CN109966427A - 一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵活菌液及其制备方法 - Google Patents

一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵活菌液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵活菌液及其制备方法，申请人研发一款新型发酵液，优化中药组分以及发酵菌种，从而使得制备的发酵液具有治疗肿瘤和提高免疫力的作用，本申请制备的发酵活菌液具有广阔的市场应用前景。

Description

一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵活菌液及其制备方法
技术领域
发明涉及一种发酵活菌液、发酵活菌液制备方法以及该发酵活菌液在治疗肿瘤和提高机体免疫力中的应用。
背景技术
二十世纪以来人类的生活环境污染日趋加剧、生活环境不断恶化、人们与致癌因素的接触越来越紧密，恶性肿瘤的发病率也逐年递增，恶性肿瘤已经超过心脑血管成为人类健康的最大敌人。
据公开资料显示，2017年2月世卫组织公布的数据表明，全球每年有1400多万新发癌症为例，预计到2030年这一数字将增加到2100多万。每年有880万人死于癌症，全球癌症死亡人数占总死亡人数的近六分之一，多在低收入和中等收入国家。许多癌症病例诊断过晚，癌症病例多是在癌症晚期才得到诊断和发现，治愈的几率较小，希望渺茫。
近几年，抗肿瘤研究的策略在不断地调整，由最初细胞毒类直接杀伤肿瘤细胞逐步转变为通过提高自身免疫系统的免疫能力来杀伤肿瘤，伴随这一过程，中药在抗肿瘤治疗中起到的作用越来越为广为人们认可，已有部分中药作为中晚期癌症患者的辅助用药用于临床上，中医认为机体的免疫力与肿瘤的关系比较密切，机体免疫力低下容易引发肿瘤，故而治疗肿瘤时中药不仅着眼于抑制肿瘤，还致力于提高机体免疫力。但是，传统的中药生产工艺制备的中药提取物治疗效果有待改善，发酵中药创造性地在体外将中药成分经过生物转化，从而使得制备的发酵提取物更容易被人体吸收和利用，提高药效。
故而，申请人研发一款新型治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液，发酵液选用经验丰富的中医提供的中药组分，优化发酵所用菌种，并在发酵液中添加矿物质、维生素、低聚果糖、菊粉等组分，从而使得制备的发酵液具有治疗肿瘤和提高免疫力的作用，本公司制备的发酵活菌液具有广阔的市场应用前景。
发明内容
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液及其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：
本发明的目的在于提供一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的中药组方，主要由以下原料组成：黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白。
进一步，各原料组分的重量份为：黄芪1-10份，党参1-10份，人参1-10份，肉苁蓉1-10份，金银花1-10份，麦麸1-20份，鸡内金5-15份，白花蛇1-5份，人中白1-15份。
优选的，黄芪10份，党参10份，人参10份，肉苁蓉10份，金银花10份，麦麸15份，鸡内金15份，白花蛇5份，人中白15份。
本发明的目的在于提供一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液所用的菌种，包括酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌。
进一步，各菌种的重量分数为：酵母菌20-40％、保加利亚乳杆菌5-10％、嗜热链球菌10-20％、双歧杆菌BB-12 10-20％、植物乳杆菌5-10％、嗜酸乳杆菌5-15％、干酪乳杆菌5-15％、鼠李糖乳杆菌5-15％。
优选地，以质量分数计为：酵母菌30％、保加利亚乳杆菌10％、嗜热链球菌10％、双歧杆菌BB-12 10％、植物乳杆菌10％、嗜酸乳杆菌10％、干酪乳杆菌10％、鼠李糖乳杆菌10％。
本发明的目的在于提供一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的方法，具体步骤如下：
