CN104739940B - 治疗风湿骨病的中药组方及其中成药的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明治疗风湿骨病的中药组方，含有甘草、延胡索、三七、骨碎补的有效部位提取物——甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱以及三七皂苷、骨碎补黄酮；所述有效部位配制的质量份数为：甘草皂苷0.01～8；甘草黄酮0.01～2；延胡索生物碱0.01～5；三七皂苷0.01～5；骨碎补黄酮0.01～5。按所述中药组方进行中成药制备的方法包含以下步骤：⑴制备甘草皂苷；⑵制备甘草黄酮；⑶制备延胡索生物碱；⑷制备三七皂苷；⑸制备骨碎补黄酮；⑹配制有效部位组分；⑺制成治疗风湿骨病的中成药片剂或胶囊。本发明的中药组方能减少中成药中的非有效成分、降低毒副作用，在祛风除湿、行气止痛、温经通络诸方面有明显的治疗作用，对风湿骨病有良好的疗效。

Description

治疗风湿骨病的中药组方及其中成药的制备方法

技术领域

本发明属于中医中药技术领域，涉及中药的成药组方，具体涉及治疗风湿骨病的一个中药组方及其中药成药（以下简称“中成药”）的制备方法。

背景技术

风湿痹病是由风寒湿热等外邪入侵而导致经络关节闭阻、气血运行不畅的疾病，其主要临床表现为全身关节呈游走性红、肿、重着和疼痛，俗称“风湿性关节炎”。临床诊断认为：“风湿性关节炎”的发病主要是由于在人体素体虚弱、正气不足、腠理不密、卫外不固的前提下，复感风寒湿诸邪，使气血失运，经络痹阻而致。诸邪先后杂至，各有其特点：痛点不固定或游走性者为风；疼痛剧烈、痛处喜暖畏寒、屈伸不利者为寒；痛处固定、肿胀明显者为湿；痛处红肿灼热、喜凉恶热者为热。此病若日久失治，病邪深入关节骨节，瘀血、痰浊等病理产物会继之而生，它们与邪气胶结，阻痹经络，留滞关节，导致关节疼痛、肿胀、变形或僵直，还可能会伴有关节外多系统受损：关节病变主要表现在四肢大小关节，也可能会累及颈柱关节。

目前，大部分风湿痹病还不能根治。在治疗手段方面，西医主要是通过药物来消除急性发热、发炎、疼痛等症状，使用的药物主要有非甾类抗炎药和肾上腺皮质素类免疫抑制药物，但是，这些药物大多数对人体的重要器官（肝、肾、膀胱、肺、胃肠和生殖腺）以及组织（骨髓）会有不同的毒性作用。因而，西医近年来还在继续寻找有效、理想的风湿治疗药物。中医对风湿痹病的系统研究已有近150年的历史。中医治疗风湿痹病一般以“祛邪、通络、止痛”为基本原则，或以虫蚁通络、或以温经通络、或以活血通络，再辅以健脾、补肾、理气等治疗手段；通常是按“风寒湿痹”和“风热湿痹”两种病型来进行分类治疗的。“风寒湿痹”的治疗方法是：散寒、祛风、除湿、通经活络；其常用的中成药有：风寒湿痹冲剂、风湿关节炎片、颈复康颗粒、腰痛宁胶囊、追风透骨丸、疏风定痛丸、小活络丹、宝光风湿液、风湿骨痛丸、祖师麻片、麝香风湿片、老鹳草膏、史国公药酒、冯了性药酒、骨刺消痛液、护骨酒、木瓜酒等；其外用药有：骨友灵擦剂、麝香壮骨膏、天麻追风膏等。“风热湿痹”的治疗方法是：清热、祛风、除湿、通经活络；其常用的中成药有：湿热痹冲剂、二妙丸、四妙丸、痹隆清安片等。上述中成药对治疗风湿痹病虽然具有较好的疗效，但是，由于药材成分复杂并含有很多非有效物质，且存在药物的毒副作用问题，因此，如何减少中成药中的非有效成分、降低毒副作用一直是现代中药研究的热点之一。

