CN104693262B - 达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法和药物用途 - Google Patents

达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法和药物用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法和药物用途，属于医药领域。取西洋参茎叶适量，加3-8倍量的60-95％乙醇加热回流提取，每次3-6小时，共提取5-7次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH＝90～120：10～30，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O＝80～90：20～10；乙醇：水＝2:4～6重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。该化合物除具有抗癌活性外，还具有治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤方面的药理作用，可用于制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、星形胶质瘤的药物，具有作用范围广，疗效显著的特点。

Description

达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法和药物用途
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法，和其在制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗癌药物中的应用。
背景技术
西洋参(学名：Panaxquinquefolius)是五加科人参属多年生草木植物，别名花旗参、洋参、西洋人参、Americanginseng，原产于加拿大的大魁北克与美国的威斯康辛州，中国北京怀柔与长白山等地已有大面积种植。古语云：“西洋参性凉而补,凡欲用人参而不受人参之温者皆可用之”。故补而不燥是西洋参的特别之处。近年来，对西洋参的加工方法、化学成分和药理作用探讨颇多。
西洋参化学成分和药理作用研究:
刘金平，等利用反复硅胶柱色谱，C18反相柱色谱，反相HPLC等手段，从吉林省抚松产西洋参(PanaxquinquefoliumL.)茎叶总皂苷中分离得到了26种三萜皂苷类成分，鉴定分别为人参皂苷(ginsenoside)Rb1(2)、-Rb2(17)、-Rb3(7)、-Rc(1)、-Rd(3)、-F2(11)、20(S)-Rg3(23)、20(R)-Rg3(26)、20(S)-Rh2(13)、20(R)-Rh2(14)、绞股蓝皂苷(gypenoside)Ⅸ(10)、-Rg1(19)、20(S)-Rg2(15)、20(R)-Rg2(16)、-Re(8)、-F1(20)、20(S)-Rh1(5)、20(R)-Rh1(6)、-Rg6(21)、伪人参皂苷(pseudo-ginsenoside)F11(24)、-RT5(12)、三七皂苷(notoginsenoside)Fe(25)、珠子参苷(majoroside)F4(18)、西洋参皂苷(quinquenoside)A(4)、-B(9)、-C(22)。其中3个皂苷为新化合物，分别命名为西洋参皂苷(quinquenoside)A、-B、-C。
邱楠楠，等应用多种色谱技术进行分离纯化,从西洋参茎叶中分离得到10个化合物,分别为：拟人参皂苷RT4(1)、拟人参皂苷RT5(2)、24(R)-Ocotillol苷元(3)、20(S)-人参皂苷Rh1(4)、20(S)-人参皂苷Rg1(5)、20(S)-人参皂苷Rg2(6)、20(S)-人参皂苷Rh2(7)、20(R)-人参皂苷Rh2(8)、20(S)-人参皂苷Rg3(9)、拟人参皂苷F11(10)。拟人参皂苷RT4和24(R)-Ocotillol苷元为首次从西洋参茎叶中分离得到。
吕忠智，等研究发现，西洋参茎叶总皂苷静脉注射，对家兔实验性心梗有明显保护作用，使心梗面积缩小，减轻梗塞心肌坏死程度，并可抑制梗塞后血液高凝态的发展。
王羽竹，等也证实，西洋参茎叶皂苷具有增加实验动物心肌血流量，提高心肌抗缺血能力，对实验性心肌损伤具有保护作用。
马文彬，等研究表明，西洋参茎叶皂甙给接种了S180的小鼠口服，可直接作用于肿瘤细胞，通过影响其DNA代谢逐渐抑制肿瘤生长，并使其向低恶性转化，此作用发生发展较慢。西洋参茎叶皂苷优于人参茎叶皂苷。
人参皂苷是西洋参有效成分之一。随着人参皂苷研究的深入，研究人员倾向于认为人参皂苷在保护心肌和癌症的预防和治疗方面具有较强的活性，因此，从西洋参茎叶总皂苷中寻找出有效的单体化合物就很是必要，可为进一步研究抗心肌缺血及抗癌的作用机制奠定坚实的基础。
郝秀华，等报道了从红参中提取达玛-20S,25R-环氧-3β,12β,26-三醇，及其提取方法和其在制备抗药肿瘤药物中的用途(ZL201110295204.9)。
发明内容
本发明提供一种达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇及其提取方法和药物用途。
一种如下式的化合物：
分子式：C30H52O4，分子量：476.4；
化学名称：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇,英文名dammar-20S,25S-epoxy-3β,12β,26-triol。
