CN104777160B - 一种敌鼠钠盐快速检测的方法及其检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种食品或保健品的分析技术领域，尤其涉及一种基于化学反应的敌鼠钠盐快速检测的方法及其检测试剂盒。该方法包括以下步骤：(1)取所述样品适量，与提取溶剂混合，振摇，静置后取上清液；(2)取分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍的敌鼠钠盐试纸，将该敌鼠钠盐试纸浸入步骤(1)所得的上清液中，取出试纸；或者吸取或蘸取少许步骤(1)所得的上清液置于该敌鼠钠盐试纸上；(3)观察试纸颜色变化并判断所检样品中是否含有敌鼠钠盐，其中：如果试纸呈淡橙色至橙红色，则判定所检样品中可能含有敌鼠钠盐，否则不含有敌鼠钠盐。本方法具有试剂用量少、快速、简便、安全和低污染等特点。

Description

一种敌鼠钠盐快速检测的方法及其检测试剂盒

技术领域

本发明涉及一种食品或保健品的分析技术领域，尤其涉及一种基于化学反应的敌鼠钠盐快速检测的方法及其检测试剂盒。

背景技术

敌鼠钠盐是目前普遍使用的一种新型抗凝血杀鼠药，化学名为2-二苯基乙酰基-1,3-茚二酮，致死量0.5～2.5g，毒杀作用较慢，有抑制维生素K₁作用，能阻碍血液中凝血酶原合成，损害毛细血管，使管壁通透性和脆性增强，容易破裂，引起内脏和皮下大量出血而死亡。常用剂型有1％敌鼠钠盐粉剂。早期患者临床症状表现为恶心、呕吐、食欲下降、精神不振、关节肿痛、低热；迟发表现为全身多处出血。当前，敌鼠钠的误服或投毒事件屡有发生。

敌鼠钠盐的测定方法，目前无国家标准方法，文献报道的有液相色谱法、红外吸收光谱法、紫外分光光度法等，这些方法都需要具有实验室条件的支持才能进行，检测时间较长、费用较大、不易普及。

专利申请号为200610014188.0的发明(敌鼠检测试纸及其制备方法)只是讲述了敌鼠试纸是滤纸经浓度为10-20g/L的柠檬酸或酒石酸的水溶液浸湿后取出，干燥后，再经浓度为10-20g/L三氯化铁水溶液浸湿后取出，自然干燥，再与基板固定连接即得。并未给出检测样品的处理方法，上述制备试纸的方法虽简单，但是用来制备试纸的试剂浓度较高，使得制备的试纸呈黄色，且必须避光、密封保存，否则易变质；在检测低浓度敌鼠钠盐阳性样品的时候，不易观察颜色的变化，易造成假阴性的出现。

因此，本领域需要有一种检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的方法，期待该方法具有以下至少一方面的优点：方法安全，操作简单快速，对操作人员和环境的影响低，检测成本低，非专业检测人员也能对食品和保健品中是否含有敌鼠钠盐进行检测。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种可以简便、快速的测定被敌鼠钠盐污染的样品及中毒后的呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的检测方法。本方法具有试剂用量少、快速、简便、安全和低污染等特点。

一种敌鼠钠盐快速检测的方法，该方法包含以下步骤：

(1)将样品与提取溶剂混合，振摇，静置后取上清液；

(2)将敌鼠钠盐试纸浸入步骤(1)所得的上清液中，取出试纸；或者吸取或蘸取少许步骤(1)所得的上清液置于试纸上；

(3)观察试纸颜色变化，并判断所检样品中是否含有敌鼠钠盐：如果试纸呈淡橙色至橙红色，则判定所检样品中可能含有敌鼠钠盐，否则不含有敌鼠钠盐。

优选的，其中步骤(1)中所述的提取溶剂为无水乙醇或乙酸乙酯；所述振摇操作是振摇30秒至10分钟。

优选的，其中步骤(2)中所述的敌鼠钠盐试纸浸入上清液中的时间为1～30秒，或置于该试纸上的上清液的量为1～10滴(也可挥干后，重复滴加)。

优选的，其中步骤(3)中观察试纸颜色变化是在30秒至10分钟内观察。

优选的，所述敌鼠钠盐试纸分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍制得。

优选的，所述敌鼠钠盐试纸的制备过程包括：(1)取定性或定量滤纸置于有机酸水溶液中浸泡，取出，烘干，(2)置于硫酸铁铵水溶液中浸泡，取出，烘干。

更优选的，所述有机酸为冰乙酸、草酸、柠檬酸或酒石酸的一种或多种，所述有机酸水溶液的浓度为0.1％～1％；所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.1％～1％；所述定性或定量滤纸置于有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液中浸渍时间为10秒至10分钟；所述烘干是在40～80℃烘干20～60分钟。

