CN104645334B - N‑乙酰半胱氨酸活性炭组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药材料领域，公开了一种含有效剂量的N‑乙酰半胱氨酸活性炭组合物包括N‑乙酰半胱氨酸、活性炭，以及N‑乙酰半胱氨酸活性炭复合物包括N‑乙酰半胱氨酸、活性炭、载体的制备方法和用途。该药物组合物和复合物可制成各种药学上可接受的剂型，具有代谢时间长，血药浓度波动小，载药量、包封率、累积释放率高，用药剂量小，明显缓释的作用，并且在用于制备治疗肝纤维化，肝硬化，酒精性、非酒精性肝病、脂肪性肝病等急、慢性肝疾病方面具有协同增效作用，且稳定性好，副作用、不良反应、临床应用剂量小，比同剂量的N‑乙酰半胱氨酸单用效果大大提高，产生了意想不到的效果，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医药材料技术领域，具体涉及一种治疗肝病的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术
N-乙酰半胱氨酸是细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的前体，具有独特的抗氧化性能，能清除体内多种游离基，在体内又能作为亲核分子NO的载体，延长NO的生物利用度，发挥NO的生理效应，能改善微循环，纠正组织缺氧。在免疫功能方面，N-乙酰半胱氨酸可调节体内的免疫反应，能抑制T细胞凋亡，保持Th1型免疫反应，使衰老过程中由于氧化应激引起的细胞介导的免疫反应损害得到恢复，从而增强宿主防御功能。
乙酰半胱氨酸被国外临床研究证明用于对乙酰氨基酚过量所致的肝功能衰竭的治疗，对其它原因引起的肝功能衰竭也有良好疗效；在呼吸系统使用作为粘液溶解药；乙酰半胱氨酸还被使用或研究用于治疗其它疾病，包括各种癌症、甲基丙烯腈中毒、放射造影诱导的肾病和心脏分流手术期间再灌注引起的损伤。
由于N-乙酰半胱氨酸不管是口服或静脉注射给药进入体内极大部分遭遇到快速和广泛的代谢，导致体内游离的N-乙酰半胱氨酸在血浆中持续时间极短，生物利用度低，致使临床需用大剂量的主要原因；同时由于N-乙酰半胱氨酸进入体内，迅速分布到全身，而且剂量较大，引起面部潮红、恶心、呕吐等不良反应，静脉注射的不良反应超过10％，限制了其在临床的应用；另外，N-乙酰半胱氨酸分子不稳定，在溶液中及暴露于空气时会被氧化和降解；乙酰半胱氨酸分子中S-H易异裂发生自动氧化并具有不良气味。
为了解决上述问题，国内外药学工作者进行了多种尝试。N-乙酰半胱氨酸制备成纳米制剂或微球制剂，虽然缓解了其半衰期短、代谢快的缺点，但载药量、包封率、药物累积释放率较低，稳定性差，用药剂量大，载体在体内长时间聚集，增加患者的负担，患者服用顺应性不好。为了提高稳定性，有学者在注射液中加入螯合剂，通常为乙二胺四乙酸盐(EDTA)，虽然改善了N-乙酰半胱氨酸剂型的稳定性，但是螯合剂给药时会引起不良反应，包括血钾过少、血镁过少和血钙水平显著下降；公开号为CN102144978A的中国专利“一种乙酰半胱氨酸颗粒及其制备工艺”和CN103142505A的专利“一种乙酰半胱氨酸组合物颗粒剂及其制备方法”，颗粒剂中不加入螯合剂，改善了由于加入螯合剂所发生的不良反应，但颗粒剂没有从根本上改变乙酰半胱氨酸易氧化的缺点，也不能改变其半衰期。
另一方面，肝病治疗需长期给药。目前，N-乙酰半胱氨酸用于肝脏疾病治疗的剂型主要为注射剂和口服制剂，但各种剂型存在代谢时间短(注射剂通常仅为30min左右)，血药浓度波动大，不利于疾病的治疗；用药剂量大，稳定性差，副作用大，不良反应多的问题，致使患者用药顺应性低，从而影响治疗效果；所述的代谢时间是指N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物在机体内消除的时间。N-乙酰半胱氨酸经静脉注射后血药浓度下降很快，使局部的药物浓度很快便不能达到理想的有效治疗水平；并且因其给药剂量较大，被机体吸收后在各组织器官分布广泛，影响了其临床应用。
总之，现有的制剂和技术没有全面解决N-乙酰半胱氨酸存在的不稳定性、代谢快和血药浓度波动大等缺点。因此，需要研发具有缓释作用、稳定性好、载药量、包封率、累积释放率高的N-乙酰半胱氨酸相关药物制剂，使N-乙酰半胱氨酸在体内代谢时间长，血药浓度波动小，副作用小，不良反应低，以提高患者的顺应性和增加药物的疗效。目前利用N-乙酰半胱氨酸和药用活性炭的相互作用，配伍组方用于治疗肝脏疾病还未见报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种新的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物、复合物及其在治疗肝脏疾病的用途。
为了更好的治疗肝脏疾病，满足临床需要，提高人民的健康水平，本发明的发明人通过大量的实验研究，摸索、优化了多种实验条件，提供了一种新的药物组合物、复合物及其制备方法，该组合物含有效剂量的N-乙酰半胱氨酸、活性炭，复合物含有效剂量的N-乙酰半胱氨酸、活性炭、载体材料。N-乙酰半胱氨酸组合物/复合物能提高治疗肝脏疾病的疗效，同时降低药物副作用，降低不良反应。
为实现本发明的目的，本发明采用如下的技术方案：
本发明第一方面涉及的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物，其包含活性炭和N-乙酰半胱氨酸，不含EDTA，其中所述的N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶0.5～5。
本发明通过研究惊奇地发现，含有N-乙酰半胱氨酸和活性炭的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物；以及含有N-乙酰半胱氨酸、活性炭、载体材料的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物分别是在特定比例下混合而成的，各组分之间产生了明显协同作用，且在不加入EDTA的情况下是稳定的，代谢时间长，血药浓度波动小，载药量、包封率、累积释放率高，用药剂量小，具有明显缓释作用，可以克服现有N-乙酰半胱氨酸相关制剂在体内代谢过程中的不足，并且能克服N-乙酰半胱氨酸在体内代谢过快、生物利用度低、药物易氧化及不良气味等生物学上的缺陷，具有缓释效应并对治疗肝脏疾病有显著疗效。
本文所用术语“吸附”是指在固－液相界面上，溶液中溶质分布高于溶液中其他部分的现象。本发明的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物中，N-乙酰半胱氨酸为吸附质而活性炭为吸附剂。实验表明，活性炭对N-乙酰半胱氨酸的吸附为一种强物理吸附，即在范德华作用力的驱动下，吸附质与吸附剂之间没有形成共价键，吸附质容易释放。这种吸附过程既不改变N-乙酰半胱氨酸的化学结构，又具有一定的吸附强度。理想的吸附药物递送系统，要求吸附剂在对药物的吸附运输过程中，对药物有牢固的吸附，而在达到治疗部位后又能较容易地将其释放。通过大量N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物制备和药效评价的实验，发明人发现，只有在N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶0.5～5这个特定比例范围内，活性炭对N-乙酰半胱氨酸的吸附和释放才能达到可逆的动态平衡，才能实现活性炭吸附剂对N-乙酰半胱氨酸药物的可控性释放。这是目前为止的其他吸附药物递送系统所不能做到的。该特定比例(N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶0.5～5)的活性炭与N-乙酰半胱氨酸结合，其协同作用具有延长药物作用时间、降低血药浓度的波动、减少不良反应；活性炭的作用是提高N-乙酰半胱氨酸稳定性，减少氧化物质的产生，保护其理化性质和药效；活性炭和N-乙酰半胱氨酸的协同作用通过抑制细菌内毒素，改善炎症反应，有利于肝病的治疗。由实施例5可知活性炭对N-乙酰半胱氨酸的吸附强度可以保证N-乙酰半胱氨酸在运输过程中只有极少的丢失，而在治疗部位又能容易地将其释放，而这种释放速度既保护了N-乙酰半胱氨酸，又达到了良好的缓释效果。通过大量的实验(实施例9药效实验)，证明N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物具有良好的治疗效果，说明这种吸附机制与前述的活性炭和N-乙酰半胱氨酸的理化性质有关。
