CN104623635B - 一种预防、治疗脑缺血的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于预防、治疗脑缺血的注射剂，包括rhEGF，阿司匹林，抗氧剂，助溶剂，pH调节剂。药理研究表明：药物能通过血脑屏障，主要分布在大脑半球、脑干等处，对血管平滑肌有解痉作用，能扩张小血管，减小脑血管阻力，增加脑血流量，保护内皮细胞，改善微循环。药物能增加MCAO后远隔部位的脑灌注，抗细胞凋亡,保护远隔部位的神经元，减少远隔部位脑组织由于神经纤维传导通路中断造成的失联络损伤。因而药物可通过减轻远隔部位的脑功能障碍，在改善中风后的临床预后中起一定的作用。

Description

一种预防、治疗脑缺血的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种预防、治疗的脑部疾病的药物组合物，尤其涉及用于预防、治疗脑缺血的药物组合物。

背景技术

脑血管疾病是当今世界严重危害人类生命健康的主要疾病之一，是我国的常见病、多发病。脑缺血是脑血管意外的一种，是中老年人的常见病、多发病，严重威胁着人类的健康与生活。近些年来，随着科学技术的不断发展，研究学者对脑缺血病发病机制、脑组织细胞损伤级联反应等的深入研究，发现可通过抑制细胞凋亡、降低炎症反应与自由基等多种途径来缓解脑组织损伤，但依据这些理论设计和制造的许多神经保护剂, 疗效不佳。超早期恢复血流供应，改善微循环状态，配合针对缺血后神经元死亡不同机制的综合干预及脑保护治疗，开拓有效治疗脑缺血的药物已成为不容忽视的社会性问题，研发理想的脑缺血保护剂和治疗策略显得十分紧迫和必要。

基因重组人表皮生长因子(recombinant human Epidermal Growth Factor,rhEGF)在医学上有显著的创伤修复、愈合伤口等功效。近年来发现，rhEGF在美容产品领域也有广阔的应用前景,具有促进皮肤细胞更新、防止皮肤衰老等功能。本发明研究发现，rhEGF不仅可改善脑缺血损伤引起的行为功能障碍，而且可通过降低炎症反应、 抑制细胞凋亡缓解脑组织损伤， 对应用rhEGF研制治疗脑缺血损伤药物有一定的积极作用。

阿司匹林用于治疗脑缺血在现有技术中已经有记载，但是药理作用显示，低剂量使用时（75-100mg/kg）效果不十分显著。本发明研究发现，rhEGF与超低量阿司匹林组成的复方制剂在治疗脑缺血时具有协同作用，从而为创伤性脑损伤的治疗提供了新思路。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗脑缺血的药物组合物，其中包括活性成分rhEGF，阿司匹林和药学可接受载体。

本发明还进一步提供一种用于预防、治疗脑缺血的注射剂，包括rhEGF，阿司匹林，抗氧剂，助溶剂，pH调节剂。

作为优选，阿司匹林的含量为1-10g/L，rhEGF含量为5-20g/L，助溶剂含量为5-20g/L，抗氧化剂含量为10-15g/L，pH调节剂浓度为0.05-0.5mol/L。

作为优选，抗氧剂包括但不限于亚硫酸氢钠，维生素C，谷胱甘肽中的一种或多种；助溶剂优选盐酸半胱氨酸；pH调节剂优选磷酸缓冲液。

本发明还提供一种用于预防、治疗脑缺血的注射剂的制备方法，包括如下步骤：

1）.向阿司匹林中加入注射用水，加热至阿司匹林完全溶解，得到阿司匹林溶液；

2）.向阿司匹林溶液中加入助溶剂，抗氧化剂和pH调节剂，搅拌溶解；

3）.向所述混合溶液中加入医用活性炭，过滤得到滤液；

4）.向滤液中加入rhEGF，补加注射用水，灌装，灭菌得成品。

本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，如一日1-3次。

具体实施方式

实施例1

取阿司匹林5g，加入600ml注射用水，加热至60℃溶解，得到阿司匹林溶液；冷却至室温，加入盐酸半胱氨酸5g，亚硫酸氢钠10g，磷酸缓冲液0.1mol；搅拌溶解；向溶液中加入总体积0.01%的活性炭，搅拌吸附14min，过滤脱炭；向滤液中加入rhEGF 10g，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌得成品。

实施例2

取阿司匹林10g，加入600ml注射用水，加热至60℃溶解，得到阿司匹林溶液；冷却至室温，加入盐酸半胱氨酸5g，维生素C 10g，磷酸缓冲液0.1mol；搅拌溶解；向溶液中加入总体积0.01%的活性炭，搅拌吸附14min，过滤脱炭；向滤液中加入rhEGF 20g，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌得成品。