更优选的，所述有机酸水溶液的浓度为0.1％～0.5％；所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.2％～0.8％；所述定性或定量滤纸置于有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液中浸渍时间为30秒至5分钟；所述烘干是在50～60℃烘干30～40分钟。

更优选的，所述敌鼠钠盐试纸的制备过程，还包括(3)将浸渍后的敌鼠钠盐试纸粘贴于PVC基板一端缩进0.4cm处，在PVC基板上缩进的一端粘贴0.5cm宽的PVC板。

另外本发明还提供了一种用于检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠

钠盐的检测试剂盒，所述试剂盒包括盒体以及：

(i)提取溶剂，其封装于试剂瓶中；

(ii)敌鼠钠盐试纸；

(iii)使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的操作方法。

优选的：

(I)所述试剂瓶是可以反复开启和密封的试剂瓶；

(II)所述使用说明资料是印刷有相应信息的纸张或卡片形式的使用说明书、检测判定标准；

(III)所述使用说明资料基本上记载了本发明的检测方法。

下面对本发明做进一步描述：

本发明第一方面提供了一种可以简便、快速的测定被敌鼠钠盐污染的食物样品及中毒后的呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)取所述样品适量，与提取溶剂混合，振摇，静置后取上清液；

(2)取分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍的敌鼠钠盐试纸，将该敌鼠钠盐试纸浸入步骤(1)所得的上清液中，取出试纸；或者吸取或蘸取少许步骤(1)所得的上清液置于该敌鼠钠盐试纸上；

(3)观察试纸颜色变化并判断所检样品中是否含有敌鼠钠盐，其中：如果试纸呈淡橙色至橙红色，则判定所检样品中可能含有敌鼠钠盐，否则不含有敌鼠钠盐。

如果步骤(3)结果表明“不含有敌鼠钠盐”，则可直接认定所检样品中没有敌鼠钠盐；如果步骤(3)结果表明“可能含有敌鼠钠盐”，则在必要的情况下可进一步借助其它方法，例如仪器分析法作进一步的判定；这样本发明的方法可以大大减少市场监督时检查现场的工作量，依法及时维护市场秩序。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述提取溶剂为无水乙醇或乙酸乙酯。根据本发明的方法，在步骤(1)中，所述样品和作为提取溶剂的无水乙醇或乙酸乙酯二者的量和比例不必作特别的限制，只要样品和提取溶剂混合后，可能存在的敌鼠钠盐能够溶解在溶剂中并达到本发明方法的检测限即可。例如在一个实施方案中，在步骤(1)中的提取溶剂为1～10ml，例如2～5ml；所取样品的量例如0.5～10g，例如1～5g。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述振摇操作是振摇30秒至10分钟；优选30秒至5分钟；更优选1分钟至3分钟。在本发明第一方面方法的步骤(1)中，振摇操作的时间是可以不作特别限定的，原因在于敌鼠钠盐在所述提取溶剂中的溶解度足够好，能够以较快的速度(例如在1分钟内即可溶解出相当多的敌鼠钠盐，例如达到检测限以上的量)溶解出来进而满足测定要求。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述敌鼠钠盐试纸是分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍并干燥后的试纸。在本发明中，如无特别说明，术语“敌鼠钠盐试纸”可以简称为试纸，只要在相应语境下均是指经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍并可用于本发明方法的试纸，而非其它情况的试纸。根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述敌鼠钠盐试纸基本上是按包括如下步骤的方法制备的：取定性或定量滤纸置于有机酸水溶液中浸泡，取出，烘干，再置于硫酸铁铵水溶液中浸泡，取出，烘干，即得。在一个实施方案中，在制备所述敌鼠钠盐试纸的过程中，所述有机酸水溶液的浓度为0.1％～1％，更优选的，所述有机酸水溶液的浓度为0.1％～0.5％，例如0.2％；所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.1％～1％；更优选的，所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.2％～0.8％，例如0.5％。在一个实施方案中，在制备所述敌鼠钠盐试纸的过程中，所述定性或定量滤纸置于有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液中浸渍时间为10秒至10分钟；优选30秒至5分钟；更优选1分钟至3分钟，例如3分钟。在一个实施方案中，在制备所述敌鼠钠盐试纸的过程中，所述烘干是在40～80℃烘干20～60分钟，例如在50～60℃烘干30～40分钟。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述敌鼠钠盐试纸在步骤(1)所得的上清液中浸入时间可以尽量的短，例如1～30秒，例如1～10秒，例如2～5秒。也可以使试纸上的溶液挥干后，重复浸入的方式来检测，以增大敌鼠钠盐试纸检测的灵敏度。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)可以是将敌鼠钠盐试纸浸入到步骤(1)所得的上清液中，还可以是吸取或蘸取少许步骤(1)所得的上清液置于敌鼠钠盐试纸上，然后再进行观察。为增大该试纸的灵敏度，可待试纸上的溶液挥干后重复该步骤。上述吸取或蘸取的方式以及其所使用的工具，它们可以是例如吸管、玻棒或任何其它可实现吸取或蘸取功能的物品。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述有机酸水溶液包括但不限于柠檬酸溶液、酒石酸溶液、草酸溶液或冰乙酸溶液。在一个实施方案中，所述有机酸水溶液的浓度为0.1％～1％，优选0.1％～0.5％，例如0.1％。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.1％～1％，优选0.2％～0.8％，例如0.5％。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(3)中观察试纸颜色变化可以在较短的时间内进行，例如在30秒至10分钟内观察，优选2分钟至8分钟，例如5分钟。在本发明中，试纸由无色变为淡橙色至橙红色，即这类色彩是连续的而无法明显区分。

