CN104630246B - 南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用 - Google Patents
南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种南方根结线虫效应基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用，属于生物基因工程技术领域。本发明的效应基因Miace3核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其相关蛋白Miace3的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明用qPCR研究基因在线虫不同阶段表达情况；设计病毒重组RNAi载体，将该载体导入植物，在植物中产生Miace1、Miace2和MIace3的dsRNA，该植株能显著抑制根结线虫的寄生。通过本发明可获得强抗根结线虫的植物。
Description
技术领域
本发明属生物基因工程技术领域，具体涉及南方根结线虫效应基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用。
背景技术
根结线虫是一类非常重要的植物寄生线虫，广泛分布于世界各地，能侵染超过3000种不同植物。根结线虫每年造成大概770亿美元的经济损失，随着作物复种指数的提高和设施农业的发展，根结线虫的发生和危害将会不断的加剧。由于根结线虫的根内寄生、寄主范围广泛的特性以及抗根结线虫种质资源的缺乏限制了化学防治、轮作和抗病育种等防治方法在控制根结线虫危害中的应用。因此，寻找其他有效的防治根结线虫的方法是植物生产所长期面临的艰巨任务。
RNA干扰技术（RNAi）的出现使得开发更为有效的防治根结线虫的方法成为可能。RNAi能通过靶向抑制根结线虫特定基因功能而限制根结线虫侵染、寄生和繁殖因而能高效地减少根结线虫的危害而且对其他非靶标生物较为安全。RNAi现象最早在秀丽小杆线虫中发现，随后在植物、无脊椎动物和脊椎动物中都相继发现了这种现象。RNAi技术通过dsRNA特异性的降解靶mRNA，影响或抑制该目的基因功能，从而影响该种生物的生长、发育、繁殖甚至能杀死该种生物。该技术相比其他防治方法的最大优点是能定向作用于特定的某种（某类）害虫而不会影响在该生境中的其他生物。
应用病毒载体诱导的基因沉默（VIGS）技术相对于传统的使用组织培养方法获得RNAi转基因植株更加简单快速，使得我们并不需要通过复杂的组培方法就可快速获得抗线虫植株。
发明内容
本发明的目的在于提供新的南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3。
本发明的另一目的是提供上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因的相关蛋白MI-ACE3。
本发明的又一目的是提供上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的应用。
本发明通过以下技术方案实现上述目的：
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3，三种乙酰胆碱酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-3所示；南方根结线虫乙酰胆碱酯酶蛋白MIACE1、MIACE2和MIACE3，三种乙酰胆碱酯酶基因氨基酸序列如SEQ ID NO:4-6所示。
在0.1×SSC、0.1% SDS的溶液中，65℃条件下杂交洗膜后，上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3杂交且编码与南方根结线虫乙酰胆碱酯酶相关蛋白的DNA分子，或者将上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的90%以上同源性且编码根结线虫乙酰胆碱酯酶相关蛋白的DNA分子，也在本发明的保护范围之内。
所述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶蛋白MIACE1、MIACE2和MIACE3中的氨基酸序列氨基酸序列经过一个或一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加并且与南方根结线虫乙酰胆碱酯酶相关的衍生蛋白。
所述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的重组表达载体由出发载体的多克隆位点插入，或由该基因的部分外显子片段如SEQ ID NO:1-3任一所示序列构建而成。
快速制备转基因抗病植物，其表达载体优选为IR-X-RI，该载体是一种植物RNAi病毒载体，其制备方法为将含有南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的RNAi载体导入植物，可以在植物中产生基因的dsRNA，当根结线虫侵染该植株后，dsRNA进入根结线虫的体内，使基因的mRNA降解，引发所述基因的失活，严重的减弱了线虫的寄生能力，从而抑制线虫的侵染、寄生、繁殖和传播。
上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备转基因植物的应用中，转基因植物的目的植物优选为双子叶植物或单子叶植物，尤其是烟草和番茄。
上述转基因抗病植物的重组基因表达盒、转基因细胞系或重组菌，含有所述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3。
作为上述应用的一个方面，抗根结线虫的转基因植物获得方法为：将含有南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的重组表达载体利用农杆菌导入目的植物中，或者通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导入或基因枪等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株，得到抗根结线虫的转基因植物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种新的有利于提高植物抗根结线虫活性的基因序列及其编码蛋白，为进一步培育有广谱抗植物寄生线虫的植物新品种奠定基础。
附图说明
图1为扩增Miace3基因的电泳结果，其中 M为分子量标记；
图2为南方根结线虫不同发育时期Miace1、Miace2和Miace3基因的相对表达量；
图3 为IL-60 BS载体示意图；
图4为IR-ACE-RI 载体示意图。
具体实施方式
下面通过实施例进一步解释本发明，但对本发明不做任何形式的限定。实施例中无特殊说明，均为本领域常规实验方法；所用实验材料如无特殊说明，均购自常规生化试剂商店。实施例中定量实验均设置三次重复，结果取平均值。
生物材料来源如下：
南方根结线虫：自行采集，参考文献：Hu M, X., Zhuo, K., Liao, J, L.Multiplex PCR for the simultaneous identification and detection ofMeloidogyne incognita, M. enterolobii and M. javanica using DNA extracteddirectly from individual galls. Phytopathology, 2011, 101(11): 1270-1277。