1)将中药黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白洗净烘干，按重量份称取，与水混合；
2)置于发酵罐中煮沸灭菌，待温度晾至25℃～35℃时接入菌种，温度保持在20℃～25℃，发酵7-15天；
3)将步骤2)中的发酵液经过板框过滤机过滤，向发酵液中加入矿物质、维生素、低聚果糖、菊粉、白藜芦醇、人参RH2、蟾酥后，即得到发酵液。
矿物质包括钠、钙、钾、铁、锌、铜、锰、铬、钼，优选的，矿物质的质量比为：钠1-10份、钙10-20份、钾1-10份、铁10-20份、锌10-20份、铜5-10份、锰5-10份、铬1-10份、钼1-10份；
更优选的，矿物质的质量比为：钠10％、钙15％、钾10％、铁15％、锌20％、铜5％、锰5％、铬10％、钼10％份。
维生素包括维生素A、叶酸、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D；优选的，维生素的质量比为：维生素A 5-10份、叶酸10-20份、维生素B2 10-20份、维生素B610-20份、维生素B12 5-10份、维生素C 20-30份、维生素D 5-10份；
更优选的，维生素的质量比为：维生素A10份、叶酸20份、维生素B2 10份、维生素B620份、维生素B12 10份、维生素C 20份、维生素D 10份。
进一步，上述制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的方法，各原料组分的重量份为：黄芪1-10份，党参1-10份，人参1-10份，肉苁蓉1-10份，金银花1-10份，麦麸1-20份，鸡内金5-15份，白花蛇1-5份，人中白1-15份，
优选的，黄芪10份，党参10份，人参10份，肉苁蓉10份，金银花10份，麦麸15份，鸡内金15份，白花蛇5份，人中白15份。
进一步，上述制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的方法，菌种由酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌组成；各菌种的重量分数为：酵母菌20-40％、保加利亚乳杆菌5-10％、嗜热链球菌10-20％、双歧杆菌BB-12 10-20％、植物乳杆菌5-10％、嗜酸乳杆菌5-15％、干酪乳杆菌5-15％、鼠李糖乳杆菌5-15％；
优选地，以质量分数计为：酵母菌30％、保加利亚乳杆菌10％、嗜热链球菌10％、双歧杆菌BB-12 10％、植物乳杆菌10％、嗜酸乳杆菌10％、干酪乳杆菌10％、鼠李糖乳杆菌10％。
本发明的目的还在于提供了上述方法制备的发酵液。
本发明的目的还在于提供上述发酵液在制备治疗肿瘤药物或试剂中的应用。
本发明的目的还在于提供上述发酵液在制备提高机体免疫力试剂或药物中的应用。
黄芪，性甘，微温。归肺、脾、肝、肾经。现代医学研究表明，黄芪有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。能消除实验性肾炎蛋白尿，增强心肌收缩力，调节血糖含量。黄芪不仅能扩张冠状动脉，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能够延缓细胞衰老的进程。黄芪食用方便，可煎汤，煎膏，浸酒，入菜肴等。
党参，性平、味甘。归脾、肺经。补中，益气，生津，治脾胃虚弱，气血两亏，体倦乏力，食少，口渴，久泻，脱肛。党参为中国常用的传统补益药，具有补中益气，健脾益肺之功效。现代研究，党参含多种糖类、酚类、甾醇、挥发油、黄芩素葡萄糖甙、皂甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。此外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。
人参，味甘、微苦，性温、平。归脾、肺经、心经。补气，固脱，生津，安神，益智。人参自古誉为“百草之王”“滋阴补生，扶正固本”之极品，含多种皂甙和多糖类成分，浸出液可被皮肤缓慢吸收且无不良刺激，能扩张皮肤毛细血管，促进皮肤血液循环，增加皮肤营养，调节皮肤的水油平衡，防止皮肤脱水、硬化、起皱，人参活性物质抑制黑色素的还原性能，使皮肤洁白光滑，能增强皮肤弹性，使细胞获得新生，是护肤美容的极品。人参的肉质根为著名强壮滋补药，适用于调整血压、恢复心脏功能、神经衰弱及身体虚弱等症，也有祛痰、健胃、利尿、兴奋等功效。
