CN104689306A

CN104689306A - 复方蒙脱石溶菌酶软膏及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104689306A
Application number: CN201510151807.XA
Authority: CN
Inventors: 乔敏
Original assignee: SHANDONG SIBANGDE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHANDONG SIBANGDE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-04-01
Filing date: 2015-04-01
Publication date: 2015-06-10

Abstract

本发明涉及一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏及其制备方法和应用。该软膏由以下原料按质量份制成：蒙脱石50～120份、溶菌酶5～10份、聚乙二醇40005～10份、甘油2～6份、山梨醇3～8份、无菌水80～164份。本发明采用蒙脱石、溶菌酶为药物的有效成分,与药用辅料，通过溶解、高温灭菌、滤膜过滤除菌、低速均质、高速均质、搅拌、降温、无菌灌装等工艺制成药剂。本发明还提供该制剂在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用。经过皮肤外用药物给药，对不同时期的皮肤溃疡都具有较好的效果。

Description

复方蒙脱石溶菌酶软膏及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏及其制备方法和应用，属于医药技术领域。

背景技术

皮肤溃疡是临床上较常见的合并症之一，其形成因素多种多样。难治性溃疡常因原发疾病如烧伤、烫伤、糖尿病等病情长期得不到控制而引起，如处理方法不当，可发生局部炎症，甚至引发全身性炎症反应，病程反复，迁延难愈，给患者带来极大痛苦，严重影响其生活质量。

慢性皮肤溃疡又称难治性溃疡，多见于老年人，尤其是在有糖尿病、脉管炎及下肢静脉回流障碍的老年人群中更为常见。随着人口的老龄化趋势及糖尿病、心血管疾病等发病率的增高，慢性皮肤溃疡的发病率也有所上升。临床上因动脉硬化闭塞症、糖尿病、心脑血管疾病及创伤引起的皮肤溃疡越来越多，占外科住院患者的3％左右。由于皮肤溃疡发生在体表，具有病程长、对外观影响大以及并发症多等特点，对患者的生活质量造成了极大的危害。

目前，褥疮·皮肤溃疡的治疗分为全身疗法和局部治疗。全身支持疗法，补充高能饮食，纠正贫血和低蛋白血症。由于长期营养不良，致使皮肤抵抗力低下，皮肤弹性减弱，脂肪层较薄，机体免疫力降低，因此对病人要进行有针对性的饮食护理，给予病人充足合理的营养素，满足病人对营养的需求，要给予高蛋白、高热量、高维生素、富含纤维素饮食，增强机体抵抗力，预防褥疮的发生。局部治疗法是对创伤面进行治疗，根据褥疮不同临床时期，采取相应的治疗措施。局部治疗可分为物理治疗及药物治疗。紫外线照射：紫外线具有杀菌、消炎及干燥作用,对各类细菌感染创面均有较好的杀菌作用。红外线照射：在促进血液循环，增强细胞功能及局部抵抗力的同时，可使创面干燥，减少渗出，有利于组织的再生与修复。

目前临床上采用的物理治疗有：特定电磁波治疗仪辐射治疗、高频电疗和直流电离子导入、WP宽谱治疗仪局部照射、热气流仪吹烤、氧气吹气疗法等。物理疗法适用于临床上Ⅰ～Ⅱ期褥疮的治疗。其功效具有消肿、消炎止痛改善褥疮局部血液微循环、促进剖面修复与再生、控制厌氧菌、加快创面干燥、提高组织含氧量，从而加速褥疮愈合。

人体任何部位，特别是在骨隆起处，长时间过度受压迫，造成局部血液循环障碍，产生缺血、缺氧、营养不良而形成溃疡，称为褥疮，褥疮是常见病、多发病，多见于年老体弱、长期卧床的患者，该病易患难治，往往给患者及其家庭带来巨大的痛苦及经济负担。

目前临床上一般采用传统治疗褥疮的方法即为尽可能地保持伤口干燥，以防止发生细菌感染，吸收和排除伤口渗液，但这些方法也存在缺陷，可使伤口脱水、结痂，在痂皮中混有一些表皮细胞，这些细胞被迫移向干燥痂皮下深处，从而延长了褥疮的愈合过程。

总之，以上治疗方法都存在不同程度的缺陷，使临床应用受到很大限制。为满足广大患者的临床需求，因此,本领域技术人员多年来一直在寻求一种能够研制开发出安全高效，使用方便的治疗皮肤溃疡的外用药物，即复方蒙脱石溶菌酶软膏，以丰富临床用药。

