CN1045603A

CN1045603A - 筛选系统

Info

Publication number: CN1045603A
Application number: CN90101369.2A
Authority: CN
Inventors: 安东尼·查尔斯·明松
Original assignee: IMMUNOLOGY Ltd CORP
Current assignee: IMMUNOLOGY Ltd CORP
Priority date: 1989-03-15
Filing date: 1990-03-15
Publication date: 1990-09-26
Also published as: WO1990010867A1; US5045447A; EP0463046A1; JPH04505964A; AU5286090A; CA2012088A1

Abstract

一种用于生产抗免疫原的抗体方法的筛选系统，其中用被编码一种或多种免疫原的抗原决定簇的病毒重组体感染的细胞筛选杂交瘤培养物上清液，所述受感染细胞先经一种或多种制备临床样品的常规方法处理以测定所述抗原决定簇的存在。

Description

本发明涉及一种筛选系统。具体地说，本发明涉及一种用于生产抗体方法中的筛选系统，它能够筛选抗体与特定抗原的结合能力。本发明也涉及实施筛选系统的方法及材料、使用筛选系统所产生的抗体、使用这些抗体的诊断方法和药盒、以及使用所说材料作为检测对照实施筛选系统的药盒。

本发明仅通过使用这种筛选系统生产抗人乳头状瘤病毒（HPV）的单克隆抗体来作为举例，但并不限于此。本领域熟练技术人员可以很明显看出，这里所述的技术可在许多抗体生产系统中加以利用。

为了将抗体成功地用于诊断试验，该抗体必须能够识别为进行分析所制备的免疫原和试验样品（即经过冷冻保藏、切片和固定等任何组织预处理）所共同具有的抗原决定簇。因此，用于筛选大量的如杂交瘤培养物上清液的所选系统必须能够协助选择用于诊断的抗体。

迄今为止，对给定抗原如HPV（用于研究目的）的抗体的生产已通过以下方法而被完成，即使用细菌表达系统中的表达蛋白质、以合成寡聚多肽形式存在的蛋白质或者是纯化蛋白质作为免疫原，且通过再次使用免疫原或其各种结合来筛选产生抗所述免疫原的抗体（如从杂交瘤上清液筛选）（Banks L.，et al 1987，J.Gen.Vol 68，3081-3089;Doorbar J.and Gallimore P.;et al 1987，J.Virology.61，p2793-2799）。

但是，这些生产单克隆抗体的已知方案一般不适用于生产用于免疫细胞化学诊断试验的单克隆抗体。因为由这些已知方案生产的抗体未必与被感染人体细胞中天然存在的蛋白质反应，更具体地说，由这些抗体识别的抗原决定簇未必就是能耐受临床样品的取样、固定及保存过程中所涉及的标准方法的抗原决定簇。

本发明人已认识到，为了选择诊断上适用的抗体，必须要求筛选材料非常类似临床样品。特别是，筛选材料在诊断检测过程中必须具有与临床样品相同形式的抗原。

在将细胞涂片或组织切片等临床样品用于依赖抗体的诊断试验时，通常需要将样品经过一个或多个预处理步骤。这些预处理步骤包括冷冻保存、切片和/或固定（如通过甲醇或甲醛/盐水）。由于这些步骤，经过这些预处理步骤的临床样品所表现的抗原与在体内表达的抗原相比可能有一定程度的改变。

本发明人由此认识到，在任何筛选系统中均要求筛选材料以两种主要途径模拟临床样品。首先，筛选材料必须能够尽可能天然地生产、加工和表现该材料。其次，在将筛选材料用于筛选系统之前它必须经过临床材料在诊断分析前所经过的同样预处理步骤。

