CN104770467B - 虎杖内生菌株烟曲霉j3菌株在草莓保鲜中的应用 - Google Patents

虎杖内生菌株烟曲霉j3菌株在草莓保鲜中的应用 Download PDF

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Abstract

一种虎杖内生菌株在草莓保鲜中的应用,该菌株为烟曲霉J3(Aspergillus fumigatus)J3菌株,保藏号为CCTCC M2015161。八分熟的草莓果实经本发明的J3菌株的发酵液处理后,可显著减低草莓的腐烂率、失重率,延缓可溶性糖、蛋白质、Vc、可滴定酸含量的下降,减少MDA的增加,保持SOD和POD的活性,抑制纤维素酶活性,从而延缓草莓的衰老,提高草莓的保鲜效果,有效延长草莓的保鲜期,为草莓的保鲜技术、开发天然防腐保鲜剂提供了新的研究方向。

Description

虎杖内生菌株烟曲霉J3菌株在草莓保鲜中的应用
技术领域
本发明涉及一种虎杖内生菌株的应用,具体涉及一种虎杖内生菌株烟曲霉J3菌株在草莓保鲜中的应用。
背景技术
草莓属浆果类水果,果实色泽鲜红、果肉柔嫩多汁,可食部分达98%,不仅可以鲜食,还可做成天然保健饮料、天然保健果脯及速冻食品等,具有广阔的市场前景。草莓不仅具有很高的食用价值,而且还有一定的药用价值,如具有生津止渴、利尿止泻、清火解热等药理作用;具有防病、防癌、治病等食疗作用。草莓以其周期短、见效快、经济效益高、适于保护地栽培等特殊优势已然成为我国果蔬业中发展最快的一项新兴产业。
但是,草莓皮薄、含水量高,采后贮藏过程中极易受到机械损伤、细菌感染,发生腐败变质,造成严重的经济损失;并且草莓成熟期短、上市时间密集、加上不耐储藏,在常温下仅能储藏1-2天,极大地限制了草莓的远销和生产的大规模种植。因此,如何延长草莓果实的贮藏期或货架寿命,保持其商品价值,是生产中迫切需要解决的问题。然而,现常用的草莓化学保鲜剂存在污染环境、危害人体健康的缺陷,而其它保鲜技术所需设备昂贵、操作繁琐,故急需寻找新的经济、简便、易接受的草莓的保鲜方法。
发明内容
本发明所要解决技术问题是:针对上述现有技术的不足,提供一种虎杖内生菌株烟曲霉J3菌株在草莓保鲜中的应用。
本发明提及的虎杖内生菌株烟曲霉J3菌株是从湖南涟源取的野生虎杖中分离纯化得到,其分类命名为烟曲霉J3(Aspergillus fumigatus)J3菌株,已于2015年3月25日保藏,保藏编号为CCTCC M2015161。
将本发明菌株J3接入10g/100mL虎杖煮提液中进行生物转化发酵培养,能制得J3发酵液。
八分熟的草莓果实经J3发酵液处理后,可显著减低草莓的腐烂率、失重率,延缓可溶性糖、蛋白质、Vc、可滴定酸含量的下降,减少MDA的增加,保持SOD和POD的活性,抑制纤维素酶活性,从而延缓草莓的衰老,提高草莓的保鲜效果。且J3发酵液的防腐保鲜效果要优于未发酵液,能有效延长草莓的保鲜期,为草莓的保鲜技术、开发天然防腐保鲜剂提供了新的研究方向。
附图说明
图1是草莓果实腐烂率变化图;
图2是草莓果实失重率变化图;
图3是草莓果实可溶性糖的变化图;
图4是草莓果实可滴定酸的变化图;
图5是草莓果实Vc含量变化图;
图6是草莓果实可溶性蛋白质含量变化趋势图;
图7是草莓果实SOD活性变化图;
图8是草莓果实的过氧化物酶活性变化图;
图9是草莓果实的纤维素酶活性变化图;
图10是草莓果实丙二醛含量变化图。
具体实施方式
实施例1
取从湖南省涟源采集的野生虎杖茎杆,用无菌水冲洗干净,然后用灭菌滤纸吸干水分,75%乙醇浸泡消毒3-5min,无菌水冲洗3-4次,0.1%升汞消毒30s,再用75%乙醇消毒1min。将根、茎秆韧皮部切去,取木质部用无菌剪刀剪成0.5cm×0.5cm的小块。无菌水冲洗3-4次,于灭菌的研钵中研磨成浆液。研磨浆液无菌水稀释10倍后,移取1ml研磨稀释液,在初筛培养基上常规涂布。每种材料平行3次,分别在28℃培养72-120h,挑选长势良好的不同形态菌落于PDA平板上划线分离,28℃培养72h后,取单菌落3次重复划线分离,得到纯化的虎杖内生菌烟曲霉J3菌株,转接到PDA斜面保藏备用。