按照中国药典2010版以及欧洲药典、美国药典用于烧伤或严重创伤的软膏剂、乳膏剂、凝胶剂，应是无菌制剂。制剂所用的原料药、辅料以及生产条件不灭菌或灭菌方法不当的话，在临床上容易产生二次染菌，造成创伤面更难愈合,治疗效果很不理想或对溃疡面产生更大的危害。此外，专用于治疗皮肤溃疡(褥疮、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡)的蒙脱石外用药物，特别是复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂尚未见报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏及其制备方法和应用。

术语说明：

本发明所述的皮肤溃疡，是指褥疮溃疡、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡。

溶菌酶，英文名Lysozyme hydrochloride，CAS登录号9066-59-5,市场可购。

本发明技术方案如下：

一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏,由以下原料按质量份制成：

根据本发明优选的,一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏,由以下原料按质量份制成：

根据本发明,进一步优选的；

一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏，由以下原料按质量份制成：

或者,一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏，由以下原料按质量份制成：

根据本发明，所述复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂的制备方法,包括如下步骤：

(1)按配比称取蒙脱石、溶菌酶、聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水备用；

(2)将蒙脱石加入无菌水中，超声分散30～50min，温度控制在38～60℃，超声波频率为30～40KHz，得悬乳液；

(3)将步骤(2)制得的悬乳液于150～160℃温度下，在20～35KHz超声灭菌30～50min，然后冷却至60～70℃，保温备用；

(4)按配比称取溶菌酶，加无菌水溶解，用0.22μm滤膜过滤除菌后，将所得溶菌酶料液输送至已灭菌的罐内,常温备用；

(5)按配比称取聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水各组分混合，继续升温至135～140℃，并保持温度60～90min进行灭菌；输送至已灭菌的罐内存放,在65～70℃保温备用；

(6)在无菌条件下,将步骤(3)(4)(5)所得的物料混合，搅拌均匀；

(7)将步骤(5)所得混和物抽入剪切罐中；在温度55～60℃条件下，开启剪切机低速900～1500r/min剪切3～5分钟，然后高速2000～2400r/min剪切2～3分钟；关闭剪切机，开启搅拌，转速为30～50r/min，继续搅拌3～4分钟，然后再在搅拌转速为20～25r/min继续搅拌，降温至30～35℃时停止搅拌，即得。

将上述产品进行无菌包装，检验，入库。

需要说明的是,在以上制备方法中,所有用于物料输送的管道必须预先通过灭菌处理。就制备方法而言,以上是本发明的优选方法,但不限于此。本领域的技术人员根据其熟知的知识,可以适当加以调整。以上所述复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂制备方法中为特别限定的,可参照现有技术。

本发明还提供复方蒙脱石溶菌酶软膏在制备治疗皮肤溃疡的药物中的应用。所述的皮肤溃疡，包括褥疮溃疡、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡。

本发明所述的制备方法中复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂质量标准如下、但不限于此。

复方蒙脱石溶菌酶软膏质量标准

本品含蒙脱石应为标示量的97.0％～110.0％；溶菌酶应为标示量的94.0％～110.0％。

【形状】本品为类白色软膏剂。

【鉴别】

(1)取本品适量(相当于2mg溶菌酶)，加水5ml使溶解，加10％氢氧化钠溶液5滴与10％硫酸铜溶液1滴，混匀后显紫红色。

(2)取本品适量，加醋酸－醋酸钠缓冲液(取无水醋酸钠6.7g，加水约900ml，振摇使溶解，用醋酸调节pH值至5.4，加水稀释至1000ml,摇匀。)制成每1ml中含溶菌酶0.4mg的溶液，照分光光度法《中国药典2010年版二部附录ⅣA》测定,在280nm的波长处有最大吸收，吸收度应为0.39～0.49。

(3)取4g复方蒙脱石溶菌酶软膏，加水50ml搅拌后,过滤，取滤饼用1000ml水反复冲洗三次，取滤饼在105℃烘干，上述得到的蒙脱石研磨成细粉；取细粉适量，置于载样架上，将载样架放入干燥器(含饱和氯化钠溶液，20℃时相对湿度约75％)中约12小时后取出，将载样架上的样品压平，按照X-射线粉末衍射法(中国药典2010年版二部附录IX F)测定，在衍射角(2θ)2°至80°的范围内扫描，得到的蒙脱石X-射线衍射图谱。蒙脱石标准品X-射线衍射图谱中的蒙脱石特征峰〔衍射角(2θ)分别约为5.8°、19.8°和61.9°〕一致。

