CN104496857B - 作为神经氨酸酶抑制剂的化合物及其在药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明为作为神经氨酸酶抑制剂的化合物及其在药物中的应用。涉及一种四元环化合物及其作为药物的用途，尤其是作为用于预防、处理、治疗或减轻流感病毒性疾病的药物的应用，对流感病毒神经氨酸酶有很好的抑制作用。具体地说，本发明涉及通式(I)所示化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，其中各变量如说明书所定义。本发明还涉及含有通式(I)所示化合物的药物组合物和使用通式(I)所示化合物或其药物组合物治疗流感疾病的方法。
Description
技术领域
本发明属于药物领域，具体涉及用于治疗流感的化合物及其药物组合物，进一步涉及所述化合物或药物组合物在制备药物中的用途和使用方法。特别地，本发明所述化合物为神经氨酸酶抑制剂。
背景技术
神经氨酸酶又称唾液酸酶，是分布于流感病毒被膜上的一种糖蛋白，它具有抗原性，可以催化唾液酸水解，协助成熟流感病毒脱离宿主细胞感染新的细胞，在流感病毒的生活周期中扮演了重要的角色。在甲型流感病毒中，神经氨酸酶的抗原性会发生变异，这成为划分甲型流感病毒亚型的依据，在目前已知的甲型流感病毒中共有9种不同的神经氨酸酶抗原型。
流感病毒神经氨酸酶的三维结构在20世纪80年代被确定后，成为抗病毒药物研究的靶点，并在两种神经氨酸酶抑制剂zanamivir和oseltamivir的发现过程中起了重要的作用。神经氨酸酶抑制剂通过对神经氨酸酶的作用而抑制流感病毒在机体内的扩散，达到预防和治疗流感的目的。
神经氨酸酶蛋白氨基酸残基的变化，是产生耐药性及新型病毒形成的一个重要根源。近年来已有两种上市的神经氨酸酶抑制剂zanamivir和oseltamivir相继出现严重的副作用和耐药性，因此新型的神经氨酸酶抑制剂的研发刻不容缓。
本发明化合物用于治疗患者流行感冒，该化合物选择性地抑制神经氨酸酶。
发明内容
本发明涉及一种新的四元环化合物及其药物组合物，以及所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、处理、治疗或减轻流感病毒性疾病，尤其是对流感病毒神经氨酸酶有很好的抑制作用。
一方面，本发明涉及一种化合物，其为式(I)所示化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
其中，R1为H或C1-6烷基；
R2为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R3为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R4为H或C1-6烷基。
一些实施方案中，R1为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。
一些实施方案中，R4为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基 -2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基或3,3-二甲基-2-丁基。
另一些实施方案中，R2为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
又一些实施方案中，R3为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，该药物组合物含有本发明所述的化合物，及其药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或它们的组合。
一些实施方案中，本发明所述的药物组合物，其进一步地包含抗流感药物，其中，所述抗流感药物为帕拉米韦、扎那米韦、奥司他韦、那尼纳米韦、法匹拉韦、金刚烷胺、金刚乙胺、阿比多尔、利巴韦林、司他弗林、英加韦林(Ingavirin)、GR-217029或其组合。
另一方面，本发明涉及所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于抑制神经氨酸酶。
另一方面，本发明涉及所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于预防、处理、治疗或减轻患者的流感疾病。
本发明另一方面涉及式(I)所包含的化合物的制备、分离和纯化的方法。
前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这些方面。这些方面及其他的方面的内容将在下面作更加具体完整的描述。
本发明的详细说明书
定义和一般术语
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术等等)，以本申请为准。
应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
除非另外说明，应当应用本文所使用的下列定义。出于本发明的目的，化学元素与元素周期表CAS版，和《化学和物理手册》，第75版，1994一致。此外，有机化学一般原理可参考"Organic Chemistry",Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999,和"March's Advanced Organic Chemistry”by Michael B.Smith and Jerry March,JohnWiley&Sons,New York:2007中的描述，其全部内容通过引用并入本文。
除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。 例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。
本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等。
术语“手性”是具有与其镜像不能重叠性质的分子；而“非手性”是指与其镜像可以重叠的分子。
术语“对映异构体”是指一个化合物的两个不能重叠但互成镜像关系的异构体。
术语“非对映异构体”是指有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体混合物可通过高分辨分析操作如电泳和色谱，例如HPLC来分离。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，本发明的具体化合物，或像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。应了解术语“任选取代的”与术语“取代或非取代的”可以交换使用。一般而言，术语“取代的”，表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。其中所述的取代基可以是，但并不限于：氢、氟、氯、溴、碘、氧代(＝O)、亚甲基(＝CH2)、烷基、烷氧基、氰基、羟基、巯基、硝基、烷氨基、氨基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、环烷基、环烷基烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、卤代烷基取代的芳基、卤素取代的芳基或三氟甲磺酰基等。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。
本发明所使用的立体化学的定义和规则一般遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；andEliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994.
