CN104611275B - 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用 - Google Patents

植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104611275B
CN104611275B CN201510073650.3A CN201510073650A CN104611275B CN 104611275 B CN104611275 B CN 104611275B CN 201510073650 A CN201510073650 A CN 201510073650A CN 104611275 B CN104611275 B CN 104611275B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus plantarum
ucn
food
bacterial strains
animal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510073650.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104611275A (zh
Inventor
郑敏
郑一敏
曾雁鸣
胥秀英
周永喜
江娟
邹远军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu ranxin Biotechnology Co., Ltd
Original Assignee
Chengdu Yukang Science & Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Yukang Science & Technology Co ltd filed Critical Chengdu Yukang Science & Technology Co ltd
Priority to CN201510073650.3A priority Critical patent/CN104611275B/zh
Publication of CN104611275A publication Critical patent/CN104611275A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104611275B publication Critical patent/CN104611275B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于微生物、食品保鲜、动物饲料领域，具体涉及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)UCN‑11菌株及其组合物和应用，本发明新菌株具有食品防腐保鲜和动物保健作用，可确保食品货架期和动物高效健康养殖。该新菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.9480。采用本发明菌株、发酵培养物、发酵培养物离心所得的发酵液或菌体、以及该发酵液或菌体的干燥物为有效成分制备食品。制备过程不添加化学防腐剂，无需辐照处理，保持肉类食品原有鲜度，显著提升品质；货架期能超过6个月；去除肉类食品的腥膻味，改善其口味；长期食用，可增加人体益生菌数量。喂养动物全过程无需添加抗生素，可显著促进动物健康生长，并降低成本，提高经济效益。

Description

植物乳杆菌UCN-11菌株及其组合物和应用
技术领域
本发明属于微生物、食品保鲜、动物饲料领域，具体涉及一种植物乳杆菌UCN-11菌株及其组合物和应用。
背景技术
乳酸菌是一类发酵能够产生大量乳酸的细菌总称，在自然界分布广泛，为一群生活在机体内益于宿主健康的为重要的益生微生物，它维护人体和动物健康的作用已被普遍认可。
一些乳酸菌在乳酸发酵过程中，发酵产物中只有乳酸的称为同型乳酸发酵，代表菌有双球菌属Diplococcus、链球菌属Streptococcus及乳酸杆菌属Lactobacillus等，工业发酵中最常用的菌种是乳酸杆菌属中的一些种类。
然而，还有一些被称为异型乳酸发酵的乳酸菌，它们发酵产物中除乳酸外，还有乙醇、乙酸及CO2等其它产物，代表菌如魏斯氏菌属Weissellas和肠膜明串球菌属，其中绿色魏斯氏菌引起肉制品出现变绿和腐败变质，是肉类加工食品重要的安全隐患。尽管肠膜明串球菌不引起食品直接腐败变质，但其代谢产生的CO2气体常常导致食品包装涨袋，给肉类加工行业也造成显著经济损失。
泡椒凤爪、鸡翅、猪蹄、猪皮和猪耳朵和竹笋等泡制加工食品，特别容易受到魏斯氏菌和肠膜明串球菌污染。目前，现有食品化学防腐剂脱氢乙酸钠、双乙酸钠、山梨酸钾和乳酸链球菌素对魏斯氏菌和肠膜明串球菌效果不好。因此，食品加工后除了需要加入化学食品防腐剂外，还必须经过辐照，才能确保6个月货架期。食品化学防腐剂和辐照残留的安全担忧已经引起社会普遍关注，国家食品新标准出台，更严格控制使用一些加工助剂后，泡椒凤爪生产形势变得十分严峻，常常因防腐保鲜不合格导致制厂家停产。