本发明的N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物中，N-乙酰半胱氨酸和活性炭的重量比为1∶0.5～5特定比例范围内与载体材料结合，载体材料与活性炭产生协同作用，明显延长N-乙酰半胱氨酸体内代谢时间，降低血药浓度波动，提高其稳定性。
本文所用术语“稳定性”是指本发明中所述药物组合物、复合物、复配物保持物理、化学、生物学和微生物学特性的能力。药物的稳定性可提高药物治疗效果，降低药物使用剂量，减少不良反应的发生。
本文所用术语“载药量”是指本发明中(N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物中乙酰半胱氨酸的含量/N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物的质量)×100％；
本文所用术语“包封率”是指本发明中(N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物中乙酰半胱氨酸的含量/N-乙酰半胱氨酸的总量)×100％；
本文所用术语“累积释放率”是指本发明所制备的缓释制剂做释放曲线时，在该时间点，溶出杯中N-乙酰半胱氨酸的量，加上前面取样时取走的乙酰半胱氨酸量。
进一步的，N-乙酰半胱氨酸与活性炭优选的重量比为1∶1～4.5，进一步优选的重量比为1∶2～3.5，更优选的重量比为1∶2.5～3。
本发明药物组分的重量配比是经过发明人进行大量摸索总结得出的，药物组合物在上述重量配比范围内均具有较好疗效。
进一步的，本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物，其活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的吸附量以所述N-乙酰半胱氨酸重量占所述活性炭和N-乙酰半胱氨酸重量的百分数计，为15～65wt％，优选为20～55wt％，更优选为30～45wt％。
所述的吸附量是指活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的量。N-乙酰半胱氨酸和活性炭的重量比对吸附量具有重要影响。活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸过程中会出现吸附饱和现象，一旦饱和现象出现，活性炭将不再吸附N-乙酰半胱氨酸，发明人发现N-乙酰半胱氨酸和活性炭在特定重量比1∶0.5～5范围内，吸附刚达到饱和，吸附量为特定范围内。N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物吸附量对制备N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物具有决定性作用，吸附量在15～65wt％的特定范围中所制备的复合物，其载药量、包封率及缓释时间均较理想，可以用于制备肝脏疾病的药物。
进一步的，本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物，其具有明显缓释效果，缓释时间为5～8小时。
进一步的，本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的粒径0.4～2μm，优选0.7～1.5μm。
进一步的，本发明所述的活性炭为改性活性炭，所述改性活性炭的制备方法为：取研磨活性炭，筛分出适宜粒径，在酸性溶液中充惰性气体并进行高温处理，减压干燥，即得改性活性炭。
所述的改性活性炭的目的是为了实现活性炭更有效地吸附N-乙酰半胱氨酸，需要结合N-乙酰半胱氨酸的特点进行针对性地改性。
进一步的，所述的惰性气体可以是氮气。
所述惰性气体的作用是对活性炭的表面化学性质进行改性，改变活性炭容易吸附氧气的缺陷，进而提高其吸附性能，防止吸附在活性炭上药物的氧化；优选采用20℃条件下，以惰性气体N2为载气改性活性炭材料，提高活性炭表面上引入丰富的含氮官能团，对N-乙酰半胱氨酸具有较强的吸附能力，吸附量比未改性的活性炭的吸附量显著增大。
进一步的，所述的酸性溶液选自硝酸、盐酸。
进一步的，所述高温超声处理的温度为80～90℃。
由于N-乙酰半胱氨酸里含有巯基，巯基是典型的软碱性配位基团，能与软酸金属离子Pb2+形成稳定螯合物，因此，利用经酸性溶液氧化后的活性炭在高温下进行热处理，使得活性炭表面的酸性含氧官能团大量分解，形成了一些新的碱性部位。
进一步的，需要控制活性炭的粒径：对活性炭进行粉碎过筛处理使其粒径在0.1～2μm范围内，优选的粒径范围是0.1～0.2μm，有利于增加药用活性炭的比表面积，增大吸附量，利于N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的制备。
本发明的第二方面涉及一种N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其包含第一方面任一项所述的药物组合物和载体材料，所述药物组合物与载体材料的重量比为1∶1～6，优选为1∶1.5～4，更优选为1∶2～3。
本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其中所述的载体材料选自聚丙烯酸树脂、明胶、壳聚糖、白蛋白、海藻酸钠中的任意一种或任意多种。
进一步的，本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其具有明显缓释效果，缓释时间为8～12小时。
进一步的，本发明所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其中所述的复合物的粒径50～200μm，优选的粒径为80～140μm。
本发明的第三方面涉及第一方面任一项的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
将含有N-乙酰半胱氨酸的溶液与经酸性溶液处理的活性炭按比例混合，超声分散混匀，即得到N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物，所述的N-乙酰半胱氨酸和活性炭混合的重量比为1∶0.5～5，优选的重量比为1∶1～4.5，进一步优选的重量比为1∶2～3.5，更优选的重量比为1∶2.5～3。
进一步的，制得的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物中，其活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的吸附量以所述N-乙酰半胱氨酸重量占所述活性炭和N-乙酰半胱氨酸重量的百分数计，为15～65wt％，优选为20～55wt％，更优选为30～45wt％。
进一步的，制得的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物，其具有明显缓释效果，缓释时间为5～8小时。
进一步的，制得的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物，其中所述的组合物的粒径0.4～2μm，优选0.7～1.5μm。
本发明的第四方面涉及第二方面任一项的N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
将溶胀的载体材料与第一方面任一项所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物按比例混合，搅拌成混悬液，加入表面活性剂，脱水、固化，即得N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，所述药物组合物与载体材料的重量比为1∶1～6，优选为1∶1.5～4，更优选为1∶2～3。
进一步的，所述的载体材料选自聚丙烯酸树脂、明胶、壳聚糖、白蛋白、海藻酸钠中的任意一种或任意多种。
进一步的，制得的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其具有明显缓释效果，缓释时间为8～12小时。
进一步的，制得的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其中所述的复合物的粒径为50～200μm，优选的粒径为80～140μm。
进一步的，所述的表面活性剂为液体石蜡、司盘-80。
本发明的第五方面涉及第一方面任一项所述的药物组合物或第二方面任一项所述的药物复合物在用于制备肝脏疾病药物的用途。