以下生物材料为发明人获赠得到：
本氏烟；
载体IL-60 BS和IR-X-RI：参考文献：Yuval P., Rita M.K., Fuad A., et al. Auniversal expression/silencing vector in plants. Plant Physiology, 2007, 145,1251–1263。
以上生物材料公众可以从申请人处获得。
实施例1南方根结线虫Miace3蛋白及其编码基因的克隆
（1）使用TRIZOL 法提取南方根结线虫二龄幼虫RNA，然后使用Clontech RACE试剂盒将RNA反转录为cDNA。
（2）本实验室利用源于南方根结线虫基因组数据库中的MiV1ctg1711序列（http://www6.inra.fr/meloidogyne_incognita/Genomic-resources），以及GenBank数据库中的Caenorhabditis elegans (NM_064562.4), Bursaphelenchus xylophilus (GU166347.1), Ditylenchus destructor (EF583057.1), Loa loa (XM_003144938.1)，设计引物获取Miace3的3’RACE片段。3’RACE片段的获得：使用引物对，MIE31F：TTCACAATGGAATTCTTCAATCAGG，（SEQ ID NO:7）和Clontech RACE试剂盒的锚定引物NUP，以步骤（2）获得的cDNA为模板进行扩增。PCR扩增体系：cDNA 2μL，两条引物各3μL，10×KODplus Buffer 5μL，MgSO4 2μL，dNTP 5μL，KOD plus DNA polymerase 1μL， ddH2O 34μL。PCR扩增程序：94℃ 3min，35×（94℃ 30s，62℃ 2min，72℃ 2min），72℃ 5min，20℃保存。
（5）对3’RACE片段和MiV1ctg1711片段进行拼接后获得Miace3的基因全长，再使用引物对MiE3FF：（SEQ ID NO:8）和MiE3FR：（SEQ ID NO:9） 进行扩增，验证序列正确性。PCR扩增程序同（3）。结果见图1，测序后获得的序列如序列SEQ ID NO:3 所示，并命名为Miace3，该基因编码的蛋白命名为MIACE3，如序列SEQ ID NO:6所示。
实施例2 Micae基因在南方根结线虫不同发育阶段的表达分析
（1）使用TRIZOL 法提取不同发育阶段的南方根结线虫的RNA，并将RNA反转录为cDNA。
（2）使用引物ME11 RTF/ ME11 RTR，ME23RTF/ ME23RTR，ME32RTF/ ME32RTR（SEQID NO:10-15）对Miace1，Miace2和Miace3进行荧光定量PCR分析，以南方根结线虫β-actin基因为内参，引物为Q1MiatF/Q1MiatF：（SEQ ID NO:16-17）。反应条件：94℃ 30s，40×（94℃ 30s， 60℃ 30s，72℃ 1min）。
图2结果表明，Miace1 基因随着南方根结线虫的发育其表达量不断上升，而在南方根结线虫侵染本氏烟18天表大量有所下降；Miace2和Miace3反在18天的表达量有所上升。说明在南方根结线虫在发育过程中三个ace基因起到了基因互补的作用。证明ace基因在南方根结线虫的寄生发育过程中发挥重要作用。
实施例 3 Miace基因在培育抗根结线虫植物中的应用
（1）使用TRIZOL 法提取南方根结线虫二龄幼虫RNA，并将RNA反转录为cDNA。
（2）使用引物对ME12i1F / ME12i1R, ME21i1F/ME21i1R and ME3i1F/ME3i1R（SEQID NO:18-23）进行PCR扩增，PCR扩增程序：94℃ 3min，30×（94℃ 30s，60℃ 30s，72℃2min），72℃ 5min。将得到的PCR产物分别使用限制性内切酶SalI/EcoRI，EcoRI/BamHI andBamHI /SalI进行酶切，并纯化回收。
（3）同时使用限制性内切酶SalI/EcoRI，EcoRI/BamHI and BamHI /SalI酶切载体IR-X-RI，并纯化回收。
（4）将（2）和（3）得到的产物进行连接，获得重组表达载体IR-ACE1-RI，IR-ACE2-RI和IR-ACE3-RI。并将载体IR-ACE1-RI，IR-ACE2-RI，IR-ACE3-RI和IL-60 BS大肠杆菌JM109中得到重组菌株，结构如图3和图4所示，分别提取IR-ACE1-RI，IR-ACE2-RI，IR-ACE3-RI和IL-60 BS质粒。
（5）将本氏烟播种到灭菌土上。40天后，待本氏烟芥长出6-8片叶子后。将提取的质粒分别以IR-ACE1-RI+IL60，IR-ACE2-RI+IL60，IR-ACE3-RI+IL60，IR-ACE1-RI+IR-ACE2+IL60，IR-ACE2-RI+IR-ACE3-RI+IL60，IR-ACE1-RI+IR-ACE3-RI+IL60，IR-ACE1-RI+ IR-ACE2-RI+IR-ACE3-RI+IL60，IR-X-RI+60作为对照各20ug接种到本氏烟茎部。7天后检测烟草表达各基因后各接种南方根结线虫200条。接种后，保持温度在23℃-26℃之间，30天后计算根结的数量。实验进行三次重复，结果取平均值。结果见表1。
表1 沉默南方根结线虫不同ACE基因的转基因烟草寄生指数的统计结果
注：表中数据为平均值±标准误，表中同一指标同行中小写字母不同者示差异显著（p<0.05，Duncan’s法）
表1所示表明，表达沉默南方根结线虫的Miace 基因后，能显著地减少每株植株上根结数量，即沉默3个Miace 基因后，能显著地抑制根结线虫的寄生能力。
序列表中本发明的相关特征部分：
SEQ ID NO: 1 Miace1
ATGGATTATTCAATAGAGGACAGAAAAAGAATAAAAAGTTTAAAAACAAATAATGGGTTTTGTTTGTCCTTGCGACATCTTCTTTATTTCCCTTTTGTTTTTCTTTCACAGTATGTGGTGTCAGCAGCTGTTTATGTAAATTTATCTGATGGTTCCCCAATATTTGGGTCATTTGTACAAGCAGCTACAGGAAAATATATTTCTCAATTTTTGGGTGTTCCTTTTGCTGAACCCCCCATAGGAAAACTTCGATTTCGACGGCCTATTCCGAAACGTCCTTGGAGAGAACAATGGAATGCTACTACCTTCCGTGACTCTTGTGTTCAATCTCCAGATACCTATTTTGGTGATTTTTATGGGGCTACAATGTGGAATTCTAATACTCCTTGTTCTGAGGATTGTCTTTATTTAAATATTTATGTTCCCGGTGAAATTGATAGAGAAAAACGTTTACCTGTTCTTTTTTGGATTTATGGAGGTGGATTCTGGAGTGGGACGGCTTCTCTTGATGTTTATGATGGGAAAATATTTGCAGGGGAAGAAAATGTAATTATTGTAACTGTAAATTACCGTGTTACTGTATTTGGTTTTCTCTATTTGGGTAGAGAAGAAGCTCCAGGCAATATGGGTTTATGGGATCAGTTACTTGCTTTAAAATGGGTATATAAAAATATACAAGTATTTGGAGGTGATCCTTCCTTAATTACTTTATTTGGTGAAAGTGCTGGGGGAGCTTCTGTTTCGATGCATATGTTATCCCCCCTTTCTCAGCCTTATTTTACTCGGTCAATTTTACAAAGTGGAGCAGCTACTGCCCCATGGGCAGTAGAAAATAAGCAGGTAGCATTGCACAGAGCTGTTATTTTATATGAATATATGAAATGCGGGAATGGAAATATGTCTCATTTAGCCCCAGACCAATGGAATATGGATGAAGTTTTGAGATGTTTACATGCGGCATCTGCTGATAAACTTAGAGACTCGGAATGGAGTCCAGTAATGGAATTTGCAGACTTTCCTTGGGTGCCTGTCATTGATGGAGAATTTCTTGTGGAGAATATAGAAACTTCCTTAAAACGAGGAAATTTTAAGAAAACCCAATTATTGGCTGGAAGTAATTTTGACGAGGCAATTTATTTTATTGTCTATCAATTAGCGGATGTATTCCCTCCTGCAGAATTTTTTGAGAAAAAAGATTTTATAAAAAGTAGAGATGTTTGGATTAAAAGTGTTTCTAGTTTACTTCCAAGACAAATATTAAAATCATCCCTTGCATTACAATCAATTTTAAATTATTATGAACCTGAAGGTTTACCTATAGAATCAAAAAATTGGGTAGATAGTCTTGATAAAATGCTTGGAGATTTTTTATTTACTTGTAATGTTAATGAATTTGCTTTGGCACATAGTGAGCATGGAGCAGATACCTATTATTATATGTTTTCCCATCGCGCATCTCAACAAACTTGGCCTGAATGGATGGGTGTTCTTCATGGTTATGAAATTAATTTTATTTTTGGAGAACCTTATAATCGGAAACAATTTAAATATACAAAAGAAGAACAGGAATTGAGTTCTCGTTTTATGCGTTTTTGGGCAAATTTTGCACGTACAGGTGACCCAAACCGCAATCCAGACAATTCTTATATTTCTGATTGGCCTCCATATAATTCAAAAACTATGGAATATATAAATTTAACAATAGAATCAGATTATATACAAAAAGGTGCTAGACGAATAGGAACTGGGCCAAGAAGAAAACATTGCAATTTTTGGAAATTTATTCCAAAATTAATTTCTATTTCTGCTGATTTGGGAGAATCTTTTATTAAATGGAAACAACAAATGGATAGATGGGAAAATGATTATATGCCTGAATGGGAGAATCATTTTGAGCAATATAAACGTCATCAAATGTATAGAATAAAGGATGAAGTTGGTGATAATGATGTTTGTGGAATAAAATAG
SEQ ID NO: 2 Miace2
ATGCGCAAACGAAGAAGAAAAACAACAGCTTTTTCTATCAACACAAGTGAACTTCTTCGTCTTTATTTTAAATTTTCTTCACATTCTTGCCTTACTTTTATATTTTGTTGTTTTTTCTGTCTAATTGTTTATTGCTCTTCTGTTCATGGACGATCTTCACCTGTTGCTCTCACGGATGTTCTTATTCAAACTACTTTAGGAAAAATTATTGGGTTTAAACAGAAGTTTGATGGTAAATCTGTTCACACATTTTTGGGCGTTCCCTATGCAAAAAGTCCAACTGGTTCAGGTCGATTTGGACTTCCTGAAATGATTGAACCTTGGGAAGGAGAATTCCGAGCAGATAAACCAGCCAGAACTTGTTTCTTTTCCAGAGATACCATGTTTCCTGATTTCCCTGGTGCAGAGATGTGGAATCCGCCTAATGATATTGACGAGGATTGCCTTGCAATGAATATTTGGGTTCCTGAGCATCACGATGGCACTGTTCTTGTGTGGATTTATGGAGGTGGATTTTACTCGGGCTCTCCTTCTCTTGATTTATATGATGGGCGAGTTTTGGCTGTTCAAGAGCGTGCAGTTGTTATCAATATCAATTATCGGCTAGGTCCTTTTGGATTTTTGTATTTTGGCGATGATACATCAGTTCCTGGTAATATGGGACTACAAGACCAACAAATGGCTTTGAAATGGATACATGAGCATATTGCCCATTTTGGTGGTGATCCTCGGCGTGTTACTCTTTTTGGTGAGAGTGCGGGTAGTGCTTCAGCAATGGCACATATGTTTGCTGATGGAAGTTATTCTCTTTTTTCGCGCATTATTGCACAAAGTGGGTCAATTATTAATAATTGGGCTACAAAACCAAAAGCTTCCATCCTTCAAATTTCTCTACAGTTGGCACATCATTTGAATTGCAGCAATGGAAATAACTCTACAAAAGCAATGCAGAATATAGTGGAATGCATAAGACGTGTACCAACATCAATTATTCAACGGGCTGGTGATGCTGTTTCTCAATCGCTAAGCCTTCCAATGGATTTTGCATTTGTTCCAATAGATGAAGATACGCATTTCTTTCGTGGTAATGTTTTTGACAAATTGCGCCGAAAAAATTTCAAACGTGATGTTAGCATTCTTGTGGGAACTGTTAGGGACGAGGGAACATACTGGTTGCCCTATTGTTTACAAAAGAACGGGTTTGGCTTTAATCACACAATATCTCCTGAGGATCATATAAACCAAGCATTGATTTCTGAAACAGATTACAGCAAAGCTTTTGATGCATTTCTTCCTTATTTTGGCAATTCCAATTTGGTACGTCATGCACTTATGCACGCATATTCACATCTTCCTACAGAAAAGCAAGAACAAAGATGGCGGGATGGTGTTGCACGTTTTTTGGGTGATTATTTCTTCACGTGTGATAGTATCGAGTTTGCTGATATTGTTTCTGATGAATTGTATGGTTCTGTCTACAGTTTTTATTTCACGCGGCGATCATCAGCAAATCCTTGGCCACAATGGATGGGAGCAATGCATGGCTACGAAATTGAATATGTTTTTGGATTGCCTTTAAGAAGTCCACATCTTTATGATCCGTCAGAATTGGAATTGGAAATATCATTTTCTACAAAAATTATGGAGTTTTGGGGACATTTTGCGCGAACTGGGGAGCCAGTAGAATTTTGGCCAAAATATAATCGGATAACGAGAAAATCTTTGGTTCTAAGCGAGGAAATTGCTACTGGCACTAGTCATCGTATTTATGTAGATGTGCACGGAAAACTTTGTAGATTGCTCGAGGAAGCTCAAGCAGTAGCTGGAATTACTGGAGAACAGAGGTCCCGTATTTGCCCCGACGGTCGGGCAACTACAGTTAATTATGGACAAGAGATTTCAATGGAAGATGTTAAAGAAGAAATGCAACTAAATAGAGGAATCAGTGGTATTAATAGAATTCCTTCAATCAAAATTTATATTTCATTAATAATCTTATCATTAGCGTTATTAAGATCTCCTGAAATATCTTTCCTGTATTCATCATTTATTTTCAAATAA
