CN104530127A

CN104530127A - 一种淫羊藿苷衍生物及其使用方法和用途

Info

Publication number: CN104530127A
Application number: CN201410766336.9A
Authority: CN
Inventors: 张英俊; 周平健; 王晓军; 阳传文; 张健存
Original assignee: Guangdong HEC Pharmaceutical
Current assignee: Guangzhou iwahito Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2014-12-12
Filing date: 2014-12-12
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2034-12-12
Also published as: CN104530127B

Abstract

本发明提供了一种如式(I)所示的淫羊藿苷衍生物或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，及其药物组合物。本发明还涉及制备这类化合物和药物组合物的方法，以及它们在预防或治疗患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症中的用途。

Description

一种淫羊藿苷衍生物及其使用方法和用途

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及淫羊藿苷衍生物及其药物组合物，以及所述淫羊藿苷衍生物及其药物组合物在预防或治疗患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症中的用途。

背景技术

淫羊藿苷是淫羊藿总黄酮中的主要单体成分，主要来源于小檗科植物淫羊藿属的茎叶。淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有补肾壮阳、抗衰老、抗肿瘤等功效。在骨质疏松的动物模型中，淫羊藿苷能提高卵巢切除的大鼠骨组织内ALP和BMP的表达水平，也能促进骨密度的增加，增强骨质的生物力学强度(Niana,et al.,Phytomedicine,16:320,2009)。淫羊藿苷还能促进成骨细胞的增值和分化，同时抑制破骨细胞的分化，改善骨代谢(Hsieh,et al.,Phytomedicine,17:414,2010)。在神经系统方面，淫羊藿苷能提高缺氧和缺糖的神经细胞的存活率(Wang,et al.,European Journal ofPharmacology,609:40,2009)，减小β-微管蛋白引起的神经毒性(Zeng,et al.,Neuropharmacology,59:542,2010)。Ning,H(Ning,et al.,UrologyUrology,68:1350,2006)和Agli Mario Dell(Agli,et al.,Journal ofNatural Products,71:1513,2008)发现淫羊藿苷及其衍生物具有抑制磷酸酯酶-5的活性和促进性腺的发育。

天然产物的主要有效成分的单一化合物作为化学药物本身或药物研发的先导化合物是多年来药物研发人员从事化学药物研发的重要研究方法之一，黄酮苷类化合物的淫羊藿苷也成为研究的热点。在植物化学研究人员从植物中提取出淫羊藿苷以来，国内外众多学者对其药理作用进行了深入而广泛的研究。抗肿瘤功效、调节免疫功能、改善心血管功能、抗衰老和抗氧化功能、增强抗毒病能力和增强性功能是已经发现的淫羊藿苷主要生理活性。

报道显示，淫羊藿苷具有抗骨质疏松的作用，相关药物可以用于骨质疏松症的预防和治疗，却不能促进成骨样细胞的钙结节形成率，同时该类化合物结构上的微小变化会对活性产生很大的影响。本发明通过对天然有效成分的研究，提供了一类新颖的，活性更好，理化性质更适合制剂的淫羊藿苷衍生物，可以用于制备预防或治疗性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症的药物。特别是本发明提供的化合物能够促进成骨细胞的钙结节形成率。

发明内容

本发明通过对天然有效成分的研究，提供了一类新颖的，活性更好，理化性质更适合制剂的淫羊藿苷衍生物，可以用于制备预防或治疗性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症的药物。

本发明还提供制备这类化合物的方法以及含有此类化合物的药物组合物。

本发明提供的淫羊藿苷衍生物及其药物组合物能够促进成骨细胞的钙结节形成率。

一方面，本发明提供一种化合物，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R¹为H或

R²为-OR⁶或-NHR⁷；

各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-6烷基；

R⁴为C_1-6烷氧基；

R⁷为H或C_1-8烷基，其中所述C_1-8烷基任选地被一个或多个烷氧基羰基所取代；和

n为0、1、2、3或4。

在一实施方案中，其中各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-4烷基；R⁴为C_1-4烷氧基；和

R⁷为H或C_1-6烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个C_1-6烷氧基羰基所取代。

在另一实施方案中，本发明提供一种化合物，其为式(II)所示的化合物或式(II)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R³为H或C_1-4烷基；

R⁴为C_1-4烷氧基；和

在另一实施方案中，本发明提供一种化合物，其为式(III)所示的化合物或式(III)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R¹为H或

各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-4烷基；和

R⁴为C_1-4烷氧基。

在另一实施方案中，R³为H、Na、甲基、乙基、正丙基或异丙基；和

R⁴为甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基。

在另一实施方案中，各R⁵和R⁶分别独立地为H、Na、甲基、乙基、正丙基或异丙基。

在另一实施方案中，R⁷为H或C_1-4烷基，其中所述C_1-4烷基任选地被一个或多个甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基或异丙氧基羰基所取代。

在另一实施方案中，本发明化合物具有以下之一的结构：

或或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药。

另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，包含本发明所述的化合物及药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或它们的组合。

另一方面，本发明还提供了一种使用本发明所述化合物或药物组合物在制备用于预防、处理、减轻或治疗患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症的药物中的用途。

另一方面，本发明还提供了淫羊藿苷衍生物及其药物组合物在预防、治疗或减轻患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症中的应用。所述癌症包括，但不限于，乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、白血病、肺癌，等等。