将本发明菌株J3于25℃在PDA培养基中培养7天,光学显微镜下观察,菌丝细长、交织分布,有隔膜,无假根,分生孢子梗发生于菌丝,顶囊烧瓶形,分生孢子圆球形、光滑。
上述虎杖内生菌J3,其分类命名为烟曲霉J3(Aspergillus fumigatus)J3,已于2015年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国武汉武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M2015161。
实施例2
1.处理液的制备
配制10g/100mL虎杖煮提液,于121℃高压蒸汽灭菌后,接入本发明的J3菌株,于28℃、180r/min生物转化96h,发酵液10000r/min离心10min。取上清液100mL 60℃旋转浓缩10倍,即得终浓度为1g/mL的本发明菌株J3的发酵液(本文简称J3发酵液),4℃保存备用。以未接入本发明的J3菌株为未发酵液组。
虎杖苷保鲜液(80μg/mL虎杖苷溶液),白藜芦醇保鲜液(80μg/mL白藜芦醇溶液)。
2.实验材料
供试品种为“白兰地”草莓,成熟度为八成熟,采自湖南农业大学草莓园。采摘时选取草莓果实保持生长条件(土壤、湿度、营养等)、成熟度及大小一致,无病虫害及机械损伤。
3.草莓保鲜方法
处理组:将挑选好的供试草莓样品分别浸泡在上述4种处理液中5min,然后用风扇于自然状态下吹干,将处理好的草莓放于室温(10-13℃)中贮藏;
空白对照组:去离子水处理实验草莓,其它操作和保存方法同处理组。
4.草莓果实品质指标测定
草莓果实腐烂率:每天观察试验样品,记录腐烂果实数。
腐烂率(%)=腐烂果实数/总果实数×100%。
草莓失重率:隔天对试验样品用天平称其重量,并做好记录,每处理用果6个,重复3次。失重率(%)=(原有重量-现有重量)/原有重量×100%。
草莓果实可溶性糖:可溶性糖采用蒽酮法测定。参考郝建军方法(赫建军等的植物生理学实验技术[M].化学工业出版社,2006:141-142)制作葡萄糖标准曲线。
草莓可滴定酸:采用滴定法测定。
草莓果实VC含量:采用2,6-二氯靛酚法测定。
可溶性蛋白质含量:参考郝建军方法(赫建军等的植物生理学实验技术[M].化学工业出版社,2006:141-142)制作蛋白质标准曲线。采用考马斯亮蓝法检测可溶性蛋白质。
超氧化物岐化酶(SOD)活性:采用NBT光化还原法。NBT光化还原法测SOD活性,以抑制NBT还原一半表示一个酶活。
过氧化物酶(POD)活性:采用愈创木酚显色法。
纤维素酶活性:采用水浸法提取纤维素酶,滤纸糖化法测酶活,一个酶活单位(U)定义为每10min内释放出1μg葡萄糖所需的酶量。
丙二醛(MDA)含量:采用硫代巴比妥酸显色法测定。
数据统计分析:采用EXCEL软件绘图,SPSS11.0软件进行统计分析。
5.结果与分析
1)草莓果实腐烂率结果如图1所示,由图可知,与空白对照组相比,不同处理液处理对置于室温下草莓的腐烂率有明显的降低作用。空白对照组从贮藏第2天开始腐烂,白藜芦醇组从第3天开始腐烂,虎杖苷、未发酵液及发酵液组第4天才开始出现腐烂。贮藏结束第8天时,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组的腐烂率依次为83.33%、66.67%、67.86%、47.00%、40.81%,各处理组腐烂率均显著低于空白对照组,发酵液组显著低于其它处理组。可见,经各处理液处理后均可延长草莓的贮藏期,其中经J3发酵液处理的腐烂率最低,相比空白对照,贮藏期延长了2天,最利于草莓保鲜。