本发明采取的提取分离方法是：
取西洋参茎叶适量，加3-8倍量的60-95％乙醇加热回流提取，每次3-6小时，共提取5-7次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH＝90～120：10～30，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O＝80～90：20～10；乙醇：水＝2:4～6重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。
本发明是从西洋参茎叶中分离得到的新单体化合物，白色针晶(乙酸乙酯)，mp189-190℃，TLC检测，10％硫酸-乙醇为显色剂，105℃下加热显紫红色斑点。
本发明达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇的晶型单晶表征如下：
正交晶晶格；
晶格参数：α＝90.00°；
空间群：P21；
单位晶格中的分子数：16；
单位晶格体积：
密度：Dcalc＝1.156g/cm3。
本发明达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇在制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗癌药物中的应用。
本发明达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇在制备抗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、星形胶质瘤药物中的应用。
本发明用于制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗癌的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等；当该药物胃肠外给药时，可采取任何常规形式，例如注射剂，软膏剂、栓剂、经皮给药、吸入剂等。
本发明制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗癌的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁、碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水、甘油、1,2-丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油、含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。
本发明的有益效果在于，该化合物属于新化合物，属于首次发现，与其对映体相比，该化合物除具有抗癌活性外，还具有治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤方面的药理作用，可用于制备治疗冠心病，心肌缺血，缺血性休克，心律不齐和再灌注损伤以及抗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、星形胶质瘤的药物，具有作用范围广，疗效显著的特点。
有效物质的剂量可以根据服用方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变，口服量为：8.0～16.0mg/kg，每日两次服用；注射6.0～9.0mg/kg，每日一次。
附图说明
图1是本发明化合物的HR-ESI-MS谱图；
图2是本发明化合物的IR谱图；
图3是本发明化合物的1HNMR谱图；
图4是本发明化合物的13CNMR谱图；
图5是本发明化合物的HMQC谱图；
图6是本发明化合物的HMBC谱图；
图7是本发明化合物的1H-1H-COSY谱图；
图8是本发明化合物的NOESY谱图；
图9是本发明化合物的X-单晶衍射结构图。
具体实施方式
实施例1
取西洋参茎叶2.5kg，加3体积倍量的60％乙醇加热回流提取，每次3小时，共提取5次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH＝90：10，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O＝80：20；乙醇：水＝2:4重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。
实施例2
取西洋参茎叶2.5kg，加5体积倍量的80％乙醇加热回流提取，每次4.5小时，共提取6次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH＝105：20，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O＝85：15；乙醇：水＝2:5重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。
实施例3
取西洋参茎叶2.5kg，加8倍体积量的95％乙醇加热回流提取，每次6小时，共提取7次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH＝120：30，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O＝90：10；乙醇：水＝2:6重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。