本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但绝不限于：非对映体、对映异构体、阻转异构体和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D、L或R、S用来表示分子手性中心的绝对 构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50：50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
本发明的化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。
依据起始物料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物，例如外消旋体和非对映异构体混合物(这取决于不对称碳原子的数量)的形式存在。光学活性的(R)-或(S)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有一个双键，取代基可能为E或Z构型；如果化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能有顺式或反式构型。
所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
可以用已知的方法将任何所得终产物或中间体的外消旋体通过本领域技术人员熟悉的方法拆分成光学对映体，如，通过对获得的其非对映异构的盐进行分离。外消旋的产物也可以通过手性色谱来分离，如，使用手性吸附剂的高效液相色谱(HPLC)。特别地，对映异构体可以通过不对称合成制备，例如，可参考Jacques,et al.,Enantiomers,Racematesand Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Principles of AsymmetricSynthesis(2nd Ed.Robert E.Gawley,Jeffrey Aubé,Elsevier,Oxford,UK,2012)；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；Wilen,S.H.Tablesof Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of NotreDame Press,Notre Dame,IN 1972)；Chiral Separation Techniques:A PracticalApproach(Subramanian,G.Ed.,Wiley-VCH Verlag GmbH&Co.KGaA,Weinheim,Germany,2007)。
术语“互变异构体”或“互变异构的形式”是指不同能量的可通过低能垒(lowenergy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。酮-烯醇互变异构的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构的另一个实例是酚-酮互变异构。酚-酮互变异构的一个具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的互变。除非另外指出，本发明化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“各…独立地为”与“…各自独立地为”和“…独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相 不影响。
术语“烷基”或“烷基基团”，表示含有1至20个碳原子，饱和的直链或支链的一价烃基基团，其中，所述的烷基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。除非另外详细说明，烷基基团含有1-20个碳原子。一些实施例中，烷基基团含有1-10个碳原子；另外一些实施例中，烷基基团含有1-8个碳原子；另外一些实施例中，烷基基团含有1-6个碳原子；另外一些实施例中，烷基基团含有1-4个碳原子；又一些实施例中，烷基基团含有1-3个碳原子。
烷基基团的实例包括，但并不限于：甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、丙基(n-Pr，-CH2CH2CH3)、异丙基(i-Pr，-CH(CH3)2)、正丁基(n-Bu，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基丙基或异丁基(i-Bu，-CH2CH(CH3)2)、1-甲基丙基或仲丁基(s-Bu，-CH(CH3)CH2CH3)、叔丁基(t-Bu，-C(CH3)3)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、正庚基、正辛基等等。
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)或式(Ia)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类、脂肪族(C1-24)酯类、酰氧基甲基酯类、碳酸酯、氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.Higuchi and V.Stella,Pro-drugs as Novel DeliverySystems,Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Edward B.Roche,ed.,BioreversibleCarriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and PergamonPress,1987,J.Rautio et al,Prodrugs:Design and Clinical Applications,NatureReview Drug Discovery,2008,7,255-270,and S.J.Hecker et al,Prodrugs ofPhosphates and Phosphonates,Journal of Medicinal Chemistry,2008,51，2328-2345。
“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化、还原、水解、酰氨化、脱酰氨作用、酯化、脱脂作用、酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19,1977.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于：与氨基基团反应形成的无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、高氯酸盐；有机酸盐，如乙酸 盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐；或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括，己二酸盐、苹果酸盐、2-羟基丙酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、重硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。通过适当的碱得到的盐包括，碱金属，碱土金属，铵和N+(C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。可以形成盐的碱金属或碱土金属包括钠、锂、钾、钙、镁等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物、氢氧化物、羧化物、硫酸化物、磷酸化物、硝酸化物、C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于：水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。