如上所述，本发明使用人乳头状瘤病毒作为例子。

人乳头状瘤病毒为小DNA病毒（约8kb），已报道有40多个型。它诱导皮肤或粘膜的上皮细胞或纤维上皮细胞增生（Zur Hausen，H.，1977，Current Topics in Microbiol and lmmunol.78，1-30）。尤其是几种HPV类型的DNA已在各种生殖性损害中被发现，其范围从常含HPV 6b或HPV11 DNA的良性疣（Gissmann L.et al，1983，Proc.Nat.Acad.Sci.（USA）80，560-563）到常含有HPV-16，-18，-33或-35基因组的子宫颈侵入性鳞状上皮细胞癌（Durst M.，et al 1983，Proc.Nat.Aead.Sci.USA 80，3812-3815;Beaudenon S.，et al 1986，Nature，Vol.321，246-249）。

通过子宫颈涂片的细胞学检查，有可能指出高达10%的从其收集涂片样品的妇女具有异常细胞学行为。然后对这些妇女进一步进行身体检查，通常包括侵害性诊断方法。这些妇女中一部分被非严重HPV感染，而另一部分被更不吉利的HPV类型感染。这样在一个筛选系统中有一个诊断试验将是有用的，它既能够鉴定HPV感染的存在，又能够区分非严重HPV感染与严重HPV感染。为了减少设备和训练成本，对于任何新的诊断试验来说利用现有技术比较有利，从而很自然地想到本发明的筛选方法。而且，从任何这类试验都可自然地得到客观答案（而非主观估价），从而有可能使试验实现自动化，有助于减少成本和等待时间，后者对于患者来说尤其重要。

至今未有基于抗体的临床诊断试验可供利用以测定HPV感染。这主要是由于两个原因。首先，至今还不可能建立一种用于乳头状瘤病毒体外繁殖的受纳组织培养物系统。其次，临床材料难以获得，病毒蛋白通常仅非常少量地存在于临床损伤部位，引起损伤的HPV通常具有未知类型。这两个因素意味着不可能得到在单克隆抗体的大规模生产中既用作免疫原又用作筛选剂的可靠和充足定型（即已知）HPV来源。

本发明提供了一种用于生产抗体方法中的筛选系统，该抗体具有与特定抗原结合的能力，其中抗体是用感染了重组病毒载体的细胞筛选，该载体表达一种特异于所需抗体的抗原，所述细胞已按与制备临床样品类似的方法进行了预处理。优选的是，该抗体是从动物获得，该动物则已被重组DNA在合适宿主体中表达的蛋白质或合成寡聚肽免疫，所说的蛋白质或寡聚肽具有与病毒载体所编码的抗原决定簇同源的抗原决定簇。

与抗原决定簇相关的术语“同源”是用于说明该抗原决定簇实际上由相同的氨基酸序列表示，同时应当意识到由于它们的不同生产方式它们在形态上并不一定完全相同。本发明的筛选系统能够保证待鉴别的抗体能够识别同源抗原决定簇的共同结构特征，从而可能少受由制备的临床样品所代表的抗原决定簇中任何形态改变的影响。使用筛选系统所获得的抗体可被进一步筛选，以抗所制备的已知抗原性的临床样品（如被已知类型的HPV感染），从而保证该抗体在该情况下具有所需的识别抗原决定簇的能力。

本发明也提供了用于这里所提供的筛选系统中的筛选材料，它包括被重组病毒载体（表达特异于所需抗体的抗原）感染的细胞，该细胞已经过类似临床样品制备过程中所经过的预处理。

本发明也提供了利用所述筛选系统所生产的抗体。

本发明也提供了诊断药盒，它包括以下两种成分或其一：a）利用所述筛选系统所生产的抗体，b）包括被一种重组病毒载体感染的细胞以及一种或多种试剂的筛选材料，其中试剂是检测临床样品中具有该抗体所专一的抗原决定簇的蛋白质的存在所必需的，重组病毒载体表达与该蛋白质所具有的抗原决定簇同源的抗原决定簇。筛选材料中的细胞可按制备临床样品时类似的方式进行预处理。在该药盒中，筛选材料可作为检测对照加入。