【检查】粘度依照《中国药典2010年版二部附录ⅥG第二法》；黏度(Pa.s)48～69。

粒度照粒度和粒度分布测定法《中国药典2010年版附录ⅨE第一法》检查，均不得检出大于90μm的粒子。

无菌照无菌检查法《中国药典2010年版附录ⅪH》检查，应符合规定。

其他本品应符合《中国药典2010年版附录ⅠF》软膏项下的其他要求。

【溶菌酶含量】

供试品溶液的制备称取软膏适量(相当于溶菌酶25mg)，置试管中，加水20ml搅拌后，过滤，取滤饼用80ml水反复冲洗三次，滤液合并至100毫升量瓶中，用pH6.2磷酸盐缓冲溶液定刻度。精密移取2mL置50ml容量瓶中，加pH6.2磷酸盐缓冲液至刻度，做为供试品溶液备用。

标准品溶液制备精密称取溶菌酶标准品25毫克，置100ml容量瓶中，加磷酸盐缓冲溶液溶解，定容至刻度。分别精密移取1mL、2mL溶液置50ml容量瓶中，加pH6.2磷酸盐缓冲溶液至刻度，做为标准溶液(1)及标准溶液(2)。样品溶液，标准溶液(1)标准溶液(2)置冰浴中保存。

底物悬浮液的制备称取溶酶小球菌15～20mg，加磷酸盐缓冲液(pH6.2)0.5～1ml,在研钵内研磨3分钟，再加磷酸盐缓冲液(pH6.2)适量，使总体积约为50ml，使悬浮液于25±0.1℃时，在450nm的波长处测得的吸收度为0.70±0.05(临用前配制)。

测定法精密量取溶菌酶底物试液4ml，在35℃水浴中加热5分钟，精密移取在水浴提前加热3分钟的样品溶液100μl，加入底物试液中，并在35℃水浴中加热10分钟后，再精密量取1mol/L的盐酸溶液0.5mL加入底其中，摇匀。以水做为空白，在波长640nm处，紫外可见分光光度法测量样品溶液的吸收值Ast。标准溶液(1)、标准溶液(2)按以上方法测定吸光度As₁、As₂。

Ws：溶菌酶标准品称取量

Wt：样品称取量×规格

As₁：标准溶液(1)吸收度

As₂：标准溶液(2)吸收度

【蒙脱石含量】

取4g复方蒙脱石溶菌酶软膏,加水50ml搅拌溶解后,过滤，取滤饼用1000ml水反复冲洗三次，取滤饼在105℃干燥至恒重，即得供试品中所含蒙脱石的重量，计算，即得。

本发明的治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏，它采用蒙脱石和溶菌酶为本发明药物的有效成分，与药用辅料制成药剂，经过皮肤外用药物给药，对不同时期的褥疮还是对糖尿病并发症引起的皮肤溃疡的治疗，都显示了它具有高渗、杀菌，其中所具备的特点如下：

1、复方蒙脱石溶菌酶软膏中的溶菌酶具有促进纤维芽细胞的增殖作用、促进试验性创伤愈合作用、促进结缔组织纤维形成作用等药理作用。复方蒙脱石溶菌酶软膏中的活性成分溶菌酶为一种粘多糖溶解酶，其通过水解破坏组成细菌细胞壁的肽糖分子的由N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖氨之间的β-(1，4)糖苷键，使细胞因渗透压不平衡引起破裂，从而导致菌体细胞壁溶解而杀死细菌。

2、复方蒙脱石溶菌酶软膏中的蒙脱石是一种安全无毒天然药物，用药后，不被皮肤所吸收，不进入血液循环，并且蒙脱石局部形成负电性，而层与层之间则带正电，电荷分布呈多态微相分离结构。这样，借助静电作用，蒙脱石可与带电性生物分子及细菌、病毒、毒素产生相互作用，将其固定、清除；达到祛腐、生肌、促进溃疡愈合。且蒙脱石外敷于创面，由在水肿组织外形成高渗状态，改变局部的渗透压，从而将水肿组织内多余水分吸出，能减轻局部创口水肿程度，加速肉芽组织生成，加速愈合，能达到收敛生肌的目的。

3、蒙脱石联合溶菌酶治疗皮肤溃疡，起到协同作用。其特点是抑菌力强、无味、性能稳定、无刺激性、毒性低、能抑制细菌、病毒、真菌、芽孢及原虫等，对创面愈合无干扰作用，应用胜过其他任何一种伤口护理产品。本发明制剂中加入蒙脱石，一方面对溶菌酶起到稳定性作用，另一方面持续性缓慢释放溶菌酶以达到延长药效的目的。二者联合应用从而促进褥疮的快速愈合。将其制成复方剂型完全符药物用药的特点及临床治疗的特点。