另一方面，本发明包括不同化合物的所有合适的同位素变化。本发明化合物的同位素变化被定义为：其中至少一个原子被具有相同原子序数但与通常自然界中找到的原子质量不同，优选最丰富同位素的原子取代。可以引入本发明化合物的同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，硫，氟和氯，例如分别为：H²，H³，C¹¹，C¹³，C¹⁴，N¹⁵，O¹⁷，O¹⁸，S³⁵，F¹⁸和Cl³⁶。本发明的某些同位素变化，例如，那些其中引入了放射性同位素的化合物，例如：引入H³或C¹⁴,在药物和/或基质组织分布的研究中非常有用。含氚，即：H³，和碳-14，即：C¹⁴的同位素由于它们易于制备和可检测性而特别优选。另外，由于更大的新陈代谢稳定性，被同位素，例如：氘，即：H²所取代可以提供一定的治疗优势，例如，在活体内增加的半衰期，减少的药量需求，并因此在某些情况下为优选的。本发明化合物的同位素变化基本可以通过传统方法来制备，使用合适试剂的适当同位素变化。

其中至少一种原子被不同的原子的同位素所取代的化合物同样作为本发明的一部分，该不同原子的同位素可以用于体内的活化成像技术，例如：单光子发射计算体层摄影(SPECT)或正电子发射计算机断层扫描(PET)。对于这些可用于SPECT研究中的衍生物的例子有：其中引入Tc^99m，In¹¹¹，Rb⁸²，Cs¹³⁷，I¹²³，Ga⁶⁷，lr¹⁹²或Ti²⁰¹，并优选为I¹²³的化合物(用于碘化作用，请见：例如“药物的放射性碘化反应，有效合成策略的概要”Coenen HH,Springer,Dordrecht 2006)，而PTE应用的中：可以使用C¹¹，N¹³，O¹⁵，F¹⁸，Rb⁸²，Sr⁸²,并优选为F¹⁸(氟-18标记方法：基本反应的特点和可能性(Features and possibilities of basicreactions)Coenen,HH,Ernst Schering Res Found Workshop 2007,Vol62,p15-50；Miller,PW Ang Chem Int Ed2008,Vol 47,第8998页)。

另一方面，本发明所描述的结构式包括所有的立体异构形式(对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。

另一方面，本发明的化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。

另一方面，本发明化合物的氮氧化物也包含在本发明的范围之内。可以通过在升温下使用常用氧化剂(例如过氧化氢)，在有例如乙酸的酸存在下，氧化相应的含氮碱性物质，或者通过在适合的溶剂中与过酸反应，例如在二氯甲烷、乙酸乙酯或乙酸甲酯中与过乙酸反应，或在氯仿或二氯甲烷中与3-氯过氧苯甲酸反应，制备本发明化合物的氮氧化物。

另一方面，本发明化合物的盐包括药学上可接受的盐；还包括用于制备或纯化式(I)、(II)或(III)所示化合物的中间体或式(I)、(II)或(III)所示化合物分离的对映异构体的盐，但不一定是药学上可接受的盐。

如果本发明的化合物是碱性的，则想得到的盐可以通过文献上提供的任何合适的方法制备得到，例如，使用无机酸，如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸和磷酸等等。或者使用有机酸，如乙酸，马来酸，琥珀酸，扁桃酸，富马酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，羟乙酸和水杨酸；吡喃糖酸，如葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸；α-羟酸，如柠檬酸和酒石酸；氨基酸，如天门冬氨酸和谷氨酸；芳香族酸，如苯甲酸和肉桂酸；磺酸，如对甲苯磺酸，乙磺酸，等等。

如果本发明的化合物是酸性的，则想得到的盐可以通过合适的方法制备得到，如，使用无机碱或有机碱，如氨(伯氨，仲氨，叔氨)，碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，等等。合适的盐包括，但并不限于，从氨基酸得到的有机盐，如甘氨酸和精氨酸，氨，如伯氨、仲氨和叔氨，和环状氨，如哌啶，吗啉和哌嗪等，和从钠，钙，钾，镁，锰，铁，铜，锌，铝和锂得到无机盐。

定义和一般术语

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。不管所讨论的术语是单独出现还是组合出现，本文中描述的定义都适用。

根据本发明的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版本和化学药品手册，75，^thEd，1994来定义。另外，有机化学一般原理见"Organic Chemistry,"Sorrell et al.,University Science Books,Sausalito:1999,and"March's Advanced Organic Chemistry,"by Smith et al.,John Wiley&Sons,New York:2007，因此所有的内容都融合了参考文献。

除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。

本发明说使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。

像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。

术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可能而不是必须地发生，并且该描述包括其中所述事件或情形发生的情况，以及不发生的情况。

术语“取代”或“取代的”，表示所述结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个取代的基团可以有一个取代基在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。

术语“任选地被…….所取代”，可以与术语“未取代或被…..所取代”交换使用，即所述结构是未取代的或者被一个或多个本发明所述的取代基取代，本发明所述的取代基包括，但不限于D，F，Cl，N₃，-CN，-OH，-SH，-NH₂，烷基，烷氧基，烷氧基羰基，烷硫基，烷氨基，环烷基，杂环基，芳基，杂芳基等等。

另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“各…分别独立地为”与“…各自独立地为”和“…独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。

术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C₁-₆烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C₃烷基、C₄烷基、C₅烷基和C₆烷基。