SEQ ID NO: 3Miace3
ATGTGGCGGTTGTTATCAATAATTTTAGTATTCTCGTTTATTGACGGCACAATACTTCGATTATCACAAGTAAATGCCTCATTATCTTCTTCCCACCAATCTAAAGTTCCAGTGGATGTTGAGCTCCAAGCTGGCCTTTTACGAGGATTTGAATCTATTTTTCTACACAAACGTGTTCGCTCTTTCTTGGGTGTTCCATTTGCTGAGCCCCCAATTGGAGAATTGAGATTTTTGCCTCCTCGACTAAAAAAGCCTTGGAATGGTTGGATAAAGTGTGGGAATATTGGGAAAACTATTGAAGCAACAACACTCGCCTCAGCATGTTATCAAGGAAGAGACACTTATAATGAATCATTTTGGGGTTCTGAAATGTGGAATGCAAACACTCCAGTCAGTGAAGATTGTCTTTACATGAATATTTGGGCACCAGCGGAGGCTAGTAATCTGACAGTTTTGGTTTGGTTTTTTGGTGGAGGTTTTTGGTATGGAAGTCCATCTTTGCTTCTTTATGATGGAAAAGCTTTGGCATTAACTGCAAATGCTATTGTTGTTAATATAAATTATAGACTAGGTGCTTTTGGTTATTTGTATTTGGGAGATTCTGAAGTTCCTGGAAATATGGGAATGCTAGATCAGCAACTTGCACTTTATTGGATTAGAGAGAATATTGGAGCTTTTGGTGGAAATCCAAAATCAGTAACTATTTTTGGAGAAAGTGCCGGTGCTTCTAGTATTGTTGCTCATTTAATTGCACCAGGATCGCGTGGACTCTTTCACAATGGAATTCTTCAATCAGGTTCATTAGACAATCGTTGGAGTATGGATACCCCAAAACGTGCCTTAGAAAAAAGTCGTGACTTGGCTAAACTTGCTGGATGTAATCGTACAAATATTCATGATATGGCACGTTGTCTTCGAAGAGTACCTCCTGCCGAGTTTGTTGATCAATTGTGGAATATTCCAACTTTGGGATTTCTAGAATTTCCTCTTGTTATTGTTTCAAAGGATGCAAATTTTTTTACTAAAGAAGATGCATTTATTGCATTGAGGAACAAAAATTTCGCTCAAAATGTTAACTTAATGATTGGAATAAACAGCGATGAAGGGGCATTCTGGAATATTTACAATCTCCCAAAATTTTTCGATCACCAAACCCAACCACTTATGGGGATTAATGAATTTAATGAATGTGTAAATACAGCTTTTGCTCGTTTACCTGAAGTCATTAGAGCTGCTGCAGCATATGTTTATACAGGAAATAATCGTTGTGATTATGCAAATGGACAGCATCGTTTTCTTGCTGATCAAGTTAATCAAATGGTTGGCGATTATTTCTTTACTTGTGATTCTCTTTGGTTTGCAGATCAGTTTGATGATTCCCCTGGACATGTTTATATTTATTATTTTGATGAACCTTCAAGTGCTAATCCTTGGCCAAAATGGACAGGGGTAATGCATGGTTATGAAATCGAATTTGTATTTGGTATTCCTTTATATAATACATCTGCTGGATATTCTAATAGAGAAAGAACTTTGAGTAAGAAAATGATTCAACTTTGGACATCATTTGCCACAACTGGTGTTCCATCATTATCTGATCACCGAGAAGATCGACTACACTGGCCACAATATCACAGTCAAAATGCCCCAAGATGGATGCATTTAAAAGCATCACATTTAAAGCCTATGCATGCAAATAAACGTTCAGAATGTCGAATATGGAGAGCAGCCAAAGACATGGAATATAGCGAATATGTTATGGACAAATTTCTTGTCTCATCATTAATTAATTCATCAACCTCGATATTTTTAATAAATAGAATTTTGGTGGTTATTTTATTTTCAATTTCTGTTTATTTATTTTCCTTTAAATAA
SEQ ID NO: 4 MIACE1
MDYSIEDRKRIKSLKTNNGFCLSLRHLLYFPFVFLSQYVVSAAVYVNLSDGSPIFGSFVQAATGKYISQFLGVPFAEPPIGKLRFRRPIPKRPWREQWNATTFRDSCVQSPDTYFGDFYGATMWNSNTPCSEDCLYLNIYVPGEIDREKRLPVLFWIYGGGFWSGTASLDVYDGKIFAGEENVIIVTVNYRVTVFGFLYLGREEAPGNMGLWDQLLALKWVYKNIQVFGGDPSLITLFGESAGGASVSMHMLSPLSQPYFTRSILQSGAATAPWAVENKQVALHRAVILYEYMKCGNGNMSHLAPDQWNMDEVLRCLHAASADKLRDSEWSPVMEFADFPWVPVIDGEFLVENIETSLKRGNFKKTQLLAGSNFDEAIYFIVYQLADVFPPAEFFEKKDFIKSRDVWIKSVSSLLPRQILKSSLALQSILNYYEPEGLPIESKNWVDSLDKMLGDFLFTCNVNEFALAHSEHGADTYYYMFSHRASQQTWPEWMGVLHGYEINFIFGEPYNRKQFKYTKEEQELSSRFMRFWANFARTGDPNRNPDNSYISDWPPYNSKTMEYINLTIESDYIQKGARRIGTGPRRKHCNFWKFIPKLISISADLGESFIKWKQQMDRWENDYMPEWENHFEQYKRHQMYRIKDEVGDNDVCGIK.
SEQ ID NO: 5 MIACE2
MRKRRRKTTAFSINTSELLRLYFKFSSHSCLTFIFCCFFCLIVYCSSVHGRSSPVALTDVLIQTTLGKIIGFKQKFDGKSVHTFLGVPYAKSPTGSGRFGLPEMIEPWEGEFRADKPARTCFFSRDTMFPDFPGAEMWNPPNDIDEDCLAMNIWVPEHHDGTVLVWIYGGGFYSGSPSLDLYDGRVLAVQERAVVININYRLGPFGFLYFGDDTSVPGNMGLQDQQMALKWIHEHIAHFGGDPRRVTLFGESAGSASAMAHMFADGSYSLFSRIIAQSGSIINNWATKPKASILQISLQLAHHLNCSNGNNSTKAMQNIVECIRRVPTSIIQRAGDAVSQSLSLPMDFAFVPIDEDTHFFRGNVFDKLRRKNFKRDVSILVGTVRDEGTYWLPYCLQKNGFGFNHTISPEDHINQALISETDYSKAFDAFLPYFGNSNLVRHALMHAYSHLPTEKQEQRWRDGVARFLGDYFFTCDSIEFADIVSDELYGSVYSFYFTRRSSANPWPQWMGAMHGYEIEYVFGLPLRSPHLYDPSELELEISFSTKIMEFWGHFARTGEPVEFWPKYNRITRKSLVLSEEIATGTSHRIYVDVHGKLCRLLEEAQAVAGITGEQRSRICPDGRATTVNYGQEISMEDVKEEMQLNRGISGINRIPSIKIYISLIILSLALLRSPEISFLYSSFIFK.