CN 200810057436.9公开了植物乳杆菌A71，CGMCC No.2228在冷冻肉保鲜中的应用，所述对象和目标菌与本发明完全不同。CN200810062522.9公开了植物乳杆菌抗菌肽、CN200910072654.4公开了植物乳杆菌细菌素，CN201010281481.X公开了一种植物乳杆菌在食品防腐方面应用，但其抗菌谱与本发明完全不同。本发明的发明人曾在CN201210349849.0公开了一种具有食品防腐保鲜的植物乳杆菌929-2及其应用，所述的植物乳杆菌929-2，能主动地在熟肉加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，确保了货架期，并保持原有风味和品质。但植物乳杆菌929-2菌株对引起的肉制品变质和涨袋的异型乳酸杆菌—肠膜明串珠球菌和魏斯氏菌无效，成为目前制约该技术全面推广应用的主要技术瓶颈。
异型乳酸发酵的乳酸菌也常常给养殖业带来麻烦，它们大量存在动物饲养环境、一般加工饲料，特别是青饲料或发酵饲料中，一旦滞留在胃肠内，产生大量气体，从而导致梭菌繁殖，进一步生成大量有害气体，使胃肠胀气,压迫心脏和肺部，导致血液循环障碍,使动物猪窒息死亡，成为养殖业亟待解决的一大难题。
现有技术中CN200910193577.8公开一种具有改善猪品质、风味的饲料用乳酸菌制剂制备方法及应用，所述乳酸菌为植物乳杆菌，CGMCC No.1.0557。CN 201310084014.1公开了一株适用于发酵饲料的植物乳杆菌及其应用，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌，CGMCCNo.5684。CN 201010281481.X公开了一株植物乳杆菌及其应用，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，CGMCC No.3698。但所用菌株、制备方法、应用方式、应用对象与本发明也完全不同。
本发明的发明人经过5年筛选、研究和试制，最终优选出活力强的植物乳杆菌UCN-11，能主动地在熟肉加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，还能抑制引起的肉制品变质和涨袋的异型乳酸杆菌—肠膜明串珠球菌和魏斯氏菌，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，确保了货架期，并保持原有风味和品质。特别地，本发明的发明人将发明的植物乳杆菌UCN-11应用于动物养殖业，能有效控制异型乳酸发酵的乳酸菌生长给养殖业带来麻烦，还能完全阻止大肠杆菌、沙门氏杆菌和产气荚膜梭菌繁殖，确保动物健康生长，有良好应用前景。
发明内容
本发明所解决的技术问题是一种新的菌株，具有食品防腐保质和和动物保健作用，可确保食品货架期和动物高效健康养殖。
本发明菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，编号UCN-11，于2014年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.9480。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
植物乳杆菌UCN-11菌株的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
植物乳杆菌UCN-11菌株的菌液可在pH值3.0-6.5范围内可明显抑制食品腐败细菌和动物肠道致病菌，所述食品腐败细菌为魏斯氏菌、肠膜明串珠球菌、艰难梭菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肉毒梭状芽胞杆菌、大肠杆菌、李斯特菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或铜绿假单孢杆菌。所述动物肠道致病菌为魏斯氏菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌。尤其对发酵产物中除乳酸外，还有乙醇、乙酸及CO2等其它产物的异型乳酸发酵的乳酸菌，如魏斯氏菌、肠膜明串珠球菌、发酵乳杆菌，以及代谢产生CO2气体常常导致食品包装涨袋的肠膜明串球菌、发酵乳杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌的抑制效果更佳。
本发明还提供了一种可用于食品生物防腐剂或动物饲料添加剂的组合物，亦称菌剂，它是以有效量的植物乳杆菌UCN-11菌株、植物乳杆菌UCN-11菌株的发酵培养物、该发酵培养物离心所得的培养液或其干燥物，该发酵培养物离心所得的菌体或其干燥物为有效成分，加入可接受的辅料制成。所述的可用于食品生物防腐剂或动物饲料添加剂的组合物为单位剂量形式，优选的，所述的单位剂量形式选自：片剂、颗粒剂、粉剂、溶液、混悬液、乳剂和预混剂等。
本发明还提供了植物乳杆菌UCN-11菌株用于食品防腐、保鲜的应用。
具体可应用于凤爪、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵或竹笋等食品的防腐保鲜。
上述技术方案中，所述防腐是用植物乳杆菌UCN-11菌株的菌液或干粉菌剂添加到食品中或添加后再进一步发酵，实现抑制魏斯氏菌、肠膜明串珠球菌、艰难梭菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肉毒梭菌、大肠杆菌、李斯特菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢杆菌等食品腐败细菌，使食品符合国家卫生规定标准。