在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。

本发明使用的术语“烷基”或“烷基基团”，表示含有1-20个碳原子，饱和的直链或支链一价烃基基团，其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。除非另外详细说明，烷基基团含有1-20个碳原子。在一实施方案中，烷基基团含有1-8个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子；还在一实施方案中，烷基基团含有1-3个碳原子。所述烷基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。

烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基(Me、-CH₃)，乙基(Et、-CH₂CH₃)，正丙基(n-Pr、-CH₂CH₂CH₃)，异丙基(i-Pr、-CH(CH₃)₂)，正丁基(n-Bu、-CH₂CH₂CH₂CH₃)，异丁基(i-Bu、-CH₂CH(CH₃)₂)，仲丁基(s-Bu、-CH(CH₃)CH₂CH₃)，叔丁基(t-Bu、-C(CH₃)₃)，正戊基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃)，3-戊基(-CH(CH₂CH₃)₂)，2-甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH₂CH₃)，3-甲基-2-丁基(-CH(CH₃)CH(CH₃)₂)，3-甲基-1-丁基(-CH₂CH₂CH(CH₃)₂)，2-甲基-1-丁基(-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃)，正己基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，2-己基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃)，3-己基(-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃))，2-甲基-2-戊基(-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃)，3-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃)，4-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂)，3-甲基-3-戊基(-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂)，2-甲基-3-戊基(-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂)，2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂)，3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH₃)C(CH₃)₃)，正庚基，正辛基，等等。

术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。所述烷氧基基团任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。

烷氧基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基(MeO、-OCH₃)，乙氧基(EtO、-OCH₂CH₃)，1-丙氧基(n-PrO、n-丙氧基、-OCH₂CH₂CH₃)，2-丙氧基(i-PrO、i-丙氧基、-OCH(CH₃)₂)，1-丁氧基(n-BuO、n-丁氧基、-OCH₂CH₂CH₂CH₃)，2-甲基-l-丙氧基(i-BuO、i-丁氧基、-OCH₂CH(CH₃)₂)，2-丁氧基(s-BuO、s-丁氧基、-OCH(CH₃)CH₂CH₃)，2-甲基-2-丙氧基(t-BuO、t-丁氧基、-OC(CH₃)₃)，1-戊氧基(n-戊氧基、-OCH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，2-戊氧基(-OCH(CH₃)CH₂CH₂CH₃)，3-戊氧基(-OCH(CH₂CH₃)₂)，2-甲基-2-丁氧基(-OC(CH₃)₂CH₂CH₃)，3-甲基-2-丁氧基(-OCH(CH₃)CH(CH₃)₂)，3-甲基-l-丁氧基(-OCH₂CH₂CH(CH₃)₂)，2-甲基-l-丁氧基(-OCH₂CH(CH₃)CH₂CH₃)，等等。

术语“烷氧基羰基”表示基团-C(O)-烷氧基，其中烷氧基具有如本发明所述的含义。烷氧基羰基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基羰基，乙氧基羰基，正丙氧基羰基，异丙氧基羰基，等等。

术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。

本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of ChemicalTerms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；and Eliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of OrganicCompounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994。

许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。在描述光学活性化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示分子关于其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。一种具体的立体异构体是对映异构体，这种异构体的混合物称作对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时，可出现这种情况。

本发明公开化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。

术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。酮-烯醇互变异构的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构的另一个实例是酚-酮互变异构。酚-酮互变异构的一个具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的互变。除非另外指出，本发明化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。

“药学上可接受的”是指这样一些化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。

除非其他方面表明，本发明的化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。另外，除非其他方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。

本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C_1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含OH基团，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：Higuchi et al.,Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14,A.C.S.Symposium Series；Roche et al.,ed.,Bioreversible Carriers in Drug Design,American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press,1987；Rautio et al.,Prodrugs:Design and Clinical Applications,Nature ReviewsDrug Discovery,2008,7,255-270,and Hecker et al,Prodrugs of Phosphates and Phosphonates,J.Med.Chem.,2008,51,2328-2345,每篇文献通过引用包含于此。

“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。

术语“药学上可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的效果/风险比相称的盐。药学可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge,et al.,J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1中对药学可接受的盐进行了详细描述。

药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐，天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐，丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐，二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐，半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐，乳酸盐、马来酸盐、月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐、扑酸盐，果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硬脂酸盐，硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N⁺(C₁-C₄烷基)₄的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C₁-C₈磺酸化物和芳香磺酸化物。

术语“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸，乙醇胺或其混合物。

当所述溶剂为水时，可以使用术语“水合物”。在一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与一个水分子相结合，比如一水合物；在另外一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与多于一个的水分子相结合，比如二水合物，还有一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与少于一个的水分子相结合，比如半水合物。应注意，本发明所述的水合物保留有非水合形式的所述化合物的生物有效性。

术语“保护基团”或“PG”是指一个取代基与别的官能团起反应的时候，通常用来阻断或保护特殊的功能性。例如，“氨基的保护基团”是指一个取代基与氨基基团相连来阻断或保护化合物中氨基的功能性，合适的氨基保护基团包括乙酰基，三氟乙酰基，苯甲酰基，乙氧基羰基，叔丁氧羰基(BOC)，苄氧羰基(CBZ)，9-芴亚甲氧羰基(Fmoc)和苄基。相似地，“羟基保护基团”是指羟基的取代基用来阻断或保护羟基的功能性，合适的保护基团包括三烷基甲硅烷基，乙酰基，苯甲酰基和苄基。“羧基保护基团”是指羧基的取代基用来阻断或保护羧基的功能性，一般的羧基保护基包括-CH₂CH₂SO₂Ph，氰基乙基，2-(三甲基硅烷基)乙基，2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基，2-(对甲苯磺酰基)乙基，2-(对硝基苯磺酰基)乙基，2-(二苯基膦基)乙基，硝基乙基，等等。对于保护基团一般的描述可参考文献：Greene et al.,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991 and Kocienski et al.,Protecting Groups,Thieme,Stuttgart,2005。