在中药中，同类活性成分组群称为有效部位，可按照其分子结构的基本构架分为生物碱类、黄酮类、皂苷类、挥发油类等。通过系统研究中药复方中有效部位的作用机理以及它们之间的协同及拮抗作用，能够获得更加合理、安全的组方，降低中药的毒副作用，提高药效。

发明内容

本发明的目的在于解决上述问题，提供一种治疗风湿骨病的中药组方，所述中药组方非采用中药药材全粉或粗提物入药，而是采用从中药药材甘草、延胡索、骨碎补和三七中提取的有效部位入药并按比例混合制成；本发明的另一目的是，提供按所述中药组方制备中成药的一种方法，能使所述中药组方进入中医治疗实际领域。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。

一种治疗风湿骨病的中药组方，其特征是，含有生物碱、黄酮、皂苷三类有效部位，所述生物碱为延胡索生物碱，所述黄酮包括甘草黄酮、骨碎补黄酮，所述皂苷包括甘草皂苷、三七皂苷；由所述延胡索生物碱、甘草黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷及三七皂苷按比例混合制成。

进一步，所述有效部位配制的质量份数为：

甘草皂苷 0.01～8；

甘草黄酮 0.01～2；

延胡索生物碱 0.01～5；

三七皂苷 0.01～5；

骨碎补黄酮 0.01～5。

进一步，所述有效部位配制的质量份数为：

甘草皂苷 1～4.5；

甘草黄酮 0.5～1.5；

延胡索生物碱 0.5～2.5；

三七皂苷 0.5～3；

骨碎补黄酮 0.5～3。

为实现上述第二目的，本发明采取了以下技术方案。

一种按照上述治疗风湿骨病的中药组方进行中成药制备的方法，其特征是，包含以下步骤：

（1）制备甘草皂苷

取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，减压浓缩，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将洗脱液减压浓缩至干，干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草皂苷的质量百分比为50%～95%；

（2）制备甘草黄酮

取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后再过HZ915聚酰胺树脂柱；将醇液减压浓缩干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草黄酮的质量百分比为20%～80%；

（3）制备延胡索生物碱

称取延胡索药材进行粉碎，用乙醇溶液加热回流，过滤、离心，采用D101大孔吸附树脂纯化滤液，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩至干膏状，在烘箱中干燥成粉末，获得延胡索提取物；所述延胡索提取物中延胡索生物碱的质量百分比为20%～70%；

（4）制备三七皂苷

称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤、离心，减压浓缩至浸膏；用去离子水溶解，过 HZ-816大孔树脂柱；

重复以上做法一次；

收集乙醇洗脱液，将乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，称重，获得三七提取物；所述三七提取物中三七皂苷的质量百分比为60%～95%；

（5）制备骨碎补黄酮

称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液减压浓缩，将浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，再真空干燥，称重，获得骨碎补提取物；所述骨碎补提取物中骨碎补黄酮的质量百分比为35%～50%；

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 0.01～8；

甘草黄酮 0.01～2；

延胡索生物碱 0.01～5；

三七皂苷 0.01～5；

骨碎补黄酮 0.01～5；

（7）制成治疗风湿骨病的中成药

① 将步骤（6）配制的有效部位组分混合均匀，湿法制粒、然后进行干燥，干燥后的有效部位组分含水率为3～5%；

② 在步骤①干燥后的有效部位组分中加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90%乙醇为粘合剂制成软材，用20目筛制粒，在烘箱内于40～60℃干燥至含水2%～4%，然后用10目筛整粒并加入1%的硬脂酸镁混合，压制成片剂；

③ 在步骤①干燥后的有效部位组分中加入适量二氧化硅，混合均匀；然后定量填充在医用胶囊内，制成胶囊。

进一步，所述甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 1～4.5；

甘草黄酮 0.5～1.5；

延胡索生物碱 0.5～2.5；

三七皂苷 0.5～3；

骨碎补黄酮 0.5～3。

本发明采用的甘草是豆科甘草属植物，其根和茎是最常用的中药。甘草味甘、性平、无毒，含有多种化学成分，其主要成分为甘草酸（也称“甘草皂苷”）、甘草黄酮，具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用，主治五脏六腑寒热邪气，坚筋骨、长肌肉、倍气力、解毒；久服能轻身延年。多数报道认为：甘草皂苷的抗炎机理与抑制前列腺素等介质的作用有关。甘草酸可能通过对花生四烯酸水解所需的磷脂酶A2的抑制来实现抑制前列腺素的合成与释放。