上述技术方案中，所述保鲜是用植物乳杆菌UCN-11菌株的菌液或干粉菌剂添加到食品中，或添加到食品中后再通过发酵来调节食品风味、改善食品质地、去除肉类食品的腥膻味等。
本发明还提供了植物乳杆菌UCN-11菌株用于动物保健的应用。
上述技术方案中，所述动物为禽类、猪、羊和牛等。
上述技术方案中，所述动物保健为预防或治疗由魏斯氏菌，或由魏斯氏菌与产气荚膜梭菌共同引起的胃肠胀气。所述动物保健还包括预防或治疗由产气荚膜梭菌、沙门氏菌和大肠杆菌之一或共同引起动物腹泻。
上述技术方案中，所述动物保健也包括促进动物健康生长，提高产能和品质。
下面更进一步地描述本发明。
如本文使用的术语“生物防腐保鲜”具有其一般含义，并且在本文特别地是指采用本发明的菌剂在腌制加工品表面形成一道强有力的生物屏障，抑制和防止腐败细菌的侵染和繁殖，增加保鲜期和货架寿命。
如本文使用的术语“食品科学或饲料科学可接受的辅料”通常是指食品领域可使用，对产品或者对哺乳动物无害，或具有合理的或可接受的利益/风险比的辅料。
如本文使用的术语“辅料”和“赋形剂”可以是食品科学或饲料科学领域中任何常规的辅料和赋形剂。具体的辅料和赋形剂的选择将取决于用于使用方式。用于特定保鲜模式的合适生物保鲜剂组合物的制备方法完全在食品领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为食品学上可接受的辅料或赋形剂包括食品领域常规的辅料、赋形剂、稀释剂、填充剂、溶剂、支持剂、崩解剂、表面活性剂和吸附载体等。必要时，还可以包括香味剂和甜味剂等。
本发明植物乳杆菌UCN-11菌株在食品方面应用，可产如下的有益效果：
1.采用本发明菌株及其菌剂制备食品，制备过程未添加化学防腐剂，避免了化学防腐剂影响人体健康；
2.采用本发明菌株及其菌剂制备食品，制备过程不采用辐照处理，彻底解除辐照对残留担忧，同时也避免风味和质地破坏，并降低成本；
3.不改变组织状态，保持肉类食品原有鲜度，显著提升品质；
4.货架期能超过6个月；
5.去除肉类食品的腥膻味，改善其口味；
6.长期食用，可增加人体益生菌数量。
本发明植物乳杆菌UCN-11菌株在动物保健方面应用，可产如下的有益效果：
1.能有效防止或预防由魏斯氏菌与产气荚膜梭菌共同引起的畜禽胃肠胀气，有效率达到100％，优于现有抗生素维吉尼亚霉素、吉他霉素、金霉素和恩拉霉素；
2.预防或治疗由产气荚膜梭菌、沙门氏菌和大肠杆菌之一或共同引起动物腹泻，有效率达到100％，优于现有抗生素硫酸粘杆菌素、喹诺酮和恩拉霉素；
3.动物生产全过程不使用抗生素，避免了抗生素残留影响人体健康；
4.彻底解除动物养殖中因大量使用抗生素对环境的污染，有助于保护环境；
5.促进动物健康生长，提高经济效益好。
具体实施方式
为表明本发明植物乳杆菌UCN-11菌株的效果，下面通过具体的实施例或试验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例或试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
植物乳杆菌新菌株的16S rDNA序列测定实施例
本发明植物乳杆菌UCN-11菌株，于2014年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.9480。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
本发明植物乳杆菌UCN-11菌株，按照Takala(MiniBEST Bacterial Genomic DNAExtraction Kit Ver.3.0)试剂盒操作步骤，经过提取基因组DNA，Takala(16S rDNABacterial Identification PCR Kit)试剂盒扩增16S rDNA序列，Takara(MiniBEST DNAFragment Purification Kit Ver.3.0试剂盒纯化PCR产物。PCR扩增：正相引物为5'-GAGCGGATAACAATTTCACACAGG-3'，反相引物为5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3'。反应体系50ul：模板DNA1ul；PCR Premix 25ul；Forward Premix 0.5ul；Reverse Premix 0.5ul；16S-free 23ul；扩增条件：94℃预热性5min；94℃变性1min；55℃退火1min；72℃延伸1.5min；30个循环；72℃补充延伸5min；4℃保存。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，100V/cm下稳压电泳20min，Bio-Rad GelDoc image凝胶成像系统照相，观察其扩增情况。发现只有单一的目标带，没有非特异性的其他条带，最后回收PCR产物。2000bp P lus DNAmarke为标准分子量标记。PCR产物的核酸序列由宝生物工程(大连)有限公司测定。通过多批次重复测定和校准，获得本发明的植物乳杆菌UCN-11菌株16S rDNA序列如下：
