CN104737985A - 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法 - Google Patents

一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104737985A
CN104737985A CN201510094866.8A CN201510094866A CN104737985A CN 104737985 A CN104737985 A CN 104737985A CN 201510094866 A CN201510094866 A CN 201510094866A CN 104737985 A CN104737985 A CN 104737985A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mouse
stress
stress model
building
experimental
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510094866.8A
Other languages
English (en)
Inventor
石玉祥
安永福
索慧娜
王晓芳
李英
栾英凡
王艳梅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei University of Engineering
Original Assignee
Hebei University of Engineering
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei University of Engineering filed Critical Hebei University of Engineering
Priority to CN201510094866.8A priority Critical patent/CN104737985A/zh
Publication of CN104737985A publication Critical patent/CN104737985A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，利用摇床模拟运输应激刺激来分别进行应激时间的确定和验证试验。本运输应激模型成本低廉、特征稳定可靠，有效地避免了利用牛、猪等大动物来建立应激模型而面临的难以保证运输应激条件一致性的难题。实验动物越大，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输应激刺激因素和动物保定因素，上述因素对实验结果影响的不确定性就越明显，且所需实验动物费用的开支也会明显增加。所以本发明建立的低成本、特征稳定可靠的模拟运输应激模型方法可以促进运输应激机制和干预措施的研究。