4、本发明的复方蒙脱石溶菌酶软膏为皮肤局部外用无菌制剂，制备工艺中最关键的就是灭菌技术。本发明制剂产品有效成分溶菌酶高温条件下易发生变性，不适于采用高温灭菌法。考虑到溶菌酶在水中溶解性较好，根据本品生产过程中，本发明先将溶菌酶溶解后再加入到水相中，选择过滤法灭菌，以保证本制剂既符合国家药典要求，又能达到灭菌的目的。根据本发明制剂辅料各成分的理化性质,如果采用非热力灭菌方法，如过滤法，因基质黏稠，难以过滤。经综合考虑本制剂的特点，本发明特别采用高温湿热灭菌工艺对制剂辅料的水相进行灭菌。

综上，本发明的治疗皮肤溃疡(褥疮、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡)的外用药物的复方蒙脱石溶菌酶软膏无菌制剂，采用蒙脱石、溶菌酶为本发明药物的有效成分与药用辅料，通过溶解、高温灭菌、滤膜过滤除菌、低速均质、高速均质、搅拌、降温、无菌灌装等工艺制成药剂。经过皮肤外用药物给药，对不同时期的皮肤溃疡(褥疮、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡)都显示了它具有较好的临床作用。更为详细的效果实验将在实施例中予以说明。

下面结合实验例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

实验例1：蒙脱石灭菌试验

在本发明中,活性成分蒙脱石是由颗粒极细的含水铝硅酸盐构成的层状矿物,由基性火成岩在碱性环境中风化而成，也有的是海底沉积的火山灰分解后的产物。依据中国药典2010年版(附录IF)规定，用于大面积烧伤或严重创伤的皮肤时，应达到无菌的要求。因此，本制剂原辅料需要灭菌，在无菌环境中制得无菌制剂，以供临床使用。目前市场上的蒙脱石灭菌方法均采用Co⁶⁰辐射方法,国家卫生部有关Co⁶⁰辐照灭菌剂量标准《卫药发1997第38号》通知中，Co⁶⁰辐照灭菌最大剂量为6KGY。由于蒙脱石是一种矿物药物,Co⁶⁰辐照剂量6KGY无法穿透蒙脱石，造成灭菌效果较差，而只有提高Co⁶⁰辐照剂量为15KGY，远远超过国家卫生部规定的6KGY最高剂量。研究蒙脱石灭菌方法是确保蒙脱石药物符合质量标准的前提下，保证蒙脱石药物能够安全使用，具有重大的创新突破。

不同的湿热灭菌和时间对蒙脱石湿热灭菌效果的比较,见表1：

表1 蒙脱石湿热灭菌效果比较

由表中可分析出：

1.湿热灭菌温度在130～140℃(超声20KHz)，时间在30～50min条件下,蒙脱石X-射线衍射图谱符合中国药典2010增补版规定，表明在此条件下未对蒙脱石化学结构发生破坏，但无菌检查，不符合规定。

2.湿热灭菌温度在150℃(超声20KHz)，时间在30～50min，蒙脱石X-射线衍射图谱符合中国药典2010增补版规定，表明在此条件下未对蒙脱石化学结构发生破坏，无菌检查，符合规定。

实验例2：蒙脱石对溶菌酶溶出度影响作用试验

本发明制剂中加入蒙脱石，一方面对溶菌酶起到稳定性作用，另一方面持续性缓慢释放溶菌酶以达到延长药效的目的，并对其溶出度进行试验；

取实施例1～3的复方蒙脱石溶菌酶软膏各2g，照《中国药典2010年版二部》(附录X C)第二法溶出度测定法，以经脱气处理后的1000ml水为溶出介质，转速为75转±5转/分，依法操作，分别于5min、10min、20min、30min、45min，取样20ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定溶菌酶的效价并换算成含量。

复方蒙脱石溶菌酶软膏溶出度试验表明：复方蒙脱石溶菌酶软膏中的溶菌酶成分在45min内持续性缓慢释放。见表2。

表2 复方蒙脱石溶菌酶软膏中的溶菌酶含量

结果表明：复方蒙脱石溶菌酶软膏实施例1～3的溶出度均在80％以上。以时间(分钟)对其溶出量(％)作曲线，即得各样品的溶出曲线，见附图1～3。

实验例3：蒙脱石对溶菌酶含量影响作用试验

考察加入蒙脱石对溶菌酶活性起到保护作用；见表3。

表3 蒙脱石用量筛选单位(g)

处方组分	1	2	3	4	5
						溶菌酶	5	5	5	5	5
聚乙二醇4000	5	5	5	5	5
						甘油	2	2	2	2	2
山梨醇	3	3	3	3	3
						蒙脱石	0	30	50	55	60
注射用水	100	100	100	100	100

