CN104721137A

CN104721137A - 温敏复合脂质体用于水溶性及两亲性抗癌药物的控制释放

Info

Publication number: CN104721137A
Application number: CN201310711063.3A
Authority: CN
Inventors: 戴志飞; 梁晓龙; 蒋灵冬; 井立佳; 靳玉慎; 李小达
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-06-24

Abstract

本发明公开一种对高强度聚焦超声(HIFU)和温度敏感的复合脂质体及其用途，将其用作HIFU或加热作用下药物智能控释的载体。该类载体中包含至少一种用于形成复合脂质体的脂质(CFL)，至少一种热敏磷脂，至少一种溶血磷脂，以及一种具有共价连接聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质。此类复合脂质体的温度敏感区间为39.0℃-45.0℃，具有长循环和对HIFU敏感的特性。本发明还涉及应用HIFU和温敏复合脂质体用于水溶性及两亲性抗癌药物的控制释放。本发明中温敏复合脂质体纳米粒子具有较高的稳定性和很好的生物相容性并对HIFU具有很好的响应能力，在HIFU的照射下水溶性及两亲性抗肿瘤药物能迅速地从温敏复合脂质体中释放出来，呈现显著提高的治疗效果。

Description

温敏复合脂质体用于水溶性及两亲性抗癌药物的控制释放

技术领域

本发明属于生物医用材料领域，具体涉及高强度聚焦超声(HIFU)和温敏的复合脂质体及其用途。

技术背景

常规化疗药物存在半衰期短、副作用强等特点。因此药物载体的研制已成为当今药剂学中一个重要分支。要达到较准确的药物输送，药物载体的可控释放性能是一个必要的条件。理想的药物控制释放技术应该具备以下两个条件(1)药物载体在血液循环过程中稳定，不会产生药物泄漏和在药物到达病变部位过早释放的现象；(2)能在病变部位快速释放。温敏载体的使用提供了一种触发高浓度活性药物在目标区域中迅速释放的可能。温敏脂质体(TSL)，在外部热源的作用下，例如微波或红外激光器，可在局部组织温度升高的区域释放它们所载的药物，以提高局部药物递送效率。温敏脂质体与高温的结合已经呈现出了各种潜在的治疗效果。与在生理温度范围内能保持稳定，不释放药物的非温敏脂质体(NTSL)相比，温敏脂质体在加热时会经历一个相变，呈现出更高的渗透性，快速释放所载药物。

高强度聚焦超声束可以在距波源一定距离的位置校准成一个毫米级面积的焦斑，用于非侵入性消融肿瘤，对肿瘤位置进行较长时间的持续照射，产生热消融和直接杀伤肿瘤所需的升温。与其它方法相比，HIFU作为一种定点刺激工具具有独特的优势，因为它可以传播到深部组织，也可以聚焦到特定的位置。这种局部治疗依赖于药物载体的稳定性和热触发的药物释放能力，以及精确地控制目标区域的温度升高，周围组织尽可能小的升温。一般情况下，载有药物的载体在其物理完整性受到干扰前在生理条件下会保持稳定。一个理想的药物输送过程应该如下：首先，载体装载药物在血液中循环；然后，包载的药物在一个合适的刺激下以一定的速率被控制释放。最近，高强度聚焦超声脉冲波被用来加强温敏脂质体的药物释放。传统温敏脂质体在约42℃-45℃范围内引发，药物释放时间大于30分钟，而低温温敏脂质体(LTSL)能在约39-40℃的温度范围在数秒钟内释放其包载的药物。由于高强度聚焦超声激发，较大脂质体(＞100nm)的破裂和较小脂质体(＜100nm)的膜孔状缺陷的产生可能是导致药物释放的主要原因；在照射期间也会发生惯性空化作用。但是，脂质体主要的缺点是在生理条件下缺乏稳定性，这往往会导致包封的药物在到达目标之前过早释放，造成不良反应。因此，我们迫切需要研发更稳定的温敏脂质体。