肉苁蓉，味甘、咸，性温。归肾、大肠经。补肾阳；益精血；润肠道。肉苁蓉为列当科植物苁蓉或者管花苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾阳益精血，润肠通便的功效，可以用于肾阳不足，精血亏虚，阳痿，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘，肉苁蓉温而不燥，补而不进，用于肾虚不足，阳痿，遗精早泄症。此外，肉苁蓉还具有提高免疫力，抗衰老抑制等作用。
金银花自古被誉为清热解毒的良药。性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。
鸡内金，味甘，平。归脾、胃、小肠、膀胱经；健胃消食，涩精止遗，通淋化石。鸡内金，为雉科动物家鸡的干燥沙囊内壁，可用于食积不消，呕吐泻痢，小儿疳积，遗尿，遗精，石淋涩痛，胆胀胁痛。
白花蛇，味甘咸，温。入肝、脾经。对偏瘫，瘫痪，手足麻木，中风，风湿，关节炎，牛皮癣，等顽固疾病也有很好的治疗作用。
人中白，味咸，性凉。归肺、心、膀胱经；清热降火，止血化瘀，用于肺痿劳热，吐血，衄血，喉痹，牙疳，口舌生疮，诸湿溃烂，烫火伤。人中白，为人科健康人尿自然沉淀的固体物。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的发酵活菌液不仅优化中药组分，以黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白为原料；还优化了发酵菌种，菌种由酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌组成；上述菌种对中药组分进行了充分的发酵，形成一系列新的代谢产物。
(2)发酵液经过滤后添加了矿物质、维生素、低聚果糖、菊粉、白藜芦醇、人参RH2、蟾酥，含有人体扶正固本的各种营养物质，对治疗肿瘤及提高机体免疫力具有良好的作用与效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1
一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的中药组方，主要由以下原料组成：黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白。各原料组分的重量份为：黄芪1-10份，党参1-10份，人参1-10份，肉苁蓉1-10份，金银花1-10份，麦麸1-20份，鸡内金5-15份，白花蛇1-5份，人中白1-15份。
实施例2
一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的中药组方，主要由以下原料组成：黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白。各原料组分的重量份为：黄芪10份，党参10份，人参10份，肉苁蓉10份，金银花10份，麦麸15份，鸡内金15份，白花蛇5份，人中白15份。
实施例3
一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液所用的菌种，包括酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌，各菌种的重量分数为：酵母菌20-40％、保加利亚乳杆菌5-10％、嗜热链球菌10-20％、双歧杆菌BB-12 10-20％、植物乳杆菌5-10％、嗜酸乳杆菌5-15％、干酪乳杆菌5-15％、鼠李糖乳杆菌5-15％。
实施例4
一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液所用的菌种，包括酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌，各菌种的重量分数为：酵母菌30％、保加利亚乳杆菌10％、嗜热链球菌10％、双歧杆菌BB-12 10％、植物乳杆菌10％、嗜酸乳杆菌10％、干酪乳杆菌10％、鼠李糖乳杆菌10％。
实施例5
一种治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液，按一定重量份称取以下原料：黄芪10份，党参10份，人参10份，肉苁蓉10份，金银花10份，麦麸15份，鸡内金15份，白花蛇5份，人中白15份，水100份；添加的菌种：酵母菌30份、保加利亚乳杆菌10份、嗜热链球菌10份、双歧杆菌BB-12 10份、植物乳杆菌10份、嗜酸乳杆菌10份、干酪乳杆菌10份、鼠李糖乳杆菌10份。