术语“防止”或“预防”指获病或障碍的风险的减少(即：使疾病的至少一种临床症状在主体内停止发展，该主体可能面对或预先倾向面对这种疾病，但还没有经历或表现出疾病的症状)。

术语“治疗有效量”是指当给药于主体来治疗疾病时，化合物的分量足够对这种疾病的治疗起效。“治疗有效量”可以随着化合物，疾病和严重程度，以及有待治疗的主体的条件，年龄，体重，性别等而改变。

疾病状态的“治疗”包括：(i)预防疾病状态，即，使可能暴露于或易患疾病状态、但还没有经历或显示疾病状态的症状的受试者的疾病状态的临床症状不再发展；(ii)抑制疾病状态，即，阻止疾病状态或其临床症状的发展，或(iii)缓解疾病状态，即，使疾病状态或其临床症状暂时或永久消退。

本发明化合物的组合物、制剂和给药

本发明提供了一种药物组合物，包括式(I)、(II)或(III)的化合物或式(I)、(II)或(III)的立体异构体，异构体的外消旋或非外消旋混合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在本发明的一个实施方式中，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体、辅剂、或赋形剂，以及任选地、其它的治疗和/或预防成分。

合适的载体、辅剂和赋形剂剂对于本领域技术人员是熟知的并且详细描述于例如Ansel H.C.et al.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(2004)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；Gennaro A.R.et al.,Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2000)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；和Rowe R.C.,Handbook of Pharmaceutical Excipients(2005)Pharmaceutical Press,Chicago中。

本发明的化合物或组合物可以通过任何合适方式给药，包括口服(包括含服和舌下)，局部，直肠，阴道，透皮，胃肠外(肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下)，肺内，皮内，鞘内和硬膜外和鼻内，以及如果需要用于局部治疗，病灶内给药。优选的方式为口服给药，向腹膜内给药或静脉注射。

对于口服施用而言，所述药物组合物可以采用例如以下的形式：通过常规方法用可药用赋形剂制备的片剂或胶囊，所述赋形剂比如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如月桂基硫酸钠)。片剂可以通过本领域公知的方法包衣。

口服施用的液体制剂可以采用例如以下的形式：溶液、糖浆或混悬液，或者可以干燥产物的形式存在，以在使用前用水或其他适合的载体重构。这些液体制剂可以通过常规方法采用可药用添加剂制备，所述添加剂例如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素或氢化的可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂和阿拉伯树胶)；非水载体(例如杏仁油、油状酯或乙醇)和防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。

对于口含施用而言，所述组合物可采用以常规方法制备的片剂或锭剂的形式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物可以配制作为膏剂，霜剂或洗剂或作为经皮贴用于对表皮局部给药。膏剂和霜剂可以例如用水性或油性基料(base)加入合适的增稠剂和/或胶凝剂配制。洗剂可以用水性或油性基料配制，并且通常还将含有一种或多种乳化剂，稳定剂，分散剂，悬浮剂，增稠剂或着色剂。适于在口中局部给药的剂型包括：锭剂，其包含在增香基料，通常蔗糖和金合欢或黄蓍胶中的活性剂；软锭剂，其包含在惰性基料例如明胶和甘油或蔗糖和金合欢中的活性成分；和漱口水，其包含在合适的液体载体中的活性成分。此外，眼科的药物制剂，滴耳剂和滴眼剂都是本发明考虑的范围。

本发明药学上可接受的组合物可以以栓剂的形式直肠或阴道给药。这些可以通过将试剂与合适的非灌注辅药混合制备而成，这种辅药在室温下为固体但在直肠或阴道的温度下则为液体，从而在直肠或阴道中熔化并释放药物。这样的物质包括可可豆脂，蜂蜡，和聚乙二醇类。

对于鼻内施用或通过吸入施用而言，本发明的活性化合物以在加压容器或喷雾器中、或者采用吸入器或吹入器的胶囊中的气雾喷雾剂的形式方便地递送。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀递送经计量的量来确定合适的抛射剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体)和单位剂量。加压容器或喷雾器的药物可以包含活性化合物的溶液或悬浮液，而对胶囊来说则其优选粉末形式。可将用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(由例如明胶制成)配制成包含本发明化合物和合适的粉末基质(比如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

用于在普通成人中治疗上述病症的气雾剂制剂优选地制备为每个计量剂量或气雾剂的“每喷(puff)”包含20μg至1000μg的本发明化合物。气雾剂的每日总剂量在100μg至10mg的范围内。可以一天施用几次，例如2、3、4或8次，每次给予例如1、2或3个剂量。

药物制剂优选为单位剂型。在这种形式中，制剂被细分为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有离散量的制剂，如包装的片剂、胶囊、以及在小瓶或安瓿瓶中的粉末。此外，单位剂型可以是胶囊，片剂，扁囊剂或锭剂本身，或者可以是适当数量的任何这些剂型的包装形式。