本发明采用的延胡索（Corydalis yanhusuo W. T. Wang ex Z. Y. Su et C. Y.Wu），又名延胡、玄胡索、元胡索、元胡，属罂粟科紫堇属多年生草本植物。延胡索为块茎球形，夏季开花，花瓣呈紫红色，蒴果圆柱形，果子两端渐狭。延胡索的块茎含有20多种生物碱，为常用中药，可用于行气止痛、活血散瘀、跌打损伤等。

本发明采用的三七又名参三七、田七、血山草、六月淋、蝎子草，古时亦称昭参、血参、人参三七、田三七、山漆、三七参等，属伞形目五加科人参属多年生草本植物，是中国特有的名贵中药材，也是中国最早的药食同源的植物之一。三七的根部可入药，性温，味辛，具有散淤止血，消肿定痛的功效。常食三七，对冠心病、心绞痛有预防和治疗作用。由于三七同为人参属植物，而它的有效活性物质又高于和多于人参，因此又被赞为“参中之王”。清朝药学著作《本草纲目拾遗》中记载：“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药中之最珍贵者”。扬名中外的中成药“云南白药”和“片仔癀”即以三七为主要原料制成。

本发明采用的骨碎补，其有效成分为柚皮苷等二氢黄酮苷部分，能用于治疗肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨折伤。

本发明的积极效果是：

（1）本发明的治疗风湿骨病的中药组方按照“标本兼治”的原则，依据祛风除湿、行气止痛、温经通络的治疗方案，不是将中药药材的全粉或粗提物入药，而是采用将甘草、延胡索、三七、骨碎补的有效部位提取物设计组合成一个用于治疗风湿骨病的组方，能减少中成药中的非有效成分、降低毒副作用。

（2）本发明的制备方法步骤明确，可操作性强，提取物的质量百分比较高。

（3）动物实验证明：按照本发明的中药组方治制备的治疗风湿骨病中成药能显著抑制佐剂性关节炎大鼠的继发性足肿胀，降低佐剂性关节炎大鼠血清炎症因子水平，具有防治佐剂性关节炎及祛风除湿、调节免疫的作用；能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致急性足跖肿胀，显著减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，显著延长小鼠热板痛阈值，具有抗炎及消肿止痛作用；能显著改善醋酸致小鼠毛细血管通透性。

（4）动物实验证明：按照本发明的中药组方治制备的治疗风湿骨病中成药（胶囊或片剂）在祛风除湿、行气止痛、温经通络诸方面均有明显的作用，对风湿骨病有良好的疗效。

具体实施方式

以下介绍本发明治疗风湿骨病的中药组方及其中成药的制备方法的具体实施方式，提供11个实施例，以此来详细解释本发明的实施情况以及验证本发明制备的治疗风湿骨病中成药的药效。需要指出的是，本发明的实施不限于以下的实施方式。

实施例1

一种治疗风湿骨病中成药的制备方法，包含以下步骤：

（1）制备甘草皂苷

取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，减压浓缩，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将洗脱液减压浓缩至干，干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草皂苷的质量百分比为50%～95%。

（2）制备甘草黄酮

取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后再过HZ915聚酰胺树脂柱；将醇液减压浓缩干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草黄酮的质量百分比为20%～80%。

（3）制备延胡索生物碱

称取延胡索药材进行粉碎，用乙醇溶液加热回流，过滤、离心，采用D101大孔吸附树脂纯化滤液，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩至干膏状，在烘箱中干燥成粉末，获得延胡索提取物；所述延胡索提取物中延胡索生物碱的质量百分比为20%～70%。

（4）制备三七皂苷

称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤、离心，减压浓缩至浸膏；用去离子水溶解，过 HZ-816大孔树脂柱。