如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
可药用的酸加成盐可与无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可以由其衍生得到盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以由其衍生得到盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
可药用碱加成盐可与无机碱和有机碱形成。
可以由其衍生得到盐的无机碱包括，例如铵盐和周期表的I族至XII族的金属。在某些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
可以由其衍生得到盐的有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代的胺、环状胺、 碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括，例如，异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的可药用盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(Handbook of PharmaceuticalSalts：Properties，Selection，and Use)”，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。
另外，本发明公开的化合物，包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
本发明给出的任何结构式也意欲表示这些化合物未被同位素富集的形式以及同位素富集的形式。同位素富集的化合物具有本发明给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如2H， 3H，11C，13C，14C，15N，17O，18O，18F，31P，32P，35S，36Cl和125I。
另一方面，本发明所述化合物包括同位素富集的本发明所定义的化合物，例如，其中存在放射性同位素，如3H，14C和18F的那些化合物，或者其中存在非放射性同位素，如2H和13C。该类同位素富集的化合物可用于代谢研究(使用14C)、反应动力学研究(使用例如2H或3H)、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描术(PET)或包括药物或底物组织分布测定的单光子发射计算机断层成像术(SPECT)，或可用于患者的放疗中。18F富集的化合物对PET或SPECT研究而言是特别理想的。同位素富集的式(I)所示化合物可以通过本领域技术人员熟悉的常规技术或本发明中的实施例和制备过程所描述使用合适的同位素标记试剂替代原来使用过的未标记试剂来制备。
此外，较重同位素特别是氘(即，2H或D)的取代可提供某些治疗优点，这些优点是由代谢稳定性更高带来的。例如，体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数得到改善带来的。应当理解，本发明中的氘被看做式(I)化合物的取代基。可以用同位素富集因子来定义该类较重同位素特别是氘的浓度。本发明所使用的术语“同位素富集因子”是指所指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物的取代基被指定为氘，该化合物对各指定的氘原子而言具有至少3500(各指定氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)，至少5000(75％的氘掺入)，至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)的同位素富集因子。本发明可药用的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以是同位素取代的例如D2O、丙酮-d6、DMSO-d6的那些溶剂化物。
另一方面，本发明涉及制备式(I)所包含的化合物的中间体。
另一方面，本发明涉及式(I)所包含的化合物的制备、分离和纯化的方法。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物，药学上可接受的载体，赋形剂，稀释剂，辅剂，溶媒，或它们的组合。在一些实施方案，药物组合物可以是液体，固体，半固体，凝胶或喷雾剂型。
“联合”表示在单个剂量单位形式中的固定组合或用于组合施用的部分的药盒，其中本发明公开化合物和组合伴侣可以在同一时间独立施用或者可以在一定的时间间隔内分别施用，特别是使联合合伴侣表现出合作、例如协同作用。如本文所用的术语“共同给药”或“联合给药”等意欲囊括将所选的组合伙伴施用于需要其的单个个体(例如患者)，并且意欲包括其中物质不必通过相同施用途径或同时施用的治疗方案。如本文所用的术语“药物组合产品”表示将一种以上活性成分混合或组合所得到的产品，并且既包括活性成分的固定组合也包括非固定组合。术语“固定联合”表示活性成分如本发明公开化合物和组合伙伴以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定联合”表示活性成分如本发明公开化合物化合物和组合伙伴均作为单独实体同时、共同或无特定时间限制地先后施用于患者，其中该施用在患者体内提供了两种化合物的治疗有效水平。后者还适用于鸡尾酒疗法，例如施用3种或更多种活性成分。
本发明化合物的描述
一方面，本发明涉及一种化合物，其为式(I)所示化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
其中，R1为H或C1-6烷基；
R2为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R3为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R4为H或C1-6烷基。
一些实施方案中，R1为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。
一些实施方案中，R4为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基或3,3-二甲基-2-丁基。
另一些实施方案中，R2为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
又一些实施方案中，R3为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
又一些实施方案中，其包含以下其中之一的结构或其中之一结构的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药：
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，该药物组合物含有本发明所述的化合物，及其药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或它们的组合。
一些实施方案中，本发明所述的药物组合物，其进一步地包含抗流感药物，其中，所述抗流感药物为帕拉米韦、扎那米韦、奥司他韦、那尼纳米韦、法匹拉韦、金刚烷胺、金刚乙胺、阿比多尔、利巴韦林、司他弗林、英加韦林(Ingavirin)、GR-217029或其组合。
另一方面，本发明涉及所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于抑制神经氨酸酶。
另一方面，本发明涉及所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于预防、处理、治疗或减轻患者的流感疾病。