本发明也包括一种诊断方法，其中利用所述筛选系统所生产的抗体用于检测临床样品，以确定具有抗体所专一的抗原决定簇的蛋白质的存在。

该方法可用于生产能够区分免疫原的不同株的抗体。这可通过使用被病毒重组体（它编码一个或多个特异针对于免疫原的一种特定株的抗原决定簇）感染的细胞筛选抗体而达到。合适的病毒载体是牛痘。

本发明所公开的方法尤其具有以下优点：1）被病毒重组体感染的细胞能够提供一种良好的抗原来源;2）抗原是在哺乳动物细胞中表达，因此它能够以在天然感染中所发现的抗原基本相同的方式合成和加工;3）在用于杂交瘤筛选过程之前，感染细胞经过了与试验样品组织相同的预处理，从而保证所选择的抗体能够识别抗这些预处理的抗原决定簇，并且由此推断这些抗原决定簇存在于制备用于分析的试验样品上。预处理通常包括通过离心沉淀感染细胞、固定和制成切片。当临床样品为子宫颈涂片时固定过程通常使用甲醇，当临床样品为活组织检查材料时则通常使用甲醛/盐水。

这里所提供的筛选系统和病毒感染的细胞筛选材料可用于抗体的再次筛选，但它们也可能被首次制备和选择。

除了产生所述问题的乳头状瘤病毒外，本发明可以更广泛地应用，尤其适用于针对难以按常规方法生产的天然形式抗原的抗体。

使用病毒感染的细胞作为筛子或阳性对照的好处尤其在于可以制备具有已知水平（如1/1000细胞）抗原的细胞。因此，人们可以判断某一具体检测中抗体的可适用性或者是使用阳性对照的检测法中阳性信号的强度。

图1显示了用于融合β-半乳糖苷酶HPV16-L1开放读码的表达质粒PHX2的构建;

图2显示了pUC18中全长HPV16-L1开放读码的构建（也见Brown等1988 J.Gen.Virol.69，1263-1273）;

图3显示了牛痘表达质粒pRK19的构建，它为在牛痘病毒4b启动子的控制下表达编码序列的插入载体（也见Richard Kent Ph D Thesis，Uriversity Combridge）;

图4显示了从质粒pRK19构建表达质粒pRKL1，其中HPV-16L1基因由牛痘病毒4b启动子控制（也见Biowne等1988 J.Gen.Virol.69，1263-1273），

图5显示了为融合β-半乳糖苷酶HPV-16E7开放读码的表达质粒pExE7的构建;

图6显示了表达质粒pRKE7的构建，其中HPV16 E7基因受牛痘病毒4b启动子控制;

图7显示了本发明筛选系统的使用。

为了使本发明更易理解，下面叙述一个实施方案，它仅作为举例而不是限定本发明。

1.生产抗HPV-16L1的单克隆抗体

（a）制备HPV-16L1/β-半乳糖苷酶融合蛋白（免疫原）

获得HPV-16DNA的基因组克隆（完整核苷酸系列的详细情况见Seecorf等1985，Virology 145，181，在此引用该文献以供参考）。克隆部分HPV-16L1开放读码（氨基酸211至C末端）作为Bam H1/Sph 1片段（碱基6153-7464），且连接于载体pEx-1的BamH1和Sal 1位点（Stanley & Luzio 1984;EMBO J.3，1429，在此引用以作参考），结果产生融合的β-半乳糖苷酶的开放读码和HPV-16L1的C-末端部分（图1）。产生的质粒（PHX2）转染进大肠杆菌POP2136，通过热诱导产生β-半乳糖苷酶融合蛋白，再通过凝胶电泳纯化。

（b）制备抗HPV-16L1的单克隆抗体

通过间隔为1个月的三次腹膜内注射100μg β-半乳糖苷酶-L1融合蛋白（制法如上（1a）（存在于不完全弗氏佐剂中）对小鼠进行免疫。在最后一次免疫4天后将小鼠脾细胞与骨髓瘤NSO细胞融合，然后将融合产物分布于48×1.5cm直径的组织培养孔中。