根据本发明第一方面的方法，如果所述样品被判定为其中可能含有敌鼠钠盐，则该样品可以进一步用其它方法进行检测，例如通过实验室的方法，例如HPLC法等。本发明的方法特别适用于在市场上或其它检测现场进行大样本的检测和筛查，并进而减少实验室的工作量。

基于本发明第一方面的方法，本发明第二方面提供了一种检测试剂盒，其用于检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐，所述试剂盒包括盒体以及：

(i)提取溶剂，其封装于试剂瓶中；

(ii)分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍的敌鼠钠盐试纸；

(iii)使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的操作方法。

根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述试剂瓶是可以反复开启和密封的试剂瓶。用于封装提取溶剂的试剂瓶的材质可以不做特别的限制，例如可以是带有瓶塞、瓶盖等的玻璃瓶、塑料瓶等。在一个优选的实施方案中，所述的用于封装提取溶剂的试剂瓶内装入的提取溶剂的体积占试剂瓶容量的1/10～9/10，例如1/10～5/10。在试剂瓶中预留一定的空间是非常有用的，例如可以直接将待检样品加入到试剂瓶中，盖严，然后振摇，使待检样品与提取溶剂充分混合，以尽可能地使可能存在的敌鼠钠盐溶解在溶液中，由此使本发明提供的试剂盒非常简单。

根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述使用说明资料可以是使用说明书、检测方法说明、检测判定标准等等，其形式可以是印刷有相关信息的纸张、卡片等，该使用说明资料基本上记载了本发明第一方面所述的方法。因此，本发明第一方面任一实施方案中，其中的任一技术特征同样适用于本发明第二方面的试剂盒或者适用于本发明的其它方面。

本发明与其它敌鼠钠盐的快速检测方法相比，具有以下优点：

(a)灵敏度高：与其它文献所采取的10-20g/L的固体有机酸溶液和10-20g/L的三氯化铁水溶液相比，本发明采用相对较低浓度的有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液作为试纸的浸泡液，不但可以使制备出来的试纸呈现滤纸本身的颜色，没有其它颜色的干扰，而且检测能力高。与其它文献报道的方法的检测限比较如下：

方法	200610014188.0	本发明
			检测限	100mg/kg	50mg/kg

(b)方法完整：本发明从所述样品的处理，到检测操作，再到检测结果的判定都有详细的说明，其中包含了敌鼠钠盐试纸的制备，拥有一套完整的敌鼠钠盐快速检测的方法。

附图说明

图1是本发明敌鼠钠盐试纸结构示意图。

具体实施方式

下面通过具体的实例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于任何形式限制本发明。

实施例1、敌鼠钠盐快速检测试纸的制备

取滤纸置于浓度为0.1％的柠檬酸溶液中，浸泡30秒，取出，80℃烘干20分钟，再置于浓度为0.2％的硫酸铁铵溶液中，浸泡30秒，取出，80℃烘干20分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S1。