用实施例1的方法制备；对其5个处方所制备的软膏进行12个月的考察，按照复方蒙脱石溶菌酶软膏质量标准，对加入蒙脱石所产生的溶菌酶含量分析；见表4。

表4 溶菌酶含量分析

处方评价及结果：

处方1：复方蒙脱石溶菌酶软膏为色泽均匀，但溶菌酶含量低；

处方2：复方蒙脱石溶菌酶软膏为色泽均匀，但溶菌酶含量较低；

处方3：复方蒙脱石溶菌酶软膏为色泽均匀，溶菌酶含量稳定；

处方4：复方蒙脱石溶菌酶软膏为色泽均匀，溶菌酶含量稳定；

处方5：复方蒙脱石溶菌酶软膏为色泽均匀，溶菌酶含量稳定。

结果分析：以上处方软膏成型较好；处方1、2中蒙脱石用量低，造成溶菌酶含量较低，不适合本制剂的要求。处方3、4、5成型较好；溶菌酶含量稳定，适合要求，由此可见加入蒙脱石对溶菌酶活性起到保护作用。

实验例4：复方蒙脱石溶菌酶软膏中蒙脱石吸附力作用

本发明制剂中加入蒙脱石，一方面对溶菌酶起到稳定性作用，另一方面持续性缓慢释放溶菌酶以达到延长药效的目的，并对其溶出度进行试验。

取实施例1～3的复方蒙脱石溶菌酶软膏各2g,加水50ml搅拌后,过滤，取滤饼用1000ml水反复冲洗三次，取滤饼在105℃烘干，取试制样品适量(约相当于蒙脱石0.20g)，置具塞锥形瓶中，精密加入磷酸盐缓冲液(pH6.8)10ml，振摇1小时，放置24小时，精密加入硫酸士的宁溶液(取硫酸士的宁2.00g，置100ml量瓶中，加水适量，水浴加热溶解，放冷至室温，加水至刻度，摇匀)10ml，置37℃水浴中，振摇1小时，滤过，精密量取续滤液10ml，置250ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH6.8)稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml量瓶中，加磷酸盐冲液(pH6.8)稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录Ⅳ A)，在254nm的波长处测定吸光度；另取上述硫酸士的宁溶液适量制成每1ml含20μg的硫酸士的宁磷酸盐缓冲液(pH6.8)溶液，同法测定吸光度，并计算吸附力。

A₁：硫酸士的宁对照溶液吸光度；A₂：供试品溶液吸光度；M₁：硫酸士的宁重量；

M₂：供试品重量；M₃：平均装量；D₁：硫酸士的宁对照溶液稀释倍数；D₂：样品溶液稀释倍数；G：标示量。

结果：通过研究确定测定方法，并对复方蒙脱石溶菌酶软膏实施例1～3样品、三批样品测定、复核，吸附力均在0.35～0.55g/g范围内。见表5：

表5 复方蒙脱石溶菌酶软膏中蒙脱石吸附力

结果表明：复方蒙脱石溶菌酶软膏实施例1～3的蒙脱石吸附力，符合中国药典2010版二部增补版要求，表明复方蒙脱石溶菌酶软膏中的溶菌酶以及辅料，未对蒙脱石的理化性质产生影响。

实验例5；原辅料相容性试验

本发明复方蒙脱石溶菌酶软膏研究过程中选用的蒙脱石、溶菌酶，尤其是辅料在处方中的应用，需进行原辅料的相容性试验，原辅料相容性试验如下；

将原料与所选辅料按一定比例物理混合，按照中国药典2010版二部(附录ⅪXC)原料药与药物制剂稳定性试验指导原则中影响因素的实验方法，分别在高温60℃±2℃、湿度90％±5％、强光4500±500lx的条件下放置10天，检查放置前后变化。试验结果如下：

1、高温条件原辅料相容性试验

将原辅料按照一定比例混合，暴露置高温60℃±2℃条件下10天取样，检验结果见表6：

表6 原辅料相容性试验(60℃±2℃)10天

经高温60℃±2℃条件下10天相容性试验，结果显示各辅料性状、含量均无变化。水分检查结果显示随时间延长而有所降低。

以上结果表明蒙脱石+溶菌酶在高温60℃±2℃条件下与辅料相容性良好。

2、光照条件原辅料相容性试验

将原辅料按照一定比例混合，暴露置光照(4500±500lx)条件下10天取样，测定各项指标，结果见表7。

表7 原辅料相容性试验光照(4500±500lx)10天

以上结果表明蒙脱石+溶菌酶在光照(4500±500lx)条件下与辅料相容性良好；经光照(4500±500lx)条件下10天相容性试验，结果显示各辅料性状、含量均无变化。