上述治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的制备方法，包括如下步骤：
1)将原料黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白洗净烘干，备用；
2)按重量份称取烘干后的原料和水混合后，于发酵罐中煮沸灭菌，待温度晾至30℃时接入菌种，菌种以质量分数计为：酵母菌30％、保加利亚乳杆菌10％、嗜热链球菌10％、双歧杆菌BB-12 10％、植物乳杆菌10％、嗜酸乳杆菌10％、干酪乳杆菌10％、鼠李糖乳杆菌10％，温度保持在30℃～40℃，发酵7-15天；
3)将发酵液经过板框过滤机过滤，向发酵液中加入矿物质(钠、钙、钾、铁、锌、铜、锰、铬、钼)、维生素(维生素A、叶酸、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D)、低聚果糖、菊粉、白藜芦醇、人参RH2、蟾酥后，即得所述的发酵活菌液。其中，矿物质的质量比为：钠10％、钙15％、钾10％、铁15％、锌20％、铜5％、锰5％、铬10％、钼10％份；维生素的质量比为：维生素A 10份、叶酸20份、维生素B2 10份、维生素B6 20份、维生素B12 10份、维生素C 20份、维生素D 10份。
实施例6
小鼠模型建立：昆明种小鼠，雌雄各半。无菌条件下，取传代一周的小鼠S180肉瘤细胞悬液，经生理盐水稀释调节细胞数，每只小鼠腋下接种2.0×106个细胞，24h后随机分组，每组10只，包括模型组，阳性对照组和给药组。
模型组处理：荷瘤模型对照组小鼠每天按0.1ml/10g口服灌胃生理盐水；
阳性组处理：阳性对照组小鼠每天按30mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺；
发酵液组处理：发酵液组小鼠每天按0.1ml/10g口服灌胃实施例5制备的发酵液。
连续给药10d后，颈椎脱臼法处死供试小鼠，剥取瘤块用分析天平称其重量。计数据以x±s表示。
通过动物实验检测实施例5制备的发酵液对荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的影响分析，如表1：
表1实施例5的发酵液对荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的影响
注：给药组与模型组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01
由表1的实验结果表明：模型组小鼠瘤重为3.44g，阳性组小鼠瘤重为1.63g(p<0.01)，给药组与模型组比较，小鼠瘤重较低，发酵液组小鼠瘤重为2.71g(p<0.05)，阳性对照组和实验组的小鼠瘤重相比有显著降低，则说明本发明的发酵液具有治疗肿瘤的功效。
实施例7
在无菌条件下，每只小鼠右腋下接种传代后6d的S180细胞2×106个(0.2mL)，24h后随机分组。发酵液组每日按0.1mL/10g口服灌胃发酵液。阳性组每日按12.5mg/kg剂量每日灌胃甘露聚糖肽。对照组和模型组每日按0.1mL/10g腹腔注射生理盐水。
在给药第7至13d，给药组和模型组每日皮下注射氢化可的松25mg/kg，对照组给予等量生理盐水。
第14天给药后30min进行实验。
小鼠按0.1mL/10g剂量尾静脉注射以1％明胶配制的25％印度墨汁。于注射后30s和6min分别在小鼠眼后静脉丛用尖嘴吸管取血0.025mL，加入盛有0.1％Na2CO3 2mL溶液的试管中，摇匀后于675nm处分别测定两次吸光值。迅速断颈处死动物，称量肝、脾重量。按以下公式计算吞噬指数K和校正吞噬指数α。
式中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重
碳粒廓清实验能够反应药物对机体免疫功能的影响，一定浓度的碳粒经过小鼠眼眶后静脉丛注射进入血液，经血流带到肝脾等处，而被这些部位的巨噬细胞吞噬清除，在一定浓度范围内，碳粒的清除速率与其剂量呈现指函数关系，即吞噬速度与血液中碳粒浓度成正比。若以血中碳粒浓度的对数值作为纵坐标，时间为横坐标，两者则呈直线关系，其斜率值表示吞噬速度，即未经校正的吞噬指数。因为小鼠肝脾重量不等，故而斜率值不同，所以一般以校正的吞噬指数表示，反映每单位组织重量的吞噬活性。通过动物实验分析实施例5制备的发酵液对荷瘤小鼠碳粒廓清的影响，如表2：