本发明的第六方面涉及一种N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复配物，其包含为第一方面任一项所述的药物组合物和/或第二方面任一项所述的药物复合物，以及与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
根据本发明第六方面的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复配物，可采用现有制药领域中的常规方法生产，其中所述的药学上各种可接受的辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、润滑剂等。
根据本发明第六方面的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复配物，其中所述的制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型包括注射剂、口服制剂等。复配物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80、聚乙二醇类、丙二醇类、丙三醇类等助溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，如氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇、蔗糖、甘氨酸等。复配物在制成口服制剂时，可选择的稀释剂或填充剂有：淀粉、蔗糖、磷酸钙、阿拉伯树胶、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露糖醇等；可选择的保湿剂如甘油；可选择的粘合剂有：羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素等；可选择的崩解剂有：琼脂、碳酸钙、海藻酸、碳酸钠、干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；可选择的溶液阻滞液如石蜡；可选择的润滑剂有：硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等；可选择的吸收促进剂如季铵化合物；可选择的润湿剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯等。
本发明的第七方面涉及第六方面所述的复配物在用于制备肝脏疾病药物的用途。
根据本发明第五方面和第七方面的用途，其中所述的肝脏疾病选自肝纤维化，急、慢性肝疾病，肝硬化，酒精性、非酒精性肝病，脂肪性肝病等。
肝纤维化是指肝脏纤维组织弥漫性增生，它是各种慢性肝脏疾病的共同终末途径。活化的肝星状细胞生成大量的细胞外基质是肝纤维化的中心环节，肝星状细胞不仅合成新细胞外基质，同时也合成干扰正常间质的基质金属蛋白酶。在肝纤维化过程中，以肝星状细胞为中心的旁分泌和自分泌作用下不断使病情恶化。而氧化应激导致肝星状细胞激活的重要因素，因此，消除各种自由基是治疗肝纤维化的基础，N-乙酰半胱氨酸具有较强的抗氧化性能，从机制上说明其具有较好的治疗肝纤维化作用。另外，肠道菌群的失调对肝纤维化的发展起促进作用，细菌释放的内毒素进入人体循环，活化免疫细胞，释放炎症因子。因此，减少细菌内毒素的产生和进入体内可以减缓肝纤维化的进展，而活性炭作为吸附惰性载体，对细菌内毒素具有较好的吸附作用，从一定程度上抑制了疾病的进展。
非酒精性脂肪性肝炎是指除去酒精和其他明确的肝损害因素所致的以慢性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合症演变的脂肪性肝炎。非酒精性脂肪性肝炎与肝纤维化的发病机制不同，两者的治疗效果也不同。
本发明的有益效果在于：
(1)首次发现了N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物中N-乙酰半胱氨酸与活性炭的特定重量配比1∶0.5～5及N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物与载体材料的特定重量比例1∶1～6，上述两种比例显示N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物和复合物具有明显缓释效果，并且对肝纤维化，急、慢性肝疾病，肝硬化，酒精性、非酒精性肝病，脂肪性肝病等疾病的治疗具有决定性作用。
(2)首次提供了一种N-乙酰半胱氨酸、活性炭或N-乙酰半胱氨酸、活性炭及载体按特定比例混合制备治疗肝纤维化，急、慢性肝疾病，肝硬化，酒精性、非酒精性肝病，脂肪性肝病的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物、复合物、复配体及其制备方法和用途，满足临床需要；
(3)首次对本发明药物组合物和复合物的相互作用和配伍组方进行了药剂学和药效学研究，发现了N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物和复合物对二甲基亚硝胺所致大鼠肝纤维化、四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤、酒精性肝损伤及高脂饲料所致大鼠非酒精性脂肪性肝炎具有明显的治疗作用，明显降低肝纤维化大鼠血清学指标，升高肝组织SOD、GSH含量，降低肝组织MDA、Hyp、TGF-β1、TCHOL、TG、LDL等含量，显著抑制肝纤维化和各肝脏疾病的发展进程。通过对比实验发现，N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物和复合物实验组与正常组、模型组、单用乙酰半胱氨酸组和水飞蓟宾组相比，统计学差异均显著(p<0.05)，表明N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物和复合物治疗肝脏疾病效果显著，其结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的；
(4)本发明制备工艺简单，产品质量和收率高，药品制剂均匀稳定；
(5)进行稳定性实验表明本发明药物组合物和复合物各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；
(6)本发明组合物、复合物合并用药疗效确切，且减少了相对用药剂量，而且具有良好的生物安全性，具有广泛的临床应用前景。
附图说明
图1：乙酰半胱氨酸、乙酰半胱氨酸加载体材料、N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物与N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物缓释效果实验结果图。
图2：N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物显微图(放大倍数200)。
图3：N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物扫描电镜图。
图4：N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物粒径分布图。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，进一步阐述所述药物组合物、复合物的有益效果。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例1
N-乙酰半胱氨酸(NAC)与活性炭重量比为1∶1的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物制备
称取活性炭1.0g，研磨，筛分出粒径在0.1-2μm活性炭，加入25ml酸性溶液(含91.25mgHCl)，在80℃恒温超声30min，过滤，于105℃减压烘干燥，备用。精密称取NAC1.0g，置于250ml具塞锥形瓶中，加入煮沸30分钟冷却的去氧水40ml，溶解。精密加入活性炭1.0g，充氮、密塞，1500rmp搅拌30min，过滤，50℃减压干燥，置于密封容器中，即得组合物。
实施例2
N-乙酰半胱氨酸与活性炭重量比为1∶2.5的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物制备
称取活性炭2.5g，研磨，筛分出粒径在0.1-0.2μm活性炭，加入25ml酸性溶液(含91.25mgHCl)，在80-90℃恒温超声30min，过滤，于105℃减压烘干燥，备用。精密称取NAC1.0g，置于250ml具塞锥形瓶中，加入煮沸30分钟冷却的去氧水40ml，溶解。精密加入活性炭1.0g，充氮、密塞，1500rmp搅拌30min，过滤，50℃减压干燥，置于密封容器中，即得组合物。