3、高湿条件原辅料相容性试验

将原辅料按照一定比例混合，暴露置高湿(90％±5％)条件下10天取样，测定各项指标，结果见表8。

表8 原辅料相容性试验高湿(90％±5％)10天

经高湿90％±5％条件下10天相容性试验，结果显示各辅料性状、含量均无变化。因本法为物料暴露于高湿条件下，故水分有所增加。

以上结果表明蒙脱石+溶菌酶在高湿90％±5％条件下与辅料相容性良好。综合试验结果表明制剂应密封保存。

实验例6复方蒙脱石溶菌酶软膏的长期稳定性试验

将实施例1制备的复方蒙脱石溶菌酶软膏在上市规定的贮存条件下进行长期稳定性试验，考察复方蒙脱石溶菌酶软膏在运输、保存、使用过程中的稳定性特征，从而作为确定有效期和贮存条件的依据。将采用铝塑管包装的复方蒙脱石溶菌酶软膏样品，放置于25℃±2℃、RH60％±10％的恒温、恒湿箱中放置24个月，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样，检测各项质量指标。结果见表9。

表9 复方蒙脱石溶菌酶软膏长期稳定性试验

结果：经长期稳定性24个月的考察，结果显示与0月比较各项指标无明显变化，表明复方蒙脱石溶菌酶软膏在25℃±2℃、RH60％±10％条件下稳定性良好，在规定的各项条件下生产、包装、贮存、运输均不会对本品的质量产生不利影响，可保障临床用药安全有效。

实验例7、复方蒙脱石溶菌酶软膏家兔皮肤刺激试验

1仪器与材料

1.1仪器ACS—A型电子计重秤(上海友声衡器有限公司)；KH-Q2016组织切片机；KH-TOb组织脱水机；BL2000病理图像诊断系统；Olympus生物显微镜。

1.2试药：复方蒙脱石溶菌酶软膏；实施例1制得；硫化钠(成都市科龙化工试剂厂)。

1.3动物：雌性日本大耳白兔(家兔)12只,体重2.0～2.5kg,购自山东大学动物中心。

2局部刺激性实验

2.1分组：取家兔12只，6只作为完整皮肤给药,分为完整皮肤阴性对照侧(纯化水)和完整皮肤复方蒙脱石溶菌酶软膏侧；其余6只作为破损皮肤给药,分为破损皮肤阴性对照组(纯化水)和破损皮肤复方蒙脱石溶菌酶软膏组。

2.2给药方法:完整皮肤给药：给药前24h，用剪刀剪去家兔脊柱两侧被毛，再用8％Na₂S涂抹去毛区2min后用温水洗净皮肤。去毛范围为左侧、右侧两个区域,每个区域面积为3cm×3cm。左侧为复方蒙脱石溶菌酶软膏侧,右侧为阴性对照侧。将25cm×25cm大小的二层纱布放置于已去毛的皮肤上，将0.1g复方蒙脱石溶菌酶软膏或1ml纯化水涂于纱布上,用保鲜膜覆盖,保持5min后，温水洗净双侧皮肤。每天给药1次，连续7d。

破损皮肤给药：去毛完成后对皮肤做破损处理，用砂纸磨至血液渗出为度，其余给药方法同完整皮肤给药。

2.3观察指标：每次给药前后lh、末次给药后1、24、48、72h以及恢复期内每日，在自然光线下进行观察并记录各区域有无红斑及水肿，涂布部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况及其发生时间和消退时间，并对红斑及水肿按表10评分，计算各组皮肤总分的平均分值；按表11进行评价。

表10 皮肤刺激反应评分标准

皮肤刺激反应	分值(分)
		红斑：无红斑	0
轻度红斑，勉强可见	1
		中度红斑，明显可见	2
重度红斑	3
		紫红色红斑到轻度焦痂形成	4
水肿：无水肿	0
		轻度水肿，勉强可见	1
中度水肿,明显隆起(边缘高出周围皮肤)	2
		重度水肿，皮肤隆起1mm,轮廓清楚	3
严重水肿，皮肤隆起1mm,以上或有水泡或破溃	4

表11 皮肤刺激强度评分标准

平均分值	评价
		0～0.49	无刺激性
0.5～2.99	轻度刺激性
		3.0～5.99	中度刺激性
6.0～8.0	重度刺激性

观察结束后，每组颈动脉放血处死3只家兔，剪取敷贴部位皮肤一小块，用福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(FAA液)进行固定，常规脱水，石蜡包埋切片，苏木精-伊红(HE)染色，在光学显微镜下，进行病理组织学观察。

结果：复方蒙脱石溶菌酶软膏多次给药对家兔完整皮肤无刺激性反应。

实验例8复方蒙脱石溶菌酶软膏药效学实验研究

1材料：医用凡士林(长春市立达卫生材料制品厂,批号：20010408)；复方蒙脱石溶菌酶软膏实施例1制得；磺胺嘧啶银乳膏(山东健康药业有限公司)；福尔马林、乙醚、硫化钠等。