本发明化合物及组合物的用途

本发明通过对天然有效成分的研究，提供了一类新颖的，活性更好，理化性质更适合制剂的淫羊藿苷衍生物或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，及其药物组合物。

本发明提供的淫羊藿苷衍生物及其药物组合物可用于制备预防、治疗或减轻患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症的药物。特别是本发明提供的淫羊藿苷衍生物及其药物组合物能够促进成骨细胞的钙结节形成率。

本发明还提供了淫羊藿苷衍生物及其药物组合物在预防、治疗或减轻患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症中的应用。所述癌症包括，但不限于，乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、白血病、肺癌，等等。

本发明提供一种用于预防、治疗或减轻患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症和癌症的方法，所述方法包括给予有治疗需要的患者治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。并且，本发明提供的化合物或其药物组合物可以与其它疗法或治疗剂共同施用。施用方式可以为同时、顺序或以一定时间间隔进行。

实施治疗、预防或延缓等作用所需的化合物或药物组合物的剂量通常取决于施用的具体化合物、患者、具体疾病或病症及其严重程度、给药途径和频率等，并且需要由主治医师根据具体情况判定。例如，在通过经静脉途径施用本发明提供的化合物或药物组合物时，可以每周一次甚至以更长时间间隔进行施用。

应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式(I)、(II)或(III)化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以为0.1-1000mg/kg/day，优选为1-100mg/kg/day，服用可以是一天一次或数次，且各次服药可以包括1、2或3个剂量。

本发明的化合物及药物组合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物中的哺乳动物。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。在此，本发明的化合物包括其药学上可接受的衍生物。

化合物的合成方法

为描述本发明，以下列出了实施例。但需要理解，本发明不限于这些实施例，只是提供实践本发明的方法。

一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。

所属领域的专业人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。

下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购买于商品供应商如AldrichChemical Company,Arco Chemical Company and Alfa Chemical Company，除非其他方面表明，使用时都没有经过进一步纯化。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，天津市福晨化学试剂厂，武汉鑫华远科技发展有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司和青岛海洋化工厂购买得到。

无水四氢呋喃，二氧六环，甲苯，乙醚是经过金属钠回流干燥得到。无水二氯甲烷和氯仿是经过氢化钙回流干燥得到。乙酸乙酯，石油醚，正己烷，N,N-二甲基乙酰胺和N,N-二甲基甲酰胺是经无水硫酸钠事先干燥使用。

以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿都是干燥过的。

色谱柱是使用硅胶柱。硅胶(300-400目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以CDC1₃、d₆-DMSO、CD₃OD或d₆-丙酮为溶剂(报导以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)、d(doublet，双峰)、t(triplet，三重峰)、m(multiplet，多重峰)、br(broadened，宽峰)、dd(doublet of doublets，四重峰)、dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。

低分辨率质谱(MS)数据的条件是：Agilent 1200或Agilent 6120 Series LCMS(柱子型号：ZorbaxSB-C18,2.1×30mm,3.5微米,6min,流速为0.6mL/min。流动相：5-95％(含0.1％甲酸的CH₃CN)在(含0.1％甲酸的H₂O)中的比例，在210/254nm用UV检测，用低响应电喷模式(ESI)。

纯的化合物的表征方式为：Agilent 1100 Series高性能液相色谱(HPLC)，在210nm和254nm用UV检测。柱子通常在40℃下操作。

下面简写词的使用贯穿本发明：

H₂O 水

DMAP 4-二甲氨基吡啶

CH₂Cl₂，DCM 二氯甲烷

EtOAc，EA 乙酸乙酯

CDC1₃ 氘代氯仿

DIEA，DIPEA 二异丙基乙基胺

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

Et₃N，TEA 三乙胺

EDTA 乙二胺四乙酸

g 克

mg 毫克

h 小时

H₂SO₄ 硫酸

MeOH，CH₃OH 甲醇

EtOH，CH₃CH₂OH 乙醇

mL，ml 毫升

min 分钟

N₂ 氮气

RT，rt，r.t. 室温

NaHCO₃ 碳酸氢钠

NaCl 氯化钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

PE 石油醚(60-90℃)

THF 四氢呋喃

下列合成方案描述了制备本发明公开化合物的步骤。除非另外说明，R¹、R³、R⁴、R⁶和R⁷具有如本发明所述的定义。

合成方案1

化合物(II)可以通过合成方案1中提供的方法制备得到：

步骤1：将原料(B)溶于干燥的溶剂中，所用溶剂包括但不限于二氯甲烷，四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺等，反应混合物冷却至-78℃，加入原料(C)，然后在碱性条件下，例如在三乙胺，二异丙乙基胺等的存在下，发生取代反应，得到中间体(D)。

步骤2：以中间体(A)为原料，在碱性条件下，例如在三乙胺，二异丙乙基胺等的存在下于干燥的溶剂中与中间体(D)进行取代反应，得到化合物(II)，所用溶剂包括但不限于二氯甲烷，四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺等。

合成方案2

化合物(III)可以通过合成方案2中提供的方法制备得到：

以中间体(A)为起始原料，在碱性条件下，例如在碳酸钾，碳酸铯等的存在下，于溶剂中与原料(E)进行取代反应，得到化合物(III)，所用溶剂包括但不限于丙酮，乙腈，N,N-二甲基甲酰胺等。

