CN104777114A

CN104777114A - 一种氨基酸-n-甲酸酐中氯离子的测定方法

Info

Publication number: CN104777114A
Application number: CN201510169564.2A
Authority: CN
Inventors: 任磊; 郭宁宁; 陈冉冉
Original assignee: Hefei Anderson Pharma Co Ltd
Current assignee: Hefei Anderson Pharma Co Ltd
Priority date: 2015-04-10
Filing date: 2015-04-10
Publication date: 2015-07-15

Abstract

本发明提供了一种测定氨基酸-N-甲酸酐中氯离子含量的方法，直接将样品加入无机碱水溶液里，然后采用硝酸银滴定，测试处理后样品的吸光度，计算得到氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的含量。本发明的测定方法简单，准确，成本低。

Description

一种氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的测定方法

技术领域

本发明涉及氯离子的测定方法技术领域，具体属于一种氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的测定方法。

背景技术

氨基酸-N-甲酸酐(3-取代噁唑啉-2,5-二酮，简称氨基酸NCA,结构式如下)

很多聚肽在生物体内能降解为对人体有利的氨基酸，近些年其在生物医疗和生物技术有着广泛的应用，如：组织工程，药物载体和疾病治疗等等。通过氨基酸NCA的开环聚合是合成聚肽的重要方法，其中氨基酸NCA的质量是聚合反应的关键之一。氨基酸NCA的制备方法有很多种，如使用光气，双光气，三光气等等，其中氯离子的含量是氨基酸NCA的质量关键所在。氯离子主要存在方式有：氨基酸的盐酸盐，酰氯中间体等等。关于有机物中氯离子的检测很多专利和文献都有报道，常用的检测方法有：离子色谱法，滴定法(包括常规硝酸银，酸碱滴定，电位滴定等等)，其关键在于样品的处理和方法的选择。

专利US20020082431A1中，公开了采用银滴定法测量氨基酸NCA中氯离子的方法，但没有公开待测溶液的配置方法以及采用的哪种银滴定法。专利CN103335873A中，公开了氨基酸NCA在氮气保护下，先用有机溶剂溶解，然后再加入碱溶液水解，最后通过离子色谱测量。该方法操作苛刻，需要有机溶剂，并且需要昂贵的离子色谱。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供了一种氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的测定方法，该方法操作简单，精密度高，成本低。

本发明采用的技术方案如下：

一种氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的测试方法，

(1)取样品加入到无机碱水溶液中，25-100度加热0.5-1.0小时；

(2)溶液冷却后，加入过量的硝酸，硝酸银，加热到25-40度至反应完全；

(3)同样进行空白试验重复上述过程并以NaCl做外标，测试不同浓度Cl离子的吸光度，并作曲线公式；

Y＝A*X+B

Y-样品的吸光度

X-样品中氯离子浓度ug/ml

A-工作曲线的常数

B-工作曲线的截距

将测试数据带入工作曲线，计算出氯离子的浓度，并得到样品中氯离子的含量为W_Cl(％)＝X*V/W

V-样品的总体积ml

W-样品的称量质量mg

步骤1)中所述无机碱为氢氧化锂，氢氧化钠或氢氧化钾。

此操作的原理和步骤是：将待测样品与NaOH水溶液一起反应，使氨基酸NCA水解为氨基酸钠盐和NaCl，向反应液中加入足量硝酸用于中和过量NaOH，再滴加AgNO3溶液，产生白色沉淀，440nm处测量吸光度，即可得到样品中氯元素的含量。

下面是氨基酸NCA及其它反应中的中间体(NCA样品中主要氯离子的来源)碱水解反应结构式：

氨基酸-N-甲酸酐中氯的主要存在形式为氨基酸盐酸盐和氨基酸酰氯，通过加入到氢氧化锂，氢氧化钠或氢氧化钾水溶液中，可以定量的把这两种化合物中的氯解离，并且化合物本身会转化成水溶性的氨基酸金属盐，大量的氨基酸-N-甲酸酐也会转化成氨基酸金属盐和二氧化碳气体，该反应的反应液澄清，无需进一步过滤，即可进行下步操作。或者将该反应液直接用离子色谱检测，结果和硝酸银滴定法相符合。

步骤1)中所述反应温度为25-50度。碱水解的反应速率会随着反应温度的升高而加快；但不能高于100度或者长时间加热反应，因为这些剧烈条件会使氨基酸及衍生物分解，影响测试结果。

