CN104513800A

CN104513800A - 一种海洋难培养微生物的筛选鉴定方法

Info

Publication number: CN104513800A
Application number: CN201310459407.6A
Authority: CN
Inventors: 朱道辰; 陈焱; 谢长校; 洪好
Original assignee: ZHENJIANG BIO-INNOVA BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ZHENJIANG BIO-INNOVA BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-10-08
Filing date: 2013-10-08
Publication date: 2015-04-15

Abstract

本发明提供一种筛选难培养海洋微生物的方法，其主要以经过处理的海水作为培养基成分，辅以多种微量元素和复合维生素，并且通过双层平板法培养固体培养基进行平板筛选，本发明的方法能够高效的筛选难培养海洋微生物。

Description

一种海洋难培养微生物的筛选鉴定方法

技术领域

本发明涉及一种海洋微生物的筛选方法，尤其是一种海洋难培养微生物的筛选方法。

背景技术

海洋微生物是指适宜在高盐高压低温和寡营养等条件下生长为特征的生长于海洋以及海洋沉积物中的细菌和真菌等。海洋微生物种类多，在海洋生态系统中起着至关重要的作用。并且人类已经从海洋微生物中筛选到各种天然活性产物和各种酶，以及筛选鉴定了数以万计的种群。

但是截至目前，所筛选分离鉴定到的微生物占海洋微生物总数目的不到1%，绝大多数海洋微生物按照目前培养条件下属于难培养微生物。目前培养海洋微生物主要用的培养基为常规海水培养基以及相关的普通培养基，因此，寻找能够筛选海洋难培养微生物的筛选方法是目前重要的研究课题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够有效筛选海洋难培养微生物的培养方法。

实现本发明目的的一种海洋难培养微生物的筛选方法，包括培养基成分海水、微量元素溶液和维生素溶液，以及采用双层平板法培养。

所述培养基海水浓度为1%~100%。

所述微量元素溶液添加量为0.1wt%~10wt%。

所述复合维生素的添加量为0.01wt%~1wt%。

所述微量元素溶液配方（mg/L）：氯化铁,200; 氯化钴,50; 氯化锰,30; 氯化锌,60;氯化镍,20; 氯化铜,500; 氯化锶,10; 氯化锡, 30; 二氧化钛,10; 硅酸钠,50; 硼酸,60; 钼酸钠,20; 钨酸钠,10; 亚硒酸钠, 10; 硝酸铬,15;

所述复合维生素配方（mg/L）：维生素B1, 10; 维生素B2, 20; 尼克酸,30; 泛酸,100; B6, 20; B12, 50; 烟酰胺, 30; 叶酸, 100; 乳酸清, 60; 对氨基苯甲酸, 80; 肌醇, 40; 胆碱, 120; 生物素, 50; 烟酸, 30; 维生素C, 120; 维生素D, 70;维生素E, 30; 维生素K, 20; 维生素T, 10; 维生素U, 10。

所述双层平板，上层培养基成分为浓度为1%~100%的海水和1-1.5%的琼脂。下层培养基成分为浓度为1%~100%的海水，0.1wt%~10wt%的微量元素溶液，0.01wt%~1wt%的复合维生素溶液。双层培养基的上层所占总培养基体积的20%-80%。

本发明的一种海洋难培养微生物的筛选方法的有益效果如下：

本发明提供一种培养基和培养方法，能够有效培养难培养海洋微生物。

具体实施方式

实施例 1

本实施例的海洋难培养微生物的成分及含量如下：

上层培养基成分：50%海水，1.5%琼脂

下层培养基成分：如下表

名称	比例（%）
		海水	20
微量元素溶液	1
		复合维生素溶液	2
琼脂	0.5
		纯水	77

将海洋沉积物取0.1g，纯水中稀释10^-5倍，然后吸取100ml，涂布到上述双层培养基中培养15天。对照组为海水营养培养基和含有氯化钠2%的LB培养基，观察其形成不同形态的菌落数。

培养结果如下：

	3天	10天	15天
				LB培养基	2	3	5
海水营养培养基	3	5	7
				本实施例1	7	11	15

从上表可以看出，本实施例能够显著的筛选到多种不同形态的微生物，数量显著多于常规培养基。

Claims

1.一种海洋难培养微生物的筛选方法，其特征在于以处理过的海水作为基本培养基，添加多种微量元素和复合维生素，以及采用双层平板法进行固体培养筛选。

2.根据权利要求1所述的海洋难培养微生物的筛选方法，其特征在于：所述培养基海水浓度为1%~100%。

3.根据权利要求1或2所述的海洋难培养微生物的筛选方法，其特征在于：所述微量元素溶液添加量为0.1wt%~10wt%，所述复合维生素的添加量为0.01wt%~1wt%。

4.微量元素溶液配方（mg/L）：氯化铁,200; 氯化钴,50; 氯化锰,30; 氯化锌,60;氯化镍,20; 氯化铜,500; 氯化锶,10; 氯化锡, 30; 二氧化钛,10; 硅酸钠,50; 硼酸,60; 钼酸钠,20; 钨酸钠,10; 亚硒酸钠, 10; 硝酸铬,15;

复合维生素配方（mg/L）：维生素B1, 10; 维生素B2, 20; 尼克酸,30; 泛酸,100; B6, 20; B12, 50; 烟酰胺, 30; 叶酸, 100; 乳酸清, 60; 对氨基苯甲酸, 80; 肌醇, 40; 胆碱, 120; 生物素, 50; 烟酸, 30; 维生素C, 120; 维生素D, 70;维生素E, 30; 维生素K, 20; 维生素T, 10; 维生素U, 10。

5. 根据权利要求1-3所述的一海洋难培养微生物的筛选方法，其特征在于利用双层平板法进行固体培养筛选。

6.其中上层含有1-1.5%的琼脂，下层含有0.2-0.5%的琼脂。

7.上层培养基成分为浓度为1%~100%的海水和1-1.5%的琼脂。

8.下层培养基成分为浓度为1%~100%的海水，0.1wt%~10wt%的微量元素溶液，0.01wt%~1wt%的复合维生素溶液。

9.双层培养基的上层所占总培养基体积的20%-80%。