本发明的化合物(在本文中，表述方式“式(I)化合物及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物和药学上可接受的盐及前药”可以统称为“本发明的化合物”)，可以用于生产医药产品治疗流感疾病，包括那些本发明所描述的。本发明的化合物在生产有效抑制流感病毒感染药物中的应用。本发明的化合物可以用于生产一种医药品用来减轻、控制或治疗流感病毒所介导的病症，特别是神经氨酸酶蛋白介导的疾病。本发明包含药物组合物，该药物组合物包括式(I)所代表的化合物与至少一个药学上可接受的载体，辅剂或稀释剂的结合所需的有效治疗用量。
除非其他方面表明，本发明的化合物所有的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、盐和药学上可接受的前药都属于本发明的范围。
具体地说，盐是药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”包括物质或组合物必须是适合化学或毒理学地，与组成制剂的其他组分和用于治疗的哺乳动物有关。本领域技术人员可以根据所采用其他组分和所用于治疗的对象例如人，来具体选择“药学上可以接受的”的物质或组合物。
本发明的化合物的盐还包括用于制备或纯化式(I)所示化合物的中间体或式(I)所示化合物分离的对映异构体的盐，但不一定是药学上可接受的盐。
如果本发明的化合物是碱性的，则想得到的盐可以通过文献上提供的任何合适的方法制备得到，例如，使用无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等。或者使用有机酸，如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、苹果酸、2-羟基丙酸、枸橼酸、草酸、羟乙酸和水杨酸；吡喃糖酸，如葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸；α-羟酸，如柠檬酸和酒石酸；氨基酸，如天门冬氨酸和谷氨酸；芳香族酸，如苯甲酸和肉桂酸；磺酸，如对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、三氟甲磺酸等等或它们的组合。
如果本发明的化合物是酸性的，则想得到的盐可以通过合适的方法制备得到，如，使用无机碱或有机碱，如氨(伯氨、仲氨、叔氨)，碱金属氢氧化物，铵，N+(R14)4的盐和碱土金属氢氧化物等等。合适的盐包括，但并不限于：从氨基酸得到的有机盐，如甘氨酸和精氨酸，氨，如伯氨、仲氨和叔氨，N+(R14)4 的盐，如R14是H、C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-4烷基等，和环状氨，如哌啶，吗啉和哌嗪等，和从钠，钙，钾，镁，锰，铁，铜，锌，铝和锂得到无机盐。也包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。
本发明化合物的药物组合物、制剂和给药
所述药物组合物包含任何一种本发明的化合物。该药物组合物还可以进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或它们的组合。
所述药物组合物进一步包含抗流感病毒的药物。所述抗流感病毒的药物可以为任何已知的不同于本发明化合物的其他用于抗流感的药物。例如，可以为帕拉米韦、扎那米韦、奥司他韦、那尼纳米韦、法匹拉韦、金刚烷胺、金刚乙胺、阿比多尔、利巴韦林、司他弗林、英加韦林(Ingavirin)、GR-217029或其组合。
当可用于治疗时，治疗有效量的本发明化合物，尤其是式(I)化合物及其药学上可接受的盐可作为未加工的化学药品给予，还可作为药物组合物的活性成分提供。因此，本发明内容还提供药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的本本发明化合物，尤其是式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本文所使用的术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者益处(例如病毒负荷减少)的各活性组分的总量。当使用单独的活性成分单独给药时，该术语仅指该成分。当组合应用时，该术语则是指不论组合，依次或同时给药时，都引起治疗效果的活性成分的组合量。本发明化合物，尤其是式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。从与制剂其他成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲，载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的。根据本发明内容的另一方面，还提供用于制备药物制剂的方法，该方法包括将本发明化合物，尤其是式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混匀。本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。
药物制剂可呈单位剂型，每个单位剂量含有预定量的活性成分。本发明内容的化合物的剂量水平介于约0.01毫克/千克(mg/kg)体重/天和约250毫克/千克体重/天之间，优选介于约0.05mg/kg体重/天和约100mg/kg体重/天之间，常常以单一疗法用于预防或治疗流感病毒介导的疾病。通常可按每天约1至约5次或者作为连续输注给予本发明内容的药物组合物。这类给药法可用作长期或短期疗法。与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的量将根据待治疗的疾病、疾病的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗时间和患者年龄、性别、体重和情况而改变。优选的单位剂型是含有本文上述活性成分的日剂量或分剂量或其适宜分数的单位剂型。可用显然低于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。此后，以较小的增量来加大剂量直到在这种情况下达到最佳效果。一般而言，最理想地给予化合物的浓度水平是通常可在抗病毒方面提供有效结果而又不至于引起任何有害或有毒的副作用。
当本发明内容的组合物包含本发明内容的化合物和一种或多种其他治疗药物或预防药物的组合时，化合物和另外的药物的剂量水平通常在单一疗法方案中，占正常给药剂量的约10-150％，更优选占正常给药剂量的约10-80％。药物制剂适于通过任何合适的途径给药，例如通过口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻、 局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或者真皮下注射或输注)途径。可按药剂学领域的任何已知方法制备这类制剂，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合。优选口服给药或注射给药。
适于口服给药的药物制剂按独立的单位提供，例如胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫制剂或起泡制剂(whip)；或水包油乳液剂或油包水乳液剂。
举例来说，对于以片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可与药学上可接受的口服无毒惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)相混合。通过将化合物粉碎成合适的微细尺寸，并与被同样粉碎的药用载体(例如淀粉或甘露醇等可食用的糖类)混匀来制备散剂。还可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
通过制备如上所述的粉状混合物，并装填到成形的明胶壳内，来制备胶囊剂。在装填操作之前，可将助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固态聚乙二醇)加到粉状混合物中。还可加入当服下胶囊剂时将改进药物可利用性的崩解剂或增溶剂(例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)。
