CN104666762A - 一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法 - Google Patents
一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,步骤如下:(1)将归芍地黄丸原料经粉碎后,然后加入水,混合均匀,制得原料浆液;(2)向原料浆液中加入酸调pH值,加入胃蛋白酶,处理,制得胃蛋白酶处理的浆液;(3)向胃蛋白酶处理的浆液中加入胰蛋白酶,处理,制得胃、胰蛋白酶处理的浆液;(4)接种双歧杆菌和植物乳杆菌,即得。本发明制得了副作用较小的胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液,该品酸甜适口,且经实际应用,长期服用该胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液不仅能够达到服用归芍地黄丸治疗效果,并且导致胃寒、阻碍消化的副作用也得到极大的降低。
Description
技术领域
本发明涉及一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,特别涉及一种利用生物技术处理经典归芍地黄丸组方的方法,属于生物医药技术领域。
背景技术
归芍地黄丸是一种常用中成药,是由补阴经典代表方剂六味地黄丸(熟地黄山萸肉山药泽泻牡丹皮和茯苓)加当归、白芍而成,归芍地黄丸是以六味地黄丸为基础的方剂,滋补肝肾之阴,配以当归养血和血,活血调经;白芍补血柔肝,诸药配伍既能补肾阴,又能益精血,对于肝肾不足、阴亏血虚所致之疾患极为适宜。
但由于归芍地黄丸属甘温性,偏于补阴的药,主治肺肾阴虚,其配方中阴柔的药多一些,所以吃后有时候会妨碍消化的副作用,因此不仅脾胃功能弱、消化不良者慎吃,而且长期服用会导致腹满、便溏、食欲不振等不适症状。
中国专利文献CN1365810A(申请号01102108.X)公开了一种纳米归芍地黄制剂药物,其特征在于它是下述重量配比的纳米原料制成的药剂:纳米当归30-60份、纳米白芍30-60份、纳米熟地黄100-200份、纳米山茱萸60-95份、纳米牡丹皮40-80份、纳米山药60-95份、纳米茯苓40-80份、纳米泽泻40-80份,采用下述方法制成:选择配方用中药材炮制加工成中药饮片;置于提取罐中,加溶剂并导入微波萃取,使其以20--30亿次/秒速度作极性变化运动,其微波萃取的温度为30--60℃,时间1-10小时;将上述萃取液进行减压浓缩,温度为30--60℃,时间为3-72小时,同时另收取中药中挥发性物质;将减压浓缩液与可挥发性物质合并置于喷雾干燥塔,用超音射流技术,在30--60℃温度,0至0.05MPa压力下,以超音速速度瞬时射流干燥,其中超音速射流速度为330米-990米/秒,即制成纳米中药饮片。上述专利中归芍地黄丸妨碍消化的副作用并没有减弱。
双歧杆菌Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌,末端常常分叉,故名双歧杆菌。双歧杆菌具有以下治疗效果:1、维护肠道正常细菌菌群平衡,抑制病原菌的生长,防止便秘,下痢和胃肠障碍等;2、抗肿瘤;3、在肠道内合成维生素、氨基酸和提高机体对钙离子的吸收;4、降低血液中胆固醇水平,防治高血压;5、改善乳制品的耐乳糖性,提高消化率;6、增强人体免疫机能,预防抗生素的副作用,抗衰老,延年益寿。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸杆菌中的一种,常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体胃肠道的益生菌群,具有维持肠道内菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种功能。植物乳杆菌在食品工业中应用十分广泛。由于对食盐、亚硝酸盐具有良好的耐受性,对蛋白质、脂肪无明显直接的分解作用等特点,在发酵肉制品中应用很多。同时,也广泛用于发酵植物性食品,此外利用植物乳杆菌还可以生产共轭亚油酸。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法。
术语说明
胃蛋白酶的活力单位(U):采用中国药典1977年版制定的检测方法检测的活力单位。
胰蛋白酶的活力单位(U):采用中国药典1990年版制定的检测方法检测的活力单位。
本发明技术方案如下:
一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,步骤如下:
(1)将归芍地黄丸原料中的八味原料药经粉碎后,制得原料粉末,然后按每百克原料粉末加入200~600克水和炼蜜,混合均匀,制得原料浆液;
(2)向步骤(1)制得的原料浆液中加入酸调pH值为1.5~2.2,按每百克归芍地黄丸原料加入20~60活力单位的胃蛋白酶,在温度36~38℃,处理2~3小时,碱调pH值为7.8~8.2,制得胃蛋白酶处理的浆液;
(3)向步骤(2)制得的胃蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升加入20~50活力单位的胰蛋白酶,在温度36~38℃,处理2~3小时,酸调pH值至5.5~6,制得胃、胰蛋白酶处理的浆液;
(4)向步骤(3)制得的胃、胰蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升接种0.5~2g的经活化的双歧杆菌和1.5~3g的经活化的植物乳杆菌,制得胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液。
根据本发明优选的,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归30~60份、白芍30~60份、熟地黄80~320、制山茱萸40~160、牡丹皮30~120、山药40~160、茯苓30~120、泽泻30~120、炼蜜7~22份。
进一步优选的,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜7~10份。
进一步优选的,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜16~22份。
根据本发明优选的,所述步骤(2)、(3)中的酸为盐酸。
根据本发明优选的,所述步骤(1)的碱为碳酸钠。