或者将得到的得到化合物(III)，在碱性条件下于溶剂中在三甲基溴硅烷存在下进行水解反应，得到相应的酸，也可以进一步与碱(如氢氧化钠，甲醇钠等)作用得到相应的盐。

实施例

实施例1(2S)-2-((((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)(乙氧基)磷酰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯

步骤1)5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-3-(((2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-4H-色烯-4-酮

将淫羊藿苷(10g,14.8mmol)和β-葡聚糖酶(10g)加入500mL乙酸钠和盐酸的缓冲溶液中(EtOH/H₂O(V/V)＝30/70,pH＝5.0)，反应混合物在50℃下搅拌5小时，减压浓缩。残留物加入水(2000mL)并搅拌30分钟，加入乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用乙酸乙酯重结晶后，得到标题化合物为黄色固体(6g,79％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:515.2[M+H]⁺。

步骤2)3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4H-色烯-4-酮

将浓硫酸(20mL)慢慢滴加到乙醇和水的混合溶剂中(V/V＝1/1,200mL)，然后加入5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-3-(((2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-4H-色烯-4-酮(6g,11.7mmol)，反应混合物在50℃下搅拌5小时，减压浓缩。残留物加入100mL水并搅拌30分钟，加入乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用乙酸乙酯重结晶后，得到标题化合物为黄色固体(3.5g,82％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:369.1[M+H]⁺；

¹H-NMR(400MHz,CD₃SOCD₃)δ(ppm):11.73(s,1H),8.17(d,J＝8.8Hz,2H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(s,1H),6.25(s,1H),6.03(s,1H),5.30-5.33(m,1H),3.89(s,3H),3.62(d,J＝7.2Hz,2H),1.86(s,3H),1.77(s,3H)。

步骤3)(2S)-2-(氯(乙氧基)磷酰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯

将二氯磷酸乙酯(500mg,3.07mmol)溶于干燥的二氯甲烷中(30mL)，反应混合物冷却至-78℃，然后加入L-缬氨酸甲酯盐酸盐(514mg,3.07mmol)和三乙胺(0.85mL,6.14mmol)，在氮气保护下，反应混合物在-78℃搅拌60分钟后升至室温反应1小时，减压浓缩，得到油状标题化合物(789mg,100％)，直接用于下一步反应。

步骤4)(2S)-2-((((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)(乙氧基)磷酰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯

3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4H-色烯-4-酮(250mg,0.68mmol)和(2S)-2-(氯(乙氧基)磷酰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯(262mg,1.02mmol)溶于干燥的二氯甲烷中(25mL)，反应混合物冷却至0℃，然后加入4-二甲氨基吡啶(8mg,0.068mmol)和三乙胺(0.28mL,2.03mmol)，在氮气保护下,反应混合物在0℃搅拌60分钟后升至室温反应48小时，加入水(10mL)淬灭反应，加入二氯甲烷萃取(40mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1/2)，得到标题化合物为黄色固体(42mg,10.5％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:589.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):0.86-0.89(m,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,2H),1.36-1.40(m,3H),1.70(s,3H),1.82(s,3H),2.07-2.11(m,1H),3.42-3.45.(m,1H),3.48(d,J＝2.6Hz,2H),3.70(d,J＝6.7Hz,3H),3.90(s,3H),4.25-4.30(m,2H),5.18-5.21(m,1H),6.67(s,1H),6.99(d,J＝4.8Hz,1H),7.05(d,J＝9.0Hz,2H),8.18(d,J＝9.0Hz,2H),11.69(s,1H)。

实施例2 2-((((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)(乙氧基)磷酰基)氨基)乙酸乙酯

步骤1)(2S)-2-((氯(乙氧基)磷酰基)氨基)乙酸乙酯

将二氯磷酸乙酯(500mg,3.07mmol)溶于干燥的二氯甲烷中(30mL)，反应混合物冷却至-78℃，然后加入甘氨酸乙酯盐酸盐(430mg,3.07mmol)和三乙胺(0.85mL,6.14mmol)，在氮气保护下，反应混合物在-78℃搅拌60分钟后升至室温反应1小时，减压浓缩，得到油状标题化合物(660mg,100％)，直接用于下一步反应。

步骤2)2-((((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)(乙氧基)磷酰基)氨基)乙酸乙酯

将3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4H-色烯-4-酮(250mg,0.68mmol)和(2S)-2-(氯((乙氧基)磷酰基)氨基)乙酸乙酯(233mg,1.02mmol)溶于干燥的二氯甲烷中(25mL)，反应混合物冷却至0℃，然后加入4-二甲氨基吡啶(8mg,0.068mmol)和三乙胺(0.28mL,2.03mmol)，在氮气保护下，反应混合物在0℃搅拌60分钟后升至室温反应48小时，加入水(10mL)淬灭反应，加入二氯甲烷萃取(40mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1/2)，得到标题化合物为黄色固体(57mg,15％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:562.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):1.29(t,J＝7.1Hz,3H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H),1.70(s,3H),1.82(s,3H),3.60(d,J＝6.3Hz,2H),3.80-3.84(m,2H),3.90(s,3H),4.25-4.32(m,4H),5.20-5.31(m,1H),6.65(s,1H),6.97(d,J＝1.0Hz,1H),7.03-7.08(m,2H),8.16-8.19(m,2H),11.70(s,1H)。