实施例3
N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的吸附量、粒径范围及缓释效果
为了说明N-乙酰半胱氨酸与活性炭之间的特异性协同复配作用，并且二者的协同复配作用对所制备的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物的药剂学性质及药效学具有显著的影响，以及找出活性炭对N-乙酰半胱氨酸产生最强吸附效果的两者优选重量比，本发明进行不同比例活性炭和N-乙酰半胱氨酸组合物药剂学性质比较，通过上述条件制备组合物，以验证N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物中两者优选重量比。
活性炭对N-乙酰半胱氨酸的吸附量采用外标法高效液相色谱法测定，色谱条件为色谱柱Agilent ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相∶0.01mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.56g，加水700ml溶解后，用磷酸调pH2.5，加水至1000ml)-甲醇(90∶10)；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：20μL，在上述色谱条件下，理论踏板数和分离度均符合要求，活性炭对N-乙酰半胱氨酸测定无干扰。
吸附量测定：精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物50mg，加入煮沸30分钟冷却的去氧水25ml，超声提取，同法提取三次，合并滤液，定容至100ml。精密吸取5ml置于10ml量瓶中，加水定容，按上述色谱条件测定。吸附量(％)＝活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的量/(活性炭+N-乙酰半胱氨酸)总量，结果见表1。
缓释功能测定：精密称取按不同重量比制备的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物0.5g，装入预先处理好的透析袋中，加入5ml人工胃液溶液，两端扎紧，放入450ml人工胃液溶液的具塞玻璃瓶中，于(37±0.5)℃水浴恒温振荡每分钟60次/min，定时取样5.0ml，并补加5.0ml新鲜释放介质，按上述高效液相测定乙酰半胱氨酸含量方法检测，结果见表1。
表1 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的药剂学性质
从表1结果可知，不同比例活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸，粒径范围、缓释时间、吸附量结果有明显不同，根据实验结果，N-乙酰半胱氨酸和活性炭重量比1∶2.5～3为最佳比例，且在1∶0.5～5范围外不能达到缓释效果，吸附量和粒径结果也不理想。
以下实施例中的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物均为N-乙酰半胱氨酸和活性炭重量比1∶2.5～3按实施例2所述的组合物制备方法制备而成的。
实施例4不同载体材料N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物制备
精密称取聚丙烯酸树脂Ⅱ号2g，加丙酮50ml和无水乙醇5ml，溶胀过夜。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1g，硬脂酸镁0.03g，加入溶胀后的10ml聚丙烯酸树脂Ⅱ号中，在15℃水浴中搅拌5min，成混悬液作为水相；取液体石蜡15ml，加入0.5ml司盘-80混匀作为油相。将水相以液滴状加入油相，于室温下继续搅拌1h，加5ml纯化水固化，离心，取固体在60℃减压干燥，即得。
精密称取聚丙烯酸树脂Ⅱ号1.5g，加丙酮50ml和无水乙醇5ml，溶胀过夜。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1g，硬脂酸镁0.03g，加入溶胀后的10ml聚丙烯酸树脂Ⅱ号中，在15℃水浴中搅拌5min，成混悬液作为水相；取液体石蜡15ml，加入0.5ml司盘-80混匀作为油相。将水相以液滴状加入油相，于室温下继续搅拌1h，加5ml纯化水固化，离心，取固体在60℃减压干燥，即得。
精密称取聚丙烯酸树脂Ⅲ号3g，加丙酮50ml和无水乙醇5ml，溶胀过夜。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1g，硬脂酸镁0.03g，加入溶胀后的10ml聚丙烯酸树脂Ⅲ号中，在15℃水浴中搅拌5min，成混悬液作为水相；取液体石蜡20ml，加入1ml司盘-80混匀作为油相。将水相以液滴状加入油相，继续搅拌30min，加5ml乙酸乙酯固化，离心，水洗涤三次，离心，取固体在60℃减压干燥，即得。
精密称取聚丙烯酸树脂Ⅲ号4.0g，加丙酮50ml和无水乙醇5ml，溶胀过夜。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1g，硬脂酸镁0.03g，加入溶胀后的10ml聚丙烯酸树脂Ⅲ号中，在15℃水浴中搅拌5min，成混悬液作为水相；取液体石蜡20ml，加入1ml司盘-80混匀作为油相。将水相以液滴状加入油相，继续搅拌30min，加5ml乙酸乙酯固化，离心，水洗涤三次，离心，取固体在60℃减压干燥，即得。
精密称取明胶2.5g，加水10ml、55℃在1200rmp搅拌充分溶胀。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1.0g加入明胶溶液中，在55℃在1200rmp搅拌20min成混悬液作为水相；取液体石蜡50ml，加入1g司盘-80混匀作为油相。将水相线状加入油相，继续搅拌20min，加异丙醇15ml脱水3min，用甲醛10ml固化5min，于4℃放置24h，异丙醇洗涤三次，过滤，水洗涤三次，过滤，50℃减压干燥固体，即得。
精密称取明胶1.0g，加水10ml、55℃在1200rmp搅拌充分溶胀。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1.0g加入明胶溶液中，在55℃在1200rmp搅拌20min成混悬液作为水相；取液体石蜡50ml，加入1g司盘-80混匀作为油相。将水相线状加入油相，继续搅拌20min，加异丙醇15ml脱水3min，用甲醛10ml固化5min，于4℃放置24h，异丙醇洗涤三次，过滤，水洗涤三次，过滤，50℃减压干燥固体，即得。
精密称取明胶6.0g，加水10ml、55℃在1200rmp搅拌充分溶胀。精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物1.0g加入明胶溶液中，在55℃在1200rmp搅拌20min成混悬液作为水相；取液体石蜡50ml，加入1g司盘-80混匀作为油相。将水相线状加入油相，继续搅拌20min，加异丙醇15ml脱水3min，用甲醛10ml固化5min，于4℃放置24h，异丙醇洗涤三次，过滤，水洗涤三次，过滤，50℃减压干燥固体，即得。
以下实施例中的N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物均为N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物与载体材料明胶重量比为1∶2.5按上述明胶方法制备而成的。
实施例5 N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物缓释功能
将N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物进行缓释功能比较。具体操作如下：将精密称取制备的N-乙酰半胱氨酸复合物0.5g，装入预先处理好的透析袋中，加入5ml人工胃液溶液，两端扎紧，放入450ml人工胃液溶液的具塞玻璃瓶中，于(37±0.5)℃水浴恒温振荡每分钟60次/min，定时取样5.0ml，并补加5.0ml新鲜释放介质。取样后按上述高效液相含量检测方法处理并测定含量，根据标准曲线计算累计释放百分率(Q)，以Q对时间(t)作图并进行方程拟合；同时精密称取N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物、N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸+载体材料适量，按上述要求释放，结果见图1。由图1可知，N-乙酰半胱氨酸在20分钟内完全释放，N-乙酰半胱氨酸+载体材料稍具有缓释效果，但效果不及N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物释放时间明显延长，累积释放50％时间长达10h以上。