实验动物：Wistar大白鼠，山东大学动物实验中心。

2方法：Wistar大白鼠烫伤性感染组织影响实验；

取皮肤无损伤，健康Wistar大白鼠40只,饲养观察1周后，无异常。将大白鼠脊柱两侧躯干部位皮肤用脱毛剂硫化钠脱毛，面积约3cm×4cm，(约占体表的10％)，用温水洗净脱毛剂，归笼观察24h，见皮肤无损伤、红肿、皮疹等异常现象，将6cm×6cm医用胶布中间开窗，面积3cm×4cm，再制成3cm×4cm大的棉垫，将食用油烧热至140℃，沾湿大棉垫，取出立即贴于脱毛处皮肤上，30s后取下，使烫伤部位呈深Ⅱ度烫伤，观察24h后，见创面有明显的炎症变化，如紫红充血、水肿等。各组的大白鼠烫伤的面积及深度相似，记录大白鼠的创面面积。动物模型制好后，各组分笼饲养，并分别给予下列药物：复方蒙脱石溶菌酶软膏、磺胺嘧啶银、凡士林，药量为0.5g/只,每天涂药1次，涂药后创面不加覆盖，每日观察创面感染、愈合动物全身表现等。

3结果

1)体征表现：给药1周时，凡士林组大白鼠食欲不振、消瘦，体质量明显减轻，其余各组食欲正常，活动自如，体质量略有增加，无死亡情况.

2)肉眼观察大白鼠的创面愈合情况如下：复方蒙脱石溶菌酶软膏组：用药后3天，3组大白鼠的创面明显减少，7天后有肉芽组织生成，20天后多数大白鼠创面基本愈合，或有小条状疤痕，愈合创面有鼠毛长出，组织高度与正常皮肤一致。磺胺嘧啶银组：局部感染情况基本与复方蒙脱石溶菌酶软膏组，创面无感染、无脓苔。凡士林组创面脓汁较多、感染较重，更无肉芽组织生成，20天后仍未愈合。

3)统计学处理：20天后处死动物，测量各给药组和对照组每只鼠的创面面积，计算用药前和用药后的面积差值，进行统计学分析见表12。

表12 药物对大鼠烫伤面积的影响

由表12结果可看出复方蒙脱石溶菌酶软膏组、磺胺嘧啶银组与凡士林组有明显差异(P<0.05)

表13 与磺胺嘧啶银组间的疗效比较

由表13结果可看出，复方蒙脱石溶菌酶软膏组与磺胺嘧啶银组无差异，其疗效相似P＞0.05。

4)病理学检查：用药20天后,断头取血,分别取30只大白鼠皮肤(试验部位),病理切片进行组织学检查:复方蒙脱石溶菌酶软膏组大白鼠皮肤愈合表现：皮下肉芽组织增生,并有较多胶原组织形成；表皮再生，增生并覆盖创面，并有皮肤附属器再生，大部分属于不完全再生或Ⅱ期愈合，个别鼠有疤痕形成。磺胺嘧啶银组大白鼠皮肤Ⅱ期愈合，无表皮再生，缺乏附属器。凡士林组仅有1只鼠Ⅱ期愈合，其他均可见溃疡面且感染严重。

附图说明

图1是实施例1溶菌酶溶出曲线，横坐标为时间；纵坐标为溶菌酶溶出含量；

图2是实施例2溶菌酶溶出曲线，横坐标为时间；纵坐标为溶菌酶溶出含量；

图3是实施例3溶菌酶溶出曲线，横坐标为时间；纵坐标为溶菌酶溶出含量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

实施例1～3原辅料说明：

实施例中所涉及的装置和设备均为目前软膏剂生产通用设备，市场可购。说明如下：

不锈钢溶解罐(型号100L)郑州永信搪瓷化工设备有限公司；剪切机(型号50L)温州市东顶机械制造有限公司有售；超声波器(型号JCX-300)山东省济宁市超声电子仪器厂有售。

实施例1、复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂及制备

1、原辅材料投料量配比(w/w)：

2、按照如下方法制备：

(1)按配比称取蒙脱石、溶菌酶、聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水各组分；

(2)将蒙脱石加入无菌水中，超声分散30min，温度控制在60℃，超声波频率为40KHz，得悬乳液；

(3)将步骤(2)制得的悬乳液于150℃温度下，在20KHz超声灭菌30min，然后冷却至60℃，保温备用；

(4)按配比称取溶菌酶,加无菌水溶解，用0.22μm滤膜过滤除菌后，将所得溶菌酶料液输送至无菌车间已灭菌的罐内,常温备用；

(5)按配比称取聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水各组分混合，在135℃条件下灭菌,保持温度60分钟后，输送至无菌车间已灭菌的罐内存放,在70℃保温备用；

