻用纳米乳原位凝胶的制备方法，其特征在于：所得纳米乳平均粒径低于200nm，多分散指数不大于0.3。

10.根据权利要求1～7所述的哈黑里里方提取物鼻用纳米乳原位凝胶的应用，其特征在于：所述的凝胶制剂以滴鼻形式通过鼻腔给药，与人工鼻液混合后30s内转变为凝胶状态，凝胶溶蚀时间大于60min。