实施例6 N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物形态观察、粒径大小及其分布
光镜形态观察：在光学显微镜下用测微尺目测3批N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物的粒径，每批不少于500个，其粒径分布在80-140μm的复合物占总数81.9％，平均算术粒径为110.4μm，SD为13.59μm，结果见图2；电镜观察：另取少量干燥复合物，经喷金后，在电子扫描显微镜下观察，记录扫描电镜图谱。在扫描电镜下观察，复合物表面光滑，未见有药物附着于表面，见图3。
取室温下不少于500个N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物，轻涂载玻片上，滴少许液体石蜡分散，在光学显微镜下进行形态观察，同时计算复合物的平均粒径(dav)和粒径分布。根据公式：式中d1，d2……di为所述复合物的粒径，n1，n2……ni分别为具有粒径为d1，d2……di的复合物的个数，粒径分布见图4。
从图2-图4中可以看出所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物呈黑色，外形圆整，表面光滑，粒径较均匀，分散性好，表面未见有药物附着。
实施例7 N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物的载药量、粒径及缓释功能
为了再次验证活性炭对N-乙酰半胱氨酸产生最强吸附效果的两者优选重量比，按照实施例4中载体材料为明胶的制备方法制备复合物，进行不同比例活性炭和N-乙酰半胱氨酸药剂学性质比较，检测方法与实施例3中采用外标法高效液相色谱法测定N-乙酰半胱氨酸含量相同，结果见表2。
表2 N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物药剂学性质
从表2结果可知，不同比例N-乙酰半胱氨酸和活性炭形成复合物，粒径范围、缓释时间、载药量和包封率结果有明显不同。根据实验结果，N-乙酰半胱氨酸与活性炭重量比为1∶2.5～3为最佳复配比例，此配比制备的复合物载药量、包封率较其他配比组分高，缓释时间较其他组长且粒径较为理想，并且N-乙酰半胱氨酸与活性炭的配比重量在1∶0.5～5范围外，无缓释效果，同时载药量、包封率和粒径结果也很不理想。
表1和表2中采用了相同的N-乙酰半胱氨酸和活性炭的不同重量比例作为参数进行实验，确切说明了N-乙酰半胱氨酸与活性炭的配比重量在1∶0.5～5内不论制备成组合物还是复合物，都具有缓释效果，但复合物的缓释效果较组合物强，鉴于载体材料增加N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物的缓释效果，提高组合物的稳定性，且与组合物产生协同增效作用。
实施例8 N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物稳定性测定
N-乙酰半胱氨酸、N,N，-二乙酰胱氨酸的含量测定方法如下：色谱柱：Agilent，ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.01mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.38g，庚烷磺酸钠3.2g，加水700ml，溶解后，用磷酸调节pH至2.15，加水至1000ml)-甲醇＝95∶5；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：20μl。
取N-乙酰半胱氨酸适量，加流动相制成质量浓度为4mg/ml作为供试品溶液。取N,N，-二乙酰胱氨酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。
分别取N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物、N-乙酰半胱氨酸加载体材料(明胶)和N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物置于常温下放置3个月和6个月，根据上述条件，对不同供试品进行测定比较，结果见下表3和表4。
表3 放置3个月不同供试品含量测定结果
表4 放置6个月不同供试品含量测定结果
从表3和表4可以看出，N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸加载体材料、N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物在放置3个月和6个月后，其所含N-乙酰半胱氨酸有效含量均未出现明显差异，但N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸加载体材料中N,N，-二乙酰胱氨酸杂质和总杂质含量明显增加，N-乙酰半胱氨酸活性炭复合物中N,N，-二乙酰胱氨酸和总杂质含量增量较N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物少。
实施例9 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物药效学和毒性试验
在本发明药效学和毒性试验中，我们发现N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物和复合物在药效学方面显示出相同的疗效，因此下述实验和表格中皆以“活性炭组合物/复合物”表示，“N-乙酰半胱氨酸纳米活性炭复合物”则以“纳米活性炭复合物”表示。表格中“N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高、中、低剂量组”分别以“活性炭组合物/复合物高”、“活性炭组合物/复合物中”和“活性炭组合物/复合物低”表示。“N-乙酰半胱氨酸纳米活性炭复合物高、中、低剂量组”分别以“纳米活性炭复合物高”、“纳米活性炭复合物中”和“纳米活性炭复合物低”表示。
实施例9-1 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对二甲基亚硝胺(DMNA)致大鼠肝纤维化的治疗作用。
取大鼠150只随机分为两大组：正常组10只、造模组140只。造模期间标准饲料，自由饮水进食。造模组以10mg·kg-1的DMNA溶液大鼠皮下注射该溶液，每周3次，连续4周，正常对照组10mg·kg-1生理盐水皮下注射。第四周末处理大鼠5只，Massion染色观察肝纤维化程度。造模成功后，对已成模的大鼠分成6组，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高、中、低组每组15只、水飞蓟宾组15只、N-乙酰半胱氨酸组、模型组15只。N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高、中、低组分别灌胃给药100mg·kg-1、50mg·kg-1、25mg·kg-1，N-乙酰半胱氨酸组灌胃给药100mg·kg-1，水飞蓟宾组灌胃给药50mg·kg-1，模型组和正常对照组灌胃给药等体积的0.9％生理盐水，每日1次，连续给药治疗8周，于末次给药24h后，处死各组大鼠，取肝组织用ELISA法测定MDA、Hyp、SOD和TGF-β1；同时取血样离心(2000×g，10min)分离血清，用于测定ALT、AST、TP、Alb、Glb、Tbil等指标。
血清学指标测定：取大鼠血液10ml，置于生化采血管中，静止30分钟，2000×g离心10分钟，按照试剂盒说明书操作检测ALT、AST、Tbil；肝组织指标测定：MDA、SOD、Hyp指标测试按照试剂盒说明的方法进行处理，后酶标仪测定相应波长下的SOD值；TGF-β1指标测定：根据试剂盒说明，取大鼠肝脏组织，4℃下高速分散，制成10％肝组织匀浆，2000×g离心10分钟，精密取上清液100μl，ELISA法测定TGF-β1表达量。实验结果的数据统计使用SPSS16.0进行分析，以x±s表示，t检验作统计分析。