SEQ ID NO: 6 MIACE3
MWRLLSIILVFSFIDGTILRLSQVNASLSSSHQSKVPVDVELQAGLLRGFESIFLHKRVRSFLGVPFAEPPIGELRFLPPRLKKPWNGWIKCGNIGKTIEATTLASACYQGRDTYNESFWGSEMWNANTPVSEDCLYMNIWAPAEASNLTVLVWFFGGGFWYGSPSLLLYDGKALALTANAIVVNINYRLGAFGYLYLGDSEVPGNMGMLDQQLALYWIRENIGAFGGNPKSVTIFGESAGASSIVAHLIAPGSRGLFHNGILQSGSLDNRWSMDTPKRALEKSRDLAKLAGCNRTNIHDMARCLRRVPPAEFVDQLWNIPTLGFLEFPLVIVSKDANFFTKEDAFIALRNKNFAQNVNLMIGINSDEGAFWNIYNLPKFFDHQTQPLMGINEFNECVNTAFARLPEVIRAAAAYVYTGNNRCDYANGQHRFLADQVNQMVGDYFFTCDSLWFADQFDDSPGHVYIYYFDEPSSANPWPKWTGVMHGYEIEFVFGIPLYNTSAGYSNRERTLSKKMIQLWTSFATTGVPSLSDHREDRLHWPQYHSQNAPRWMHLKASHLKPMHANKRSECRIWRAAKDMEYSEYVMDKFLVSSLINSSTSIFLINRILVVILFSISVYLFSFK.
SEQ ID NO: 7
MIE31F：TTCACAATGGAATTCTTCAATCAGG
SEQ ID NO: 8
MIE3FF：TTCACAATGGAATTCTTCAATCAGG
SEQ ID NO: 9
MIE3FR：ATGTGGCGGTTGTTATCAATAATTTT
SEQ ID NO: 10
ME11RTF：AACCGCAATCCAGACAATTCTTAT
SEQ ID NO: 11
ME11RTR：TCTTCTTGGCCCAGTTCCTATTCG
SEQ ID NO: 12
ME23RTF：CTTCACCTGTTGCTCTCACGGATGT
SEQ ID NO: 13
ME23RTR：AATCAGGAAACATGGTATCTCTGGA
SEQ ID NO: 14
ME32RTF：CGATTATCACAAGTAAATGCCTCATT
SEQ ID NO: 15
ME32RTR：GGGGCTCAGCAAATGGAACACC
SEQ ID NO: 16
Q1MIATF：5-GAATGTGCAAGGCTGGATTTGCG-3
SEQ ID NO: 17
Q1MIATR：5-ATTCCGTGCTCAATCGGGTATTTCA-3
SEQ ID NO: 18
ME12I1F：GTCGGACTTGCTTTGGCACATAGTGA
SEQ ID NO: 19
ME12I1R：GAATTCTTGTCTGGATTGCGGTTT
SEQ ID NO: 20
ME21I1F：GAATTCGAGTGCGGGTAGTGCTTC
SEQ ID NO: 21
ME21I1R：GAATTCGAGTGCGGGTAGTGCTTC
SEQ ID NO: 22
ME3I1F：GGATCCTTTTCGATCACCAAACCCAACCAC
SEQ ID NO: 23
ME3I1R：GTCGGACCACAAGTAAAGAAATAATCGCCAACCAT。
序 列 表
SEQUENCE LISTING
南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用
1
1968
cDNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
1
ATGGATTATT CAATAGAGGA CAGAAAAAGA ATAAAAAGTT TAAAAACAAA TAATGGGTTT 60TGTTTGTCCT TGCGACATCT TCTTTATTTC CCTTTTGTTT TTCTTTCACA GTATGTGGTG 120TCAGCAGCTG TTTATGTAAA TTTATCTGAT GGTTCCCCAA TATTTGGGTC ATTTGTACAA 180GCAGCTACAG GAAAATATAT TTCTCAATTT TTGGGTGTTC CTTTTGCTGA ACCCCCCATA 240GGAAAACTTC GATTTCGACG GCCTATTCCG AAACGTCCTT GGAGAGAACA ATGGAATGCT 300ACTACCTTCC GTGACTCTTG TGTTCAATCT CCAGATACCT ATTTTGGTGA TTTTTATGGG 360GCTACAATGT GGAATTCTAA TACTCCTTGT TCTGAGGATT GTCTTTATTT AAATATTTAT 420GTTCCCGGTG AAATTGATAG AGAAAAACGT TTACCTGTTC TTTTTTGGAT TTATGGAGGT 480GGATTCTGGA GTGGGACGGC TTCTCTTGAT GTTTATGATG GGAAAATATT TGCAGGGGAA 540GAAAATGTAA TTATTGTAAC TGTAAATTAC CGTGTTACTG TATTTGGTTT TCTCTATTTG 600GGTAGAGAAG AAGCTCCAGG CAATATGGGT TTATGGGATC AGTTACTTGC TTTAAAATGG 660GTATATAAAA ATATACAAGT ATTTGGAGGT GATCCTTCCT TAATTACTTT ATTTGGTGAA 720AGTGCTGGGG GAGCTTCTGT TTCGATGCAT ATGTTATCCC CCCTTTCTCA GCCTTATTTT 780ACTCGGTCAA TTTTACAAAG TGGAGCAGCT ACTGCCCCAT GGGCAGTAGA AAATAAGCAG 840GTAGCATTGC ACAGAGCTGT TATTTTATAT GAATATATGA AATGCGGGAA TGGAAATATG 900TCTCATTTAG CCCCAGACCA ATGGAATATG GATGAAGTTT TGAGATGTTT ACATGCGGCA 960TCTGCTGATA AACTTAGAGA CTCGGAATGG AGTCCAGTAA TGGAATTTGC AGACTTTCCT 1020TGGGTGCCTG TCATTGATGG AGAATTTCTT GTGGAGAATA TAGAAACTTC CTTAAAACGA 1080GGAAATTTTA AGAAAACCCA ATTATTGGCT GGAAGTAATT TTGACGAGGC AATTTATTTT 1140ATTGTCTATC AATTAGCGGA TGTATTCCCT CCTGCAGAAT TTTTTGAGAA AAAAGATTTT 1200ATAAAAAGTA GAGATGTTTG GATTAAAAGT GTTTCTAGTT TACTTCCAAG ACAAATATTA 1260AAATCATCCC TTGCATTACA ATCAATTTTA AATTATTATG AACCTGAAGG TTTACCTATA 1320GAATCAAAAA ATTGGGTAGA TAGTCTTGAT AAAATGCTTG GAGATTTTTT ATTTACTTGT 1380AATGTTAATG AATTTGCTTT GGCACATAGT GAGCATGGAG CAGATACCTA TTATTATATG 1440TTTTCCCATC GCGCATCTCA ACAAACTTGG CCTGAATGGA TGGGTGTTCT TCATGGTTAT 1500GAAATTAATT TTATTTTTGG AGAACCTTAT AATCGGAAAC AATTTAAATA TACAAAAGAA 1560GAACAGGAAT TGAGTTCTCG TTTTATGCGT TTTTGGGCAA ATTTTGCACG TACAGGTGAC 1620CCAAACCGCA ATCCAGACAA TTCTTATATT TCTGATTGGC CTCCATATAA TTCAAAAACT 1680ATGGAATATA TAAATTTAAC AATAGAATCA GATTATATAC AAAAAGGTGC TAGACGAATA 1740GGAACTGGGC CAAGAAGAAA ACATTGCAAT TTTTGGAAAT TTATTCCAAA ATTAATTTCT 1800ATTTCTGCTG ATTTGGGAGA ATCTTTTATT AAATGGAAAC AACAAATGGA TAGATGGGAA 1860AATGATTATA TGCCTGAATG GGAGAATCAT TTTGAGCAAT ATAAACGTCA TCAAATGTAT 1920AGAATAAAGG ATGAAGTTGG TGATAATGAT GTTTGTGGAA TAAAATAG 1968