根据本发明优选的,所述步骤(4)中经活化的双歧杆菌是指将双歧杆菌接种于TPY液体培养基中,在36~38℃培养至对数生长期的双歧杆菌。
根据本发明进一步优选的,所述TPY液体培养基每升组分如下:
蛋白胨15.0g、酵母粉2.0g、葡萄糖20.0g、可溶性淀粉0.5g、氯化钠5.0g、5wt%半胱氨酸溶液10.0mL、西红柿浸出液400.0mL、吐温80 1.0g、肝提取液80.0mL、蒸馏水520.0mL、pH7.0。
所述西红柿浸出液的制备为本领域常规方法,步骤如下:
将新鲜西红柿洗净称重后切碎,加等量蒸馏水在100℃水浴中加热,搅拌90min,然后用纱布过滤,调pH7.0。
所述肝提取液的制备为本领域常规方法,步骤如下:
称取新鲜猪肝1000g,切成小块或绞碎,加蒸馏水至2000mL,混匀,置冰箱中过夜,第二天煮沸15min,纱布过滤并挤压收集滤液,加水定容至2000mL。
所述双歧杆菌为肠道益生菌,本领域技术人员可以根据需要进行选择,如中国专利文献CN 102946891A中的菌种保藏号为NCIMB 41676的双歧杆菌,中国专利文献CN 101679938 A中的菌种保藏号为NCIMB 41387的长双歧杆菌等。
根据本发明优选的,所述步骤(4)中经活化的植物乳杆菌是指将植物乳杆菌接种于MRS液体培养基中,在30~35℃培养至对数生长期的植物乳杆菌。
根据本发明进一步优选的,所述所述MRS液体培养基每升组分如下:
蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0g、葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g、吐温80 1.0mL、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0g、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58g、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水定容至1000mL,pH 6.2~6.6。
所述植物乳杆菌为肠道益生菌,本领域技术人员可以根据需要进行选择,如中国专利文献CN 102597214A中的菌种保藏号为KCTC 11403BP的植物乳杆菌CJLP133,中国专利文献CN 102597215A中的菌种保藏号为KCTC 11401BP的植物乳杆菌CJLP55等。
有益效果
本发明通过将传统归芍地黄丸原料经胃、胰蛋白酶分解处理,得到了副作用较小的胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液,该品酸甜适口,且经实际应用,长期服用该胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液不仅能够达到服用归芍地黄丸治疗效果,并且导致胃寒、阻碍消化的副作用也得到极大的降低。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明的技术方案做进一步说明,但本发明所保护范围不限于此。
实施例中的TPY液体培养基每升组分如下:
蛋白胨15.0g、酵母粉2.0g、葡萄糖20.0g、可溶性淀粉0.5g、氯化钠5.0g、5wt%半胱氨酸溶液10.0mL、西红柿浸出液400.0mL、吐温80 1.0g、肝提取液80.0mL、蒸馏水520.0mL、pH7.0;
所述西红柿浸出液的制备步骤如下:
将新鲜西红柿洗净称重后切碎,加等量蒸馏水在100℃水浴中加热,搅拌90min,然后用纱布过滤,调pH7.0;
所述肝提取液的制备步骤如下:
称取新鲜猪肝1000g,切成小块或绞碎,加蒸馏水至2000mL,混匀,置冰箱中过夜,第二天煮沸15min,纱布过滤并挤压收集滤液,加水定容至2000mL。
实施例中的MRS液体培养基每升组分如下:
蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0g、葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g、吐温80 1.0mL、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0g、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58g、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水定容至1000mL,pH 6.2~6.6。
实施例1
一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,步骤如下:
(1)将归芍地黄丸原料中的八味原料药经粉碎后,制得原料粉末,然后按每百克原料粉末加入200克水和炼蜜,混合均匀,制得原料浆液;
(2)向步骤(1)制得的原料浆液中加入盐酸调pH值为1.5,按每百克归芍地黄丸原料加入20活力单位的胃蛋白酶,在温度36℃,处理3小时,碳酸钠调pH值为8,制得胃蛋白酶处理的浆液;
(3)向步骤(2)制得的胃蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升加入50活力单位的胰蛋白酶,在温度37℃,处理2小时,盐酸调pH值至5.5,制得胃、胰蛋白酶处理的浆液;
(4)向步骤(3)制得的胃、胰蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升接种0.5g的经活化的双歧杆菌和1.5的经活化的植物乳杆菌,制得胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液。
所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜7份。
实施例2
一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,步骤如下:
(1)将归芍地黄丸原料中的八味原料药经粉碎后,制得原料粉末,然后按每百克原料粉末加入600克水和炼蜜,混合均匀,制得原料浆液;
(2)向步骤(1)制得的原料浆液中加入酸调pH值为2.2,按每百克归芍地黄丸原料加入60活力单位的胃蛋白酶,在温度38℃,处理2小时,碳酸钠调pH值为7.8,制得胃蛋白酶处理的浆液;