下面通过波谱学方法进行结构鉴定。
见附图1，HR-ESI-MS谱给出分子量为477.3944[M+H]+的准分子离子峰，结合1HNMR、13CNMR谱确定分子式为C30H52O4。附图2，IR(KBr)cm-1：3363(OH)；2948，2875(CH3)；1385，1335(CH2)。
1HNMR(500MHz,pyridine-d5)中未给出烯氢质子信号，中场未给出糖质子信号；高场给出7个甲基信号；δ1.63(3H,s),1.38(3H,s),1.23(3H,s),1.05(3H,s),1.03(3H,s),0.91(3H,s),0.90(3H,s)；与人参二醇比较，少一个甲基质子信号。δ3.42(1H，m)为H-3信号，δ2.16(1H，m)为H-17信号；1HNMR谱中还给出其他质子信号。
13CNMR(500MHz,pyridine-d5)中共给出30个碳信号；δ78.06为人参二醇组皂苷C-3位未连接糖的特征信号；56.2为人参二醇组皂苷C-5位的特征信号；将该化合物的13CNMR数据与人参二醇13CNMR数据相比较，结果表明二者的母环部分基本一致，差别在于C-17位所连接的六元环C-25连接有1个甲基和一个羟甲基。
根据该化合物的HMBC谱归属了甲基质子的信号:化学位移为δ0.90的甲基质子与C-8(δ39.34)，C-13(δ49.1),C-14(δ52.1)和C-15(δ31.92)有远程相关，指定为H-30位甲基；化学位移为δ1.05的甲基质子与C-7(δ35.00)，C-8(δ39.34)，C-9(δ50.40)和C-14(δ52.11)有远程相关，归属为H-18位甲基；化学位移为δ1.63的甲基质子与C-24(δ31.86)，C-25(δ77.09)和C-26(δ67.11)有远程相关，指定为H-27位甲基；化学位移为δ1.03的甲基质子与C-28(δ28.05)，C-4(δ39.95)，C-3(δ78.06)和C-5(δ56.29)有远程相关，归属为H-29位甲基；化学位移为δ1.38的甲基质子与C-22(δ27.31)，C-17(δ52.06)，C-20(δ77.87)有远程相关，指定为H-21位甲基；化学位移为δ0.91的甲基质子与C-10(δ37.22)，C-1(δ39.29)和C-9(δ50.54)有远程相关，归属为H-19位甲基；化学位移为δ1.23的甲基质子与C-3(δ78.06)，C-4(δ39.95)，C-5(δ56.29)和C-29(δ16.12)有远程相关，指定为H-28位甲基。化学位移为δ3.91(1H，d，J＝11.5HZ),3.89(1H，d，J＝11.5HZ)的质子与C-27(δ26.87)，有远程相关，指定为H-26位质子信号。C-20和C-25的S构型，是通过其在NOE谱中观察到的(i)H-21和H-17,(ii)H-26和H-21的NOE效应确定的。对从乙腈中重结晶得到的化合物的柱状晶体进行单晶X射线衍射(附图9)，确定C-20和C-25的绝对构型为S构型。结合以上结构信息，化合物的结构被确定为达玛-20S，25S-环氧3β,12β,26-三醇。晶体的数据如下：C30H52O4；Mr＝476.72，晶体尺寸0.42mm×0.38mm×0.26mm,单斜晶体,P21, α＝90.00°，β＝98.47(0)°，γ＝90.00°，Z＝2，Dcalc＝1.156g/cm3，F000＝528.0。数据由智能CCD收集，采用石墨单色仪辐射(λ＝0.71073A)；5181独特的反射收集为θmax＝22.302°，其中观测到4261的反射[F2>2σ(F2)]。通过直接法确定了化合物的结构[SHELXS-97(sheldrick，2008)]，通过F2全矩阵最小二乘法进行结构精修。在结构精修过程中，非氢原子的位置被非均匀地定位。全部氢原子被定位在理想的几何学位置上。最后指数为R＝0.0666,RW＝0.1237和S＝0.1496。
又根据该化合物的HMBC、HMQC谱归属了其他碳、氢信号。数据见表1。1HNMR谱、13CNMR谱、HMQC谱、HMBC谱、NOE谱分别见附图3-8。
综合分析，鉴定该化合物为达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。经ScienceFinder检索未发现有关该化合物的文献报道，为一新化合物。
表1达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇的NMR数据和HMBC相关
本发明达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇的晶型单晶表征如下：
正交晶晶格；
晶格参数：α＝90.00°；
空间群：P21；
单位晶格中的分子数：16；单位晶格体积：
密度：Dcalc＝1.156g/cm3。
下面通过具体药效学实验来进一步说明本发明的效果。
实验例1：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对失血性休克的影响
一、实验材料与方法
材料：beagle犬6只；达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇单晶：10mg/ml水溶液。
方法：将犬用戊巴比妥钠静脉麻醉，仰卧固定于手术台上，分离气管，插气管插管。分离颈总动脉，连接RM-6000四导生理记录仪，测：BP(SBP/DBP)；分离右侧股动脉，测LVSP，LVEDP，±dp/dt；分离右侧股静脉，备给药用。
