CN104561100A - 一种hla-dqbi常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，包括以下步骤：(1)通过对129/SV种系小鼠进行基因型鉴定；(2)应用PCR和Southern-bloting对提取的DNA进行测序和筛选，确定实验小鼠；(3)采用Neo？Cassette基因替换与ES细胞基因剔除技术结合进行目的常规基因剔除；(4)构建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。本发明所带来的有益效果是：不仅为阐明AR发病机制、同时也为相关疾病发病机制的阐明提供了良好的途径。
Description
技术领域
本发明涉及到基因剔除研究的新用途，特别是一种HLA-DQBI基因剔除实验小鼠模型的建立方法。
背景技术
基因剔除提出技术既可以细胞水平上进行，从而建立新的细胞系，也可以在整体水平行以建立基因剔除动物，通过观察个体的表型变化，推测基因在体内的可能功能，HLA-DQBI基因剔除动物模型，不仅为变应性鼻炎、支气管哮喘、精神分裂症、扩张型心肌病、多发性硬化症、孕妇反复流产、慢性乙型肝炎、肺结核等免疫性疾病及宫颈癌等恶性肿瘤相关疾病阐明发病机制、同时也为相关疾病发病机制的阐明提供了良好的途径。为阐明以上疾病的发病机制和对以上疾病的基因治疗和发展特异性药物疗法提供一定基础，也有报道指出有些疾病与种族遗传有关，进而阐明疾病临床表型多样性的本质，为临床个体化治疗提供一定依据，同时也为我国群体多态性研究、人类学研究、疾病相关性研究等提供有价值的科学遗传依据。
发明内容
为了克服以上技术缺陷，本发明提供一种HLA-DQBI常规基因剔除动物模型的建立方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为，一种HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，包括以下步骤：
(1)通过对129/SV种系小鼠进行基因型鉴定；
(2)应用PCR和Southern-bloting对提取的DNA进行测序和筛选，确定实验小鼠；
(3)采用Neo Cassette基因替换与ES细胞基因剔除技术结合进行目的常规基因剔除；
(4)构建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
所述129/SV种系小鼠是在所有小鼠饲养于下述SPF环境中，室内温度控制在22℃～26℃，湿度50％～65％，光照控制12h明/12h暗；小鼠笼盒、垫料、饮用水均经高温高压灭菌处理；饲料为经印Co辐照灭菌的全营养饲料。饲养过程中，每天进入动物房1次，观察小鼠生长情况并记录小鼠的质量变化情况；每周更换两次垫料并补充食物和水。采用H2-eb1+/-雄性小鼠与雌性小鼠按1∶1比例间歇同笼兄妹近亲繁殖方法繁殖，连续生产3-4胎，子鼠3周后离乳，离乳后种鼠亦同笼交配，H2-eb1基因剔除小鼠采用纯合子交配繁殖。
所述常规基因剔除是通过基因打靶，把需要剔除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette替换掉，这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。此类基因剔除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基因没有胚胎致死性。
本发明所带来的的有益效果是：本发明在研究疾病发病机制中主要是应用基因剔除技术，HLA-DQB1位于人类白细胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA)II类基因DQ座位点，属于经典的HLAII类基因范畴，具基因多态性，与抗原处理和提呈有关。研究发现，HLA-DQB1与变应性鼻炎、支气管哮喘、精神分裂症、扩张型心肌病、多发性硬化症、孕妇反复流产、慢性乙型肝炎、肺结核等免疫性疾病及宫颈癌等恶性肿瘤相关，具体机制仍未阐明，因而构建HLA-DQB1，不仅为阐明AR发病机制、同时也为相关疾病发病机制的阐明提供了良好的途径。
具体实施方式
一种HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，包括以下步骤：
(1)通过对129/SV种系小鼠进行基因型鉴定；
(2)应用PCR和Southern-bloting对提取的DNA进行测序和筛选，确定实验小鼠；
(3)采用Neo Cassette基因替换与ES细胞基因剔除技术结合进行目的常规基因剔除；
(4)构建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
所述129/SV种系小鼠是在所有小鼠饲养于下述SPF环境中，室内温度控制在22℃～26℃，湿度50％～65％，光照控制12h明/12h暗；小鼠笼盒、垫料、饮用水均经高温高压灭菌处理；饲料为经印Co辐照灭菌的全营养饲料。饲养过程中，每天进入动物房1次，观察小鼠生长情况并记录小鼠的质量变化情况；每周更换两次垫料并补充食物和水。采用H2-eb1+/-雄性小鼠与雌性小鼠按1∶1比例间歇同笼兄妹近亲繁殖方法繁殖，连续生产3-4胎，子鼠3周后离乳，离乳后种鼠亦同笼交配，H2-eb1基因剔除小鼠采用纯合子交配繁殖。