（c）制备筛选材料

（ⅰ）制备表达全长HPV-16L1蛋白质的重组牛痘病毒。

将HPV-16L1开放读码引入得自HPV-16基因组克隆的Kpn1-Sph1片段（碱基5377-7464）中的载体pUC18。从该载体上对开放读码进行切割，通过EcoR1部分酶解得到一个2074bp片段，然后将该片段引入pRK19的EcoR1位点，pRK19为含有连接牛痘胸苷激酶编码序列的牛痘晚期启动子（4b晚期基因的启动子）的载体（R.Kent，Ph.D.thesis，Cambridge 1988，在此引用以作参考）。

所产生的质粒pRKL1（图4）含有在牛痘晚期启动子控制之下的整个HPV-16L1基因。将pRKL1转染进被野生型牛痘病毒感染的CV-1细胞，通过在5-溴脱氧尿苷中培养选择缺乏完整胸苷激酶基因的重组病毒。然后通过与HPV-16DNA探针杂交来鉴别重组病毒，再通过限制酶解进一步鉴定。鉴定出含有按正确定向插入的HPV-16L1基因的重组病毒，命名为VL1RK。

上述（1）和（2）所描述的过程在Browne等1988，J.Gen.Virol.69，1263-1273中有更完整的描述（在此引用以解参考）。

构建含有4b基因启动子的质粒的步骤如下（见图3）：

（a）将4b基因编码序列和5′端序列的228个核苷酸（含有启动子和转录起点）分离到得自牛痘病毒（WR株）Hind ⅢA限制片段的2.3kb Xbal片段上。再将2.3kb Xbal片段克隆到M13 mp 19的Xbal位点，通过Xhol切割，Bal 13酶解和重新连接除掉大部分4b编码序列。所产生的M13 mp 19中的插入子含有“上游”序列的228个核苷酸和4b编码序列的31个核苷酸。

（b）通过定点诱变删去剩余的4b编码序列，以使M13 mp 19中的克隆位点紧接于4b启动子和转录起始位点的3′端。该区域的序列如下：

Bam Sma Kpn等

……CGAATATAAATAAGGATCCCGGGTACC……

牛痘4b启动子 M13 mp 19克隆位点

序列

最后，通过从载体中除去这些序列（利用EcoRI和Accl酶解）并将其插入类似于pGS20的载体中的牛痘胸苷激酶基因而构建pRK 19（见Mackett等，1984，Joumal of Virology 49，857，在此引用以作参考）。pRK19由此具有图3所给性质。使用该启动子是因为它易于得到，从原理上讲任何一种牛痘晚期启动子都可以使用。“晚期”牛痘启动子的特征已被多人叙述，如Rosel等1986，Journal of Virology 60，436及Betholet等，1986，EMBO Journal 5，1951，它们均在此被引用以作参考。有几个使用这些启动子序列在牛痘病毒重组体中操纵外源蛋白质表达的例子，如Bertholet等，1984，PNAS 82，2096和Miner等，1988，Journal of Virology 62，297，它们均在此被引用以作参考。由这些作者所述的载体也适用于表达HPV编码序列。4b基因启动子具有其它“晚期”启动子所共有的特征。4b基因及其启动子区的序列已由Rosel和Moss确定（1985，Journal of Virology 56，830，在此引用以作参考）。

（ⅱ）制备用作福尔马林固定、石蜡包埋及组织切片的小球的牛痘感染细胞，以评估单克隆抗体的反应性。

用重组牛痘病毒或野生型牛痘病毒（阴性对照）感染预先形成的单层靶细胞（10⁷或更多），感染进行8-15小时。使用仓鼠幼仔的肾细胞（BHK-21）和Vero细胞，并且在原则上任何感性细胞系都可使用。感染复数（MOI）依所需抗原阳性细胞的比例而变化。MOI为5时，产生100%+ve细胞。MOI为0.1时，产生10%+ve，MOI可无穷地变化，从而产生一部分由泊松分布所限定的+ve细胞。对于用作筛选材料来说，MOI应高，例如为70-100%。