近年来，复合脂质体作为新型纳米药物载体引起了人们的广泛的关注。它是一种表面覆盖有一层只有原子厚度的以共价键连接的Si-O-Si网络结构的有机/无机复合脂质体(Chem Commun2009；2032-2034)。与二氧化硅纳米粒子一样，复合脂质体具有很高的稳定性，但是它克服了二氧化硅纳米粒子体内降解困难的缺点。与脂质体一样，复合脂质体具有很好的生物相容性，但是它克服了脂质体稳定性差的缺点。复合脂质体结合了脂质体与二氧化硅纳米粒子的优点，又克服了二者各自的缺点，因此是一种理想的纳米药物载体。由于稳定性提高，复合脂质体可以克服传统脂质体在未到达靶点之前过早释放药物而产生毒副作用的问题，但是，也可能产生一些新的问题：药物在肿瘤区释放太慢，达不到有效的治疗浓度，导致肿瘤的耐药性等等。

为了解决上述问题，本发明在复合脂质体中了掺入了热敏脂质和具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质，以制备一种对HIFU和温度敏感的复合脂质体。将水溶性或两亲性抗癌药物封装在温敏复合脂质体内并递送至肿瘤位置，然后，通过HIFU照射靶向位置产生惯性空化和温度升高，打开复合脂质体壳体，实现其装载药物的定点快速释放。温敏复合脂质体能保证只在需要治疗的指定区域内释放药物，不但增加了药物的局部浓度，提高了对病灶部位肿瘤细胞的杀伤力，达到最大的疗效，而且毒副作用最小，避免了全身给药对人体带来的伤害，同时，热对释放出的药物还可起到增敏效果。这一直接针对肿瘤的非侵入式治疗方式研究处于攻克癌症研究的国际前沿，很有可能会产生可行的临床治疗策略，具有重要的应用前景。

发明内容

本发明提供一种基于HIFU的热敏复合脂质体，是包含聚乙二醇表面修饰和热敏磷脂的复合脂质体，用HIFU控制亲水或两亲抗癌药物的释放。

本发明一个方面涉及一种HIFU和温度敏感的复合脂质体，其组成成分除复合脂质体形成脂质(CFL)外还包含至少一种磷脂，一种溶血磷脂，一种具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质。且所得复合脂质体的相变温度在39.0℃到45.0℃之间。

本发明中，复合脂质体形成脂质包括，但不限于有磷脂链和烷氧基结构的分子，其有如下结构：

所述的复合脂质体形成脂质结构包含三个部分，包括硅烷前体，连接基团和疏水性尾部结构，当m=1时，n=2，3；当n=2时，m=1，2，3，y=1-11，Z=-CH₃或-CH₂CH₃，X代表能够连接无机前体和疏水尾部的任意结构。

在本发明中，HIFU和温度敏感的复合脂质体其表面原子层为硅氧烷共价网络骨架，这种结构极大地增加了其稳定性。

HIFU和温度敏感的复合脂质体还可以包括具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质，其具有长循环和HIFU敏感特性的特性

HIFU和温度敏感的复合脂质体被用于输送抗癌治疗剂。上述复合脂质体形成脂质，磷脂酰胆碱，溶血磷脂，具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质的摩尔比是25-65％∶65-25％∶9-15％∶3-9％；其摩尔比包括但不限

于以下比例：25.95％∶60.55％∶9.7％∶3.8％；

34.60％∶51.90％∶9.7％∶3.8％；

43.25％∶43.25％∶9.7％∶3.8％；

51.90％∶34.60％∶9.7％∶3.8％；

60.55％∶25.95％∶9.7％∶3.8％。

本发明的一个实例采用的摩尔比为43.25％∶43.25％∶9.7％∶3.8％。

在本发明中，磷脂酰胆碱，包括但不限于，二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)，氢化大豆卵磷脂(HSPC)，氢化磷脂酰胆碱(HEPC)，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)，二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)，1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(SPPC)，1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰基卵磷脂(PMPC)，1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)。