重复以上做法一次。

收集乙醇洗脱液，将乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，称重，获得三七提取物；所述三七提取物中三七皂苷的质量百分比为60%～95%。

（5）制备骨碎补黄酮

称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液减压浓缩，将浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，再真空干燥，称重，获得骨碎补提取物；所述骨碎补提取物中骨碎补黄酮的质量百分比为35%～50%。

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 4.5；

甘草黄酮 0.5；

延胡索生物碱 2.5；

三七皂苷 1.25；

骨碎补黄酮 1.25。

（7）制成治疗风湿骨病的中成药

① 将步骤（6）配制的有效部位组分混合均匀，湿法制粒、然后进行干燥，干燥后的有效部位组分含水率为3～5%。

② 在步骤①干燥后的有效部位组分中按照常规方法加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90%乙醇为粘合剂制成软材，用20目筛制粒，在烘箱内于40～60℃干燥至含水2%～4%，然后用10目筛整粒并加入1%的硬脂酸镁混合，压制成每片500mg的片剂。

③ 在步骤①干燥后的有效部位组分中按照常规方法加入适量二氧化硅，混合均匀；然后定量（每粒胶囊400mg）填充在医用胶囊内，制成胶囊。

实施例2

一种治疗风湿骨病中成药的制备方法，包含以下步骤：

（1）～（5） 同实施例1。

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 8；

甘草黄酮 0.01；

延胡索生物碱 0.01；

三七皂苷 0.01；

骨碎补黄酮 0.01。

（7）制成治疗风湿骨病的中成药（同实施例1）。

实施例3

一种治疗风湿骨病中成药的制备方法，包含以下步骤：

（1）～（5） 同实施例1。

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 0.01；

甘草黄酮 2；

延胡索生物碱 5；

三七皂苷 5；

骨碎补黄酮 5。

（7）制成治疗风湿骨病的中成药（同实施例1）。

实施例4

一种治疗风湿骨病中成药的制备方法，包含以下步骤：

（1）～（5） 同实施例1。

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 1；

甘草黄酮 0.5；

延胡索生物碱 2.5；

三七皂苷 0.5；

骨碎补黄酮 0.5。

（7）制成治疗风湿骨病的中成药（同实施例1）。

实施例5

一种治疗风湿骨病中成药的制备方法，包含以下步骤：

（1）～（5）同实施例1。

（6）配制有效部位组分

将步骤（1）至步骤（5）制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 4.5；

甘草黄酮 1.5；

延胡索生物碱 0.5；

三七皂苷 3；

骨碎补黄酮 3。

（7）制成治疗风湿骨病的中成药（同实施例1）。

实施例6

用实施例1～5制备的治疗风湿骨病中成药进行的动物实验：将本发明实施例1～5制备的治疗风湿骨病中成药用于治疗大鼠的佐剂性关节炎，观察所述治疗风湿骨病中成药对患佐剂性关节炎的大鼠（AA大鼠）继发性足跖肿胀以及对其血清中PGE₂、IL-1β、水平的影响。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：SD大鼠40只，雄性，清洁级，6～8周龄。

3、实验方法

大鼠适应性喂养5天，除正常组之外，其余各组大鼠左后足跖注射0.05mL 5mg/ml弗氏完全佐剂；造模第10天后开始灌胃给药，每日一次，连续14天，给药剂量为：空白组（10mL/kg蒸馏水），模型组（10mL/kg蒸馏水），受试药物组（70mg/kg），阳性对照组（40mg/kg雷公藤多苷片）。给药后，每3天测量一次右足的肿胀度，直至大鼠处死前一天。在第23天时，腹腔麻醉大鼠，从主动脉取血4ml～6ml，然后处死大鼠，在离心机上3000离心15min取血清待测。采用酶联免疫法检测血清中、IL-1β、PGE₂的含量。

