CN104721241B - 一种朱槿花苞提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物提取物及其治疗用途，具体涉及朱槿花苞提取物在制备抗菌药物中的应用。本发明公开的朱槿花苞提取物为朱槿花苞经乙醇提取后再分别经正丁醇和乙酸乙酯提取的朱槿花正丁醇部位提取物和乙酸乙酯部位提取物；或者，朱槿花苞经乙醇溶液提取后再用AB‑8柱按顺序使用水、30%乙醇液、60%乙醇液、95%乙醇液洗脱后所收集到的AB‑8柱30%乙醇段部位提取物和AB‑8柱60%乙醇段部位提取物。本发明涉及的朱槿花苞提取物不但具使用后不但皮肤伤口恢复快，而且伤口收缩较好，硬痂基本脱落的优点。

Description

一种朱槿花苞提取物及其应用

技术领域

本发明涉及一种植物提取物及其治疗用途，具体涉及朱槿花苞提取物在治疗皮肤病中的应用。

背景技术

疖痈用现代医学来解释是由于病菌引起的皮肤毛囊、汗腺等组织的感染，出现红肿和脓包等。可见于头面部、颈部、背部、臀部以及腋窝会阴等处。根据病症的轻重，可使用消毒试剂如酒精等清洗，或使用抗生素内服或外用、再严重者则需要引流及用药；若使用传统医学方法，可使用具有相关作用的中草药进行内服外洗，同样也可达到较好的效果。但是轻度的疖痈，特别是出现在颜面部的轻度疖痈，常备称作小疖子或者女性脸上的痘痘，这些都是皮肤毛囊及其附属腺体与外界相通时感染病菌而发生，或者由于自身腺体分泌功能的相关原因而引起。轻度疖痈是十分普遍的皮肤病症之一。

皮肤修复作用在医学中常见的是溃疡，由于皮肤以及软组织的溃烂，需要去除病变组织，重新生长新皮肤组织，直至恢复正常皮肤；此类病症根据轻重，同样可以使用消毒、抗生素、去除腐烂组织后用药以及中医药疗法等。而皮肤修复不仅限于溃疡类医学问题，当今大多针对的皮肤修复的问题可归于美容护理，如晒伤修复、痘印修复等。具有此类功能的药物或者中药材常作为添加剂或者主要成分物质加入化妆品或者皮肤类保健品中，以增加卖点。

现今针对疖痈和皮肤修复病症主要还是抗生素为主，皮肤外用药物如激素、外用抗生素等联合使用；但是对于轻度的皮肤疖痈问题及待修复问题，市场上拥有非常多样的药物及具有一定功能的护理品，或者化妆品。并且以中草药为主要成分的产品，可同时横跨药品和化妆品的范围，如片仔癀、龙珠软膏，云南白药等。各种抗菌消肿的中药乳膏。在各种针对疖痈及修复问题的产品中，黄连、黄芩、黄柏、菝葜等药材或相关成分的添加屡见不鲜，并从粗提取物到单体不等，效果良莠不齐，且一般都为复方中药添加，成分复杂。

发明内容

本发明是提供一种单方中药的提取物，采用朱槿花苞提取物来治疗疖痈、促进皮肤修复、抗菌和增强免疫力。

一种朱槿花苞提取物，经乙醇提取后再经正丁醇提取和朱槿花苞经水或者乙醇溶液提取后再用AB-8柱按顺序使用水、30％乙醇液、60％乙醇液、95％乙醇液洗脱后所收集到的AB-8柱30％乙醇段部位提取物和AB-8柱60％乙醇段部位提取物。

优选的，朱槿花苞乙醇提取物是使用70％-90％的乙醇加热提取，料液比1:7至1:10，加热提取三次，分别60min、30min和30min。

优选的，正丁醇部位提取物、氯仿部位提取物和乙酸乙酯部位提取物在制备时，水和有机试剂的相比为1:1至1:2，萃取8至10次。

优选的，AB-8柱30％乙醇段部位提取物和AB-8柱60％乙醇段部位提取物制备时，洗脱时流速为1ml/min—1.5ml/min，每段冲洗时间为2—4h，使用的每份洗脱液的用量为柱体积的2-3倍。