实施例3(((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)磷酸二乙酯

将3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-基)-4H-色烯-4-酮(410mg,1.12mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(300mg,0.93mmol)溶于丙酮溶液中(30mL)，然后加入无水碳酸铯(717mg,2.2mmol)，反应混合物在氮气保护下加热回流过夜，减压浓缩。加入水(20mL)，并用稀盐酸(2mol/L)调反应液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1/1)，得到标题化合物为黄色固体(160mg,32％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:519.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):1.33(t,J＝7.0Hz,6H),1.69(d,J＝10.2Hz,3H),1.78(s,3H),3.50(d,J＝6.6Hz,2H),3.88(s,3H),4.16-4.20(m,4H),4.56(d,J＝8.2Hz,2H),5.22(t,J＝6.1Hz,1H),6.28(s,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,2H),7.70(s,1H),8.12(d,J＝8.9Hz,1H),12.43(s,1H).)。

实施例4(((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)磷酸

将(((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)磷酸二乙酯(110mg,0.21mmol)溶于二甲烷溶液中(20mL)，然后在冰浴冷却下加入2,6-二甲基吡啶(1.0mL)和三甲基溴硅烷(620mg,4.2mmol)，搅拌30分钟后，反应混合物在氮气保护下室温反应过夜。向体系中加入甲苯(20mL)，减压浓缩。加入二氯甲烷(20mL)，并用稀盐酸(1mol/L)调反应液的pH值至2～3，析出黄色固体，抽滤，得到的固体溶解在稀氢氧化钠溶液(1.4mol/L)中，用甲基叔丁基醚萃取(20mL x 3)，水相再用稀盐酸(1mol/L)酸化，抽滤后得到黄色固体，真空干燥得到标题化合物为黄色固体(40mg,39％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:463.1[M+1]⁺；

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm):1.65(s,3H),1.76(s,3H),2.05(d,J＝6.6Hz,2H),3.87(s,3H),4.19(d,J＝9.5Hz,2H),5.21(t,J＝6.8Hz,1H),6.27(s,1H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(s,1H),8.19(d,J＝9.0Hz,1H)。

实施例5(((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)磷酸钠

将(((5,7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)磷酸(40mg,0.082mmol)加入到甲醇中(2mL)，在冰水浴冷却下加入甲醇钠(9.0mg)，反应混合物在氮气保护下室温反应30分钟，减压浓缩后，真空干燥得到标题化合物为黄色固体(42mg,100％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:478.2[M-46+1]⁺；

¹H NMR(400MHz,D₂O)δ(ppm):1.53(s,3H),1.62(s,3H),2.05(d,J＝6.6Hz,2H),3.75(s,3H),4.09(d,J＝9.5Hz,2H),5.21(t,J＝6.8Hz,1H),6.27(s,1H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.50(s,1H),7.91(d,J＝9.0Hz,1H)。

实施例6(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双(磷酸二乙酯)

将3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-基)-4H-色烯-4-酮(410mg,1.12mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(740mg,2.25mmol)溶于丙酮溶液中(30mL)，然后加入无水碳酸铯(1.46g,4.5mmol)，反应混合物在氮气保护下加热回流过夜，减压浓缩。加入水(20mL)，并用稀盐酸(2mol/L)调反应液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1/1)，得到标题化合物为黄色固体(130mg,20％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:669.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):1.30-1.42(m,12H),1.69(d,J＝10.2Hz,3H),1.78(s,3H),3.50(d,J＝6.6Hz,2H),3.88(s,3H),4.15-4.23(m,8H),4.54-4.61(m,4H),5.22(t,J＝6.1Hz,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,2H),7.70(s,1H),8.12(d,J＝8.9Hz,1H),12.43(s,1H)。

实施例7(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双磷酸钠

步骤1)(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双磷酸

将(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双(磷酸二乙酯)(130mg,0.19mmol)溶于二甲烷溶液中(30mL)，然后在冰浴冷却下加入2,6-二甲基吡啶(1.0mL)和三甲基溴硅烷(620mg,4mmol)，搅拌30分钟后，反应混合物在氮气保护下室温反应过夜。向体系中加入甲苯(20mL)，减压浓缩。加入二氯甲烷(20mL)，并用稀盐酸(1mol/L)调反应液的pH值至2～3，析出黄色固体，抽滤，得到的固体溶解在稀氢氧化钠溶液(1.4mol/L)中，用甲基叔丁基醚萃取(20mL x 3)，水相再用稀盐酸(1mol/L)酸化，抽滤后得到黄色固体，真空干燥得到标题化合物黄色固体(20mg,18％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:589.1[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ(ppm):1.65(s,3H),1.76(s,3H),2.05(d,J＝6.6Hz,2H),3.87(s,3H),4.17-4.20(m,4H),5.21(t,J＝6.8Hz,1H),6.27(s,1H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(s,1H),8.19(d,J＝9.0Hz,1H)。

步骤2)(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双磷酸钠

将(((5-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-氧代-4H-色烯-3,7-二基)双(氧基))双(亚甲基))双磷酸(50mg,0.085mmol)溶于甲醇中(5mL)，在搅拌下滴加稀氢氧化钠溶液(0.34mL,1.0mol/L)，继续搅拌30分钟后，减压浓缩，殘留物用冷冻机干燥后得到标题化合物为黄色固体(57mg,100％)。

MS(ESI,pos.ion)m/z:557.1[M-88+1]⁺；

¹H NMR(400MHz,D₂O):δ1.55(s,3H),1.62(s,3H),2.05(d,J＝6.6Hz,2H),3.75(s,3H),4.07-4.12(m,4H),5.01(t,J＝6.8Hz,1H),6.27(s,1H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.67(s,1H),8.09(d,J＝9.0Hz,1H)。