取滤纸置于浓度为0.5％的冰乙酸溶液中，浸泡1分钟，取出，60℃烘干30分钟，再置于浓度为0.2％的硫酸铁铵溶液中，浸泡2分钟，取出，80℃烘干20分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S2。

取滤纸置于浓度为0.8％的草酸溶液中，浸泡30秒，取出，50℃烘干40分钟，再置于浓度为0.3％的硫酸铁铵溶液中，浸泡1分钟，取出，50℃烘干40分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S3。

取滤纸置于浓度为0.2％的酒石酸溶液中，浸泡2分钟，取出，40℃烘干60分钟，再置于浓度为0.4％的硫酸铁铵溶液中，浸泡1分钟，取出，60℃烘干30分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S4。

取滤纸置于浓度为0.1％的柠檬酸溶液中，浸泡1分钟，取出，80℃烘干20分钟，再置于浓度为0.5％的硫酸铁铵溶液中，浸泡1分钟，取出，60℃烘干30分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S5。在下文中如无另外说明，使用的是试纸S5进行试验。

取滤纸置于浓度为0.5％的酒石酸溶液中，浸泡30秒，取出，40℃烘干60分钟，再置于浓度为0.5％的硫酸铁铵溶液中，浸泡1分钟，取出，50℃烘干40分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S6。

取滤纸置于浓度为1％的冰乙酸溶液中，浸泡3分钟，取出，80℃烘干20分钟，再置于浓度为1％的硫酸铁铵溶液中，浸泡30秒，取出，50℃烘干40分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S7。

取滤纸置于浓度为0.6％的草酸溶液中，浸泡2分钟，取出，60℃烘干30分钟，再置于浓度为0.4％的硫酸铁铵溶液中，浸泡1分钟，取出，40℃烘干60分钟，得到敌鼠钠盐检测试纸，在本发明中可简称为试纸S8。

取滤纸分别置于浓度为15g/L的柠檬酸或酒石酸溶液中，浸泡2分钟，取出，自然晾干，再置于浓度为15g/L的三氯化铁水溶液中，浸泡2分钟，取出，自然晾干，分别得到敌鼠钠盐检测试纸S9(柠檬酸)和试纸S10(酒石酸)。试纸S9和试纸S10呈明显的黄色，而试纸S1～S8呈现的基本上都是无色。

实施例2、检测所述样品中是否含有敌鼠钠盐的一般操作条件

1、取样量：固体、半固体样品一般取2～3g；液体样品一般取2～3ml。

2、待测溶液的制备、显色

(1)无色液体样品可直接将敌鼠钠盐试纸浸入待测溶液中3秒，取出。

(2)有色样品，可取2～3g或2～3ml样品于显色管中，加2～5ml乙酸乙酯，振摇1分钟，静置后取上清液作为待测液。将试纸浸入该待测液中3秒，取出。

(3)固体、半固体样品，可取2～3g样品于显色管中，加2～5ml无水乙醇或乙酸乙酯，振摇2分钟，静置后取上清液作为待测液，将试纸浸入该待测液中5秒，取出。

3、检测结果的判断

若5分钟内试纸呈淡橙色至橙红色则判断样品中可能含有敌鼠钠盐；反之，则判断样品中不含敌鼠钠盐。

实施例3、检测食品和保健品中是否含有敌鼠钠盐的试验

采用实施例2的方法检测10批市售样品，再依据郑州市疾病预防控制中心的李志岭等发表的“高效液相色谱法检测食物中毒样品中的敌鼠钠盐”的方法检测样品。

结果如下：

上述试验结果与高效液相验证结果表明，本发明检测方法无一例假阳性报告，同时也未漏检任何含有敌鼠钠盐的样品，结果准确可靠。

按本发明方法取上述敌鼠钠盐检测呈阴性的8个样品，分别掺入敌鼠钠盐5mg，进行检测，结果均呈阳性反应，表明本方法抗干扰能力较强，具有较好的准确性。

分别使用实施例1所得的试纸S1～S4和试纸S6～S8，针对本实施例上述样品中的样品2号、样品4号、样品6号、样品9号的试样按本发明方法进行检测。显色结果与使用试纸S5的结果一致。