分离右倾侧股动脉，备动脉放血用，连接心电导联，测ECG计算HR,剑突皮肤处用丝线连接力传感器，测呼吸频率，手术完毕后，稳定10分钟，记录各项正常指标，然后经股动脉放血至盛有0.1％肝素生理盐水贮血瓶中，是动脉平均压降至40mmHg为休克(如放血后，BP急剧下降，可将血液输回动物体内，使动脉平均压维持在40mmHg)。稳定0分钟，动脉平均压不升，按10mg/kg·b给药，观察120分钟各项指标变化，记录给药后1,3,5,10,20,30,45,60,90,120分钟。静脉采血，离心，取血清，测定LPO(八木氏改良法)和SOD。
二、实验结果
1.对平均动脉血压(MBP)的影响
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇小剂量组在给药后20’、30’MBP显著升高，与生理盐水对照组相比，有明显差异(p<0.05)。5’～45’MBP的上升百分率明显高于盐水对照组，两组相比，差异显著(p<0.05，p<0.01，p<0.001)。
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇大剂量组在给药后5’～120’MBP及上升百分率均明显高于盐水对照组(p<0.05，p<0.01，p<0.001)，有非常显著性意义。
多巴胺组在给药后5’～20’MBP明显升高，5’～30’MBP的上升百分率明显高于盐水对照组，与盐水对照组相比有差异显著(p<0.05，p<0.01)。结果见表2-1。
表2-1达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对MBP(Kpa)的影响
续表2-1
续表2-1
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与0.9％NaCl对照组比较。
2.对+dp/dt的影响
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇小剂量组在给药后10’～45’和90’、120’的+dp/dt明显增加，与盐水对照组相比较差异显著(p<0.05,p<0.01)。30’～120’+dp/dt的上升百分率均显著增加，与盐水对照组相比有非常显著意义(p<0.05,p<0.01)。
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇大剂量组在给药后30’～120’+dp/dt及上升百分率显著增加，与盐水对照组相比有非常显著性意义(p<0.05,p<0.01)。
多巴胺组在给药后5’～45’+dp/dt及上升百分率均显著增加，与盐水对照组相比较差异显著(p<0.05,p<0.01)。30’～120’+dp/dt的上升百分率均显著增加，与盐水对照组相比有非常显著意义(p<0.05,p<0.01，p<0.001)。结果见表2-2。
表2-2达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对+dp/dt(Kpa)的影响
续表2-2
续表2-2
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与0.9％NaCl对照组比较。
3.对-dp/dt的影响
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇小剂量组在给药后45’-dp/dt的上升百分率明显高于盐水对照组，与盐水对照组相比较差异显著(p<0.05)。
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇大剂量组在给药后60’-dp/dt明显升高，10’～60’-dp/dt的上升百分率明显高于盐水对照组，两组相比(p<0.05,p<0.01)。
多巴胺组在给药后5’、10’-dp/dt的上升百分率明显高于盐水对照组，与盐水对照组相比较差异显著(p<0.01)。5’～20’-dp/dt的上升百分率明显高于盐水对照组，与盐水对照组相比差异显著(p<0.05,p<0.01)。结果见表2-3。
表2-3达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对-dp/dt(Kpa)的影响
续表2-3
续表2-3
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与0.9％NaCl对照组比较。
心率和呼吸频率：在给药各时间点与休克时相比无明显差异。
结果表明：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇具有抗失血性休克作用。
实验例2：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对正常麻醉犬血流动力学的影响
一、实验材料与方法
材料：beagle犬6只；体重13kg～15kg，雌雄各3只，达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇单晶：10mg/ml溶液；
方法：方法同实验一，故略。
二、结果
1、对过氧化脂质(LPO)的影响
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇小、大剂量组在给药后120’LPO的含量明显低于盐水对照组，两组相比较差异显著(p<0.05)。
多巴胺组在给药后120’LPO的含量明显低于盐水对照组，两组比较差异显著(p<0.05)。结果见表3-1。
表3-1达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对LPO(A/ml)的影响
*p<0.05，与0.9％NaCl对照组比较。