在本发明中，所述溶血磷脂包括但不限于磷脂单分子链结构。如1-硬脂酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(MSPC)，1-棕榈酰-2-羟基-sn-甘油基-3-磷脂酰胆碱(MPPC)。

在本发明中，复合脂质体由于加入了具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质，有长循环的特点，这样的脂质包括但不限于PEG的平均分子量是2000的氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE-PEG2000)，PEG的平均分子量是5000的氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE-PEG5000)，PEG的平均分子量是2000的聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)，PEG的平均分子量是2000的聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE-PEG2000)和不同分子量的聚乙二醇修饰的磷脂磷脂酰乙醇胺，神经节苷酯，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚山梨醇酯，泊洛沙姆。

一方面，本发明提供了递送活性剂到患者病灶区的方法。该方法包括以下步骤：(a)将温敏复合脂质体注射入患者体内；(b)HIFU照射至少3分钟使病灶区域升温至41-42℃。另一方面，本发明提供了一种利用此处所述的复合脂质体递送活性剂到患者目标区域中的方法，其中活性试剂包载在温敏复合脂质体的内部空间。

在本发明中，温敏复合脂质体，其中所述触发活性剂释放的热量是由HIFU辐照产生。

在本发明的本实例中，所述的磷脂酰胆碱是二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)。

在本发明的本实例中，所述溶血磷脂是单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC)。

在本发明的本实例中，所述溶血磷脂是单棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)。

在本发明的本实施例中，所述具有长循环特性的材料是聚乙二醇平均分子量为2000的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)。

在本发明中，所述治疗剂可以是水溶性或两亲性治疗剂，成像试剂，诊断试剂或它们的组合。

在另一个方面，本发明提供了温敏复合脂质体的应用，所述治疗性抗癌剂包括，但不限于，盐酸阿霉素，甲氨蝶呤，环磷酸腺苷，环磷酰胺，阿霉素培洛，硝酸卡介苗，阿柔比星，丝裂霉素，氨磷汀，氮芥的一种或两种或多种的混合物。

在本发明中，温敏复合脂质体的粒径在30-500nm的范围内。

本发明的温敏复合脂质体可以使用任何合适的途径注射到目标体中，例如，静脉内给药，动脉内给药，肌内给药，腹膜内给药，皮下给药，关节内给药，鞘内给药，脑室内给药，经鼻喷，肺吸入，口服给药，以及本领域专业人员所熟悉的其他合适的给药方式。本发明的方法可以治疗包括，但不限于，组织，鼻，肺，肝，肾，骨，软组织，肌肉，肾上腺和乳房。

本领域技术人员可以容易地确定本发明中温敏复合脂质体向受试者使用的活性剂的剂量。如本领域已知的，本领域技术人员可以根据载体中活性剂的量来调整剂量。

本发明的优势

本发明包括温敏复合脂质体的优化，通过添加复合脂质体形成脂质和具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质，显著提高HIFU响应，提高载体相对于脂质体的稳定性。所得复合脂质体具有良好的HIFU和温度敏感性，亲水性和两亲性药物的包封率都大于80％。

本发明提供了一种制备生物相容的温敏复合脂质体的方法及其应用。该制备工艺简单，无污染，产量高，成本低，效率高，所得的温敏复合脂质体相比于非温敏复合脂质体能呈现出有效的HIFU响应性能并能显著提高治疗效果，显示出广阔的应用前景。

本发明可以保证药物只在需要治疗的指定区域内发生释放。它不仅能增加药物的局部浓度，达到最大的治疗效果和最小的副作用，而且也可以避免由于全身给药对人体造成的损害。另外，热也能与释放的药物产生协同效应，使治疗效果进一步提高。因此，温敏复合脂质体有望成为能通过HIFU来有效控制释放性能的药物载体，将在不久的未来发挥重要作用。