2)草莓失重率变化见图2,由图可知,随着贮藏时间的延长,各组草莓的失重率都呈上升的趋势。贮藏结束第8天后,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组的失重率依次为14.52%、12.29%、12.85%、10.64%、10.15%,各处理组失重率均显著低于空白对照组,发酵液组失重率最低,显著低于其它处理组。
3)草莓可溶性糖的变化见图3,由图可知,八分熟的草莓在贮藏后两天内糖含量均有上升,贮藏第4天均逐渐下降,贮藏结束第8天时,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组含糖量分别为0.85%、0.80%、0.86%、0.96%、1.04%,下降率依次为22.69%、28.41%、19.5%、16.52%、8.78%,发酵液组下降率不仅极显著低于空白对照组,且显著低于其他处理组。表明,发酵液组可溶性糖变化趋势最小,最有利于草莓中可溶性糖的保护,极大地保持草莓原有风味。
4)草莓的可滴定酸变化见图4,由图可知,各处理组变化总趋势与空白对照组一致,刚采摘的八分熟的草莓可滴定酸含量最高为0.84%;贮藏第2天,各组酸含量迅速下降;贮藏结束第8天时,各组酸含量明显低于入贮时,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组的酸含量依次为0.53%、0.66%、0.61%、0.63%、0.64%,下降率为37.04%、22.22%、27.41%、25.19%、24.0%。各处理组酸含量下降率均显著低于空白对照组,发酵液组下降率(24.0%)显著低于虎杖苷(27.41%)和未发酵液组(25.19%),但显著高于白藜芦醇组(22.22%)。
5)草莓果实VC含量,参见图5,各处理组中VC含量的变化趋势与空白对照组一致,均呈下降趋势,但相比空白对照组,各处理组中VC含量的下降速度较慢。贮藏开始时VC含量为68.79%,贮藏结束第8天时,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组的VC含量依次为29.21%、32.53%、31.63%、39.05%、39.16%,下降率依次为57.53%、52.76%、54.02%、43.23%、43.08%,各处理组VC含量下降率均显著低于空白对照组。表明,相比空白对照组,各处理组均可降低草莓中VC含量的下降。
6)草莓果实可溶性蛋白质含量,由图6可知,在贮藏过程中可溶性蛋白含量变化总体表现为先升后降的趋势。草莓中的蛋白质含量在贮藏前期逐渐升高,在贮藏第2天时达到一个峰值,且各处理组的蛋白质含量增长低于空白对照组,贮藏第2天后,各组蛋白质含量呈下降趋势且下降速度明显低于空白对照组;贮藏结束第8天时,空白对照组、白藜芦醇组、虎杖苷组、未发酵液组、发酵液组的蛋白质下降率为93.35%、76.56%、61.86%、87.90%、69.57%,各处理组的蛋白质下降率显著低于空白对照组。发酵液组的蛋白质下降率(69.57%)显著低于白藜芦醇组(76.56%)和未发酵液组(87.90%),但显著高于虎杖苷组(61.86%)。表明,各处理组均可有效减少可溶性蛋白含量下降,维持细胞内可溶性蛋白含量,有利于减少细胞毒害,达到较好的草莓保鲜效果。
7)草莓果实SOD活性变化如图7所示,贮藏前2天各组草莓的SOD活性缓慢降低,各处理组降低速度均低于空白对照组,随着贮藏时间的延长逐渐上升,第4天时,各组SOD活性达到峰值,在贮藏后期,SOD活性均呈下降趋势,但各处理组下降速度均低于空白对照组。贮藏结束第8天时,各处理组SOD活性显著高于空白对照组,发酵液组的活性显著高于其它处理组。表明,各处理组均可保护SOD活性,有利于清除细胞内自由基,减少其对膜的损伤,从而延缓草莓果实衰老,其中发酵液保持SOD活性效果最佳。