此外需要或必需时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶、西黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但并不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。例如，通过制成粉状混合物，制粒或预压片，加入润滑剂和崩解剂，压制成片，从而制成片剂。将适当粉碎的化合物与如上述所述的稀释剂或基料、任选与粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解阻止剂(例如石蜡)、吸收加速剂(季盐)和/或吸收剂(例如皂土、高岭土或磷酸二钙)混合，来制备粉状混合物。可用粘合剂(例如糖浆、淀粉浆、阿拉伯胶浆(acadiamucilage)或纤维素材料或聚合材料溶液)润湿后加压过筛，将粉状混合物制粒。制粒的一个替代方法是，可将粉状混合物通过压片机，结果是将形成不佳的团块再击碎制成颗粒。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐，滑石粉或矿物油使颗粒润滑以防止粘到压片机的冲模上。然后将经润滑的混合物压制成片。本发明内容的化合物还可与自由流动的惰性载体混合，无需通过制粒或预压片步骤便可压制成片。可提供透明或不透明的由虫胶密封衣、糖衣或聚合材料衣和蜡质抛光衣(polish coating of wax)组成的保护性包衣材料。可将染料加到这些包衣材料中以区分不同的单位剂量。
口服液体制剂例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以剂量单位形式制备，从而给定量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于适当调味的水溶液中来制备，而酏剂可通过使用无毒溶媒来制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂)等。
如果适当的话，可将用于口服给药的剂量单位制剂微胶囊化。也可将制剂制成延时或持续释放，例如通过包衣或包埋在聚合物、蜡等微粒材料中。
本发明化合物，尤其是式(I)化合物及其药学上可接受的盐还可以脂质体递药系统给予，例如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体可由多种磷脂(例如胆固醇、十八烷基胺或磷脂酰胆碱)构成。
本发明化合物，尤其是式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为单独的载体 (化合物分子与之偶联)递药。化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，化合物可与一类生物可降解的聚合物偶联，用于达到药物的控释，这类聚合物例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联共聚物或两亲性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可作为离散的贴剂(discrete patch)以在长时间内保持与接受者表皮密切接触。例如，活性成分可由通过离子导入贴剂递药，通常可参见Pharmaceutical Research 1986,3(6),318。
适于局部给药的药物制剂可制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂、油制剂或透皮贴剂。
适于直肠给药的药物制剂可作为栓剂或作为灌肠剂提供。
适于经鼻给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粒径为例如20-500微米范围的粗粉剂，通过以鼻吸方式给药，即通过鼻通道从接近鼻子的粗粉剂容器中快速吸入。其中载体为液体、适于作为鼻腔喷雾剂或滴鼻剂给药的合适制剂包括活性成分的水性溶液剂或油性溶液剂。
适于通过吸入给药的药物制剂包括微细粒子粉剂(dust)或细雾剂(mist)，可用不同类型计量的剂量压缩气溶胶、雾化吸入器、吹入器或其他事宜递送气溶胶喷雾剂的装置中制备。
适于阴道给药的药物制剂可以阴道栓、阴道塞、乳膏剂、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂提供。
适于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂及水性和非水性无菌混悬剂，水性和非水性无菌注射溶液剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与待接受者血液等渗的溶质，水性和非水性无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。制剂可以单位剂量或多剂量容器提供，例如密封的安凯和小瓶，并可保存在冷冻干燥(冻干)条件下，只需在临用前加入无菌液体载体，例如注射用水。临用时配置的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉针剂、颗粒剂和片剂制备。
应当了解的是，除了以上特别提到的成分以外，制剂还包括与所述制剂类型有关的本领域常用的其它成分，例如适于口服给药的这类制剂可包括矫味剂。
本发明化合物和药物组合物的用途
本发明提供了本发明的化合物或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物可以用于有效抑制流感病毒，特别是有效抑制神经氨酸酶。本发明所述任一化合物或药物组合物可以用于预防、处理、治疗或减轻流感疾病。
包含本发明化合物或药物组合物给药的治疗方法，进一步包括对患者给药其他抗流感的药物，由此，可以将本发明的化合物与其他抗流感的药物进行联合治疗，其中所述抗流感的药物为帕拉米韦、扎那米韦、奥司他韦、那尼纳米韦、法匹拉韦、金刚烷胺、金刚乙胺、阿比多尔、利巴韦林、司他弗林、英加韦林(Ingavirin)、GR-217029或其组合。
并且包含本发明化合物或药物组合物给药的治疗方法，进一步包含其他抗流感药物的给药，其中，其他抗流感药物可以和本发明化合物或其药物组合物联合给药，本发明化合物或药物组合物作为单个剂型，或分开的化合物或药物组合物作为多剂型的一部分。其他抗流感药物可以与本发明化合物同时给药或不同 时给药。后者的情况，给药可以错开进行如6小时、12小时、1天、2天、3天、1周、2周、3周、1个月或2个月进行。
本发明的化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”或“有效剂量”是指处理或减轻一个或多个本发明所提到病症的严重度的有效量。根据本发明的方法，化合物和组合物可以是任何给药量和任何给药途径来有效地用于处理或减轻疾病的严重程度。必需的准确的量将根据患者的情况而改变，这取决于种族，年龄，患者的一般条件，感染的严重程度、特殊的因素、给药方式，等等。化合物或组合物可以和一个或多个其他治疗剂联合给药，如本发明所讨论的。
一般合成方法
在本说明书中，如果在化学名称和化学结构间存在任何差异，结构是占优的。
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)所示。下面的合成方法和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。
所属领域的技术人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。
下面所描述的实施例，除非其他方面表明，所有的温度定为摄氏度(℃)。除非其他方面表明，试剂购买于商品供应商如Aldrich Chemical Company,Arco Chemical Companyand Alfa Chemical Company，使用时都没有经过进一步纯化；一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司，和青岛海洋化工厂购买得到。
无水四氢呋喃，二氧六环，甲苯，乙醚是经过金属钠回流干燥得到。无水二氯甲烷和氯仿是经过氢化钙回流干燥得到。乙酸乙酯，石油醚，正己烷，N,N-二甲基乙酰胺和N,N-二甲基甲酰胺是经无水硫酸钠事先干燥使用。