本发明的植物乳杆菌UCN-11菌株主要生化性状见表1。
表1 植物乳杆菌UCN-11生化性状
项目 植物乳杆菌UCN-11菌株 项目 植物乳杆菌UCN-11菌株
阿拉伯糖 + 木糖 +
纤维二滩 + 菊糖 -
果糖 + 卫矛醇 -
半乳糖 + 肌醇 -
葡萄糖 + 山梨糖 -+
乳糖 + 甘油 -
麦芽糖 + 松二糖 -+
甘露醇 + 苦杏仁苷 +
甘露糖 + 蕈糖 +
松三糖 + 水杨素 +
蜜二糖 + 淀粉 +
棉子糖 - 七叶苷 +
鼠李糖 -+ 尿素 -
核糖 + 硫化氢 -
山梨醇 - 6.5％NaCl生长 +
蔗糖 + 10-45℃ 生长
注：“+”试验结果阳性，“-”试验结果为阴性，“-+”为弱阳性。
使用植物乳杆菌UCN-11菌株作为食品防腐剂或动物保健剂，制备实例如下：
制备实施例1 发酵培养物制备
取植物乳杆菌UCN-11菌株，斜面接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的常规斜面上，在28-30℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的常规液体培养基中，在30℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5％接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min的培养基中，在30℃的发酵罐发酵培养24小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体菌剂，其中每1ml菌细胞数量不少于108。
制备实施例2发酵培养物组合物制备
取植物乳杆菌UCN-11菌株，斜面接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的常规斜面上，在28-30℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的常规液体培养基中，在30℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5％接种于葡萄糖20克，玉米浆干粉5克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾0.5，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min的培养基中，在30℃的发酵罐发酵培养24小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取菌细胞10份，加辅料30份混合，干燥，粉碎，分装，即得固体粉末制剂，其中每1克菌细胞数量为3.3×1013。
应用实施例1 泡椒凤爪应用
本发明菌剂在泡椒凤爪保鲜应用，按下述方法制备：
1.取鸡爪，解冻，挑选肉厚和个大的分割鸡爪，去除鸡爪上的角质层和爪指甲，称50kg，用净化水泡洗鸡爪中残留的血液和不洗干净物；
2.将步骤2鸡爪置沸水预煮3～5分钟，滤过，冷却至室温备用；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸30分钟，冷却至45℃下备用；
4.取步骤3处理后泡椒泡制母液，按泡制母液体积30％加入液体生物保鲜剂，搅拌均匀后，再加入步骤2处理后的鸡爪，在温度15-45℃下，浸泡36小时；
5.分装：取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例2 泡椒凤爪应用
本发明菌剂在泡椒凤爪保鲜应用，按下述方法制备：
1.取鸡爪，解冻，挑选肉厚和个大的分割鸡爪，去除鸡爪上的角质层和爪指甲，称50kg，用净化水泡洗鸡爪中残留的血液和不洗干净物；
2.将步骤2鸡爪置沸水预煮5分钟，滤过，冷却至室温备用；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟，冷却至45℃下备用；
4.取步骤3处理后泡椒泡制母液，按每100升泡制母液加入固体生物保鲜剂1200克，搅拌均匀后，再加入步骤2处理后的鸡爪，在温度15-45℃下，浸泡36小时；
取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例3 泡椒鸡翅应用
本发明生物保鲜菌剂在泡椒鸡翅保鲜应用，按下述方法制备：
1.鸡翅预处理：解冻，挑选肉厚、个大适中的鸡翅，用净化水泡洗不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸20分钟，冷却至45℃下备用；
4.泡制：按鸡翅-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃下，浸泡24小时；
取适量泡制好鸡翅，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例4 泡椒猪蹄应用