Description

一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法。
背景技术
在大多数应激条件下，动物机体的生物学功能会受到不同程度损伤，如生长发育受阻、生产力及繁殖力下降，这是机体为保证其基本的生命活动所必须付出的代价。动物在应激状态下，如果体内固有的贮备不足以应对应激，机体就会动用本该用于其他生物功能的资源，进而导致这些生物功能的损伤。在运输途中的饥渴、混群、拥挤、高温、颠簸、噪声等运输应激源的综合作用下，牛、猪等动物机体的营养、水分大量消耗和免疫力降低，不仅导致动物生长速度和生产性能降低，还可能继发病原性疾病，对动物的身体健康和生产性能产生极大影响，对养殖业产生严重的经济损失。
为预防牛、猪等动物的运输应激所造成的危害，研究人员开展了大量的试验研究，由于开展动物运输应激试验的实验动物费用较高和激发实验动物运输应激过程比较繁琐，在一定程度上影响了动物运输应激的试验研究。
根据小鼠的生理生化特点，摸索建立运输应激模型，对于研究运输应激机制，筛选有效的干预措施，减小或避免运输应激对动物的危害必要。但直接使用现有的牛、猪等大动物来建立应激模型，面临的最大难题是保证运输应激条件一致性是相当困难的。运输应激刺激是一个复杂的过程，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输应激刺激因素和动物保定因素，实验动物越大，上述因素对实验结果影响的不确定性就越明显。此外所需实验动物费的开支也会明显增加。建立低成本、特征稳定可靠的模拟运输应激模型方法可以促进运输应激机制和干预措施的研究。
发明内容
本发明为了解决上述问题，设计了一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，具体技术方案是：
一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，关键是：本方法步骤中包括：
A、应激时间的确定
将2N只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中N为整数，在22～25℃温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，每摇动满1小时即刻从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，并绘制两组小鼠的血糖、血清乳酸脱氢酶、促肾上腺皮质激素随时间变化的规律曲线，根据规律曲线确定合适的应激时间T；
B、验证试验
再取2M只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中M为整数，在22～25℃温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，摇床连续摇动时间为T，期间观察小鼠行为表现，在T-1及T时刻，分别从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，检测两组小鼠的血清皮质醇、肌酸磷酸水平并进行比较，确定应激时间T的准确性。
实验证明，优选地，所述的摇床的振荡速度为170次/分。
还有，步骤A中摇床连续摇动不少于8小时。
步骤A中所述的应激时间T为4小时。
所述的采血取样方式为先将小鼠断头采血，再将血样静置，待凝集后进行离心处理。
所述的离心处理按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。
所述的实验小鼠中雌、雄各半。
本发明的关键在于：本发明根据小鼠的生理生化特点，而建立运输应激模型，对于研究运输应激机制，筛选有效的干预措施，减小或避免运输应激对动物的危害有着非常重要的作用；另外，本方法的实验过程保证实验动物自身因素、运输应激刺激因素和动物保定因素的稳定，实验结果更加可靠。
本发明的有益效果是：本运输应激模型成本低廉、特征稳定可靠，有效地避免了利用牛、猪等大动物来建立应激模型而面临的难以保证运输应激条件一致性的难题。实验动物越大，运输应激刺激因素包括实验环境条件、实验动物自身因素及运输应激刺激因素和动物保定因素，上述因素对实验结果影响的不确定性就越明显，且所需实验动物费用的开支也会明显增加。所以本发明建立的低成本、特征稳定可靠的模拟运输应激模型方法可以促进运输应激机制和干预措施的研究。
附图说明
图1是小鼠的血糖变化规律。
图2是小鼠的肾上腺皮质激素变化规律。
图3是小鼠的乳酸脱氢酶变化规律。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实验一：运输应激对小鼠血糖、血清肾上腺皮质激素、乳酸脱氢酶影响规律观察：
将50只Km小白鼠(雌、雄各半，体重在18-22g之间)随机分成二组，分别放置在小鼠笼内。在室温(22～25℃)下将一组小鼠于170次/分的摇床上，连续摇动8小时。摇动间隔1小时后，各组取3只小鼠断头采血，放置30min，血标本凝集后，按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。应用ELISAL试剂盒检测血糖、肾上腺皮质激素和血清乳酸脱氢酶的水平。
试验结果：
血糖、血清肾上腺皮质激素和乳酸脱氢酶的检测结果如图1、图2、图3，在受运输应激后，应激小鼠的血糖、肾上腺皮质激素、乳酸脱氢酶均升高，4h后与正常对照组相比，均有显著性差异(P<0.05)；7h后其浓度都高于正常对照组。
实验二:运输应激对小鼠血清皮质醇、肌酸磷酸影响：
将12只Km小白鼠，雌、雄各半，体重在18-22g之间，随机分成二组，分别放置在小鼠笼内。在室温22～25℃下将一组小鼠于170次/分的摇床上，连续摇动4h，试验过程中，观察小鼠行为表现。然后分别在摇动3h、4h时，各组取3只小鼠断头采血，放置30min，血标本凝集后，按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。应用ELISAL试剂盒检测血清皮质醇和肌酸磷酸水平。
试验结果：行为观察结果为小鼠受应激刺激40min后开始产生明显的行为变化，如毛须树立、排便、站立不安、尖叫；3h后眼睛开始流泪，眼周皮毛不洁。
血清检测指标见表1
表1 血清皮质醇、肌酸磷酸的检测结果
注：同列肩标不同字母表示二者之间有显著性差异(P<0.05)；否则为不显著性差异(P>0.05)。
各种应激反应的机理尽管比较复杂,但其反应路径一般认为是:应激源刺激畜禽的末梢感受器,传入神经中枢,下丘脑接受神经和体液途径传来的应激刺激,引起下丘脑兴奋,再引起垂体生理活动,致使促肾上腺皮质激素和肾上腺分泌的增加,糖皮质类固醇、醛固醇、去甲肾上腺素、肾上腺素等激素分泌量增加,这些激素进入血液到达各器官的靶细胞内,作用于细胞核的信使核糖核酸,调节酶和蛋白质的合成,最终形成体内复杂的防卫反应，避免机体受损害。若动物新陈代谢的同化作用占优势,机体的全身非特异性抵抗力提高到正常水平以上,肾上腺皮质激素含量也趋于一致,机体不常用的系统运转起来,直到机体适应新的情况或外界应激因素消失。这样，克服了应激源的作用而获得了适应。糖皮质激素和盐皮质激素则是分别由肾上腺皮质的球状带和束状带分泌的激素，糖皮质激素是调节糖和蛋白质代谢的激素，同时它还有抑制免疫反应和减轻炎症反应的功能；盐皮质激素主要调节水盐代谢，维持内环境的稳定。血清肌酸磷酸酶(creatinine phosphkinaes,CPK)是一种器官特异性酶,其功能是催化磷酸腺苷中的高能磷酸转移到肌酸分子上,生成磷酸肌酸而储存能量。正常情况下CPK由于细胞的屏障作用不易逸出,仅由于细胞的不断更新而少量释放入血。
表1实验结果表明，小白鼠经运输应激刺激4h后，其皮质酮、肌酸磷酸酶水平均有显著升高，与对照组均有显著差异(P<0.05)。