以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿均是经过干燥的。
色谱柱是使用硅胶柱，硅胶(200-300目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱数据通过Bruker Avance 400核磁共振谱仪或Bruker Avance III HD 600核磁共振谱仪来测定，以CDC13,d6-DMSO,CD3OD或d6-丙酮为溶剂(报导以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰),s,s(singlet，singlet，单峰，单峰),d(doublet，双峰),t(triplet，三重峰),m(multiplet，多重峰),br(broadened，宽峰),dd(doublet of doublets，四重峰),ddd(doublet ofdoublet of doublets，双双二重峰),dt(doublet of triplets，双三重峰),ddt(doubletof doublet of triplets，双双三重峰),dddd(doublet of doublet of doublet ofdoublets，双双双二重峰),td(triplet of doublets，三双重峰),brs(broadenedsinglet，宽单峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1312A二元泵和a G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6320 系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315B DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1311A四元泵和G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6120系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315D DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
以上两种光谱仪都配备了Agilent Zorbax SB-C18柱，规格为2.1×30mm，5μm。注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.6mL/min；HPLC的峰值是通过在210nm和254nm处的UV-Vis波长来记录读取的。流动相为0.1％的甲酸乙腈溶液(相A)和0.1％的甲酸超纯水溶液(相B)。梯度洗脱条件如表1所示：
表1：低分辨率质谱流动相的梯度洗脱条件
| 时间(min) | A(CH3CN，0.1％ HCOOH) | B(H2O，0.1％HCOOH) |
| 0-3 | 5-100 | 95-0 |
| 3-6 | 100 | 0 |
| 6-6.1 | 100-5 | 0-95 |
| 6.1-8 | 5 | 95 |
下面简写词的使用贯穿本发明：
Ac2O 乙酸酐
BOC,Boc 叔丁氧基羰基
CDC13 氘代氯仿
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc,EA 乙酸乙酯
Et3N,TEA 三乙胺
HF 氢氟酸
HgCl2 氯化汞
MeOH,CH3OH 甲醇
CH2Cl2,DCM 二氯甲烷
mL 毫升
PE 石油醚(60–90℃)
K2CO3 碳酸钾
KOH 氢氧化钾
NaOH 氢氧化钠
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
TBAF 四丁基氟化胺
DIPEA 二异丙基乙基胺
TBSOTf 叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯
NaBH4 硼氢化钠
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
(COCl)2 草酰氯
KMnO4 高锰酸钾
t-BuOk 叔丁醇钾
Et2AlCl 一氯二乙基铝
AlH4Li,LAH 氢化铝锂
PPL 猪胰脂肪酶
PhMe 甲苯
H2SO4 硫酸
BH3。THF 硼烷四氢呋喃溶液
18-C-6 冠醚
合成方法
合成方法1
化合物12可以通过合成方法1制备得到，其中，R4具有如本发明所述含义。化合物1与硝基化合物2在TBAF的作用下反应得到化合物3，化合物3用TBSOTf上羟基保护基得到化合物4，化合物4在三氟乙酸的作用下脱Boc得到化合物5，化合物5与乙酸酐反应得到氨基保护的化合物6，化合物6发生硝基还原反应得到氨基化合物7，化合物7上Boc得到化合物8，化合物8水解得到化合物9，化合物9在DMSO和草酰氯的作用下得到化合物10，化合物10在氧化剂如高锰酸钾的作用下得到化合物11，化合物11在吡啶氢氟酸溶液的作用下脱去TBS得到目标化合物12。
合成方法2
化合物19可以通过合成方法2制备得到，其中R4具有如本发明所述含义。化合物13在六水合氯化镍和硼氢化钠的作用下将硝基还原得到氨基化合物14，化合物14与乙酸酐反应得到氨基保护的化合物15，化合物15水解后得到化合物16，化合物16在DMSO和草酰氯的作用下得到化合物17，化合物17在氧化剂如高锰酸钾的作用下得到化合物18，化合物18脱保护得到目标化合物19。
合成方法3
化合物24可以通过合成方法3制备得到，其中R4具有如本发明所述含义。化合物20在三氟乙酸的作用下选择性脱去Boc保护基得到化合物21，化合物21与硫代胍基化合物22反应得到化合物23，化合物23脱保护得到目标化合物24。
具体实施方式
下面的实施例可以对本发明做进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。
实施例
实施例1化合物(1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-氨基-4-乙基-1-羟基己基)环丁烷甲酸的合成
合成路线：
步骤1)化合物1,1-二乙氧基乙烯(1-2)的合成
-10℃下，将2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1-1)(50mL,0.32mol)缓慢滴入t-BuOK(80g,1.02mol)与18-C-6(3.4g)的THF(500mL)溶液，滴毕，保温反应12小时，常压蒸馏除去THF，剩余物减压蒸出，得到无色油状物1,1-二乙氧基乙烯(1-2)22g，产率59％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.81(q,4H),3.08(s,2H),1.31(t,6H).
步骤2)化合物(1R,2S)-3,3-二乙氧基环丁烷-1,2-二羧酸甲酯(1-4)的合成
-25℃下，将Et2AlCl(84mL,69.4mmol)滴入富马酸二甲酯(1-3)(5g,34.7mmol)的甲苯(120mL)溶液中，滴毕，保温反应1小时，滴加DIPEA(6.06mL,34.7mmol)，反应30分钟后，滴加1,1-二乙氧基乙烯(1-2)(5.6g,48.6mmol)，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠 (150mL)溶液，过滤，滤饼用EtOAc(200mL)洗涤，分层，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩后经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝30/1)得到黄色油状物1.8g，产率20％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.77-3.70(m,6H),3.66(m,1H),3.57-3.49(m,2H),3.44-3.88(m,2H),3.32(m,1H),2.60-2.57(m,1H),2.35-2.26(m,1H),1.27-1.12(m,6H).