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪蹄保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪蹄预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪蹄中残留的血液和不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮3min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟，冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪蹄-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃下，浸泡24小时；
取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例5 泡椒猪皮应用
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪皮保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪皮预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪皮中不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮3min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟，冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪皮-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3，置入同一容器中，在温度15-45℃下，浸泡15小时；
取适量泡制好猪皮，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例6 泡椒猪耳朵应用
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪耳朵保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪耳朵预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪耳朵中不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸30分钟，冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪耳朵-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃下，浸泡36小时；
取适量泡制好猪耳朵，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例7 泡椒竹笋应用
本发明生物保鲜菌剂在泡椒竹笋保鲜应用，按下述方法制备：
1.竹笋预处理：用净化水泡洗竹笋中不洗干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟，冷却至45℃下备用；
4.泡制：按竹笋-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃下，浸泡24小时；
取适量泡制好竹笋，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例8 防腐保鲜效果
按照生物防腐保鲜菌剂应用实施例1，使用液体菌剂，制成益生菌泡椒凤爪，室温条件下放置6个月，依据泡椒凤爪行业标准DB51/T975—2009规定方法按时测定非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数和致病菌、按照GB4789.35—2010规定方法测定益生菌总菌落数，采用30人品尝方法考察风味，结果非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数、致病菌(表2)均符合标准，风味极佳。
表2 液体菌剂对凤爪保质防腐作用
注：-示未检出，+++示品质和口感极佳；基于效果表中各组合比例均为等比例。
应用实施例9 防腐保鲜效果
按照应用实施例2，使用固体菌剂，制成泡椒凤爪，室温条件下放置6个月，依据泡椒凤爪行业标准DB51/T975—2009规定方法按时测定非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数和致病菌、按照GB4789.35—2010规定方法测定益生菌总菌落数，采用30人品尝方法考察风味，结果非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数、致病菌(表3)均符合标准，风味极佳。
表3 固体菌剂对凤爪的保质作用
注：-示未检出，+++示品质和口感极佳；基于效果表中各组合比例均为等比例。
还特别在室温条件下，考察了几种菌剂在魏斯氏菌和肠膜明串珠球菌污染严重四川一家工厂试验，考察对货架期影响(表4)。植物乳杆菌UCN-11菌剂处理组能显著延长货架期。
表4 菌剂对泡椒凤爪货架期影响
处理组 货架期(月) 备注
化学防腐剂 0.3 魏斯氏菌和肠膜明串珠球菌污染
化学防腐剂+辐照 6