2.对超氧化物歧化酶(SOD)的影响
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇小剂量组在给药后120’SOD的含量及百分率与盐水对照组比较，无显著显著。
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇大剂量组在给药后120’SOD的含量及上升百分率明显高于盐水对照组，两组相比(p<0.05,p<0.01)。
多巴胺组在给药后120’SOD的含量及上升百分率明显高于盐水对照组，两组比较(p<0.01)，结果见表2-2。
表3-2达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对LPO(A/ml)的影响
*p<0.05，**p<0.01与0.9％NaCl对照组比较。
结果表明：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇能显著降低LPO及提高SOD含量，有抗自由基作用。
实验例3：MTT(四唑盐)法测定达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对肿瘤细胞的杀伤作用的选择
(1)试验设计
使用瘤株：SM7721人肝癌细胞株、MCF7人乳腺癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、SHG44人星形胶质瘤细胞株四种人体肿瘤细胞系。(注：不同细胞均采用相同的培养液：DMSO)
(2)试验分组：
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇单晶剂量组：
1.5μg/ml、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、150μg/ml；空白对照组：溶剂；
阳性对照组：5-氟尿嘧啶(1.0μg/ml)。
方法：
①MTT液的配制：250mgMTT，放入小烧杯中，加50mlPBS(pH7.4,0.01M)，搅拌30min，配制成浓度为5mg/ml溶液，用0.22μm的微孔滤器滤菌，分装，4℃保存，两周内有效。
②取对数生长期的肿瘤细胞，加入适量0.25％胰蛋白酶，使贴壁细胞脱落，作细胞计数，一般不着色的活细胞应97％以上，配成6×104/ml细胞悬浮液。
③取96孔平板，每孔加细胞悬液100μl。将平板置37℃5％CO2温箱24h。
④孵育24h后，于96孔板加入100ul/孔不同浓度的SPG-Rg3(SPG-Rg3用无血清培养基稀释，调成所需浓度)，置37℃5％CO2温箱72h。
⑤96孔板每孔加入20ulMTT液(MTT用无血清RPMI1640培养液配成5mg/ml溶液)继续孵育4h，终止培养。
⑥小心吸弃上清液，每孔加入150ulDMSO，震荡10min，使结晶物充分溶解；
⑦用自动化分光光度平板读数计在570nm处测定每个小孔的光密度(OD值)。
⑧结果判定：
a.计算出细胞存活率：
(计算细胞存活率时，将各测试孔的OD值减去本底OD值，各重复孔的OD值取均数±SD)
b.求出T/C＝50％时的药物浓度(IC50)及T/C＝10％时的药物浓度(IC90)。
c.数据使用SPSS软件分析系统进行处理(加权直线回归法)。
(3)结果：实验结果表明：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对4种人体肿瘤细胞均有杀伤作用，结果分别见表4。
表4对SM7721人肝癌细胞株的影响
表5对MCF7人乳腺癌细胞株的影响
表6对Hela人宫颈癌细胞株的影响
表7对SHG44人星形胶质瘤细胞株的影响
表8MTT法测得达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对4种人体肿瘤细胞作用的IC50(ug/ml)
结果表明：达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇对4种人体肿瘤细胞均有一定的杀伤作用。
制备药剂的实施例1：
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇1.0g，以1,2-丙二醇50ml溶解，过滤后分装，每支1ml，含达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇20mg。
制备药剂的实施例2：
达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇10.0g，药用淀粉适量，二者充分混合，装胶囊，制成200粒胶囊，每粒重0.20g，含达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇50mg。

Claims (1)

1.一种达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇的提取方法：其特征在于包括下列步骤：
取西洋参茎叶适量，加3-8倍量的60-95%乙醇加热回流提取，每次3-6小时，共提取5-7次，每次50L，合并提取液，回收溶剂至干；将乙醇提取物经硅胶柱色谱，洗脱剂：CHCl3：MeOH=90~120：10~30，再经C18反相柱色谱，洗脱剂：MeOH：H2O=80~90：20~10；乙醇：水=2:4~6重结晶，得到达玛-20S,25S-环氧-3β,12β,26-三醇。
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