步骤3)化合物((1R,2R)-3,3-二乙氧基环丁烷-1,2-二基)二甲醇(1-5)的合成
68℃下，将(1R,2S)-3,3-二乙氧基环丁烷-1,2-二羧酸甲酯(1-4)(6.93g,26.65mmol)的THF(70mL)溶液缓慢滴入LAH(1.97g,53.3mmol)的无水THF(80mL)溶液中，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，0℃下，向反应体系中依次滴入水(2mL)、NaOH溶液(2mL,15％)和水(6mL)，再加入少量硫酸钠，过滤，滤饼用EtOAc(100mL)洗涤，滤饼用THF(50mL)回流半小时后再过滤，合并有机相，浓缩后经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝12/10)得到黄色油状物4.3g，产率87％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.76-3.51(m,4H),3.48-3.41(m,4H),2.35-2.29(m,2H),2.13-2.06(m,1H),1.74-1.69(m,1H),1.25-1.17(m,6H).
步骤4)化合物((1R,2R)-3,3-二乙氧基-2-(羟基甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-6)的合成
25℃下，依次将PPL(13g)和烯基乙酸酯(4.05mL,43.8mmol)的甲苯(20mL)溶液缓慢加入((1R,2R)-3,3-二乙氧基环丁烷-1,2-二基)二甲醇(1-5)(8.13g,39.8mmol)的甲苯(250mL)溶液中，加毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，过滤，滤液浓缩后经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝6/1)得到黄色油状物5.96g，产率61％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.15-4.09(m,2H),3.81-3.69(m,2H),3.50-3.37(m,4H),2.39-2.26(m,3H),2.05(s,3H),1.83-1.79(m,1H),1.25-1.17(m,6H).
步骤5)化合物((1R,2R)-2-(羟基甲基)-3-氧环丁基)甲基乙酸酯(1-7)的合成
25℃下，将硫酸(24.2mL,24.2mmol,1mol/L)缓慢滴入((1R,2R)-3,3-二乙氧基-2-(羟基甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-6)(5.96g,24.2mmol)的乙腈(80mL)溶液中，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入固体氯化钠(10g)，分层，水层用EtOAc(50mL×2)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩有机层后经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝12/10)得到黄色油状物3.26g，产率78％。
步骤6)化合物((1R,2S)-2-(羟基甲基)-3-(甲氧基亚胺)环丁基)甲基乙酸酯(1-8)的合成
25℃下，将甲氧基羟胺盐酸盐(2.22g,26.5mmol)加入((1R,2R)-2-(羟基甲基)-3-氧环丁基)甲基乙酸酯(1-7)(8.28g,19mmol)与醋酸钠(4.35g,53mmol)的甲醇(60mL)溶液中，加完后，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，减压除去甲醇，残留物加入EtOAc(20mL)，过滤，滤饼用EtOAc(40mL)洗涤，减压除去EtOAc后得到黄色油状物3.81g。
步骤7)化合物((1R,2S)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)-3-(甲氧基亚胺)环丁基)甲基乙酸酯(1-9)的合成
0℃下，将TBSOTf(5.81mL,24.7mmol)缓慢滴入((1R,2S)-2-(羟基甲基)-3-(甲氧基亚胺)环丁基)甲基乙酸酯(1-8)(3.81g,19mmol)与三乙胺(6.84mL,49.4mmol)的DCM(60mL)溶液中，滴毕，25℃反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(20mL)，分液，水层用DCM(40mL×2)萃 取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝20/1)得到黄色油状物6.1g，产率95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.28(t,2H),3.76(m,5H),3.12-3.03(m,1H),2.94-2.83(m,1H),2.66-2.46(m,2H),2.04(s,3H),0.83(s,9H),0.03(s,6H).
步骤8)化合物((1R,2S,3S)-3-氨基-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)环丁基)甲醇(1-10)的合成
0℃氮气保护下，将BH3.THF(96mmol,100mL,1mol/L)的溶液滴入((1R,2S)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)-3-(甲氧基亚胺)环丁基)甲基乙酸酯(1-9)(6.1g,19.3mmol)的THF(30mL)溶液中，25℃反应20分钟后，回流反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入水(16.5mL)淬灭反应，分液，用DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去部分溶剂后，加入KOH(16.5mL,20％)溶液，回流反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，向反应体系中加入固体氯化钠(5g)，体系分层，水相用EtOAc(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到黄色油状物4.74g。步骤9)化合物((1S,2S,3R)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)-3-(羟甲基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1-11)的合成
25℃下，将Boc2O(5.76mL,25.1mmol)滴入((1R,2S,3S)-3-氨基-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)环丁基)甲醇(1-10)(4.74g,19.3mmol)与三乙胺(6.95mL,50.2mmol)的DCM(50mL)溶液中，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(30mL)，分液，水层用DCM(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝6/1)得到无色油状物3.2g，产率49％。
步骤10)化合物((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-12)的合成
25℃下，将乙酸酐(1.12mL,12mmol)滴入((1S,2S,3R)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)-3-(羟甲基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1-11)(3.2g,9.26mmol)与三乙胺(3.32mL,24mmol)的DCM(40mL)溶液中，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，向反应液中加入饱和食盐水(20mL)，分液，用DCM(15mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝15/1)得到黄色油状物2.5g，产率70％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.10-4.03(m,3H),3.80-3.72(m,2H),3.63-3.61(m,2H),2.47-2.35(m,2H),2.08(s,3H),1.47(m,9H),0.87(s,9H),0.05(m,6H).