实验结果显示模型组大鼠血清学指标明显高于正常组大鼠和各治疗组大鼠。由各项血清学指标可见，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物、N-乙酰半胱氨酸和水飞蓟宾对大鼠肝纤维各项血清生化指标Tbil、ALT、AST有显著的治疗作用，提示药物对大鼠肝纤维化均有一定的治疗作用。其中，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物中高剂量给药组效果明显优于N-乙酰半胱氨酸(p<0.05)，说明N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对肝纤维化有很好的治疗效果。从治疗结果分析，与N-乙酰半胱氨酸组比较，组合物/复合物通过延长药物作用时间，提高了药物稳定性，减少了血药浓度的波动，更有利于疾病的治疗，具体指标数据结果见表5。
表5 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对肝纤维化血清学指标的影响(x±s)
| 组别 | n | Tbil(μmol/L) | ALT(U/L) | AST(U/L) |
| 正常组 | 10 | 1.51±0.33 | 57.00±6.84 | 116.70±8.86 |
| 模型组 | 13 | 2.21±0.281 | 269.11±8.341 | 213.06±9.101 |
| 组合物/复合物低 | 12 | 1.89±0.192 | 232.24±7.522 | 181.88±6.112 |
| 组合物/复合物中 | 14 | 1.71±0.232 | 208.19±8.9623 | 154.13±7.4523 |
| 组合物/复合物高 | 14 | 1.63±0.1723 | 177.47±7.6823 | 139.80±8.9923 |
| N-乙酰半胱氨酸组 | 12 | 1.91±0.312 | 239.71±9.612 | 177.35±7.702 |
| 水飞蓟宾组 | 13 | 1.75±0.262 | 201.82±9.012 | 157.59±9.122 |
注：1.与正常组比较p<0.05，2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
从实验结果可知，肝纤维化成模后的大鼠在Hyp和MDA的表达水平上出现显著的增加，SOD则低于正常组大鼠和各治疗组大鼠。对成模后的大鼠进行肝纤维化治疗后，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物治疗中各组都有一定程度的指标逆转，其中对MDA和SOD相较N-乙酰半胱氨酸治疗效果，其中中高剂量组合物/复合物组的治疗效果明显好于N-乙酰半胱氨酸(p<0.05)，对肝纤维化指标Hyp的治疗，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高剂量组的治疗效果较为接近正常组中大鼠的Hyp表达量，中剂量和低剂量也体现出了较好的肝纤维化指标Hyp的降低和抑制作用。组合物/复合物在体内发挥较强的抗氧化作用主要由于通过延缓了药物作用时间，治疗有效浓度时间延长，发挥较好的治疗肝纤维化作用，具体指标数据结果见表6。
表6 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对肝组织指标的影响(x±s)
注：1.与正常组比较p<0.05，2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
本实验中，模型组肝纤维化大鼠TGF-β1的表达水平明显高于正常组水平，达4649.10pg/g；N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物、N-乙酰半胱氨酸和水飞蓟宾对肝纤维化成模后的大鼠进行治疗后，对TGF-β1的表达有较好的抑制和降低作用。尤其是高剂量的N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物治疗后，对TGF-β1的表达抑制，使其基本接近正常组大鼠的TGF-β1水平。与N-乙酰半胱氨酸组比较，各剂量组N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对肝纤维化重要指标TGF-β1有明显的改善作用。具体指标数据结果见表7。
表7 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对TGF-β1指标影响(x±s)
| 组别 | n | TGF-β1(pg/g) |
| 正常组 | 10 | 1486.07±58.77 |
| 模型组 | 13 | 4649.14±67.331 |
| 组合物/复合物低 | 12 | 3633.75±89.0223 |
| 组合物/复合物中 | 14 | 3217.21±73.6823 |
| 组合物/复合物高 | 14 | 2894.52±69.3423 |
| N-乙酰半胱氨酸组 | 12 | 4116.93±56.052 |
| 水飞蓟宾组 | 13 | 3102.63±97.092 |
注：1.与正常组比较p<0.05，2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
此外，本发明还对N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物防治慢性肝损伤、非酒精性脂肪性肝炎和酒精性肝损伤进行了药效学初期研究，以下所述N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物简称“组合物/复合物”，具体实验结果如下：
实施例9-2N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对四氯化碳(CCl4)致大鼠慢性肝损伤的保护作用
大鼠60只，按照体重随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、N-乙酰半胱氨酸组(200mg·kg-1)、N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物低、中、高剂量组灌胃给药50mg·kg-1、100mg·kg-1、200mg·kg-1。除正常对照组外，其余各组于第1周开始给予25％CCl4花生油溶液3ml/kg，2次/周，1次皮下注射和1次灌胃交替造模，连续10周。于造模第1起，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物在造模的同时予以灌胃，模型对照组和正常对照组大鼠灌胃给予以等量生理盐水，各鼠按10ml/kg每日灌胃1次，连续10周，末次给药后，大鼠禁食不禁水16h后用10％水合氯醛按0.3ml/kg体重腹腔注射麻醉，腹主动脉采血分离血清，保存肝组织检测。
实验生化指标结果显示，慢性肝损伤模型组大鼠的ALT、AST与正常对照组比较均明显上升，表明大鼠慢性肝损伤模型创建成功；各给药组的ALT明显低于模型对照组，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高、中剂量组大鼠的ALT、AST基本接近正常组水平；组合物/复合物高剂量组的Tbil也明显低于模型组，其中高、中、低剂量组的TP则明显高于模型组，并基本接近正常水平。对照药物N-乙酰半胱氨酸灌胃给药后对ALP和Tbil的作用不明显。与N-乙酰半胱氨酸比较，组合物/复合物防治慢性肝损伤方面有明显的作用优势，这是本发明取得的显著的药效学结果，见表8。
表8 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对慢性肝损伤大鼠生化指标的影响(x±s)
| 组别 | n | ALT(U/L) | AST(U/L) | ALP(U/L) | Tbil(umol/L) | TP(g/L) |
| 正常组 | 10 | 44±252 | 115±422 | 104±521 | 1.4±0.7 | 67.9±7.8 |
| 模型组 | 10 | 96±49 | 229±93 | 165±71 | 2.1±1.2 | 62.1±7.6 |
| 组合物/复合物低 | 9 | 63±2012 | 152±802 | 133±642 | 1.7±0.5 | 68.4±4.12 |
| 组合物/复合物中 | 10 | 55±2223 | 127±4623 | 128±5023 | 1.6±0.42 | 66.9±4.62 |