朱槿花苞提取物在制备治疗疖痈和促进皮肤修复病症药物中的应用。

朱槿花苞提取物在制备增强免疫力的药物中的应用。

朱槿花苞提取物在制备抗菌药物中的应用。

本发明的有益效果为：

(1)本发明公开的朱槿花苞提取物几乎无味，相比其他皮肤病症的药物具有刺激性气味，患者较易接受；

(2)朱槿花苞中微量元素Zn的含量较平均水平高，且Zn不但为多数辅酶的组成关键成分并且具有一定保护皮肤的作用；

(3)本发明公开的朱槿花苞提取物在治疗疖痈和促进皮肤修复中，效果可达到甚至超过抗生素的效果；

(4)本发明公开的朱槿花苞提取物不但具有治疗疖痈和促进皮肤修复作用，还有抗菌和增强免疫力的作用；

(5)使用朱槿花苞提取物，不但皮肤伤口恢复快，而且伤口收缩较好，硬痂基本脱落。

附图说明

图1朱槿花苞乙醇提取物、正丁醇部位和乙酸乙酯部位提取物在治疗疖痈中效果

其中，1a为脓包数量，1b为脱痂康复，1c为康复结果图

图2朱槿花苞正丁醇部位、氯仿部位提取物在促进皮肤修复中效果

图3朱槿花苞提取物的抗菌效果

其中，3a为金黄色葡萄球菌抑菌圈实验背面图，3b为金黄色葡萄球菌抑菌圈实验正面图，1-正丁醇部位，2-乙酸乙酯部位，3-AB-8柱30％乙醇段，4-AB-8柱60％乙醇段；

3c为铜绿假单胞菌抑菌圈实验图，A-正丁醇部位，B-正丁醇水部位，C-乙酸乙酯部位，D-AB-8柱60％乙醇段，3d为乙酸乙酯部位的铜绿假单胞菌抑菌圈实验图

图4朱槿花苞提取物的提高免疫效果图

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

实施例1 朱槿花苞提取物制备

朱槿花乙醇提取物：采摘新鲜朱槿花的花苞，使用70％--90％的乙醇加热提取，料液比1:7至1:10，加热提取三次，分别60min、30min、30min，抽滤三次提取液后合并，置于旋转蒸发仪上45℃浓缩，再转移到蒸发皿中于烘箱中，40℃至50℃烘至干浸膏，得朱槿花苞的乙醇总提取物浸膏；

正丁醇部位提取物和乙酸乙酯部位提取物的制备：将所得提取物浸膏用蒸馏水配制为20mg/ml至50mg/ml浓度的水浸膏液，使用正丁醇、乙酸乙酯分别萃取，水和有机试剂的相比为1:1至1:2，萃取8至10次，合并有机溶剂的萃取液，置于旋转蒸发仪上45℃至55℃浓缩，转移至蒸发皿中于烘箱中50℃烘干；即得相应部位提取物。

AB-8柱水段部位、AB-8柱30％乙醇段部位和AB-8柱60％乙醇段部位的制备：AB-8大孔树脂使用95％乙醇浸泡清洗，之后使用5％HCl溶液冲洗2-3遍，再用2％NaOH溶液冲洗2-3遍，使用大概两倍柱体积的量，最后用蒸馏水冲至中性；朱槿花苞经乙醇溶液提取后的提取物制成上柱样品，湿法装柱，上样浓度为(溶剂为蒸馏水)0.07g/ml--0.15g/ml，上样速度为1ml/min—1.5ml/min，之后使用2—3倍柱体积30％乙醇液、60％乙醇液冲洗，流速为1ml/min—1.5ml/min，每段冲洗时间为2—4h；将所得到的每一段使用旋转蒸发仪浓缩，温度为44℃--55℃，再转移至蒸发皿中置于烘箱中烘干至干浸膏，即得不同极性段部位提取物。