8)草莓POD活性变化见图8,草莓采后贮藏期间POD活性表现为先逐渐上升后下降的趋势。虎杖苷组、未发酵液组及发酵液组的POD活性在第4天出现高峰,并且发酵液组酶活性显著低于虎杖苷、未发酵液组;空白对照组、白藜芦醇组的POD活性在第6天出现高峰;在贮藏结束第8天时,各处理组酶活性均显著低于空白对照组,发酵液组的活性显著低于其它处理组。整个贮藏过程中,发酵液组POD酶活性上升幅度显著高于其它各组,且下降幅度显著高于其它各组,故其最有利于通过调节POD酶活性使草莓预防衰老及延缓褐变起保鲜作用。
9)草莓果实纤维素酶活性变化,参见图9,在贮藏过程中,各处理组与空白对照组草莓的纤维素酶活性都呈上升趋势,贮藏前两天,各组纤维素酶活性迅速上升;而贮藏第2天后,各处理组的纤维素酶的活性上升速度明显低于空白对照组;在贮藏结束第8天时,空白对照组纤维素酶活性最高,发酵液组最低,表明,各处理组均可降低纤维素酶活,可见,各处理组可通过抑制纤维素酶活性而延缓草莓果实软化,起到保鲜作用。
10)草莓果实丙二醛含量由图8可知,在整个贮藏过程中,各处理组与空白对照组的MDA含量均呈上升趋势。贮藏前两天,各组MDA含量增加较迅速,贮藏结束第8天时,空白对照组的MDA含量最高,发酵液组最低。表明,各处理组均能减缓草莓MDA含量的增加,说明各处理液均可通过抑制MDA的产生而减轻对膜的损伤,从而延缓草莓衰老。其中发酵液组减缓草莓MDA含量的增加作用最强。
结合图1-图10,由上分析可知,室温(10-13℃)下,1g/mL发酵液处理草莓贮藏8天后,与空白对照组相比,发酵液组显著降低了草莓的腐烂率(40.81%)、失重率(10.15%),维持较高的可溶性蛋白质(下降率为69.57%)、可溶性糖(下降率为8.78%)、可滴定酸(下降率为22.22%)和VC含量(下降率为43.08%),很好地保护SOD(4.38U/g·min)、POD(17U/g·min)活性,降低纤维素软化酶活性(100.45U/gFW)和抑制MDA的产生(2.57μmol/L),从而显著延缓了草莓的后熟和衰老,提高草莓的保鲜效果,可延长草莓贮藏期2天。与各处理组相比,发酵液组草莓在贮藏期间显著降低腐烂率、失重率,降低营养物质的消耗,更好地保持果实品质,其保鲜效果更佳。本发明菌株J3经发酵后,在保持草莓果实品质效果方面更优于未发酵液组。

Claims (7)

1.一种虎杖内生菌株的发酵液在草莓保鲜中的应用,该菌株为烟曲霉(Aspergillusfumigatus)J3菌株,保藏号为CCTCC M2015161,该发酵液是将该烟曲霉J3菌株接入10g/100mL虎杖煮提液中进行生物转化发酵培养制得。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用是指在降低草莓的腐烂率和失重率方面。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用是指在延缓草莓的可溶性糖、蛋白质、Vc和可滴定酸含量的下降方面。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用是指在减少MDA的增加方面。
5.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用是指在保持SOD和POD的活性方面。
6.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用是指在抑制纤维素酶活性方面。
7.一种虎杖内生菌株的发酵液在制备草莓保鲜剂中的应用,该菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)J3菌株,保藏号为CCTCC M2015161,该发酵液是将该烟曲霉J3菌株接入10g/100mL虎杖煮提液中进行生物转化发酵培养制得。
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