然后，用塔夫纶细胞刮器刮下细胞并将细胞收集于少量PBS中（Dulbeccos A）。将细胞悬浮液在小型离心机中以大约200rpm的转速离心10分钟。除去上清液后，将沉淀物重新悬浮于1.0ml PBS中并转移到Eppendorf试管中。然后将细胞团重悬液在微型离心机中以最大速度离心5分钟。此后除去上清液，代之以1.0ml 5%甲醛-盐水缓冲液并在室温下放置5-60分钟。用一根细的注射针头，小心移出固体团块以便它漂浮在液体中。然后，采用常规的本领域众所周知的脱水和石蜡渗滤法处理小固体团块以进行小型活组织检查。用标准方法制做免疫诊断用切片。

（ⅲ）将牛痘感染细胞制成细胞涂片用于评价单克隆抗体的反应性

用重组牛痘病毒或野生型牛痘病毒（负对照）感染预先形成的单层靶细胞（10⁷或更多），感染进行8-15小时。使用仓鼠幼仔的肾细胞（BHK-21）和Vero细胞并且在原则上任何感性细胞系都可使用。感染复数（MOI）依抗原阳性细胞所需比例而变化。

MOI为5时，产生100%+ve细胞。MOI为0.1时，产生10%+ve，MOI可无穷地变化，从而产生一部分由泊松分布所限定的+ve细胞。

用塔夫纶细胞刮器从培养瓶中刮细胞并收集于少量PBS中（Dulbeccos A），在小型离心机中以2000rpm的速度离心5-10分钟。除去上清液并反复洗涤。最后加入足够的PBS使细胞悬液的浓度达10细胞/ml，重新悬浮细胞。用一支巴斯德吸管将一滴细胞悬液（100μl）置于一玻璃片上。为确保细胞附着，已用3-氨基丙基三乙氧硅烷（APES）对载片进行了预处理。然后用常规木制或塑料刮勺（用于制做子宫颈涂片）或细菌学棉试或接种环将细胞小滴均匀涂布于整个载片。涂片立即用90%乙醇（v/v）喷雾固定或置于90%乙醇中5分钟。然后将涂片风干。恰在免疫染色之前，将这些涂片置于5%甲醛盐水缓冲液中5分钟，在进行本领域众所周知的免疫染色之前于PBS中漂洗两次。在本实施例中，通过免疫荧光测定筛选培养上清液中的HPV-16L1-特异性抗体用作靶BHK-21（被VL1RK感染的成纤维细胞）。

（d）筛选

按所述方法制备切片（或细胞涂片），其中包括具有高MOI的被感染细胞，用这些切片作为抗体筛选的靶。在室温下，将杂交瘤培养物上清液于切片上保温30分钟，用PBS洗涤后，经与荧光素结合兔抗小鼠IgG一起保温检测结合免疫球蛋白。在强核荧光基础上鉴定阳性培养物并将培养物中的细胞进行两轮限制性稀释克隆。所得杂交瘤被命名为CAMVIR-1。发现分泌的抗体可从被VL1RK感染的细胞溶解物中免疫沉淀出一种表观分子量约为55，000的蛋白质。这种蛋白质不会从被野生型牛痘病毒感染的细胞溶解物中沉淀出来。该表观分子量与预计的HPV-16L1蛋白质分子量（约53，000）一致。还发现该抗体对被VL1RK感染并用甲醛或甲醇固定的细胞产生强的核染色（采用免疫荧光法和/或免疫过氧化物酶染色法）。