4、实验结果

（1）受试药物对患佐剂性关节炎的大鼠（AA大鼠）继发性炎症的影响见表1

表1. 受试药物对AA大鼠继发性肿胀影响（±s，n=10）

注：与正常组比较^**P＜0.01；与模型组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

与正常组比较，致炎后第10天各组造模组的继发性肿胀度均显著大于正常组（P＜0.01），继发性病变的产生，表明造模成功；与模型组比较，16天、19天、22天阳性对照组的肿胀度显著低于模型组（P＜0.05），19天受试药物组的肿胀度显著低于模型组（P＜0.05），表明阳性对照药、受试药物能不同程度的改善大鼠足跖肿胀现象。这也提示：受试药物能够显著抑制AA大鼠继发性足爪肿胀。

（2）受试药物对AA大鼠血清中PGE₂、IL-1β、水平的影响见表2

表2. 受试药物对AA大鼠血清中PGE₂、IL-1β、水平的影响

与正常组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

由表2可知，与正常组大鼠比较，模型组大鼠的血清内PGE₂、IL-1β、水平明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性对照组、受试药物组的PGE₂、IL-1β、水平均明显降低（P＜0.01）；说明阳性对照药、受试药物能够显著降低AA大鼠血清中炎症细胞因子水平，且两组进行比较发现并无显著性差异。

因此，实施例6的动物实验结果说明，根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药在试验所用的剂量水平上能改善大鼠佐剂性关节炎的症状, 控制 AA 大鼠足爪肿胀，降低AA大鼠血清中炎症细胞因子水平，具有防治关节炎、祛风除湿、调节免疫的效果。

实施例7

实施例7基本同实施例6，所不同的是：实施例7是采用二甲苯致小鼠耳肿胀建立反应模型以评价受试药物的抗炎作用。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：昆明种小鼠30只，雌雄各半，清洁级，体重18～22g。

3、实验方法

（1）取小鼠30只，随机分为三组，10只/组，分为空白组、阳性对照组（阿司匹林）、受试药物组。

（2）连续给药5天，每天1次，末次给药后30min，在各小鼠左耳两面涂二甲苯（50ul/只）致炎；右耳为正常耳不涂二甲苯。lh后脱颈椎处死小鼠，用7mm打孔器打下左耳和右耳同一部位的圆片，于分析天平上称重。左耳重量减去右耳重量之差为左耳的肿胀度，计算肿胀率及肿胀抑制率，比较药物的抗炎作用。

4、实验结果

受试药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响见表3。

表3. 受试药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

由表3可知，阳性对照药、受试药物组肿胀率均明显小于空白对照组（^*P＜0.05，^**P＜0.01），其中受试药物组与阳性对照组间没有显著性差异。提示受试药物可有效抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，具有抗炎消肿作用。

实施例8

实施例8基本同实施例7，所不同的是：实施例8是采用角叉菜胶致小鼠足跖肿胀反应建立模型以评价受试药物的抗炎作用。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：昆明种小鼠30只，雌雄各半，清洁级，体重18～22g。

3、实验方法

（1）取小鼠30只，随机分为三组，10只/组，分为空白组、阳性对照组（阿司匹林）、受试药物组。

（2）连续给药5天，每天1次，第5天先测所有小鼠右后肢足跖厚度作为造模前的正常值，末次给药后30 min于每只小鼠右后肢足跖处皮下注射1%角叉菜胶悬液（0．02 ml／只），以建立急性足跖肿胀模型。再分别测定造模后30分钟、1小时、2小时、3小时后小鼠致炎右后足跖的厚度，以肿胀度和肿胀抑制率作为检测指标，采用SPSS统计软件包进行分析。

肿胀度（mm）=致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度。

4、实验结果

受试药物对角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀的影响见表4。

表4. 受试药物对角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀的影响

与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

由表4可知，阳性对照组及受试药物组的肿胀度均小于空白组，表现出明显的抗炎效果及抑制肿胀的作用，并在给药后2～3小时表现出显著疗效（^*P＜0.05，^**P＜0.01），其中，受试药物组与阳性对照组之间没有显著性差异，提示受试药物可有效抑制角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀，具有抗炎消肿作用。

实施例9

实施例9基本同实施例8，所不同的是：实施例9是采用小鼠扭体反应建立模型以评价受试药物的镇痛作用。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：昆明种小鼠，30只，雌雄各半，清洁级，体重18～22g。