植物乳杆菌929-2(液体制剂) 2 魏斯氏菌和肠膜明串珠球菌污染
植物乳杆菌929-2(固体制剂) 3 魏斯氏菌和肠膜明串珠球菌污染
植物乳杆菌UCN-11(液体制剂) 12
植物乳杆菌UCN-11(固体制剂，) 12
为了更进一步验证本发明对不同食品效果，按照应用实施例3至应用实施例7制备鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵和竹笋，后放置在37℃下的培养箱中观察14天变化情况。结果是应用植物乳杆菌UCN-11菌剂制备的鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵和竹笋14天无一涨袋，化学防腐剂对照2天内全部涨袋，优势十分明显。参照行业标准DB51/T975—2009规定方法进行检查，发现完全符合规定(见表5)。
表5 植物乳杆菌UCN-11菌株防腐保鲜剂效果
注：未注明比例均为等比例。
综上所述，本发明优选出来的植物乳杆菌UCN-11菌株，能主动地在加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，延长了货架期，并保持原有风味和品质，降低了成本，实现了一种新概念防腐保鲜，有效克服了现有技术缺陷，经10家企业应用试验均获较佳效果，本发明工业应用前景十分看好。
应用实施例10 动物胀气预防作用
为了考察植物乳杆菌UCN-11菌株对由魏斯氏菌与产气荚膜梭菌共同引起的禽类、猪、羊和牛的预防作用，禽类试验选择出生重量相近的1日白羽肉鸡100只，随机分成2组，一组灌胃植物乳杆菌UCN-11，剂量每天为0.1-0.3ml/只，连续三天，然后灌胃含109cfu/ml魏斯氏菌和产气荚膜梭菌比例为1:1的混合菌液，对照组只灌胃含109cfu/ml魏斯氏菌和产气荚膜梭菌比例为1:1的混合菌液。畜类选择重量和长势相近的断奶仔猪，羊和牛连续三天灌胃植物乳杆菌UCN-11，剂量每天为1ml/kg，然后灌胃含109cfu/ml魏斯氏菌和产气荚膜梭菌比例为1:1的混合菌液。统计发病情况(表6)。植物乳杆菌UCN-11能够完全预防魏斯氏菌与产气荚膜梭菌引起的动物胀气预防作用。
表6 植物乳杆菌UCN-11对异型发酵乳酸菌引起的动物胀气预防作用
应用实施例11 动物胀气治疗作用
为了考察植物乳杆菌UCN-11对由魏斯氏菌与产气荚膜梭菌共同引起的禽类、猪、羊、牛胃肠胀气的治疗作用，禽类试验选择出生重量相近的1日白羽肉鸡150只，连续然后灌胃比例为1:1魏斯氏菌和产气荚膜梭菌含109cfu/ml的混合菌液4天，将发病的随机分成3组，处理组灌胃植物乳杆菌UCN-11，剂量每天为0.1-0.3ml/只，一组为对照组，另一组为基础日粮添加抗生素组。畜类选择重量和长势相近的断奶仔猪，羊和牛连续然后灌胃含109cfu/ml魏斯氏菌和产气荚膜梭菌比例为1:1的混合菌液，将发病的随机分成3组，处理组灌胃植物乳杆菌UCN-11，剂量每天为3-5ml/头，一组为对照组，另一组为基础日粮添加抗生素组。统计发病情况(表7)。植物乳杆菌UCN-11有明显治疗作用
表7 植物乳杆菌UCN-11对异型发酵乳酸菌引起的动物胀气治疗作用
应用实施例12 动物腹泻预防作用
为了考察植物乳杆菌UCN-11对产气荚膜梭菌、大肠杆菌和沙门氏杆菌引起的动物腹泻预防作用，在养殖场选取重量和长势相近的幼年动物，连续三天灌胃植物乳杆菌UCN-11，禽类剂量为每天0.1-0.3ml/只，畜类剂量为每天为3-5ml/kg，然后分别分组，分别灌胃从中国兽医微生物菌种保藏管理中心购置的产气荚膜梭菌、大肠杆菌和沙门氏杆菌培养物，剂量每天为1ml/kg，统计发病情况(表8)。植物乳杆菌UCN-11对异型发酵乳酸菌引起的动物胀气有明显治疗作用。
表8 植物乳杆菌UCN-11对动物腹泻预防作用
应用实施例13 动物腹泻治疗作用
为了考察植物乳杆菌UCN-11对产气荚膜梭菌、大肠杆菌和沙门氏杆菌引起的动物腹泻治疗作用，在养殖场选取重量和长势相近的幼年动物，分别灌胃从中国兽医微生物菌种保藏管理中心购置的产气荚膜梭菌、大肠杆菌和沙门氏杆菌培养物，剂量每天为1ml/kg，发病后，再连续三天灌胃植物乳杆菌UCN-11，禽类剂量为每天0.1-0.3ml/只，畜类剂量为每天为3-5ml/kg，然后分别分组，抗生素组为饲料中添加有吉尼亚霉素、吉他霉素、金霉素和恩拉霉素等抗生素。统计治愈情况(表9)。植物乳杆菌UCN-11对异型发酵乳酸菌引起的动物胀气有明显治疗作用。
表9 植物乳杆菌UCN-11对动物腹泻治疗作用
综上所述，本发明优选出来的植物乳杆菌UCN-11及其组合物，能主动地在加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，延长了货架期，并保持原有风味和品质，降低了成本，实现了一种新概念防腐保鲜，有效克服了现有技术缺陷，经10家企业应用试验均获较佳效果，同时应用于动物养殖业，能有效控制异型乳酸发酵的乳酸菌生长给养殖业带来麻烦，还能完全阻止大肠杆菌、沙门氏杆菌和产气荚膜梭菌繁殖，确保动物健康生长，本发明工业应用前景十分看好。

Claims (14)

1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)UCN-11菌株，保藏编号为CGMCC No.9480。