2
2061
cDNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
2
ATGCGCAAAC GAAGAAGAAA AACAACAGCT TTTTCTATCA ACACAAGTGA ACTTCTTCGT 60CTTTATTTTA AATTTTCTTC ACATTCTTGC CTTACTTTTA TATTTTGTTG TTTTTTCTGT 120CTAATTGTTT ATTGCTCTTC TGTTCATGGA CGATCTTCAC CTGTTGCTCT CACGGATGTT 180CTTATTCAAA CTACTTTAGG AAAAATTATT GGGTTTAAAC AGAAGTTTGA TGGTAAATCT 240GTTCACACAT TTTTGGGCGT TCCCTATGCA AAAAGTCCAA CTGGTTCAGG TCGATTTGGA 300CTTCCTGAAA TGATTGAACC TTGGGAAGGA GAATTCCGAG CAGATAAACC AGCCAGAACT 360TGTTTCTTTT CCAGAGATAC CATGTTTCCT GATTTCCCTG GTGCAGAGAT GTGGAATCCG 420CCTAATGATA TTGACGAGGA TTGCCTTGCA ATGAATATTT GGGTTCCTGA GCATCACGAT 480GGCACTGTTC TTGTGTGGAT TTATGGAGGT GGATTTTACT CGGGCTCTCC TTCTCTTGAT 540TTATATGATG GGCGAGTTTT GGCTGTTCAA GAGCGTGCAG TTGTTATCAA TATCAATTAT 600CGGCTAGGTC CTTTTGGATT TTTGTATTTT GGCGATGATA CATCAGTTCC TGGTAATATG 660GGACTACAAG ACCAACAAAT GGCTTTGAAA TGGATACATG AGCATATTGC CCATTTTGGT 720GGTGATCCTC GGCGTGTTAC TCTTTTTGGT GAGAGTGCGG GTAGTGCTTC AGCAATGGCA 780CATATGTTTG CTGATGGAAG TTATTCTCTT TTTTCGCGCA TTATTGCACA AAGTGGGTCA 840ATTATTAATA ATTGGGCTAC AAAACCAAAA GCTTCCATCC TTCAAATTTC TCTACAGTTG 900GCACATCATT TGAATTGCAG CAATGGAAAT AACTCTACAA AAGCAATGCA GAATATAGTG 960GAATGCATAA GACGTGTACC AACATCAATT ATTCAACGGG CTGGTGATGC TGTTTCTCAA 1020TCGCTAAGCC TTCCAATGGA TTTTGCATTT GTTCCAATAG ATGAAGATAC GCATTTCTTT 1080CGTGGTAATG TTTTTGACAA ATTGCGCCGA AAAAATTTCA AACGTGATGT TAGCATTCTT 1140GTGGGAACTG TTAGGGACGA GGGAACATAC TGGTTGCCCT ATTGTTTACA AAAGAACGGG 1200TTTGGCTTTA ATCACACAAT ATCTCCTGAG GATCATATAA ACCAAGCATT GATTTCTGAA 1260ACAGATTACA GCAAAGCTTT TGATGCATTT CTTCCTTATT TTGGCAATTC CAATTTGGTA 1320CGTCATGCAC TTATGCACGC ATATTCACAT CTTCCTACAG AAAAGCAAGA ACAAAGATGG 1380CGGGATGGTG TTGCACGTTT TTTGGGTGAT TATTTCTTCA CGTGTGATAG TATCGAGTTT 1440GCTGATATTG TTTCTGATGA ATTGTATGGT TCTGTCTACA GTTTTTATTT CACGCGGCGA 1500TCATCAGCAA ATCCTTGGCC ACAATGGATG GGAGCAATGC ATGGCTACGA AATTGAATAT 1560GTTTTTGGAT TGCCTTTAAG AAGTCCACAT CTTTATGATC CGTCAGAATT GGAATTGGAA 1620ATATCATTTT CTACAAAAAT TATGGAGTTT TGGGGACATT TTGCGCGAAC TGGGGAGCCA 1680GTAGAATTTT GGCCAAAATA TAATCGGATA ACGAGAAAAT CTTTGGTTCT AAGCGAGGAA 1740ATTGCTACTG GCACTAGTCA TCGTATTTAT GTAGATGTGC ACGGAAAACT TTGTAGATTG 1800CTCGAGGAAG CTCAAGCAGT AGCTGGAATT ACTGGAGAAC AGAGGTCCCG TATTTGCCCC 1860GACGGTCGGG CAACTACAGT TAATTATGGA CAAGAGATTT CAATGGAAGA TGTTAAAGAA 1920GAAATGCAAC TAAATAGAGG AATCAGTGGT ATTAATAGAA TTCCTTCAAT CAAAATTTAT 1980ATTTCATTAA TAATCTTATC ATTAGCGTTA TTAAGATCTC CTGAAATATC TTTCCTGTAT 2040TCATCATTTA TTTTCAAATA A 2061
3
1875
cDNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
3
ATGTGGCGGT TGTTATCAAT AATTTTAGTA TTCTCGTTTA TTGACGGCAC AATACTTCGA 60TTATCACAAG TAAATGCCTC ATTATCTTCT TCCCACCAAT CTAAAGTTCC AGTGGATGTT 120GAGCTCCAAG CTGGCCTTTT ACGAGGATTT GAATCTATTT TTCTACACAA ACGTGTTCGC 180TCTTTCTTGG GTGTTCCATT TGCTGAGCCC CCAATTGGAG AATTGAGATT TTTGCCTCCT 240CGACTAAAAA AGCCTTGGAA TGGTTGGATA AAGTGTGGGA ATATTGGGAA AACTATTGAA 300GCAACAACAC TCGCCTCAGC ATGTTATCAA GGAAGAGACA CTTATAATGA ATCATTTTGG 360GGTTCTGAAA TGTGGAATGC AAACACTCCA GTCAGTGAAG ATTGTCTTTA CATGAATATT 420TGGGCACCAG CGGAGGCTAG TAATCTGACA GTTTTGGTTT GGTTTTTTGG TGGAGGTTTT 480TGGTATGGAA GTCCATCTTT GCTTCTTTAT GATGGAAAAG CTTTGGCATT AACTGCAAAT 540GCTATTGTTG TTAATATAAA TTATAGACTA GGTGCTTTTG GTTATTTGTA TTTGGGAGAT 600TCTGAAGTTC CTGGAAATAT GGGAATGCTA GATCAGCAAC TTGCACTTTA TTGGATTAGA 660GAGAATATTG GAGCTTTTGG TGGAAATCCA AAATCAGTAA CTATTTTTGG AGAAAGTGCC 720GGTGCTTCTA GTATTGTTGC TCATTTAATT GCACCAGGAT CGCGTGGACT CTTTCACAAT 780GGAATTCTTC AATCAGGTTC ATTAGACAAT CGTTGGAGTA TGGATACCCC AAAACGTGCC 840TTAGAAAAAA GTCGTGACTT GGCTAAACTT GCTGGATGTA ATCGTACAAA