所述常规基因剔除是通过基因打靶，把需要剔除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette替换掉，这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。此类基因剔除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基因没有胚胎致死性。
本发明在研究疾病发病机制中主要是应用基因剔除技术，HLA-DQB1位于人类白细胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA)II类基因DQ座位点，属于经典的HLAII类基因范畴，具基因多态性，与抗原处理和提呈有关。研究发现，HLA-DQB1与变应性鼻炎、支气管哮喘、精神分裂症、扩张型心肌病、多发性硬化症、孕妇反复流产、慢性乙型肝炎、肺结核等免疫性疾病及宫颈癌等恶性肿瘤相关，具体机制仍未阐明，因而构建HLA-DQB1，不仅为阐明AR发病机制、同时也为相关疾病发病机制的阐明提供了良好的途径。
本发明不局限于上述实施方式，任何人应得知在本发明启示下做出的结构变化所得出的相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。
本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。
Claims (3)
1.一种HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)通过对129/SV种系小鼠进行基因型鉴定；
(2)应用PCR和Southern-bloting对提取的DNA进行测序和筛选，确定实验小鼠；
(3)采用Neo Cassette基因替换与ES细胞基因剔除技术结合进行目的常规基因剔除；
(4)构建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
2.如权利要求1所述的HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述129/SV种系小鼠是在所有小鼠饲养于下述SPF环境中，室内温度控制在22℃～26℃，湿度50％～65％，光照控制12h明/12h暗；小鼠笼盒、垫料、饮用水均经高温高压灭菌处理；饲料为经印Co辐照灭菌的全营养饲料；饲养过程中，每天进入动物房1次，观察小鼠生长情况并记录小鼠的质量变化情况；每周更换两次垫料并补充食物和水；采用H2-eb1+/-雄性小鼠与雌性小鼠按1∶1比例间歇同笼兄妹近亲繁殖方法繁殖，连续生产3-4胎，子鼠3周后离乳，离乳后种鼠亦同笼交配。
3.如权利要求1所述的HLA-DQBI常规基因剔除实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述常规基因剔除是通过基因打靶，把需要剔除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette替换掉，这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。
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Publications (1)
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| CN (1) | CN104561100A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003012041A2 (en) * | 2001-07-27 | 2003-02-13 | Wyeth | Knock in transgenic mammal containing a non-functional n-terminus of kv beta 1.1 subunit |
| CN101979605A (zh) * | 2010-09-17 | 2011-02-23 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用 |
| CN103525850A (zh) * | 2013-09-27 | 2014-01-22 | 上海市第六人民医院 | 一种Clec3b基因敲除打靶载体 |
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2014
- 2014-12-24 CN CN201410811894.2A patent/CN104561100A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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| WO2003012041A2 (en) * | 2001-07-27 | 2003-02-13 | Wyeth | Knock in transgenic mammal containing a non-functional n-terminus of kv beta 1.1 subunit |
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| 张瑜 等: "H2-Ab1基因在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达的研究", 《临床耳鼻喉头颈外科杂志》 * |
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