CN104557548B - 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法 - Google Patents

从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104557548B
CN104557548B CN201510029454.6A CN201510029454A CN104557548B CN 104557548 B CN104557548 B CN 104557548B CN 201510029454 A CN201510029454 A CN 201510029454A CN 104557548 B CN104557548 B CN 104557548B
Authority
CN
China
Prior art keywords
xylotrupes dichotomus
methanol solution
extract
compound
xylotrupes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510029454.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104557548A (zh
Inventor
尹卫平
牛兰岚
刘军娜
高嘉屿
李海迪
刘华清
李文亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongying Yuelaihu Park Operation Management Co ltd
Original Assignee
Henan University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan University of Science and Technology filed Critical Henan University of Science and Technology
Priority to CN201510029454.6A priority Critical patent/CN104557548B/zh
Publication of CN104557548A publication Critical patent/CN104557548A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104557548B publication Critical patent/CN104557548B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/52—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/58—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by liquid-liquid treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/18—Systems containing only non-condensed rings with a ring being at least seven-membered

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开一种从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：步骤一、将独角仙粉用二氯甲烷浸泡，过滤，得虫渣；步骤二、向虫渣中加入质量百分数为70%甲醇溶液提取，浓缩，将浓缩液冷冻成冰状，干燥得到独角仙提取浸膏；步骤三、独角仙提取浸膏用70%甲醇溶液溶解，硅胶柱洗脱，合并相似馏分；步骤四、将第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，得到化合物Ⅰ；步骤五、将馏分段11、12合并，用聚酰胺柱色谱分离；将第3个馏分重结晶，得到化合物Ⅱ；将第4个馏分重结晶，得到化合物Ⅲ。本发明首次从独角仙中提取分离到3个化合物，分别被鉴定为1个新降崁酮衍生物和2个新嘌呤类生物碱化合物。