3、实验方法

（1）取小鼠30只，随机分为三组，10只/组，分为空白组、阳性对照组（阿司匹林2.5mg/10g）、受试药物组(1.0mg/10g)。

（2）连续给药5天，每天1次，末次给药后30min，在各小鼠腹腔注射0.7%的醋酸0.1ml/10g，观察记录15min内每只小鼠出现的扭体反应（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次数，计算镇痛百分率。

4、实验结果

受试药物对醋酸致小鼠扭体反应的影响见表5。

表5. 受试药物对醋酸致小鼠扭体反应的影响

与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与阳性对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

由表5可知，受试药物能够显著减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，扭体反应抑制率显著高于阳性对照组，显示受试药物具有显著的镇痛效果（△△P＜0.01)。

实施例10

实施例10基本同实施例9，所不同的是：实施例10是采用小鼠热板法建立模型以评价受试药物的镇痛作用。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：昆明种小鼠，30只，雌性，清洁级，体重18～22g。

3、实验方法

（1）取小鼠30只，随机分为三组，10只/组，分为空白组、阳性对照组（阿司匹林）、受试药物组。

（2）将小鼠置于温度55±0.5℃的热板，测定痛阈值，以小鼠舔后足作为观察指标。每组给药前重复测定痛阈值，取两次痛阈平均值作为正常痛阈值。连续给药5天，每天1次。在第五天给药后第0.5h、1h、2h、3h测量小鼠的痛阈值，若小鼠60s内无痛反应，立即取出，按60s计算。记录结果，计算各组痛阈提高百分率。

4、实验结果

受试药物对小鼠热板痛阈值的影响见表6。

表6. 受试药物对小鼠热板痛阈值的影响

与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

表6结果显示，阳性对照组和受试药物组的用药后痛阈增加率均高于空白组，受试药物组用药后半个小时的痛阈值显著延长，提示受试药物可显著延长小鼠对热刺激痛的反应时间，具有明显的镇痛作用。

实施例11

实施例11基本同实施例10，所不同的是：实施例11是采用小鼠腹腔毛细血管通透性法评价受试药物的活血通络作用。

1、受试药物：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药。

2、受试动物：昆明种小鼠，40只，雌雄各半，清洁级，体重18～22g。

3、实验方法

（1）取小鼠40只，随机分为四组，10只/组，分别为空白组、模型组、阳性对照组（阿司匹林）、受试药物组。

（2）连续给药5天，每天1次。于末次给药1 h后尾静脉注射0.5%的伊文思蓝溶液0.01mL/g，随即腹腔注射新配制的0.5%醋酸溶液0.02mL/g，30min后处死小鼠，打开腹腔，用5mL生理盐水冲洗腹腔，将冲洗液离心，以生理盐水为对照溶液，于590nm处测吸光度。

4、实验结果

受试药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响见表7。

表7. 受试药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

由表7可知，各组吸光度均高于空白组，表示染料有不同程度的渗出，造模成功。阳性对照组和受试药物组的吸光度均显著低于模型组，说明阳性药及受试药物均能减少醋酸致小鼠腹腔染料的渗出，能显著改善毛细血管的通透性，提示具有活血通络作用。

本发明的治疗风湿骨病的中药组方按照“标本兼治”的原则，依据祛风除湿、行气止痛、温经通络的治疗方案，采用将甘草、延胡索、三七、骨碎补的有效部位提取物（甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱以及三七皂苷、骨碎补黄酮）设计组合成一个用于治疗风湿骨病的组方，经动物实验的结果证实：根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药可显著抑制佐剂性关节炎大鼠的继发性足肿胀，降低佐剂性关节炎大鼠血清中炎症细胞因子水平，具有防治佐剂性关节炎、调节免疫的作用，能用于风湿骨关节炎的临床治疗。同时，根据本发明的中药组方制备的治疗风湿骨病中成药可显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致小鼠足跖肿胀，减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，延长小鼠对热刺激的痛阈值，改善毛细血管通透性，具有祛风除湿、调节免疫、抗炎消肿、行气止痛、活血通络的作用，对风湿骨病具有良好的疗效。