表2发酵液对荷瘤小鼠碳粒廓清能力的影响(n＝10)
注：模型组与正常组比较，给药组与模型组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01
如表2的实验结果表明：荷瘤小鼠在连续7d注射25mg/kg氢化可的松后，模型组小鼠碳粒廓清能力较对照组明显降低(P<0.01)，说明模型复制成功。通过对腹腔注射发酵液，能够使模型小鼠碳粒廓清能力有明显改善，吞噬指数K和校正吞噬系数α均较模型组明显提高，且具有显著性差异(P<0.05)，同时这一作用呈现明显剂量依赖关系。以上结果说明，发酵液能够增强荷瘤小鼠的单核巨噬细胞的吞噬能力，即提高机体免疫力的功效。

Claims (10)

1.一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的中药组方，主要由以下原料组成：黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白，各原料组分的重量份为：黄芪1-10份，党参1-10份，人参1-10份，肉苁蓉1-10份，金银花1-10份，麦麸1-20份，鸡内金5-15份，白花蛇1-5份，人中白1-15份。
2.根据权利要求1所述的中药组分，其特征在于，黄芪10份，党参10份，人参10份，肉苁蓉10份，金银花10份，麦麸15份，鸡内金15份，白花蛇5份，人中白15份。
3.一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液所用的菌种组合物，包括酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌BB-12、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌，各菌种的重量分数为：酵母菌20-40％、保加利亚乳杆菌5-10％、嗜热链球菌10-20％、双歧杆菌BB-12 10-20％、植物乳杆菌5-10％、嗜酸乳杆菌5-15％、干酪乳杆菌5-15％、鼠李糖乳杆菌5-15％。
4.根据权利要求3所述的菌种组合物，其特征在于，酵母菌30％、保加利亚乳杆菌10％、嗜热链球菌10％、双歧杆菌BB-12 10％、植物乳杆菌10％、嗜酸乳杆菌10％、干酪乳杆菌10％、鼠李糖乳杆菌10％。
5.一种制备治疗肿瘤及提高机体免疫力的发酵液的方法，具体步骤如下：
1)将中药黄芪，党参，人参，肉苁蓉，金银花，麦麸，鸡内金，白花蛇、人中白洗净烘干，按重量份称取，黄芪1-10份，党参1-10份，人参1-10份，肉苁蓉1-10份，金银花1-10份，麦麸1-20份，鸡内金5-15份，白花蛇1-5份，人中白1-15份，与水混合；
2)置于发酵罐中煮沸灭菌，待温度晾至25℃～35℃时接入菌种，各菌种的重量分数为：酵母菌20-40％、保加利亚乳杆菌5-10％、嗜热链球菌10-20％、双歧杆菌BB-12 10-20％、植物乳杆菌5-10％、嗜酸乳杆菌5-15％、干酪乳杆菌5-15％、鼠李糖乳杆菌5-15％，温度保持在20℃～25℃，发酵7-15天；
3)将步骤2)中的发酵液经过板框过滤机过滤，向发酵液中加入矿物质、维生素、低聚果糖、菊粉、白藜芦醇、人参RH2、蟾酥后，即得到发酵液。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，矿物质包括钠、钙、钾、铁、锌、铜、锰、铬、钼，优选的，矿物质的质量比为：钠1-10份、钙10-20份、钾1-10份、铁10-20份、锌10-20份、铜5-10份、锰5-10份、铬1-10份、钼1-10份。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，维生素包括维生素A、叶酸、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D；优选的，维生素的质量比为：维生素A5-10份、叶酸10-20份、维生素B2 10-20份、维生素B6 10-20份、维生素B12 5-10份、维生素C20-30份、维生素D5-10份。
8.一种采用权利要求5-7任意一项所述的方法制备的发酵液。
9.权利要求8所述的发酵液在制备治疗肿瘤药物或试剂中的应用。
10.权利要求8所述的发酵液在制备提高机体免疫力试剂或药物中的应用。
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