| 组合物/复合物高 | 10 | 51±3223 | 115±192 | 106±3923 | 1.4±0.423 | 67.2±4.92 |
| N-乙酰半胱氨酸组 | 9 | 67±201 | 183±311 | 181±801 | 1.8±1.11 | 67.9±4.31 |
注：1.与模型组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
实验结果表明模型组大鼠与正常组比较，SOD活性显著降低，MDA含量显著升高；与模型组比较，N-乙酰半胱氨酸组对MDA含量有明显改善，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对SOD活性有显著升高作用，对MDA含量则有显著的降低作用，显示复合物防治慢性肝损伤与体内抗氧化作用有关。同时，模型组大鼠与正常对照组比较，肝组织Hyp含量显著升高；与模型组比较，各给药组肝组织的Hyp含量均有显著降低作用；与N-乙酰半胱氨酸组比较，组合物/复合物各剂量组的疗效显著提高，见表9。
表9 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对慢性肝损伤大鼠肝组织指标的影响(x±s)
注：1.与模型组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
实施例9-3 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对酒精灌胃所致大鼠酒精性肝损伤的保护作用
大鼠随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高中低剂量干预组，每组10只。空白组灌胃生理盐水，模型组灌胃酒精(1.45g/kg)，于灌胃酒精1h前灌服N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物，剂量为50mg·kg-1、100mg·kg-1、200mg·kg-1。各组大鼠禁食12h后每日上午灌胃，灌胃量约4ml，前2周隔日1次，后2周每日1次。均普通颗粒饲料喂养，自由饮水和进食。灌胃6周后采用取血，分离血清低温保存待检；取出肝脏检测指标。
本实验中，与正常组相比，酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST活性明显升高。肝脏指数也显著增加(p<0.05)，显示肝细胞受到损伤。与酒精性肝损伤模型组比较，N-乙酰半胱氨酸组明显降低ALT、AST活性，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物各剂量组ALT、AST活性均明显降低，肝脏指数降低(p<0.05)。与组合物/复合物低、中、高剂量组ALT活性降低，肝指数减小，高剂量组AST活性降低(p<0.05)，见表10。
表10 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对酒精性肝损伤大鼠生化指标的影响(x±s)
注：1.与正常组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
实验结果显示，与正常组对比，酒精性肝损伤模型组大鼠SOD活性明显降低，MDA含量明显升高(p<0.05)，提示肝脏发生了脂质过氧化反应。与模型组比较，N-乙酰半胱氨酸组明显升高SOD活性，降低MDA含量，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物各剂量组肝组织中SOD活性明显升高，MDA含量明显降低(p<0.05)。与N-乙酰半胱氨酸组比较，组合物/复合物低、中、高剂量组SOD活性明显升高，MDA含量明显降低(p<0.05)，见表11。
表11 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对酒精性肝损伤大鼠肝组织指标的影响(x±s)
注：1.与正常组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.n表示大鼠的数量。
实施例9-4 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对高脂饲料所致大鼠非酒精性脂肪性肝炎的治疗作用
105只SD大鼠随机分为9组10只(每天予以标准饲料喂养)，造模组95只(每天予以高脂饲料喂养)，连续喂养12周；第12周结束后随机在造模组中处死5只。取肝脏进行病理切片检查HE染色法，评定非酒精性脂肪性肝炎程度。将造模组分为N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物高中低组，剂量为25mg·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1，N-乙酰半胱氨酸纳米活性炭复合物高、中、低组(制备方法采用纳米活性炭与复合物按实施例4载体材料为明胶的制备方法制备)，剂量为200mg·kg-1，400mg·kg-1，800mg·kg-1，N-乙酰半胱氨酸组剂量为100mg·kg-1，各组药物每天灌喂一次。正常组给予同等剂量的生理盐水，给药治疗10周后，处死各组大鼠，取血，迅速取肝右叶中部切取数块肝组织，立即投入液氮中冻存，3h后移入-80℃冰箱中保存备用。
实验结果显示，与正常组比较，N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物和N-乙酰半胱氨酸组的血清ALT、AST均明显升高(p<0.05)；与高脂组比较，组合物/复合物组中剂量组的ALT、AST均明显下降(p<0.05)；与正常组比较，组合物/复合物和N-乙酰半胱氨酸组血清TG、LDL均有明显所升高(p<0.01～0.05)，与模型组比较，组合物/复合物高、中、低剂量组较模型组明显下降(p<0.05)；TCHOL中、低剂量组之间无统计学意义，但其数值上各组均高于正常组，且与模型组比较，组合物/复合物高、中、低剂量组明显下降。组合物/复合物治疗效果明显优于N-乙酰半胱氨酸纳米活性炭复合物组，见表12、表13。
表12 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠生化指标的影响(x±s)
| 组别 | n | ALT(U/L) | AST(U/L) |
| 正常组 | 10 | 69.3±7.5 | 188.1±19.2 |
| 模型组 | 9 | 160.5±12.11 | 504.9±28.61 |
| 组合物/复合物低 | 9 | 101.8±13.224 | 290.6±40.224 |
| 组合物/复合物中 | 10 | 92.4±11.8234 | 253.5±30.9234 |
| 组合物/复合物高 | 10 | 86.6±9.9234 | 241.8±22.8234 |
| 纳米活性炭复合物低 | 10 | 112.2±12.12 | 314.9±31.82 |
| 纳米活性炭复合物中 | 10 | 86.1±13.72 | 274.2±31.52 |
| 纳米活性炭复合物高 | 10 | 103.6±9.82 | 340.1±32.42 |
| N-乙酰半胱氨酸组 | 10 | 124.6±54.912 | 418.1±31.312 |
注：1.与正常组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.与纳米活性炭复合物剂量组比较，p<0.05；5.n表示大鼠的数量。
表13 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠生化指标的影响(x±s)
| 组别 | n | TCHOL(mmol/L) | TG(mmol/L) | LDL(mmol/L) |
| 正常组 | 10 | 1.81±0.2 | 0.48±0.02 | 0.55±0.07 |
| 模型组 | 9 | 3.95±0.41 | 1.94±0.21 | 2.92±0.51 |
| 组合物/复合物低 | 9 | 3.12±0.324 | 1.49±0.2124 | 2.33±0.2124 |
| 组合物/复合物中 | 10 | 3.08±0.4234 | 1.27±0.21234 | 2.14±0.31234 |
| 组合物/复合物高 | 10 | 2.63±0.3234 | 1.02±0.11234 | 1.75±0.21234 |