Description

从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，主要涉及一种从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法。
背景技术
药用昆虫由于资源丰富，且活性较强，在新药开发方面有巨大的潜力。独角仙Allomyrinadichotoma(Linnaeus)，又称双叉犀金龟，为昆虫纲-鞘翅目-犀金龟科甲虫。全世界具有大型犄角的独角仙目前约有60种，其他犄角较小或不明显的种类约有一千三百多种。中药上又叫独角螂虫，主要有镇惊、破瘀止痛、攻毒及通便等药用功效。独角仙有很高的药用价值。中医药选用其雄虫入药，夏季捕捉，用开水烫死后晾干或烘干备用。现代医药研究发现，该节肢动物昆虫还具有治疗白血病和抗癌功效。如1976年有报道从独角仙提取到独角仙素“dicotastin”，体外研究发现，该物质对实体瘤W-256疡瘤有很高活性，对P-388淋巴白血病有边缘活性。综上所述，独角仙作为我国传统中药应用，历史悠久，资源丰富；另一方面，其活性和药用物质基础研究仍然十分匮乏。因此，挖掘和利用这一天然药用资源,研究其成药规律是十分重要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，该方法首次从独角仙中提取出3个新化合物，分别被鉴定为1个新降崁酮衍生物和2个新嘌呤类生物碱化合物，提取的化合物具有一定的抗菌活性。
本发明实现上述技术目的采用的技术方案是：从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫，用清水洗净后晾干，然后置于30-65℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22-26℃条件下，用独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量5-15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量20-30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏分，备用；
将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ；
所述的化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的结构式分别为：
化合物Ⅰ
化合物Ⅱ
化合物Ⅲ。
步骤一所述的采用二氯甲烷浸泡和步骤二所述的甲醇浸泡的时间均为40-48h。
步骤三所述的洗脱过程中每个梯度的洗脱量为2倍柱体积。
本发明的有益效果
本发明提供的方法首次从独角仙中提取出3个新化合物，分别被鉴定为1个新降崁酮衍生物和2个新嘌呤类生物碱化合物，经过药效学实验证明，具有一定的抗菌活性，为进一步提升昆虫独角仙药用价值，提供了新的科学依据。所述提取分离方法是在活性指导下的有效分离，尤其适合天然微量化合物的追踪获取。另外本发明的提取方法采用70%的甲醇溶液，能够使降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物尽可能多的被提取出来，在采用超声提取时，在较低的温度条件下进行，既可以保证有效成分提出，又可以避免有效成分遭到破坏，提取过程简单、稳定。
附图说明
图1为化合物Ⅰ的1HNMR谱图；
图2为化合物Ⅰ的13CNMR谱图；
图3为化合物Ⅰ135度的DEPT13CNMR谱图；
图4为化合物Ⅰ90度的DEPT13CNMR谱图；
图5为化合物Ⅰ的1H-1HCOSY谱图；
图6为化合物Ⅰ的HSQC谱图；
图7为化合物Ⅰ的HMBC谱图；
图8为化合物Ⅰ的HR-ESIMS谱图；
图9为化合物Ⅱ的1HNMR谱图；
图10为化合物Ⅱ的13CNMR谱图；
图11为化合物Ⅱ的HSQC谱图；
图12为化合物Ⅱ的HSQC放大谱图；
图13为化合物Ⅱ的HMBC谱图；
图14为化合物Ⅱ的HMBC放大谱图；
图15为化合物Ⅲ的1HNMR谱图；
图16为化合物Ⅲ的13CNMR谱图；
图17为化合物Ⅲ的135度的DEPT13CNMR谱图。
具体实施方式
从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫，用清水洗净后晾干，然后置于30-65℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22-26℃条件下，用独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量5-15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量20-30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏分，备用；
将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ；
所述的化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的结构式分别为：
化合物Ⅰ
化合物Ⅱ
化合物Ⅲ。
步骤一所述的采用二氯甲烷浸泡和步骤二所述的甲醇浸泡的时间均为40-48h。
步骤三所述的洗脱过程中每个梯度的洗脱量为2倍柱体积。
化合物结构鉴定
化合物Ⅰ：浅黄色无定型粉末，D25+0.035(c,0.5,H2O)；IR(KBr,cm-1):max2962,1742,1466,1366,1301,1031,728;HR-ESI-MSm/z283.1952[M-H]-（C16H28O4）;1H-NMR(400MHz,D2O):3.60(m,3H,H-16),3.54(d,1H,J=3.88Hz,H-2,3),1.85(m,1H,H-1,4),1.60(m,1H,H-5),1.60(m,2H,H-7,9),1.33(m,1H,H-6),1.33(m,-OH,H-14),1.14(m,2H,H-8),0.89(d,3H,J=7.00Hz,H-12),0.87(d,3H,J=7.00Hz,H-13),0.83(d,3H,J=7.44Hz,H-11),0.81(d,3H,J=7.44Hz,H-10)13C(100MHz,D2O)NMR:175.5(C-15),174.1(C-14),59.5(C-2),59.5(C-3),53.3(C-16),39.7(C-7),39.7(C-9),35.8(C-1),35.8(C-4),24.4(C-8),24.1(C-6),24.0(C-5),21.9(C-13),20.8(C-12),14.6(C-11),11.0(C-10)。被命名为：AllomyrinanoidsA。
化合物Ⅱ:白色无定形粉末，IR(KBr,cm-1):max3300,3160,1340cm-1and1590,1460,994,913,761,692cm-1。HR-ESI-MSm/z179.0637[M+H]+(C6H6N6O);1H-NMR(400MHz,DMSO):12.51(br.1H,-NH2),10.87(br.1H,-NOH),8.13(s,1H,H-8),7.98(s,1H,H-10),7.94(s,1H,H-2);13C(100MHz,DMSO)NMR:155.5(C-6),151.3(C-4),148.8(C-2),144.7(C-10),140.5(C-8),106.8(C-5)。被命名为：Adenine-9-methylaldehydeoximeB(1)。
化合物Ⅲ:白色无定形粉末,IR(KBr,cm-1):max3027,1512,1467,1336,990,903,760,694cm-1。1H-NMR(400MHz,DMSO):13.18(br.2H,-NOH),12.34(br.1H,-HN=C-NH-),8.13(s,1H,H-8),7.98(s,1H,H-10),7.94(s,1H,H-2);13C(100MHz,DMSO)NMR:155.4(C-6),151.3(C-4),148.7(C-2),144.5(C-10),140.4(C-8),106.5(C-5)。被命名为：6-N-methyleneamine-adenine-9-methylaldehydeoximeB(2)。
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明：
实施例1：
从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫1000g，用清水洗净后晾干，然后置于30℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22℃条件下，用独角仙粉重量5倍的二氯甲烷浸泡40h，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量5倍的二氯甲烷，在22℃条件下浸泡40h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量15倍的甲醇溶液，在26℃条件下浸泡40h，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在26℃条件下浸泡40h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量20倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，每个梯度的洗脱量为2倍柱体积，采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏分，备用；
将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ。
实施例2：
从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫1500g，用清水洗净后晾干，然后置于50℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在24℃条件下，用独角仙粉重量10倍的二氯甲烷浸泡44h，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量10倍的二氯甲烷，在24℃条件下浸泡44h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量10倍的甲醇溶液，在24℃条件下浸泡44h，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量10倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在24℃条件下浸泡48h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量250倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，每个梯度的洗脱量为2倍柱体积，采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏分，备用；
将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ。
实施例3：
从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫2500g，用清水洗净后晾干，然后置于65℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在26℃条件下，用独角仙粉重量15倍的二氯甲烷浸泡48h，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量15倍的二氯甲烷，在26℃条件下浸泡48h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量15倍的甲醇溶液，在26℃条件下浸泡48h，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在26℃条件下浸泡44h，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，每个梯度的洗脱量为2倍柱体积，采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏分，备用；
将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ。

Claims (3)