2.组合物，其特征在于：以有效量的植物乳杆菌UCN-11菌株、含植物乳杆菌UCN-11菌株的发酵培养物，或该发酵培养物离心所得的菌体或其干燥物为有效成分，加入可接受的辅料制成；所述植物乳杆菌UCN-11菌株的保藏编号为CGMCC No.9480。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述组合物为食品生物防腐剂时，所述可接受的辅料为食品科学领域可接受的辅料；所述组合物为饲料添加剂时，所述可接受的辅料为饲料科学可接受的辅料。
4.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于：所述组合物为液体或固体。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于：所述组合物为片剂、颗粒剂、粉剂、溶液、混悬液、乳剂或预混剂。
6.植物乳杆菌UCN-11菌株、含植物乳杆菌UCN-11菌株的发酵培养物，或该发酵培养物离心所得的菌体或其干燥物用于食品防腐保鲜的用途，其特征在于：所述植物乳杆菌UCN-11菌株的保藏编号为CGMCC No.9480。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述食品为凤爪、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵或竹笋。
8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述防腐是指抑制食品腐败细菌；
其中，所述食品腐败细菌为魏斯氏菌、肠膜明串珠球菌、大肠杆菌。
9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述保鲜是指调节食品风味、改善食品质地、去除肉类食品的腥膻味。
10.植物乳杆菌UCN-11菌株、含植物乳杆菌UCN-11菌株的发酵培养物，或该发酵培养物离心所得的菌体或其干燥物在制备用于动物保健的动物保健剂或饲料中的用途，其特征在于：所述植物乳杆菌UCN-11菌株的保藏编号为CGMCC No.9480。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于：所述动物为禽类、猪、羊和牛。
12.根据权利要求10所述的用途，其特征在于：所述动物保健为预防或治疗肠道致病菌引起的肠道疾病。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于：所述肠道致病菌引起的肠道疾病为由魏斯氏菌和产气荚膜梭菌引起的胃肠胀气。
14.根据权利要求12所述的用途，其特征在于：所述肠道致病菌引起的肠道疾病为产气荚膜梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌引起的腹泻。
CN201510073650.3A 2015-02-11 2015-02-11 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用 Active CN104611275B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510073650.3A CN104611275B (zh) 2015-02-11 2015-02-11 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510073650.3A CN104611275B (zh) 2015-02-11 2015-02-11 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104611275A CN104611275A (zh) 2015-05-13
CN104611275B true CN104611275B (zh) 2017-10-17

Family

ID=53145927

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510073650.3A Active CN104611275B (zh) 2015-02-11 2015-02-11 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104611275B (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2738803C2 (ru) * 2015-08-25 2020-12-17 Иммьюнбиотек Медикал Свиден Аб Композиция и способ лечения и профилактики кишечной инфекции и воспаления
CN105483050B (zh) * 2015-12-31 2018-12-18 北京英惠尔生物技术有限公司 一株植物乳杆菌及其在发酵饲料中的应用
CN105707648A (zh) * 2016-01-29 2016-06-29 江苏微康生物科技有限公司 一种抑制真菌的生物保护剂及其应用
CN106011008A (zh) * 2016-06-08 2016-10-12 黑龙江省绿色食品科学研究院 植物乳杆菌ndc75017在制备微生物膜中的应用