附图说明

图1表示在HUVECs细胞中加入0.01-1.0mg/mL的不同浓度的温敏复合脂质体和普通脂质体纳米粒子孵育24小时后的细胞存活率；

图2表示包载阿霉素温敏复合脂质体的透射电镜图片；

图3表示大鼠血液中硅元素浓度与时间关系图；

图4表示高强度聚焦超声设备的示意图。(1)超声波发生器；(2)声透镜换能器；(3)超声波束；(4)焦点；(5)37℃水浴温度；(6)反应器(7)胶乳透声膜；(8)HIFU和温度敏感的复合脂质体；(9)热电偶；

图5表示不同参数的HIFU照射下温度随时间的变化。温度用热电偶测量并记录时间。注：初始温度为37℃；

图6表示对温敏复合脂质体在HIFU照射下其内载钙黄绿素的释放百分数随时间的变化。

图7表示对温敏复合脂质体在HIFU照射下其内载盐酸阿霉素的释放百分数随时间的变化。

具体实施方式

下面将详细地描述参照本发明的实例，但本领域技术人员将会理解，以下实例仅用来说明本发明，而不是限制本发明的范围。

在接下来的实例中，具有以下结构的复合脂质体形成脂质(CFL)被选为代表：

实施例1

温敏复合脂质体的制备(CFL：DPPC的摩尔比为3∶7)

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：31.5mg，DPPC：70mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg

(2)制备方法：

根据上面所述，称量各种脂质，复合脂质体形成脂质首先在酸性乙醇溶液中水解。在40℃下孵育30分钟后，将含有DPPC，MSPC和DPPE-PEG2000的氯仿溶液加入到在酸性溶液中水解的脂质中并均匀混合。然后将溶剂用旋转蒸发仪去除，在瓶壁上形成薄膜，在真空下进一步干燥过夜。之后，将100毫升的超纯水加入到小瓶中，在60℃的水浴中孵育30分钟。将混合物涡旋20分钟，随后用探头超声5-10分钟，直到得到清澈透明的溶液。测量之前将所得溶液在室温下孵育24小时。

实施例2

温敏复合脂质体的制备(CFL：DPPC的摩尔比为4∶6)

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：41.9mg，DPPC：60mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg

(2)制备方法：

根据(1)称量各种磷脂，其它操作步骤与实施例1相同。

实施例3

温敏复合脂质体的制备(CFL：DPPC的摩尔比为5∶5)

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：52.5mg，DPPC：50mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg

(2)制备方法：

根据(1)称量各种磷脂，其它操作步骤与实施例1相同。

实施例4

温敏复合脂质体的制备(CFL：DPPC的摩尔比为6∶4)

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：62.9mg，DPPC：40mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg

(2)制备方法：

根据(1)称量各种磷脂，其它操作步骤与实施例1相同。

实施例5

温敏复合脂质体的制备(CFL：DPPC的摩尔比为7∶3)

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：73.4mg，DPPC：30mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg

(2)制备方法：

根据(1)称量各种磷脂，其它操作步骤与实施例1相同。

如表1所示，复合脂质体呈现出140-270nm的水合直径(D_hy)。复合脂质体的Zeta电位测定为-28.6mV～-38.1mV。

表1.各种复合脂质体的成分和物理性质

实施例6

温敏复合脂质体的生物相容性考察

以实施例3的温敏复合脂质体为代表，在37℃下5％CO₂气氛中将人脐静脉内皮细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种在96孔板中。没有细胞的孔作为空白对照。培养24小时后，将培养基更换为最终浓度为分别为0.01，0.05，0.1，0.2，0.5和1.0毫克/毫升纳米粒子的新鲜培养基中。每种浓度加入到三个孔中作为平行对照和无纳米颗粒的孔作为阴性对照。24小时后，20毫升的MTT溶液中加入到每个孔中，并孵育4小时。然后，除去培养基，加入150微升的DMSO溶液。用酶标仪(Multidkan MK3，Thermo)记录在560nm处各孔的吸光度。如附图1所示，用DSPC制备的普通脂质体和温敏复合脂质体都显示出对人脐静脉内皮细胞很低的细胞毒性。当温敏复合脂质体浓度达0.2毫克/毫升时人脐静脉内皮细胞的存活率保持在90％。观察到当温敏复合脂质体的浓度大于0.5毫克/毫升时，细胞活力略有下降，但当温敏复合脂质体的浓度达到1毫克/毫升时脐静脉内皮细胞的存活率仍在80％以上。这表明温敏复合脂质体的生物相容性类似于脂质体。

实施例7

包载阿霉素的温敏复合脂质体的制备

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：52.5mg，DPPC：50mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg，9.13mg阿霉素

(2)制备方法

根据以上所述，称量所需要的各种脂质和药物，复合脂质体形成脂质首先在酸性乙醇溶液中水解。在40℃孵育30分钟后，将溶有DPPC，MSPC和DPPE-PEG2000的氯仿溶液加入到在酸性溶液中水解的脂质中并均匀混合。然后将溶剂用旋转蒸发仪去除，在瓶壁上形成薄膜，在真空下进一步干燥过夜。之后，将溶有所需阿霉素的100毫升超纯水加入到小瓶中，然后在60℃的水浴中孵育30分钟。将混合物涡旋20分钟，随后用探头超声5-10分钟，直到得到清澈透明的溶液。将所得溶液在室温下孵育24小时后再进行其他处理。整个过程需要再避光的条件下进行。未包载的阿霉素使用阳离子交换树脂柱除去，以水作为洗脱剂。包载有阿霉素的温敏复合脂质体的形态如附图2所示。

实施例8

阿霉素药物含量及包封率的测定

与包载紫杉醇的复合脂质体类似，包载阿霉素的复合脂质体首先用盐酸-甲醇溶液破坏。复合脂质体中包载阿霉素的量利用荧光分光光度计测定(激发波长为480nm，发射波长为590nm)。复合脂质体纳米粒子中的载药量，是根据荧光强度/浓度校准曲线计算的。利用荧光荧光分光光度计测量(激发波长为480nm，发射波长为590nm)复合脂质体中阿霉素的量。复合脂质体纳米粒子的载药量，根据荧光强度/浓度校准曲线计算。囊泡的包封率和载药量进行评价由下列公式：

结果表明，包载阿霉素的温敏复合脂质体其包封率和载药量分别为80.5％和3.1％。

实施例9

包载钙黄绿素的温敏复合脂质体的制备

(1)材料和用量：(100ml复合脂质体用量)

CFL：52.5mg，DPPC：50mg，MSPC：7.36mg，DPPE-PEG2000：16.75mg，钙黄绿素9.8mg

(2)制备方法及钙黄绿素载药量和包封率的测定

根据(1)称量各种脂质，其它步骤和实施例7相同。

实施例10

温敏复合脂质体的半衰期

取雄性Wistar大鼠3只，尾静脉注射生理盐水，5min后，心脏取血，置于肝素处理过的离心管中-20℃冰冻保存，备用。取雄性Wistar大鼠3只，实施颈静脉插管手术，禁食、自由饮水12小时后，尾静脉注射纳米粒子分散液(浓度：20mg/mL，注射剂量：0.5mL/只)。分别于给药后0.01、0.5、1、2、4、8、12、24、36、48h取血，每个时间点采集的血液样本体积为0.3ml，置于肝素处理过的离心管中，-20℃冰冻保存，备用。每采血点血液样品(300μL)，先与1mL高氯酸混合加热至液体全部干燥。然后再与1mL浓硝酸混合，在70℃下加热1h后定容至5mL作为待测液。样品中硅元素含量经电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定(附图3)。非房室模型动力学参数如血液中硅浓度最大值(Cmax)、血液中硅浓度下降一半所需的时间即半衰期(T_1/2)、硅元素在体内停留的时间即平均驻留时间(MRT)和时间曲线下的面积(AUCtot)等主要参数的分析所用的软件为KineticaTM。