TATTCATGAT 900ATGGCACGTT GTCTTCGAAG AGTACCTCCT GCCGAGTTTG TTGATCAATT GTGGAATATT 960CCAACTTTGG GATTTCTAGA ATTTCCTCTT GTTATTGTTT CAAAGGATGC AAATTTTTTT 1020ACTAAAGAAG ATGCATTTAT TGCATTGAGG AACAAAAATT TCGCTCAAAA TGTTAACTTA 1080ATGATTGGAA TAAACAGCGA TGAAGGGGCA TTCTGGAATA TTTACAATCT CCCAAAATTT 1140TTCGATCACC AAACCCAACC ACTTATGGGG ATTAATGAAT TTAATGAATG TGTAAATACA 1200GCTTTTGCTC GTTTACCTGA AGTCATTAGA GCTGCTGCAG CATATGTTTA TACAGGAAAT 1260AATCGTTGTG ATTATGCAAA TGGACAGCAT CGTTTTCTTG CTGATCAAGT TAATCAAATG 1320GTTGGCGATT ATTTCTTTAC TTGTGATTCT CTTTGGTTTG CAGATCAGTT TGATGATTCC 1380CCTGGACATG TTTATATTTA TTATTTTGAT GAACCTTCAA GTGCTAATCC TTGGCCAAAA 1440TGGACAGGGG TAATGCATGG TTATGAAATC GAATTTGTAT TTGGTATTCC TTTATATAAT 1500ACATCTGCTG GATATTCTAA TAGAGAAAGA ACTTTGAGTA AGAAAATGAT TCAACTTTGG 1560ACATCATTTG CCACAACTGG TGTTCCATCA TTATCTGATC ACCGAGAAGA TCGACTACAC 1620TGGCCACAAT ATCACAGTCA AAATGCCCCA AGATGGATGC ATTTAAAAGC ATCACATTTA 1680AAGCCTATGC ATGCAAATAA ACGTTCAGAA TGTCGAATAT GGAGAGCAGC CAAAGACATG 1740GAATATAGCG AATATGTTAT GGACAAATTT CTTGTCTCAT CATTAATTAA TTCATCAACC 1800TCGATATTTT TAATAAATAG AATTTTGGTG GTTATTTTAT TTTCAATTTC TGTTTATTTA 1860TTTTCCTTTA AATAA 1875
4
655
氨基酸
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
4
MDYSIEDRKR IKSLKTNNGF CLSLRHLLYF PFVFLSQYVV SAAVYVNLSD GSPIFGSFVQ 60AATGKYISQF LGVPFAEPPI GKLRFRRPIP KRPWREQWNA TTFRDSCVQS PDTYFGDFYG 120ATMWNSNTPC SEDCLYLNIY VPGEIDREKR LPVLFWIYGG GFWSGTASLD VYDGKIFAGE 180ENVIIVTVNY RVTVFGFLYL GREEAPGNMG LWDQLLALKW VYKNIQVFGG DPSLITLFGE 240SAGGASVSMH MLSPLSQPYF TRSILQSGAA TAPWAVENKQ VALHRAVILY EYMKCGNGNM 300SHLAPDQWNM DEVLRCLHAA SADKLRDSEW SPVMEFADFP WVPVIDGEFL VENIETSLKR 360GNFKKTQLLA GSNFDEAIYF IVYQLADVFP PAEFFEKKDF IKSRDVWIKS VSSLLPRQIL 420KSSLALQSIL NYYEPEGLPI ESKNWVDSLD KMLGDFLFTC NVNEFALAHS EHGADTYYYM 480FSHRASQQTW PEWMGVLHGY EINFIFGEPY NRKQFKYTKE EQELSSRFMR FWANFARTGD 540PNRNPDNSYI SDWPPYNSKT MEYINLTIES DYIQKGARRI GTGPRRKHCN FWKFIPKLIS 600ISADLGESFI KWKQQMDRWE NDYMPEWENH FEQYKRHQMY RIKDEVGDND VCGIK. 655
5
686
氨基酸
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
5
MRKRRRKTTA FSINTSELLR LYFKFSSHSC LTFIFCCFFC LIVYCSSVHG RSSPVALTDV 60LIQTTLGKII GFKQKFDGKS VHTFLGVPYA KSPTGSGRFG LPEMIEPWEG EFRADKPART 120CFFSRDTMFP DFPGAEMWNP PNDIDEDCLA MNIWVPEHHD GTVLVWIYGG GFYSGSPSLD 180LYDGRVLAVQ ERAVVININY RLGPFGFLYF GDDTSVPGNM GLQDQQMALK WIHEHIAHFG 240GDPRRVTLFG ESAGSASAMA HMFADGSYSL FSRIIAQSGS IINNWATKPK ASILQISLQL 300AHHLNCSNGN NSTKAMQNIV ECIRRVPTSI IQRAGDAVSQ SLSLPMDFAF VPIDEDTHFF 360RGNVFDKLRR KNFKRDVSIL VGTVRDEGTY WLPYCLQKNG FGFNHTISPE DHINQALISE 420TDYSKAFDAF LPYFGNSNLV RHALMHAYSH LPTEKQEQRW RDGVARFLGD YFFTCDSIEF 480ADIVSDELYG SVYSFYFTRR SSANPWPQWM GAMHGYEIEY VFGLPLRSPH LYDPSELELE 540ISFSTKIMEF WGHFARTGEP VEFWPKYNRI TRKSLVLSEE IATGTSHRIY VDVHGKLCRL 600LEEAQAVAGI TGEQRSRICP DGRATTVNYG QEISMEDVKE EMQLNRGISG INRIPSIKIY 660ISLIILSLAL LRSPEISFLY SSFIFK. 686
6
624
氨基酸
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
6
MWRLLSIILV FSFIDGTILR LSQVNASLSS SHQSKVPVDV ELQAGLLRGF ESIFLHKRVR 60SFLGVPFAEP PIGELRFLPP RLKKPWNGWI KCGNIGKTIE ATTLASACYQ GRDTYNESFW 120GSEMWNANTP VSEDCLYMNI WAPAEASNLT VLVWFFGGGF WYGSPSLLLY DGKALALTAN 180AIVVNINYRL GAFGYLYLGD SEVPGNMGML DQQLALYWIR ENIGAFGGNP KSVTIFGESA 240GASSIVAHLI APGSRGLFHN GILQSGSLDN RWSMDTPKRA LEKSRDLAKL AGCNRTNIHD 300MARCLRRVPP AEFVDQLWNI PTLGFLEFPL VIVSKDANFF TKEDAFIALR NKNFAQNVNL 360MIGINSDEGA FWNIYNLPKF FDHQTQPLMG INEFNECVNT AFARLPEVIR AAAAYVYTGN 420NRCDYANGQH RFLADQVNQM VGDYFFTCDS LWFADQFDDS PGHVYIYYFD EPSSANPWPK 480WTGVMHGYEI EFVFGIPLYN TSAGYSNRER TLSKKMIQLW TSFATTGVPS LSDHREDRLH 540WPQYHSQNAP RWMHLKASHL KPMHANKRSE CRIWRAAKDM EYSEYVMDKF LVSSLINSST 600SIFLINRILV VILFSISVYL FSFK. 624
7
25
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
7
MIE31F：TTCACAATGG AATTCTTCAA TCAGG 25
8