Claims (2)

1.一种治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，含有生物碱、黄酮、皂苷三类有效部位，所述生物碱为延胡索生物碱，所述黄酮包括甘草黄酮、骨碎补黄酮，所述皂苷包括甘草皂苷、三七皂苷；由所述延胡索生物碱、甘草黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷及三七皂苷按比例混合制成；所述有效部位配制的质量份数为：

甘草皂苷 1～4.5；

甘草黄酮 0.5～1.5；

延胡索生物碱 0.5～2.5；

三七皂苷 0.5～3；

骨碎补黄酮 0.5～3；

所述甘草皂苷的制备为：取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，减压浓缩，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将洗脱液减压浓缩至干，干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草皂苷的质量百分比为50％～95％；

所述甘草黄酮的制备为：取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后再过HZ915聚酰胺树脂柱；将醇洗脱液减压浓缩干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草黄酮的质量百分比为20％～80％；

所述延胡索生物碱的制备为：称取延胡索药材进行粉碎，用乙醇溶液加热回流，过滤、离心，采用D101大孔吸附树脂纯化滤液，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干膏状，在烘箱中干燥成粉末，获得延胡索提取物；所述延胡索提取物中延胡索生物碱的质量百分比为20％～70％；

所述三七皂苷的制备为：称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤、离心，减压浓缩至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱；

重复以上做法一次；

收集用乙醇进行洗脱的乙醇洗脱液，将乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，称重，获得三七提取物；所述三七提取物中三七皂苷的质量百分比为60％～95％；

所述骨碎补黄酮的制备为：称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液减压浓缩，将浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，再真空干燥，称重，获得骨碎补提取物；所述骨碎补提取物中骨碎补黄酮的质量百分比为35％～50％。

2.一种按照权利要求1所述的治疗风湿骨病的中药组方进行中成药制备的方法，包含以下步骤：

(1)制备甘草皂苷

取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，减压浓缩，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将洗脱液减压浓缩至干，干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草皂苷的质量百分比为50％～95％；

(2)制备甘草黄酮

取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后再过HZ915聚酰胺树脂柱；将醇洗脱液减压浓缩干燥，称重，获得甘草提取物；所述甘草提取物中甘草黄酮的质量百分比为20％～80％；

(3)制备延胡索生物碱

称取延胡索药材进行粉碎，用乙醇溶液加热回流，过滤、离心，采用D101大孔吸附树脂纯化滤液，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干膏状，在烘箱中干燥成粉末，获得延胡索提取物；所述延胡索提取物中延胡索生物碱的质量百分比为20％～70％；

(4)制备三七皂苷

称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤、离心，减压浓缩至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱；

重复以上做法一次；

收集乙醇洗脱液，将乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，称重，获得三七提取物；所述三七提取物中三七皂苷的质量百分比为60％～95％；

(5)制备骨碎补黄酮

称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液减压浓缩，将浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，再真空干燥，称重，获得骨碎补提取物；所述骨碎补提取物中骨碎补黄酮的质量百分比为35％～50％；

(6)配制有效部位组分

将步骤(1)至步骤(5)制备的甘草皂苷、甘草黄酮、延胡索生物碱、三七皂苷和骨碎补黄酮按下述的质量份数进行配制：

甘草皂苷 1～4.5；

甘草黄酮 0.5～1.5；

延胡索生物碱 0.5～2.5；

三七皂苷 0.5～3；

骨碎补黄酮 0.5～3；

(7)制成治疗风湿骨病的中成药

将步骤(6)配制的有效部位组分混合均匀，湿法制粒、然后进行干燥，干燥后的有效部位组分含水率为3～5％；

在干燥后的有效部位组分中加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90％乙醇为粘合剂制成软材，用20目筛制粒，在烘箱内于40～60℃干燥至含水2％～4％，然后用10目筛整粒并加入1％的硬脂酸镁混合，压制成片剂；或者

在干燥后的有效部位组分中加入适量二氧化硅，混合均匀；然后定量填充在医用胶囊内，制成胶囊。