实施例3

取阿司匹林2g，加入600ml注射用水，加热至60℃溶解，得到阿司匹林溶液；冷却至室温，加入盐酸半胱氨酸5g，谷胱甘肽10g，磷酸缓冲液0.1mol；搅拌溶解；向溶液中加入总体积0.01%的活性炭，搅拌吸附14min，过滤脱炭；向滤液中加入rhEGF 4g，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌得成品。

1 实验材料

1.1 动物与分组

SD大鼠150只,雌雄各半，体重220-300g，由中国人民解放军军事医学科学院提供。适应性喂养一周后，随机分为6组，即

2 试验方法

2.1 造模

参照Zea-Longa线栓法，阻断右侧MCA的血液供应。造模后大鼠出现Homer’s征，动物麻醉清醒后出现以左前肢为主的偏瘫证明造模成功。rhEGF干预组在缺血后灌流同时静脉滴注rhEGF 100μg/kg；阿司匹林干预组在缺血后灌流同时静脉滴注阿司匹林 100mg/kg；药物组合物干预组在缺血后灌流同时静脉滴注药物 60μg/kg（rhEGF 40μg/kg+ASA 20μg/kg）。

2.2 rCBF测定

采用氢清除法，分别测定两侧额叶、丘脑、小脑，下丘脑的rCBF。缺血后再灌注组于MCAO后1、3、6、24h各测一次rCBF。

2.3组织病理形态学观察

将大鼠分别于缺血后6、24h、1周断头取脑，放入10%福尔马林中固定。参照大鼠立体定位图谱，分别切取额叶、丘脑、小脑组织。常规HE染色，光镜下观察脑组织形态。

2.4 TUNEL阳性细胞评定及计数

上述部位脑组织同时进行凋亡细胞原位检测（POD法）。具体操作按细胞凋亡检测试剂盒提供的步骤进行。TUNEL阳性信号位于细胞核内，为棕黄色。TUNEL阳性细胞计数:在同一切片中，高倍镜下任取10个场景，然后取平均值。

2.5　统计学处理

实验数据采用 表示，各组rCBF比较采用t检验。各部位不同时限凋亡细胞采用方差分析，P<0.05有统计学意义。

3结果

3.1　一侧MCAO后各脑区rCBF的改变

对照组各对应部位的rCBF无显著差异(P>0.05)。一侧MCAO后，除同侧小脑半球外，各部位rCBF迅速下降(P<0.05或P<0.01)，特别是缺血后1h rCBF下降达最大幅度，额叶、丘脑的rCBF两侧下降幅度不等,以病灶同侧rCBF下降更甚(P<0.05)。随时间延长，各部位rCBF有逐渐增加的趋势，除左侧小脑、下丘脑外，24h后基本恢复，接近对照组。

药物干预组MCAO后不同时间rCBF(ml•100g-1•min-1)

注：缺血前后比较，P<0.05，△P<0.01，治疗组与未治疗组比较，#P<0.05 ※P<0.01,组合物干预组与rhEGF和ASA干预组相比*P＜0.05。

3.2　药物对局灶性脑缺血后远隔脑区rCBF变化的影响

低剂量ASA干预后，相对于未干预组增加并不明显；rhEGF组和组合物组干预后，两侧额叶、丘脑、下丘脑和对侧小脑rCBF较未干预组明显增加，MCAO后1h、3h、6hrCBF增加较显著(P<0.05或P<0.01)，特别是MCAO后1h rCBF增加幅度最大。

3.3　大体病理改变

TTC染色可见一侧MCAO后，右侧额顶叶皮层及尾壳核区为苍白梗死区，而小脑、丘脑、下丘脑、额叶前部等均染成均匀的红色。

3.4　组织细胞学改变

HE染色后，正常脑组织细胞形态规整，细胞核完整；一侧MCAO后6h，光镜下可见额叶梗塞灶神经元肿胀，核固缩，呈缺血性改变；同侧丘脑亦见类似改变，部分区域甚至神经元退变消失；对侧额叶、丘脑、下丘脑及幕下小脑半球神经元未见明显变化。至MCAO后24h上述变化最明显，同侧额叶、丘脑可见大量缺血性改变的神经元。1周时可见局部有炎症细胞渗出，胶质细胞增生明显，偶见缺血性改变的神经元。