CN105861399B (zh) * 2016-06-17 2019-11-05 浙江大学 预防鸡坏死性肠炎的植物乳杆菌及其应用
TWI598103B (zh) * 2016-08-22 2017-09-11 景岳生物科技股份有限公司 改善困難梭狀桿菌感染症狀的發酵乳酸桿菌ｇｍｎｌ－２９６組合物及方法
CN107058158B (zh) * 2016-12-22 2020-11-24 内蒙古和美科盛生物技术有限公司 一种提高宠物犬免疫力的复合益生菌剂及其制备和应用
CN109700033B (zh) * 2019-03-04 2021-06-04 山东环亿生物科技有限公司 一种调节肠道、预防便秘的益生菌组合物及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI122247B (fi) * 2009-08-12 2011-10-31 Vetcare Oy Probioottinen valmiste koiran maha- ja suolistokanavassa ilmenevien häiriöiden ennaltaehkäisemiseksi tai hoitamiseksi
KR101178217B1 (ko) * 2009-10-28 2012-09-07 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
CN103667093B (zh) * 2012-09-19 2015-11-11 成都与康科技有限公司 一种具有食品防腐保鲜作用的植物乳杆菌929-2菌株及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104611275A (zh) 2015-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104611275B (zh) 植物乳杆菌ucn‑11菌株及其组合物和应用
CN105132308B (zh) 一种能降低食品中生物胺含量的植物乳杆菌及其应用
ES2864723T3 (es) Composición bioconservante de alimentos y usos de la misma
CN103651742A (zh) 一种具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂及其应用
CN103907940B (zh) 复合菌变温发酵降低肉制品生物胺的发酵剂及发酵方法
CN104970086B (zh) 生物保鲜剂及其制备方法和应用
CN109735461B (zh) 一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用
CN102965316B (zh) 含类细菌素与乳酸片球菌的饲料添加剂，预混料及配合料
CN113549574B (zh) 一种凝结芽孢杆菌及其应用
CN102726596A (zh) 一种羽毛蛋白肽饲料添加剂及应用
CN105176874A (zh) 凝结芽孢杆菌fm603及其应用
CN113907208B (zh) 一种预防仔猪腹泻的饲料添加剂及其制备方法和应用
CN109423465A (zh) 一种控制黄曲霉毒素b1的复合生物制剂及其应用
CN105557971A (zh) 一种生鲜禽肉天然生物保鲜剂及其使用方法
CN107312732A (zh) 一种益生菌饲料添加剂
CN102559563B (zh) 一种乳酸片球菌ccfm7902及其用途
CN113273639A (zh) 一种含益生菌的保鲜昆虫的制备方法
CN109588622A (zh) 一株植物乳杆菌及其在降低湿腌马鲛鱼生物胺含量中的应用
CN103667093B (zh) 一种具有食品防腐保鲜作用的植物乳杆菌929-2菌株及其应用
CN103610213B (zh) 食品级嗜酸乳杆菌发酵天然防腐剂的制备方法及产品
CN103598654A (zh) 一种蜂花粉活性益生菌饮料及其制备方法
CN107889935A (zh) 一种半湿状益生菌制品及其制备方法与应用
CN109329566A (zh) 用于改善仔猪胃肠道健康的预混合饲料及制备方法
CN105341425A (zh) 一种含抑菌微生态制剂的猪饲料及其应用
CN108432996A (zh) 一种猴头菇乳酸菌发酵饮料及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20191226

Address after: 610000 1st floor, building B4, 916 Tiangong Avenue, Xinxing street, Tianfu New District, Chengdu, Sichuan Province

Patentee after: Chengdu ranxin Biotechnology Co., Ltd

Address before: 610213 A building, No. two, 1 Garden Road, Chengdu hi tech Zone, Sichuan,

Patentee before: CHENGDU YUKANG TECHNOLOGY CO., LTD.