| 纳米活性炭复合物低 | 10 | 3.52±0.32 | 1.86±0.12 | 2.71±0.32 |
| 纳米活性炭复合物中 | 10 | 3.32±0.42 | 1.89±0.22 | 2.66±0.22 |
| 纳米活性炭复合物高 | 10 | 3.21±0.22 | 1.92±0.12 | 2.58±0.22 |
| N-乙酰半胱氨酸组 | 10 | 3.55±0.32 | 1.79±0.22 | 2.69±0.22 |
注：1.与正常组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.与纳米活性炭复合物剂量组比较，p<0.05；5.n表示大鼠的数量。
本实验中，组合物/复合物高、中、低剂量三组与模型组比较，SOD活力均明显升高(p<0.05)，GSH-px含量均明显升高(p<0.05)；组合物/复合物中、低剂量与模型组比较，MDA明显下降(p<0.05)，组合物/复合物治疗效果明显优于N-乙酰半胱氨酸和纳米活性炭复合物组，见表14。
表14 N-乙酰半胱氨酸活性炭组合物/复合物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织指标的影响(x±s)
注：1.与正常组比较，p<0.05；2.与模型组比较，p<0.05；3.与N-乙酰半胱氨酸组比较，p<0.05；4.与纳米活性炭复合物剂量组比较，p<0.05；5.n表示大鼠的数量。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (30)
1.一种N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物包含活性炭和N-乙酰半胱氨酸，不含EDTA，所述的活性炭的粒径为0.1～2μm，所述的N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶0.5～5，所述药物组合物中活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的吸附量以所述N-乙酰半胱氨酸重量占所述活性炭和N-乙酰半胱氨酸重量的百分数计，为15～65wt％；所述的活性炭为改性活性炭，所述改性活性炭的制备方法为：取研磨活性炭，筛分出适宜粒径，在酸性溶液中充惰性气体并进行高温处理，减压干燥，即得改性活性炭。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶1～4.5。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶2～3.5。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的N-乙酰半胱氨酸与活性炭的重量比为1∶2.5～3。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物中活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的吸附量以所述N-乙酰半胱氨酸重量占所述活性炭和N-乙酰半胱氨酸重量的百分数计，为20～55wt％。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物中活性炭吸附N-乙酰半胱氨酸的吸附量以所述N-乙酰半胱氨酸重量占所述活性炭和N-乙酰半胱氨酸重量的百分数计，为30～45wt％。
7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的粒径为0.4～2μm。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的粒径为0.7～1.5μm。
9.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的惰性气体是氮气。
10.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的酸性溶液选自硝酸、盐酸。
11.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述高温处理的温度为80～90℃。
12.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的活性炭粒径为0.1～0.2μm。
13.根据权利要求1-12任一项所述的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物具有缓释效果，缓释时间为5～8小时。
14.一种N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其特征在于：所述的药物复合物包含权利要求1-13任一项所述的药物组合物和载体材料，所述药物组合物与载体材料的重量比为1∶1～6。
15.根据权利要求14所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其特征在于：所述药物组合物与载体材料的重量比为1∶1.5～4。
16.根据权利要求14所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物，其特征在于：所述药物组合物与载体材料的重量比为1∶2～3。
17.根据权利要求14所述的药物复合物，其特征在于：所述的载体材料选自聚丙烯酸树脂、明胶、壳聚糖、白蛋白、海藻酸钠中的任意一种或任意多种。
18.根据权利要求14所述的药物复合物，其特征在于：所述药物复合物的粒径为50～200μm。
19.根据权利要求14所述的药物复合物，其特征在于：所述药物复合物的粒径为80～140μm。
20.根据权利要求14-19任一项所述的药物复合物，其特征在于：所述的药物复合物具有缓释效果，缓释时间为8～12小时。
21.权利要求1-13任一项所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
将含有N-乙酰半胱氨酸的溶液与经酸性溶液处理的活性炭按比例混合，超声分散混匀，即得到N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物。
22.权利要求14-20任一项所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
将溶胀的载体材料与权利要求1-13任一项所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物组合物按比例混合，搅拌成混悬液，加入表面活性剂，脱水、固化，即得N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物。
23.根据权利要求22所述的N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复合物的制备方法，其特征在于：所述的表面活性剂为液体石蜡、司盘-80。
24.一种N-乙酰半胱氨酸活性炭药物复配物，其特征在于：所述的复配物为权利要求1-13任一项所述的药物组合物和/或权利要求14-20任一项所述的药物复合物，以及与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
25.权利要求24所述的药物复配物，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料为药学领域常规的赋形剂。
26.权利要求24所述的药物复配物，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料选自药学领域常规的稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、润滑剂。
27.权利要求24-26任一项所述的药物复配物，其特征在于：所述的制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型选自注射剂、口服制剂。
28.权利要求1-13任一项所述的药物组合物、权利要求14-20任一项所述的药物复合物、权利要求24-26任一项所述的复配物在用于制备肝脏疾病药物的用途。
29.权利要求28所述的用途，其特征在于：所述的肝脏疾病选自急、慢性肝疾病。
30.权利要求28所述的用途，其特征在于：所述的肝脏疾病选自肝纤维化，肝硬化，酒精性、非酒精性肝病，脂肪性肝病。
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