使用实施例1中所得试纸S5，分别针对本实施例上述样品中的样品5号、样品6号的试样进行检测，检测方法为：取样品加无水乙醇4ml，振摇适当时间，静置，将试纸浸入该待测液中5秒，取出，5分钟内观察试纸颜色变化。以上振摇操作是振摇30秒、1分钟或5分钟。结果显示，在各种振摇时间的处理下，均显示出与上文表中相应样品相同的结果。

使用实施例1中所得试纸S5，分别针对本实施例上述样品中的样品5号、样品6号的试样进行检测，其中是吸取待测液置于该试纸上，5分钟内观察试纸颜色变化。结果均显示出与上文表中相应样品相同的结果。

分别使用实施例1中所得试纸S9和试纸S10，针对本实施例上述样品中的样品5号、样品6号的试样进行检测，检测方法为：取样品加无水乙醇4ml，振摇2分钟，静置，将试纸浸入该待测液中5秒，取出，5分钟内观察试纸颜色变化。显色结果与使用试纸S5的结果一致。

实施例4敌鼠钠盐试纸的制备方法

(1)取定性或定量滤纸置于0.1％～1％的有机酸水溶液中浸泡，取出，烘干；所述的有机酸为冰乙酸、草酸、柠檬酸、酒石酸；

(2)置于0.1％～1％的硫酸铁铵水溶液中浸泡，取出，烘干；

(3)浸渍处理好的滤纸裁成1.0cm*0.6cm的片状，粘贴于PVC基板的一端缩进0.4cm处，在该基板上缩进的一端粘贴0.5cm宽的PVC板，并将该基板裁成0.6cm×6-7cm的条状，即制得一种敌鼠钠盐检测试纸，具体形状见附图1。

实施例5检测试剂盒，

包括盒体以及：

(iv)提取溶剂，其封装于试剂瓶中；

(v)分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍的敌鼠钠盐试纸；

(vi)使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的操作方法。

优选的，

(IV)所述试剂瓶是可以反复开启和密封的试剂瓶；

(V)所述使用说明资料是印刷有相应信息的纸张或卡片形式的使用说明书、检测判定标准；

(VI)所述使用说明资料基本上记载了本发明的上述检测方法。

Claims (2)

1.一种用于检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的检测试剂盒，所述试剂盒包括盒体以及：

（i）提取溶剂，其封装于试剂瓶中；

（ii）敌鼠钠盐试纸；

（iii）使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测被敌鼠钠盐污染的样品和中毒后呕吐物中是否含有敌鼠钠盐的操作方法：

所述方法为：

（1）将样品与提取溶剂混合，振摇，静置后取上清液；

（2）将敌鼠钠盐试纸浸入步骤（1）所得的上清液中，取出试纸；或者吸取或蘸取少许步骤（1）所得的上清液置于试纸上；

（3）观察试纸颜色变化，并判断所检样品中是否含有敌鼠钠盐：如果试纸呈淡橙色至橙红色，则判定所检样品中可能含有敌鼠钠盐，否则不含有敌鼠钠盐；

其中

步骤（1）中所述的提取溶剂为无水乙醇或乙酸乙酯；所述振摇操作是振摇30秒至10分钟；

步骤（2）中所述的敌鼠钠盐试纸浸入上清液中的时间为1~30秒，或置于该试纸上的上清液的量为1~10滴；所述敌鼠钠盐试纸分别经有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液浸渍制得；

其中步骤（3）中观察试纸颜色变化是在30秒至10分钟内观察；

所述敌鼠钠盐试纸的制备过程包括：

1）取定性或定量滤纸置于有机酸水溶液中浸泡，取出，烘干；

2）置于硫酸铁铵水溶液中浸泡，取出，烘干；

其中，所述有机酸水溶液的浓度为0.1%~0.5%；所述硫酸铁铵水溶液的浓度为0.2%~0.8%；所述定性或定量滤纸置于有机酸水溶液和硫酸铁铵水溶液中浸渍时间为30秒至5分钟；所述烘干是在50~60℃烘干30~40分钟。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述敌鼠钠盐试纸的制备过程，还包括3）将浸渍后的敌鼠钠盐试纸粘贴于PVC基板一端缩进0.4cm处，在PVC基板上缩进的一端粘贴0.5cm宽的PVC板。