(3)向步骤(2)制得的胃蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升加入20活力单位的胰蛋白酶,在温度37℃,处理3小时,盐酸调pH值至6,制得胃、胰蛋白酶处理的浆液;
(4)向步骤(3)制得的胃、胰蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升接种2g的经活化的双歧杆菌和3g的经活化的植物乳杆菌,制得胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液。
所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜22份。
试验例1
张某,女,青岛市南区人,肝肾两亏,阴虚血少,头晕目眩,月经不调,腰腿酸痛,脾胃功能正常。服用实施例1所述的胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液,每天二次,每次15克,服用一个月,症状明显改善,且脾胃功能正常。
陈某,女,济南长清市人,长期服用归芍地黄丸导致胃寒、腹满、便溏、食欲不振的症状。服用实施例1所述的归芍地黄口服液,每天二次,每次15克,服用一个月,胃寒、腹满、便溏、食欲不振的症状逐渐减轻。
试验例2
经50具有显著肾阴虚患者服用实施例2所述胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液,每天服用两次,每次35可,服用一个月,记为组1。同时50位具有显著肾阴虚患者服用普通市售归芍地黄丸,按说明书服用,记为组2。结果如表1所示。
表1
肝肾阴虚血亏症状改善(人) | 脾胃虚寒症状(人) | |
组1 | 44 | 0 |
组2 | 47 | 15 |
结果分析
由表1可以看出,组1和组2均可以明显改善肺肾阴虚患者的症状,但现有市售归芍地黄丸会导致部分服用患者产生胃寒、腹满、便溏、食欲不振的症状,而服用实施例2所述的胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液,产生上述症状的服用患者明显减少。
Claims (10)
1.一种胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将归芍地黄丸原料中的八味原料药经粉碎后,制得原料粉末,然后按每百克原料粉末加入200~600克水和炼蜜,混合均匀,制得原料浆液;
(2)向步骤(1)制得的原料浆液中加入酸调pH值为1.5~2.2,按每百克归芍地黄丸原料加入20~60活力单位的胃蛋白酶,在温度36~38℃,处理2~3小时,碱调pH值为7.8~8.2,制得胃蛋白酶处理的浆液;
(3)向步骤(2)制得的胃蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升加入20~50活力单位的胰蛋白酶,在温度36~38℃,处理2~3小时,酸调pH值至5.5~6,制得胃、胰蛋白酶处理的浆液;
(4)向步骤(3)制得的胃、胰蛋白酶处理的浆液中,按每百毫升接种0.5~2g的经活化的双歧杆菌和1.5~3g的经活化的植物乳杆菌,制得胃、胰蛋白酶处理的归芍地黄复合微生态口服液。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归30~60份、白芍30~60份、熟地黄80~320、制山茱萸40~160、牡丹皮30~120、山药40~160、茯苓30~120、泽泻30~120、炼蜜7~22份。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜7~10份。
4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的归芍地黄丸原料如下,均为重量份:
当归40份、白芍40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉)80份、牡丹皮60份、山药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜16~22份。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)、(3)中的酸为盐酸。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的碱为碳酸钠。
7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中经活化的双歧杆菌是指将双歧杆菌接种于TPY液体培养基中,在36~38℃培养至对数生长期的双歧杆菌。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述TPY液体培养基每升组分如下:
蛋白胨15.0g、酵母粉2.0g、葡萄糖20.0g、可溶性淀粉0.5g、氯化钠5.0g、5wt%半胱氨酸溶液10.0mL、西红柿浸出液400.0mL、吐温801.0g、肝提取液80.0mL、蒸馏水520.0mL、pH7.0。
9.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中经活化的植物乳杆菌是指将植物乳杆菌接种于MRS液体培养基中,在30~35℃培养至对数生长期的植物乳杆菌。
10.如权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述所述MRS液体培养基每升组分如下:
蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0g、葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g、吐温801.0mL、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0g、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58g、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水定容至1000mL,pH 6.2~6.6。
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