由杂交瘤CAMV1R-1产生的单克隆抗体产生强的核染色这一事实表明由被VL1RK感染的细胞表示的抗原决定簇的表达未被日常应用于临床样品的过程所破坏。

用被重组牛痘病毒感染的细胞材料作为靶抗原的来源，靶抗原已按与应用于临床样品的预测处理类似的方法进行了处理，因而选出具有所需特异性的适用于诊断的抗体。后来，通过临床样品的免疫过氧化物酶染色进一步证实了这些试验的有效性。在已知为HPV-16阳性（通过核酸杂交测知）的活组织检查切片和子宫颈涂片制品的细胞核中用CAMVIR-1抗体检测出HPV抗原，但在已知为HPV-6或HPV-11阳性的样品中则不然。

2.生产抗HPV-16E7的单克隆抗体

用类似的方法制备两种进一步的杂交瘤，CAMVIR-2，-3和-4，它们可产生抗HPV-16的E7蛋白的单克隆抗体。HPV-16E7基因的克隆和表达细节如下。

（a）制备一种β-半乳糖苷酶-E7/β-半乳糖苷酶融合蛋白（免疫原）

用Pst 1酶解HPV-16的基因组克隆（Seedorf等人，见上文），将所得包括E7开放读码在内的1776bp片段（7003-875碱基）克隆到pUC13的Pst 1位点中。用Pst 1和Nsil酶解所得质粒pJS2（见图5），将313bp片段（562-875核苷酸）克隆到pEX-1的Pst 1位点中（Stanley and Luzio，见上述文献），得到含有融合β-半乳糖苷酶-E7编码序列的pEXE7。按用于HPV-16L1融合蛋白所述的方法（和Browne等人，见上述文献）诱导和纯化表达产物。

（b）生产HPV-16E7单克隆抗体

用β-半乳糖苷酶-E7融合蛋白（按上述2（a）制得）免疫小鼠（见1（b）中对HPV-16L1融合蛋白的叙述）。

（c）制备筛选材料

（ⅰ）制备表达HPV-16E7蛋白质的重组牛痘病毒

用Hind Ⅲ将质粒pJS2（图5）线性化并用PvuⅡ部分酶解。将起源于pUC13 Hind Ⅲ位点并终止于HPV-16 PvuⅡ位点（核苷酸553）的335bp片段纯化，修复其末端并克隆到pRK19（见图6）的Sam 1位点中，以便E7基因得以在牛痘4b晚期启动子的控制下表达。CV-1细胞的转染和胸苷激酶阴性病毒重组体的分离在L1重组体的制备（Mackett等人，见上述文献）中有述。

然后，如在1（c）（ⅱ）和/或1（c）（ⅲ）和1（d）中对HPV-16L1的描述，用表达HPV-16E7蛋白质的重组牛痘病毒生产适用于诊断的抗HPV-16E7抗体，所不同的是将用于筛选的细胞在福尔马林中短时间固定（即固定1小时或更短时间）。

图7表明利用筛选系统选择适用于诊断的抗体。用含有编码所选抗原的基因序列的重组病毒载体感染真核细胞样品。适当温育后，这些受感染细胞产生，表达并呈现该抗原。然后收集细胞并形成细胞团块。这种细胞团块可经处理用作小型临床活组织检查（或用作制做细胞涂片的细胞来源）。因此，在诊断分析之前制做切片，那些日常应用于临床样品的加工方法也适用于用受感染细胞制成切片。这些加工或预处理步骤可改变所示抗原的性质。由于这些预处理步骤应用于临床材料，自然表达的抗原可类似地改变。

然后，可在例如细胞团切片上试验杂交瘤上清液以寻找适用于诊断的抗体，该抗体应能与预计临床样品中可能存在形式的抗原结合。可采用本领域中众所周知的技术，例如使用荧光素，酶或放射标记的第二抗体检测抗体-抗原-结合。

可将包括被含有编码有意义抗原的基因序列的重组病毒载体感染的细胞的细胞团切片或细胞涂片掺加于诊断测定药盒中作为对照物。为此，被重组病毒载体感染的细胞应具有低MOI，例如3%或更低。例如，可以载有含受感染细胞的细胞团切片的显微镜载片等形式提供对照。这些细胞可呈现有意义的抗原。因此，应处理该对照作为试验样品，因为已知该对照可呈现有意义的抗原，所以应得到阳性试验结果。如果这种对照不产生阳性试验结果，则表明这种测定是有缺点的并且用这些样品所得到的阳性结果不一定是真正的阴性。上面举例说明的方法一般可应用于其它抗原并且对于使用其它病毒载体也是可行的。