25
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
8
TTCACAATGG AATTCTTCAA TCAGG 25
9
26
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
9
ATGTGGCGGT TGTTATCAAT AATTTT 26
10
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
10
AACCGCAATC CAGACAATTC TTAT 24
11
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
11
TCTTCTTGGC CCAGTTCCTA TTCG 24
12
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
12
CTTCACCTGT TGCTCTCACG GATGT 24
13
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
13
AATCAGGAAA CATGGTATCT CTGGA 24
14
26
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
14
CGATTATCAC AAGTAAATGC CTCATT 26
15
22
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
15
GGGGCTCAGC AAATGGAACA CC 22
16
23
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
16
GAATGTGCAA GGCTGGATTT GCG 23
17
25
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
17
ATTCCGTGCT CAATCGGGTA TTTCA 25
18
26
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
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GTCGGACTTG CTTTGGCACA TAGTGA 26
19
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
19
GAATTCTTGT CTGGATTGCG GTTT 24
20
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
20
GAATTCGAGT GCGGGTAGTG CTTC 24
21
24
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
21
GAATTCGAGT GCGGGTAGTG CTTC 24
22
30
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
22
ME3I1F：GGATCCTTTT CGATCACCAA ACCCAACCAC 30
23
34
DNA
南方根结线虫（Meloidogyne incognita）
23
GTCGGACCAC AAGTAAAGAA ATAATCGCCA ACCAT 30
Claims (13)
1.一种南方根结线虫Meloidogyne incognita乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3，其特征在于：所述三种乙酰胆碱酯酶基因的核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO:1-3所示。
2.根据权利要求1所述的南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3，其特征在于：与所述Miace1、Miace2和Miace3依次对应南方根结线虫乙酰胆碱酯酶蛋白MIACE1、MIACE2和MIACE3，所述三种乙酰胆碱酯酶基因所编码的氨基酸序列分别依次如SEQID NO:4-6所示。
3.根据权利要求1或2所述的南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3，其特征在于，所述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的重组表达载体由出发载体的多克隆位点插入。
4.根据权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：在所述植物中转入能够产生在所述南方根结线虫中干扰如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的表达的干扰RNA的载体。
5.根据权利要求4所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：制备转基因抗病植物，其表达载体为IR-X-RI。
6.根据权利要求4或5所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：转基因植物的目的植物为双子叶植物或单子叶植物。
7.根据权利要求6所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：所述植物为烟草。
8.根据权利要求6所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：所述植物为番茄。
9.一种抗南方根结线虫的转基因植物的制备方法，其特征在于：在所述植物中转入能够产生在所述南方根结线虫中干扰如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的表达的干扰RNA的载体。
10.一种南方根结线虫Meloidogyne incognita乙酰胆碱酯酶基因Miace3，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
11.根据权利要求10所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace3在制备抗南方根结线虫的转基因植物中的应用，其特征在于：在所述植物中转入能够产生在所述南方根结线虫中干扰如权利要求10所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace3的表达的干扰RNA的载体。
12.一种抗南方根结线虫的转基因植物的制备方法，其特征在于：在所述植物中转入能够产生在所述南方根结线虫中干扰如权利要求10所述的乙酰胆碱酯酶基因Miace3的表达的干扰RNA的载体。
13.一种南方根结线虫Meloidogyne incognita乙酰胆碱酯酶基因，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶基因所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
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| Meloidogyne incognita acetylcholinesterase (ace-2) mRNA, partial cds, JQ701796.1;Cui R. et al.;《GenBank》;20130323;全文 * |
| 松材线虫乙酰胆碱酯酶1基因沉默及蛋白抑制剂;刘立宏等;《林业科学》;20150131;第51卷(第1期);摘要、第66页左栏最后一段、右栏最后一段 * |
| 甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因ace-3全长cDNA的克隆和序列分析;丁中等;《农业生物技术学报》;20081231;第16卷(第2期);摘要 * |
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Granted publication date: 20181012 Termination date: 20200202 |
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