实施例2 朱槿花苞提取物研究所用模型

疖痈模型：实验用KM小鼠，背部剃毛机褪毛，使用酒精擦拭表面，使用10％水合氯醛麻醉小鼠，剂量400mg/kg；配制0.2％巴豆油的松节油合剂(将0.2ml巴豆油溶于100ml松节油中超声混合)，采用皮内注射，每只0.04—0.1ml，根据所需要模型的轻重程度而定。观察结果的标准：疖痈脓包情况、结硬痂情况、溃脓后厚硬痂、脱痂、脱痂恢复正常皮肤。

全层切除模型：试验用KM小鼠，背部剃毛，酒精消毒，使用10％水合氯醛麻醉，剂量为400mg/kg，使用直径为5mm的不锈钢打孔器，打下小鼠背部的皮肤，深至筋膜即可。观察标准：创口情况、创口薄痂、创口结硬痂、无脓厚痂、脱痂康复。

实施例3 朱槿花苞正丁醇部位提取物的药效作用

在朱槿花苞水提物的研究基础上，采用同样方法将朱槿花苞苞水提物和乙醇提取物对比，药效基本一致，但是考虑醇提在过滤和浓缩、烘干以及保存上的优点，采用醇提部位继续研究。

使用疖痈模型验证醇朱槿花苞正丁醇部位、乙酸乙酯部位的药效，阳性药为百多邦。用药9天左右，使用药物浓度80mg/ml—150mg/ml，使用溶剂4％DMSO，同时设定阳性组和溶剂空白对照组；观察用药期间的创口的情况，记录脓包消减情况、结硬痂情况、以及脱痂康复等指标；结果如图1显示正丁醇部位的药效好过乙酸乙酯。

使用全层切除模型再次验证正丁醇部位和氯仿部位的药效。使用实验组药物浓度为100mg/ml—150mg/ml，溶剂为5％DMSO；用药9天左右，结果如图2所示，正丁醇和阳性组一致，最先结硬痂，虽然没有阳性药快速促进大量疮口结痂，但是基本起到促进康复的作用，而脱痂康复的趋势图结果显示正丁醇和阳性药基本达到一致。

实施例4 朱槿花苞提取物的抗菌作用

使用MIC法和抑菌圈实验验证朱槿花苞不同提取物的抗菌作用。

使用菌株为标准金黄色葡萄球菌和标准铜绿假单胞菌，浓度为0.5麦氏浓度。检测药物的浓度范围为2mg/ml—400mg/ml。使用方法按照MIC抗菌实验方法以及抑菌圈实验操作方法；结果如图3所示。

以下均为朱槿花苞相应提取物，如正丁醇部位即为朱槿花苞正丁醇提取部位提取物；原汁液即朱槿花苞捣烂后汁液；红糖原汁液即朱槿花苞加红糖后捣烂所 得汁液；空白对照为5％DMSO溶液。

1.对金黄色葡萄球菌的抗菌作用：

表1 不同有效部位针对金黄色葡萄球菌的抗菌作用研究：

提取物	抗菌活性	MIC(药物浓度)	备注
				乙醇提取物	阴性
正丁醇部位	阳性	70-150mg/ml
				乙酸乙酯部位	阴性
AB-8柱水段	阴性
				AB-8柱30％乙醇段	阳性	2.5-10mg/ml
AB-8柱60％乙醇段	阳性	10-20mg/ml
				原汁液	阴性
红糖原汁液	阴性
				红糖对照	阴性
空白对照	阴性

2.对铜绿假单胞菌的抗菌作用：

表2 不同有效部位针对铜绿假单胞菌的抗菌作用：

提取物	抗菌活性	MIC(药物浓度)	备注
				乙醇提取物	阴性
正丁醇部位	阳性	150-200mg/ml
				乙酸乙酯部位	阳性	37-40mg/ml
AB-8柱水段	阴性
				AB-8柱30％乙醇段	阴性
AB-8柱60％乙醇段	阳性	80mg/ml
				原汁液	阴性
红糖原汁液	阴性
				红糖对照	阴性
空白对照	阴性