实施例11

HIFU用于控制体外的药物释放

在本研究中所用的设备是一种自己组装的高强度聚焦超声发生器。它包括两个主要组件：超声波发生器和声学透镜换能器。实验装置示意图如附图4所示。声透镜换能器的有效直径为64毫米，焦距为52毫米，其被安置在一个充满水(37℃)的水槽的底部，超声束向上发射并聚焦在一个直径约3毫米的圆形光斑中。超声波的输出功率可在0-100W的范围内调节和超声波的频率为1.1兆赫。聚焦的超声束穿过透声膜并作用在样品管中包载有尼罗红和钙黄绿素的复合脂质体溶液中。对HIFU照射的时间，位置和输出功率对复合脂质体的释放行为的影响进行了研究。样品架的孵育温度为37℃，用以模拟体内情况。HIFU照射前，水槽上覆盖一层吸声材料，以避免超声波的反射。焦点位置的温度使用热电偶测定，热电偶固定在装满脱气复合脂质体溶液的样品槽中。

实施例12

HIFU照射引起的温度上升

如实例11所述，使用固定在样品槽中部的热电偶检测在不同参数的HIFU照射下样品溶液的温度变化情况，初始温度设定为37℃。结果如附图5所示，在电压为330mV和占空比(DC)为30％的HIFU照射下显示温度在175s内升高到43℃，电压为180mV和占空比(DC)为30％的HIFU照射下显示温度在175s内升高到41℃，电压为185-190mV和占空比(DC)为30％的HIFU照射下显示温度在175s内升高到42℃，因此下面使用HIFU诱导药物释放的实验中使用的是185-190mV的电压和占空比(DC)为30％参数。

实施例13

体外HIFU控制复合脂质体中钙黄绿素的释放

使用荧光变化(淬灭与去淬灭)实验来测定钙黄绿素的释放。钙黄绿素释放百分比的计算方法：

其中F_t是样品在HIFU照射后，立即进行冰浴，然后平衡到室温的荧光强度，F₀是没有进行HIFU照射对照样品的荧光值，F_c是用酸性乙醇溶液破坏粒子后6个样品的平均荧光值。使用荧光分光光度计分别定量各样品中的钙黄绿素，490nm的激发波长和515nm的发射波长。然后将包载钙黄绿素的复合脂质体溶液加入到如实例11所述的反应器中，进行HIFU照射。根据上述方法计算得到的钙黄绿素释放百分比与时间的关系，其结果如附图6所示。没有HIFU照射，复合脂质体是稳定的，在PBS中10分钟无药物渗漏，注意，复合脂质体溶液的温度为37℃。HIFU照射下2分钟检测到约100％的钙黄绿素都能释放出来，实验中温度维持在41-42℃。注意，HIFU照射参数使用的是如实例12中所述的185-190mV的电压和30％占空比(DC)。

实施例14

体外HIFU控制复合脂质体中盐酸阿霉素的释放

使用荧光变化(淬灭与去淬灭)实验来测定钙黄绿素的释放。盐酸阿霉素释放百分比的计算方法：

其中F_t是样品在HIFU照射后，立即进行冰浴，然后平衡到室温的荧光强度，F₀是没有进行HIFU照射对照样品的荧光值，F_c是用酸性乙醇溶液破坏粒子后6个样品的平均荧光值。使用荧光分光光度计分别定量各样品中的盐酸阿霉素，480nm的激发波长和590nm的发射波长。然后将包载盐酸阿霉素的复合脂质体溶液加入到如实例11所述的反应器中，进行HIFU照射。根据上述方法计算得到的盐酸阿霉素释放百分比与时间的关系，其结果如附图7所示。没有HIFU照射，复合脂质体是稳定的，在PBS中10分钟无药物渗漏，注意，复合脂质体溶液的温度为37℃。HIFU照射下2分钟检测到约100％的盐酸阿霉素都能释放出来，实验中温度维持在41-42℃。注意，HIFU照射参数使用的是如实例12中所述的185-190mV的电压和30％占空比(DC)。