(6)在无菌条件下,将步骤(3)(4)(5)混合，搅拌均匀；

(7)将所得混和物抽入剪切罐中；在温度60℃条件下，开启剪切机低速900r/min剪切5分钟，然后高速2400r/min剪切3分钟；关闭剪切机，开启搅拌，转速为50r/min，继续搅拌4分钟，然后再在搅拌转速为25r/min搅拌，开始降温，降温至35℃时停止搅拌，制得复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂产品。

检测结果：

复方蒙脱石溶菌酶软膏：

1.鉴别：(1)蒙脱石、(2)溶菌酶，均呈阳性。

2.含量(w/w)：蒙脱石98.33％，溶菌酶98.65％。

3.复方蒙脱石溶菌酶软膏其它指标均符合规定。

实施例2、复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂及制备

1、原辅材料投料量配比(w/w)：

2、按照如下方法制备：

(2)将蒙脱石加入无菌水中，超声分散50min，温度控制在38℃，超声波频率为30KHz，得悬乳液；

(3)将步骤(2)制得的悬乳液于160℃温度下，在20KHz超声灭菌30min，然后冷却至60℃，保温备用；

(5)按配比称取聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水各组分混合，在140℃条件下灭菌；并保持温度90分钟后，输送至无菌车间已灭菌的罐内存放,在65℃保温备用；

(6)在无菌条件下,将步骤(3)(4)(5)混合，搅拌均匀；

(7)将所得混和物抽入剪切罐中；在温度55℃条件下，开启剪切机低速1500r/min剪切3分钟，然后高速2400r/min剪切2分钟；关闭剪切机，开启搅拌，转速为50r/min，继续搅拌3分钟，然后再在搅拌转速为20r/min搅拌，开始降温，降温至30℃时停止搅拌，制得复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂产品。

检测结果：

复方蒙脱石溶菌酶软膏：

1.鉴别：(1)蒙脱石、(2)溶菌酶，均呈阳性。

2.含量(w/w)：蒙脱石98.81％，溶菌酶98.23％。

3.复方蒙脱石溶菌酶软膏其它指标均符合规定。

实施例3、复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂及制备

1、原辅材料投料量配比(w/w)：

2、按照如下方法制备：

(2)将蒙脱石加入无菌水中，超声分散40min，温度控制在50℃，超声波频率为35KHz，得悬乳液；

(3)将步骤(2)制得的悬乳液于155℃温度下，在30KHz超声灭菌40min，然后冷却至65℃，保温备用；

(5)按配比称取聚乙二醇4000、甘油、山梨醇、无菌水各组分混合，在137℃条件下灭菌；保持温度70分钟后，输送至无菌车间已灭菌的罐内存放,在65～70℃保温备用；

(6)在无菌条件下,将步骤(3)(4)(5)混合，搅拌均匀；

(7)将所得混和物抽入剪切罐中；在温度58℃条件下，开启剪切机低速1000r/min剪切4分钟，然后高速2200r/min剪切3分钟；关闭剪切机，开启搅拌，转速为40r/min，继续搅拌4分钟，然后再在搅拌转速为25r/min搅拌，开始降温，降温至35℃时停止搅拌，制得复方蒙脱石溶菌酶软膏制剂产品。

检测结果：

复方蒙脱石溶菌酶软膏：

1.鉴别：(1)蒙脱石、(2)溶菌酶，均呈阳性。

2.含量(w/w)：蒙脱石98.89％，溶菌酶98.64％。

3.复方蒙脱石溶菌酶软膏其它指标均符合规定。

Claims

1.一种治疗皮肤溃疡的复方蒙脱石溶菌酶软膏,其特征在于，由以下原料按质量份制成：

2.如权利要求1所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏，其特征在于，由以下原料按质量份制成：

3.如权利要求2所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏，其特征在于，由以下原料按质量份制成：

4.如权利要求2所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏，其特征在于，由以下原料按质量份制成：

5.如权利要求2所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏，其特征在于，由以下原料按质量份制成：

6.如权利要求1～5任一所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏的制备方法，包括如下步骤：

(6)在无菌条件下,将步骤(3)(4)(5)所得的物料混合，搅拌均匀；

7.如权利要求1～5任一所述的复方蒙脱石溶菌酶软膏在制备治疗皮肤溃疡的药物中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其中所述的皮肤溃疡包括褥疮溃疡、烫伤溃疡、小腿部溃疡、帯状疱疹后溃疡、糖尿病性溃疡、术后溃疡。