3、抑菌圈实验：

实验药物及其配制：

使用溶剂为5％DMSO生理盐水溶液；乙醇提取物配制浓度250mg/ml；正丁醇部位溶液配制浓度200mg/ml-150mg/ml；乙酸乙酯部位药液配制浓度200mg/ml-150mg/ml；AB-8柱水段配制浓度200mg/ml-150mg/ml；AB-8柱30％乙醇段配制浓度200mg/ml-150mg/ml；AB-8柱60％乙醇段配制浓度200mg/ml-150mg/ml。菌液浓度为0.5麦氏浓度；结果如图3所示。

金黄色葡萄球菌抑菌圈实验结果(同等浓度范围)；1-正丁醇部位，抑菌圈较小；2-乙酸乙酯部位，物明显抑菌圈；3-AB-8柱30％乙醇段，抑菌圈较明显；4-AB-8柱60％乙醇段，抑菌圈明显，但不及30％段。

铜绿假单胞菌抑菌圈实验；A-正丁醇部位，可见抑菌圈，但稍模糊；B-正丁醇水部位，未见抑菌圈；C-乙酸乙酯部位，抑菌圈较明显；D-AB-8柱60％乙醇段，抑菌圈不明显；3d为放大的乙酸乙酯部位的抑菌圈，其为铜绿假单胞菌抗菌较明显的部位。

实施例5 朱槿花苞提取物对免疫相关功能影响

针对朱槿花苞苞提取物对免疫功能的影响，采用碳粒廓清实验，反应巨噬细胞的功能；使用KM小鼠，每组10只，按照药理实验中碳粒廓清实验的要求和步骤进行；

分组为：空白组(1％CMC溶液)；阳性药(盐酸左旋咪唑)，剂量30mg/kg，溶液浓度1.5mg/ml；朱槿花苞乙醇提取物，低剂量300mg/kg，浓度20mg/ml；朱槿花苞乙醇提取物，高剂量600mg/kg，浓度40mg/ml；正丁醇部位，低剂量300mg/kg，浓度20mg/ml；正丁醇部位，高剂量600mg/kg，浓度40mg/ml；灌胃体积剂量0.15ml/kg。给药10天，第11天处理。实验结果检测血液OD值、肝重、脾重，采用600nm、650nm、680nm分别测吸光度，然后取最佳数据，即680nm下的数据；按照相应公式计算清除系数k和吞噬指数α，并进行t检验。结果如图4所示，醇提物和正丁醇部位对巨噬细胞的功能具有一定增强作用。

表3 在680nm下的吸光度数据(分别是5min取血和20min取血所得吸光度)

表4 吞噬指数及清除指数

680nm	吞噬指数(修正后)X±SD	清除指数10^-2
			空白组	4.378±1.541	1.691±1.238
阳性组	4.548±0.8797	2.059±1.029
			C0*	5.263±0.5027	2.444±1.032
2C0*	5.011±0.6617	2.561±1.001
			C1**	5.455±0.8843	2.623±0.9862
2C1**	5.469±0.6325	2.712±0.5241

**双侧t检验有意义；*单侧t检验有意义。

Claims (5)

1.一种朱槿花苞提取物，其特征在于，所述提取物为：

朱槿花苞经乙醇提取后再经正丁醇提取的朱槿花正丁醇部位提取物；所述的朱槿花苞使用70％—90％的乙醇加热提取；所述的朱槿花苞使用乙醇提取时，料液比为1:7至1:10；所述的正丁醇部位提取物在制备时，水和有机试剂的相比为1:1至1:2。

2.一种根据权利要求1所述的朱槿花苞提取物在制备抗菌药物中的应用。

3.一种根据权利要求1所述的朱槿花苞提取物在制备增强免疫功能的药物中的应用。

4.一种根据权利要求1所述的朱槿花苞提取物在制备治疗疖痈药物中的应用。

5.一种根据权利要求1所述的朱槿花苞提取物在制备促进皮肤修复病症药物中的应用。