Claims

1.一种HIFU和温度敏感的复合脂质体，其组成成分除复合脂质体形成脂质(CFL)外还包含至少一种磷脂，一种溶血磷脂，一种具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质，且所得复合脂质体的相变温度在39.0℃到45.0℃之间，其表面具有共价连接的原子层硅氧烷网络结构。

2.权利要求1中所述的HIFU和温度敏感的复合脂质体，其中所述的复合脂质体形成脂质具有如下结构：

所述的复合脂质体形成脂质结构包含三个部分，包括硅烷前体，连接基团和疏水性尾部结构，m和n分别代表硅烷前体和疏水尾部链的数目，当m＝1时，n＝2，3；当n＝2时，m＝1，2，3；y代表亚甲基的个数，y＝1-11，Z选自-CH₃和-CH₂CH₃，X代表能够连接无机前体和疏水尾部的任意基团。

3.权利要求1中所述的HIFU和温度敏感复合脂质体，由于具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的引入使其具备了长循环的特点，而且对HIFU更为敏感，其中所述的具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子的脂质主要包括，但不限于，PEG的分子量为5000的氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE-PEG5000)，PEG的分子量为2000的聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)，PEG的分子量为2000的氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE-PEG2000)，PEG的分子量为2000的聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE-PEG2000)和不同分子量的聚乙二醇修饰的磷脂磷脂酰乙醇胺，聚乙烯吡咯烷酮，泊洛沙姆，聚山梨醇酯，聚乙烯醇，神经节苷酯。

4.权利要求1-3中所述的HIFU和温度敏感的复合脂质体，其内腔中包载了至少一种治疗剂，优选抗肿瘤治疗剂，这些治疗剂为亲水性或两亲性药物。

5.权利要求1中所述HIFU和温度敏感复合脂质体，其中磷脂酰胆碱包括了二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，氢化大豆卵磷脂(HSPC)，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)，氢化磷脂酰胆碱(HEPC)，二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)，1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(SPPC)，1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)，1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰基卵磷脂(PMPC)，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)。

6.权利要求1中所述HIFU和温度敏感复合脂质体，其中所掺杂的单链溶血磷脂包括1-棕榈酰-2-羟基-SN-甘油基-3-磷脂酰胆碱(MPPC)和1-硬脂酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(MSPC)。

7.所述权利要求1-6中所述的HIFU和温度敏感复合脂质体，其组成成分磷脂酰胆碱，溶血磷脂，具有共价连接的聚(乙二醇)(PEG)分子脂质的摩尔分别为25-65％∶65-25％∶9-15％3-9％，所有脂类的总百分比为100％。

8.权利要求1-7所述的HIFU和温度敏感复合脂质体，当复合脂质体周围或内部温度被HIFU照射或加热至41-42℃时，内部包载的活性剂在小于10分钟内有显著释放，优选小于3分钟。

9.权利要求1-8所述的HIFU和温度敏感复合脂质体，用于将治疗剂输送到患者体内的病灶区域。过程包括以下步骤：(1)将权利要求1-8中的HIFU和温度敏感复合脂质体注射进患者体内；(2)HIFU照射病灶区域至少3分钟使其升温至41-42℃。其特征是药物的释放是由HIFU引起的升温和惯性空化作用引起的。

10.权利要求1-9中所述的HIFU和温度敏感复合脂质体，主要用于癌症治疗用途，包括给患者注射权利要求4中所述的复合脂质体的有效治疗剂量。