1.从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、取独角仙成虫，用清水洗净后晾干，然后置于30-65℃的烘箱中干燥至恒重，取出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22-26℃条件下，用独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤；向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重量5-15倍的二氯甲烷，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用；
步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量5-15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在22-26℃条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20℃条件下冷冻成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量20-30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、7:3、1:1、3:7和1:9，采用TLC检测分析，合并相似流份，使之形成16个流份段，备用；
步骤四、将步骤三得到的第6个流份段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集流份，合并相似流份，使之形成10个流份，并将其中的第5个流份用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到浅黄色固体粉末，即化合物Ⅰ；
步骤五、将步骤三得到的第11和12流份段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个流份，备用；
将其中的第3个流份在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅱ；
将其中的第4个流份在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物Ⅲ；
所述的化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的结构式分别为：
化合物Ⅰ
化合物Ⅱ
化合物Ⅲ。
2.如权利要求1所述的从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其特征在于：步骤一所述的采用二氯甲烷浸泡和步骤二所述的甲醇溶液浸泡的时间均为40-48h。
3.如权利要求1所述的从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其特征在于：步骤三所述的洗脱过程中每个梯度的洗脱量为2倍柱体积。
CN201510029454.6A 2015-01-21 2015-01-21 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法 Active CN104557548B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510029454.6A CN104557548B (zh) 2015-01-21 2015-01-21 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510029454.6A CN104557548B (zh) 2015-01-21 2015-01-21 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104557548A CN104557548A (zh) 2015-04-29
CN104557548B true CN104557548B (zh) 2016-01-13

Family

ID=53074729

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510029454.6A Active CN104557548B (zh) 2015-01-21 2015-01-21 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104557548B (zh)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59190923A (ja) * 1983-04-12 1984-10-29 Kazuo Umetsu カブトムシに由来するβ−Ｄ−ガラクト−ス特異的レクチン
KR101533600B1 (ko) * 2013-06-20 2015-07-10 대한민국 항비만효과를 갖는 장수풍뎅이 유충 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 항비만 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
蛴螬抗肿瘤活性物质的研究;金莉莉;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (硕士) 医药卫生科技辑》;20061215(第12期);第E072-40页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104557548A (zh) 2015-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101559088B (zh) 穿心莲总内酯与新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的生产工艺
CN103304530B (zh) 一种香豆素类化合物及其制备方法和应用
CN104529983B (zh) 荸荠皮提取圣草酚的方法
CN108690041A (zh) 一种梣酮、白鲜碱以及黄柏酮的制备方法
CN106008445B (zh) 一类黄酮并木脂素化合物及其提取方法
CN104628531B (zh) 一种从山橿中提取的化合物sj-11及其制备方法与应用
CN104557548B (zh) 从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法
CN103232515A (zh) 一种制备青钱柳苷ⅰ的方法
CN107586311B (zh) 酢浆草中提取刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷的方法
CN104910172A (zh) 五种二苯乙烯三聚体的制备方法及其应用
CN104926823B (zh) 一种汉防己中生物碱的提取方法
CN105646638B (zh) 长梗冬青苷的制备方法
CN108948038A (zh) 一种新紫檀烷型黄酮类化合物及其用途
CN104592180B (zh) 荸荠皮提取5‑甲基金鱼草素的方法
CN105481770A (zh) 一种从山胡桃根中提取生物碱的制备方法及其用途
CN111187317A (zh) 一种糖苷化光甘草定的制备方法
CN110256511B (zh) 一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物及其应用和另一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物的应用
CN108299535A (zh) 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法
CN104592247A (zh) 荸荠己素的提取方法
CN111484411B (zh) 艾叶抗炎有效成分的提取方法和应用
CN115304616B (zh) 一种天麻活性化合物及其制备方法和应用
CN102911241A (zh) 从土贝母中制备贝萼皂苷元的方法
CN104557832A (zh) 荸荠皮提取西黄松黄酮的方法
CN105198955A (zh) 2α-羟基雷公藤内酯酮的提取纯化方法
CN104529975B (zh) 荸荠皮提取6-甲基木犀草素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210916

Address after: 710016 B 1616, Tiandi Times Plaza, Fengcheng two road, Weiyang District, Xi'an, Shaanxi.

Patentee after: Liu Jiaojiao

Address before: 471000 No. 48, Xiyuan Road, Jianxi District, Henan, Luoyang

Patentee before: HENAN University OF SCIENCE AND TECHNOLOGY

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20211111

Address after: 257092 building 10, No. 38, Huanghe Road, economic development zone, Dongying City, Shandong Province

Patentee after: DONGYING UNIVERSITY SCIENCE PARK DEVELOPMENT CO.,LTD.

Address before: 710016 1616, block B, Tiandi Times Square, Fengcheng Second Road, Weiyang District, Xi'an City, Shaanxi Province

Patentee before: Liu Jiaojiao

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20221221

Address after: 257000 Room 101, Building 8, Ecological Valley, No. 38, Huanghe Road, Dongying Development Zone, Shandong Province

Patentee after: Dongying Yuelaihu Park Operation Management Co.,Ltd.

Address before: 257092 building 10, No. 38, Huanghe Road, economic development zone, Dongying City, Shandong Province

Patentee before: DONGYING UNIVERSITY SCIENCE PARK DEVELOPMENT CO.,LTD.

TR01 Transfer of patent right