3.5　TUNEL标记结果

光镜下见正常组织切片HE复染后细胞保持原有的生长形态，细胞核染成均一的蓝色。MCAO后6h，病灶同侧额叶、丘脑均可见TUNEL阳性的凋亡细胞；MCAO后24h凋亡细胞最多；1周时凋亡细胞偶见(P<0.01)；药物干预组各时间点凋亡细胞数均明显减少(P<0.01)。而梗塞对侧额叶、对侧丘脑、两侧小脑各时段内均未见TUNEL阳性细胞。

各部位MCAO后不同时间凋亡细胞数及药物对其的影响

注：※干预组与未干预组比较，P<0.01，△、#为不同时间组的比较，P<0.01，组合物干预组与rhEGF和ASA干预组相比*P＜0.05。

4讨论

本研究示鼠一侧MCAO后，梗塞灶对侧大脑半球(包括额叶皮层及丘脑)、同侧额叶皮层、下丘脑对侧小脑半球rCBF下降，以MCAO后1h下降最明显，以后rCBF有所增加，除下丘脑及对侧小脑半球外，其余部位rCBF于24h基本恢复正常。说明在MCA支配区域外，如对侧小脑、丘脑、下丘脑、对侧额叶等部位存在脑功能的改变，即神经机能联系不能，而且神经机能联系不能具有一定的时间性,随着时间的延长逐渐消退，如同侧额叶、丘脑rCBF和MCAO后,随时间延长逐渐增加,至MCAO后24h基本恢复正常。但某些区域则持续存在，如下丘脑和对侧小脑半球,因而有必要采取相应措施，恢复这些区域的脑血流量而保护其脑功能不受影响。长期缺乏正常的神经冲动传递，可引起远隔区域脑组织形态改变。本研究发现一侧MCAO后，同侧额叶、丘脑在MCAO后6h即见神经无缺血性改变，此时TUNEL染色示同侧额叶丘脑有TUNEL阳性的凋亡细胞，以MCAO后24h凋亡细胞最多，但对侧小脑及下丘脑等部位未见细胞凋亡，这种选择性细胞死亡可能除与神经传导通路的中断有关外，与缺血程度及缺血持续时间、不同部位神经元对缺血的耐受性都有一定的关系。

rhEGF和组合物组对急/慢性缺血性脑血管病有肯定的治疗效果。预料不到的是，虽然低剂量的ASA干预组没有明显的治疗效果，但是由超低剂量的ASA和低剂量的rhEGF组成的组合物组在用量更低的情况下，相对于rhEGF组有了更好的效果。药理研究表明：药物能通过血脑屏障，主要分布在大脑半球、脑干等处，对血管平滑肌有解痉作用，能扩张小血管，减小脑血管阻力，增加脑血流量，保护内皮细胞，改善微循环。本实验显示药物干预组，在MCAO后1h、3h、6h两侧额叶、丘脑、对侧小脑、下丘脑rCBF较未用药组明显增加(P<0.05)，特别是MCAO后1h，rCBF增加最明显；MCAO后6h、24h、1周同侧额叶、丘脑凋亡细胞凋亡数亦较未用药组明显减少(P<0.01)。说明药物能增加MCAO后远隔部位的脑灌注，抗细胞凋亡,保护远隔部位的神经元，减少远隔部位脑组织由于神经纤维传导通路中断造成的失联络损伤。因而药物可通过减轻远隔部位的脑功能障碍，在改善中风后的临床预后中起一定的作用。

Claims (3)

1.一种用于预防、治疗脑缺血的注射剂，包括rhEGF，阿司匹林，抗氧剂，助溶剂，pH 调节剂，其特征在于：阿司匹林的含量为1-10g/L，rhEGF含量为 5-20g/L ，助溶剂含量为 5-20g/L ，抗氧化剂含量为 10-15g/L ， pH 调节剂浓度为 0.05-0.5mol/L 。

2.如权利要求1 所述的注射剂，其特征在于，抗氧剂选自亚硫酸氢钠，维生素C，谷胱甘肽中的一种或多种；助溶剂选自盐酸半胱氨酸；pH 调节剂选自磷酸缓冲液。

3.如权利要求1所述用于预防、治疗脑缺血的注射剂的制备方法，包括如下步骤：

1) 向阿司匹林中加入注射用水，加热至阿司匹林完全溶解，得到阿司匹林溶液；

2) 向阿司匹林溶液中加入助溶剂，抗氧化剂和pH 调节剂，搅拌溶解；

3) 向混合溶液中加入医用活性炭，过滤得到滤液；

4) 向滤液中加入rhEGF，补加注射用水，灌装，灭菌得成品。