Claims (7)

1.一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：本方法步骤中包括：
A、应激时间的确定
将2N只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中N为整数，在22～25℃温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，每摇动满1小时即刻从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，并绘制两组小鼠的血糖、血清乳酸脱氢酶、促肾上腺皮质激素随时间变化的规律曲线，根据规律曲线确定合适的应激时间T；
B、验证试验
再取2M只体重为18-22g的实验小鼠平均分为实验组、对照组两组，其中M为整数，在22～25℃温度下将实验组小鼠于160-180次/分的摇床上，摇床连续摇动时间为T，期间观察小鼠行为表现，在T-1及T时刻，分别从实验组、对照组中各取小鼠采血取样，检测两组小鼠的血清皮质醇、肌酸磷酸水平并进行比较，确定应激时间T的准确性。
2.根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述的摇床的振荡速度为170次/分。
3.根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：步骤A中摇床连续摇动不少于8小时。
4.根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：步骤A中所述的应激时间T为4小时。
5.根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述的采血取样方式为先将小鼠断头采血，再将血样静置，待凝集后进行离心处理。
6.根据权利要求5所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述的离心处理按3000rpm/min进行离心，离心时间为5min。
7.根据权利要求1所述的一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法，其特征在于：所述的实验小鼠中雌、雄各半。
CN201510094866.8A 2015-03-03 2015-03-03 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法 Pending CN104737985A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510094866.8A CN104737985A (zh) 2015-03-03 2015-03-03 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510094866.8A CN104737985A (zh) 2015-03-03 2015-03-03 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104737985A true CN104737985A (zh) 2015-07-01