Claims

1、一种用于生产对特定抗原具有结合能力的抗体方法的筛选系统，其中用被表达特异于所需抗体的抗原的重组病毒载体感染的细胞筛选抗体，并且该感染细胞首先经过了在制备临床样品以检测所述抗原存在时所通常经过的一个或多个处理过程。

2、权利要求1的筛选系统，其中病毒载体是牛痘。

3、权利要求1的筛选系统，其中抗原是包含人乳头状瘤病毒（HPV）抗原决定簇的多肽。

4、权利要求3的筛选系统，其中抗原决定簇包含在HPV-16 L1蛋白或HPV-16 E7蛋白中。

5、权利要求1的筛选系统，其中抗体得自于已用由适当宿主体内重组DNA表达的蛋白质或用合成寡核苷酸免疫过的动物，所述蛋白质或寡核苷酸显示与由病毒载体编码的抗原决定簇同源的抗原决定簇。

6、权利要求1的筛选系统，其中用于制备临床样品的常规方法包括一种或多种沉淀法，切片法，脱水法和固定法。

7、权利要求1的筛选系统，其中通过所述筛选系统选出的抗体再经过进一步的对已知含有抗原的一种或多种制得的临床样品的筛选。

8、权利要求1的筛选系统，其中抗体先经过第一筛选步骤预选，所述第一筛选步骤可能不同于权利要求1的筛选系统。

9、一种诊断程序，其中通过上述权利要求任一项所述的筛选系统选出的抗体被用于测定临床样品中代表某一抗原的蛋白质的存在，该抗体对所述抗原是特异的。

10、一种包括被表达特异于所需抗体的抗原的重组病毒载体感染的细胞的筛选材料，受感染细胞已经过制备临床样品以检测所述抗原的存在的常规方法中的一个或多个处理过程。

11、一种抗体，其衍生物或功能等价物，其可通过权利要求1-8任一项所述的筛选系统来选择。

12、一种诊断药盒，该药盒包括a）和/或b）：

a）权利要求11所述的抗体，其衍生物或功能等价物;

b）包含被表达特异于所需抗体的抗原的重组病毒载体感染的细胞的筛选材料;

以及一种或多种完成临床样品检测所必需的试剂，该检测的目的是确定抗体专一的抗原的存在。

13、权利要求12所述的诊断药盒，其中筛选材料可用作为测定的阳性对照物。

14、权利要求12所述的诊断药盒，其中包含所述筛选材料的细胞先经过一种或多种制备临床样品以测定所述抗原的存在的常规方法处理。

15、权利要求14所述的诊断药盒，其中所述常规方法包括一种或多种沉淀法，切片法，脱水法和固定法。

16、一种诊断药盒，包括：

（ⅰ）一种特异于给定抗原的抗体;

（ⅱ）用上述抗体检测临床样品分析物所需试剂;

（ⅲ）含有被表达所述抗原的重组病毒载体感染的细胞的阳性对照样品;和

（ⅳ）用于检测所述抗体（ⅰ）与样品（ⅲ）中抗原结合的试剂。

17、权利要求16所述的诊断药盒，其中试剂（ⅳ）可包括于试剂（ⅱ）中。

18、权利要求16所述的诊断药盒，其中样品（ⅲ）按适用于临床样品的类似方法处理。

19、权利要求18所述的诊断药盒，其中样品（ⅲ）可通过一种或多种将细胞沉淀，脱水，固定和切片并将切片置于一支持物上而制备。

20、权利要求16所述的诊断药盒，其中样品（ⅲ）的抗原表达水平和/或表达抗原的细胞的比例是已知的。