生物学评价

实施例8本发明化合物对成骨细胞的增殖和分化作用的活性

1实验方法

1.1成骨细胞原代培养

取数只新生大鼠(1～2天)置入75％酒精中消毒，剪下头盖骨，剔除粘附的结缔组织，PBS缓冲液漂洗3遍。0.25％胰酶-EDTA 37℃消化15min，弃上清；0.2％II型胶原酶37℃消化15min，弃上清；将头盖骨剪成1mm²的小块，用0.2％II型胶原酶37℃继续消化15min，共消化三次，收集前两次得到的细胞上清4℃保存，最后收集所有细胞上清，过200目不锈钢细胞筛网，所得滤液1000rpm离心4min，弃上清，将细胞重悬在含有10％的FBS和1％的Penicillin-Streptomycin的α-MEM培养基中，所得细胞悬液按照5×10⁵个/mL接种于25cm²培养瓶中，每瓶种6mL，置于37℃，5％CO₂及饱和湿度培养箱中生长，24h后换液，弃掉未贴壁细胞，贴壁细胞继续培养，以后每2天观察并换液一次。

1.2成骨细胞矿化结节形成测定

培养瓶中的细胞生长到80％融合时进行细胞矿化结节形成测定实验。消化细胞将其用3mL含有10％的FBS、1％的Penicillin-Streptomycin、10mMβ-甘油磷酸钠和50μg/mL的维生素C的α-MEM培养基重悬，轻轻吹打制成单细胞悬液，调整细胞密度为5×10⁴个/mL，种在24孔板中，每孔500μL。培养24h后，用10％的FBS、1％的Penicillin-Streptomycin、10mMβ-甘油磷酸钠和50μg/mL的维生素C的α-MEM培养基培养。选择一组加入100ng/mL的rh-BMP-2验证实验体系后，其他组加入受试药物，空白对照组加入等量的培养基。每2天观察换液一次。

细胞培养14天后开始进行矿化结节实验。用4％的甲醛室温固定细胞20min，然后用PBS洗一次，固定之后，用40mM的茜素红染色30min，弃掉染色液，用PBS润洗细胞一次，然后每孔加入800μL10％(V/V)的乙酸溶液，然后室温500rpm/min震荡30min，将乙酸细胞悬液吸到1.5mL离心管中，涡旋30s，然后每管加入500μL的液体石蜡封住细胞悬液，85℃(必须精确)加热10min后将离心管转移至冰上放置5min，14400rpm离心15min，吸取500μL上清到新的离心管中，每管加入200μL 10％(V/V)的氢氧化铵中以中和乙酸溶液，直至pH至4.1和4.5之间，然后每管取150μL至96孔板中在405nm波长处检测。其吸光度A值及反应细胞出现钙结节的数量，二者呈正相关。实验结果如表1所示：

表1化合物对成骨细胞钙结节形成的影响

化合物	浓度(μM)	钙结节形成升高率(％)
			空白对照	-/-	0.00
实施例1	0.02	22.08
			实施例2	0.02	19.90

化合物	浓度(μM)	钙结节形成升高率(％)
			实施例3	0.02	17.12
实施例4	0.02	18.33
			实施例5	0.02	17.85
实施例6	0.02	14.64
			实施例7	0.02	19.11

注：与空白对照组比较，P值均小于0.05。

结论：本发明化合物在较低浓度下能明显的促进成骨细胞形成钙结节的能力。

本发明化合物能够不同程度的促进成骨细胞钙结节的形成，说明本发明化合物具有促进成骨细胞矿化的功能，从而提高骨密度，增加骨重量，有望同时克服抗骨吸收药物的缺点和兼具促进骨形成药物的优点来预防和治疗骨质疏松，进而发挥抗骨质疏松的作用。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种化合物，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R¹为H或

R²为-OR⁶或-NHR⁷；

各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-6烷基；

R⁴为C_1-6烷氧基；

n为0、1、2、3或4。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-4烷基；R⁴为C_1-4烷氧基；和

3.根据权利要求1所述的化合物，其为式(II)所示的化合物或式(II)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R³为H或C_1-4烷基；

R⁴为C_1-4烷氧基；和

4.根据权利要求1所述的化合物，其为式(III)所示的化合物或式(III)所示化合物的立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，

其中：

R¹为H或

各R³、R⁵和R⁶分别独立地为H、Na或C_1-4烷基；和

R⁴为C_1-4烷氧基。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的化合物，其中R³为H、Na、甲基、乙基、正丙基或异丙基；和R⁴为甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基。

6.根据权利要求1、2或4所述的化合物，其中各R⁵和R⁶分别独立地为H、Na、甲基、乙基、正丙基或异丙基。

7.根据权利要求1、2或3所述的化合物，其中R⁷为H或C_1-4烷基，其中所述C_1-4烷基任选地被一个或多个甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基或异丙氧基羰基所取代。

8.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有以下之一的结构：

9.一种药物组合物，包含权利要求1-8任意一项所述的化合物及药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或它们的组合。

10.一种使用权利要求1-8任意一项所述的化合物或者权利要求9所述的药物组合物在制备用于预防、处理、减轻或治疗患者性功能障碍、心脑血管系统疾病、骨质疏松症或癌症的药物中的用途。