步骤2)中所述反应温度为25-40度，目的是使硝酸银和氯离子反应完全。优选温度为25度，此温度下反应更容易操作。

本发明中所指的氨基酸包括所有能生成NCA并且羧酸盐能够溶于水。

本发明中无机碱的浓度小于该碱的饱和水溶液。

本发明采用氯化钠做外标，作工作曲线并符合线性规律。然后在440nm条件下测定样品的吸光度，带入工作曲线，即可得到待测液氯离子含量。

本技术方案的原理是：把化合物中的盐酸或酰氯中的氯转化成无机氯离子并且同时把氨基酸-N-甲酸酐转化成水溶性的氨基酸，然后采用硝酸银滴定法和氯离子外标法，该方法的氯检测限是0.4ug/ml。

附图说明

图1为标准曲线

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围

实施例1

精密称取氯化钠0.165g至1000ml量瓶，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液；精密量取10ml储备液至100ml量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，既得(每1ml相对于10ug的Cl)氯化钠标准液。

分别精密量取NaCl标准液(1ml,3ml,5ml)和储备液(1ml,2ml)至25ml量瓶，加5％NaOH 10ml,加硝酸2ml,0.1mol/L硝酸银1ml,加水定容。暗处放置0.5小时后，440nm测量吸光度，并作工作曲线。

表一

氯离子浓度(ug/ml)	吸光度
		0.4	0.018
1.2	0.049
		2	0.091
4	0.172
		8	0.332

实施例2

重复实施例1(为了得到外标法的工作曲线)。

将精确称量的500mg天冬氨酸-NCA转移至100ml的圆底烧瓶中，加入40ml 5％NaOH(wt)的碱溶液，100℃加热搅拌半小时，冷却到室温后，将反应液转移到100ml容量瓶中，加入15ml浓硝酸调PH至酸性，再加入5ml 0.1NAgNO₃,25℃反应0.5小时，然后加入去离子水定容。440nm条件下测量溶液的吸光度，同时进行空白试验。

实施例3

重复实施例1(为了得到外标法的工作曲线)。

将精确称量的500mg L-天冬氨酸-4-苄酯-N-羰基酸酐转移至100ml的圆底烧瓶中，加入40ml 5％NaOH(wt)的碱溶液，25℃加热搅拌半小时，将反应液转移到100ml容量瓶中，加入15ml浓硝酸调PH至酸性，再加入5ml 0.1NAgNO₃,25℃反应0.5小时，然后加入去离子水定容。440nm条件下测量溶液的吸光度，同时进行空白试验。

实施例4

重复实施例1(为了得到外标法的工作曲线)。

将精确称量的500mg L-天冬氨酸-4-苄酯-N-羰基酸酐转移至100ml的圆底烧瓶中，加入40ml 5％NaOH(wt)的碱溶液，50℃加热搅拌半小时，冷却到室温后，将反应液转移到100ml容量瓶中，加入15ml浓硝酸调PH至酸性，再加入5ml 0.1NAgNO₃,25℃反应0.5小时，然后加入去离子水定容。440nm条件下测量溶液的吸光度，同时进行空白试验。

实施例5

重复实施例1(为了得到外标法的工作曲线)。

将精确称量的500mg L-谷氨酸-5-苄酯-N-羰基酸酐转移至100ml的圆底烧瓶中，加入40ml 5％NaOH(wt)的碱溶液，50℃加热搅拌半小时，冷却到室温后，将反应液转移到100ml容量瓶中，加入15ml浓硝酸调PH至酸性，再加入5ml 0.1NAgNO₃,25℃反应0.5小时，然后加入去离子水定容。440nm条件下测量溶液的吸光度，同时进行空白试验。

表二:氯离子含量检测结果

	吸光度	氯离子含量
			实施例2	0.034	0.015％
实施例3	0.035	0.015％

实施例4	0.034	0.015％
			实施例5	0.046	0.020％

以上测试中用到的L-天冬氨酸-4-苄酯-N-羰基酸酐均是同一批样品。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims

1.一种氨基酸-N-甲酸酐中氯离子的测定方法，其特征在于：所述的方法，包括以下步骤：

(1)取样品加入到无机碱水溶液中，25-100度加热0.5-1.0小时；

(3)同样进行空白试验重复上述过程并以NaCl做外标，测试不同浓度Cl离子的吸光度；并作曲线公式：

Y＝A*X+B

Y-样品的吸光度

X-样品中氯离子浓度ug/ml

A-工作曲线的常数

B-工作曲线的截距

将测试数据带入工作曲线，计算出氯离子的浓度，并得到样品中氯离子的含量为WCl(％)＝X*V/W

V-样品的总体积ml

W-样品的称样量mg。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤1)中所述无机碱为氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾。

3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，步骤1)中所述反应温度为25-50度。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，步骤2)中所述反应温度为25度。