Family

ID=53578707

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510094866.8A Pending CN104737985A (zh) 2015-03-03 2015-03-03 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104737985A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106173482A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 中国农业大学 一水肌酸在提高经过宰前运输的北京鸭肉品质中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101324553A (zh) * 2008-07-04 2008-12-17 复旦大学 一种实验动物短途运输应激评价和干预方法
EP2460403A1 (en) * 2009-07-31 2012-06-06 Stelic Institute Of Regenerative Medicine, Stelic Institute & Co. Steatohepatitis-liver cancer model animal
CN103031374A (zh) * 2012-11-06 2013-04-10 中国农业大学 一种用于评价运输应激模型的基因芯片及其应用
CN103750038A (zh) * 2014-01-10 2014-04-30 华中农业大学 抗育肥猪运输应激的饲料预混剂及抗育肥猪运输应激的方法
CN104222523A (zh) * 2014-09-26 2014-12-24 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种抗应激的饲料添加剂及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101324553A (zh) * 2008-07-04 2008-12-17 复旦大学 一种实验动物短途运输应激评价和干预方法
EP2460403A1 (en) * 2009-07-31 2012-06-06 Stelic Institute Of Regenerative Medicine, Stelic Institute & Co. Steatohepatitis-liver cancer model animal
CN103031374A (zh) * 2012-11-06 2013-04-10 中国农业大学 一种用于评价运输应激模型的基因芯片及其应用
CN103750038A (zh) * 2014-01-10 2014-04-30 华中农业大学 抗育肥猪运输应激的饲料预混剂及抗育肥猪运输应激的方法
CN104222523A (zh) * 2014-09-26 2014-12-24 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种抗应激的饲料添加剂及其制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
安永福 等: "抗家畜运输应激复方中药组方的筛选模型", 《中国会议全文数据库》 *
杨斐 等: "短途运输应激对Wistar大鼠的影响", 《中国实验动物学报》 *
胡樱 等: "小鼠短途运输应激及其营养干预的研究", 《实验动物科学》 *
赫荣贺 等: "抗应激复合添加剂对模拟运输应激大鼠血液相关生化指标的影响", 《中国兽医学报》 *
赫荣贺: "复合添加剂对大鼠抗运输应激能力的影响及配伍剂量筛选", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *
饶开晴 等: "大鼠模拟运输应激的效果分析", 《西南民族大学学报（自然科学版）》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106173482A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 中国农业大学 一水肌酸在提高经过宰前运输的北京鸭肉品质中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Olson et al. Allostatic load and preterm birth
Hau et al. Repeated stressors in adulthood increase the rate of biological ageing
Roney et al. Within-cycle fluctuations in progesterone negatively predict changes in both in-pair and extra-pair desire among partnered women
Tahir et al. Meta-analysis of heifer traits identified reproductive pathways in Bos indicus cattle
Han et al. Adolescents’ internalizing and externalizing problems predict their affect‐specific HPA and HPG axes reactivity
Biane et al. Reorganization of recurrent layer 5 corticospinal networks following adult motor training
Witkowska-Piłaszewicz et al. Anti-inflammatory state in Arabian horses introduced to the endurance training
Gong et al. Seasonal dietary shifts alter the gut microbiota of avivorous bats: implication for adaptation to energy harvest and nutritional utilization
Battaglia et al. Targeting Human Glucocorticoid Receptors in Fear Learning: A Multiscale Integrated Approach to Study Functional Connectivity
Hong et al. Differential distribution of melanin-concentrating hormone (MCH)-and hypocretin (Hcrt)-immunoreactive neurons projecting to the mesopontine cholinergic complex in the rat
Trova et al. Sex steroids and the shaping of the peripubertal brain: the sexual-dimorphic set-up of adult neurogenesis
Baker et al. A ryanodine receptor agonist promotes the consolidation of long-term memory in young chicks
Guelfi et al. A cross-talk between blood-cell neuroplasticity-related genes and environmental enrichment in working dogs
CN104737985A (zh) 一种小鼠模拟运输应激模型的建立方法
Engelmann Vasopressin in the septum: not important versus causally involved in learning and memory—two faces of the same coin?
Ross et al. The ATTACH™ program and immune cell gene expression profiles in mothers and children: A pilot randomized controlled trial
Chen et al. mechanical stretch induced osteogenesis on human annulus fibrosus cells through upregulation of BMP-2/6 heterodimer and activation of P38 and SMAD1/5/8 signaling pathways
de Andrés et al. Non-Invasive determination of annual fecal cortisol, androstenedione, and testosterone variations in a herd of male Asian elephants (Elephas maximus) and their relation to some climatic variables
Bagley Fibre type-specific hypertrophy mechanisms in human skeletal muscle: potential role of myonuclear addition
Topczewska et al. Does Experience Make Hucul Horses More Resistant to Stress? A Pilot Study
Logan et al. An extended photoperiod increases milk yield and decreases ovulatory activity in dairy goats
Asundi et al. Evaluation of gene expression through qRT-PCR in cyclically loaded tendons: an in vivo model
Frank et al. Persistence, reward dependence, and sensitivity to reward are associated with unexpected salience response in girls but not in adult women: implications for psychiatric vulnerabilities
Suhita Pengaruh Health Education terhadap Pengetahuan dan Sikap Wanita Dewasa Tentang “Sadari “dalam Upaya Deteksi Dini Ca Mammae di Kediri
Roberts et al. Postexercise myogenic gene expression: are human findings lost during translation?

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150701