步骤11)化合物((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(羟基甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-13)的合成
25℃下，将TBAF(3.36g,12.9mmol)加入((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-12)(2.5g,6.45mmol)的THF(30mL)溶液中，加毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(10mL)，分液，水层用EtOAc(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝2/1)得到黄色油状物1.82g，产率95％。
步骤12)化合物((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲酰基环丁基)甲基乙酸酯(1-14)的合成
-78℃下，将DMSO(1.4g,18mmol)的DCM(10mL)溶液滴入(COCl)2(0.86mL,9mmol)的DCM(30mL)中，滴毕，保温反应半小时，滴加((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(羟基甲基)环丁基)甲基乙酸酯(1-13)(1.82g,6.67mmol)，滴毕，保温反应1小时，滴加Et3N(3.7mL,26.7mmol)，继续反应半小时后，将反应温度升至0℃，加入水(5mL)，TLC监测反应进程。反应结束后，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝5/2)得到黄色油状物1.63g，产率90％。
步骤13)化合物((1R,2S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-((1R)-4-乙基-1-羟基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-15)的合成
-10℃下，将3-硝基甲基戊烷(1.74g,12mmol)滴入TBAF(0.63g,2.4mmol)的THF(40mL)溶液中，滴毕，25℃反应1小时，滴加((1R,2S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲酰基环丁基)甲基乙酸酯(1-14)(1.63g,6.01mmol)，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(15mL)，分液，水层用EtOAc(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝5/1)得到黄色油状物2.29g，产率83％。
步骤14)化合物((1R,2S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-16)的合成
0℃下，依次将2,6-二甲基吡啶(3.2mL,27.5mmol)和TBSOTf(3.79mL,16.5mmol)滴入((1R,2S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-((1R)-4-乙基-1-羟基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-15)(2.29g,5.5mmol)的DCM(30mL)中，滴毕，25℃反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，向反应液中加入饱和氯化铵(20mL)溶液，分液，水层用DCM(15mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物2.37g，直接用于下一步反应。
MS(ESI,pos.ion)m/z:431.3[M+H-Boc]+.
步骤15)化合物((1R,2S,3R)-3-氨基-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-17)的合成
25℃下，将TFA(2mL)滴入((1R,2S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-16)(1g,1.89mmol)的DCM(20mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(10mL)，分液，水层用DCM(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝1/1)得到产物0.68g，产率83％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:431.4[M+H]+.
步骤16)化合物((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-18)的合成
25℃下，依次将三乙胺(0.57mL,4.12mmol)和乙酸酐(0.2mL,2.06mmol)滴入((1R,2S,3R)-3-氨基-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-17)(0.68g,1.58mmol)的DCM(10mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(10mL)，分液，水层用DCM(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc (v/v)＝2/1)得到产物0.35g，产率47％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:473.2[M+H]+.
步骤17)化合物((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-19)的合成
0℃下，将NiCl2.6H2O(0.26g,1.11mmol)加入((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-18)(0.35g,0.74mmol)的MeOH(10mL)溶液中，分批加入NaBH4(0.14g,3.7mmol)，加完后，25℃反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(5mL)淬灭反应，除去甲醇，剩余物中加入EtOAc(10mL)、氨水(1mL)与少量水，分液，水层用EtOAc(8mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗产品0.32g。
MS(ESI,pos.ion)m/z:443.3[M+H]+.
步骤18)化合物((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-(叔丁氧羰基)氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-20)的合成
25℃下，依次将Et3N(0.26mL,1.88mmol)和Boc2O(0.21mL,0.94mmol)滴入((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-19)(0.32g,0.72mmol)的DCM(10mL)溶液中，滴毕，保温反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，加入饱和氯化铵(5mL)溶液，分液，用DCM(5mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝2/1)得到产物0.12g。
MS(ESI,pos.ion)m/z:443.3[M+H-Boc]+；
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.74(dd,1H),4.09-3.99(m,1H),2.38-2.33(m,4H),2.12(m,1H),2.04-2.00(m,3H),1.93-1.87(m,3H),1.34(s,9H),0(s,9H),1.24-1.17(m,7H),0.88(m,9H),0.85-0.79(m,6H),0.10-0.03(m,6H).
步骤19)化合物((1R)-((1S,2R,4R)-2-乙酰氨基-4-(羟基甲基)环丁基)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1-21)的合成
25℃下，将NaOH(10g,10.7mmol,10％)溶液加入((1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-(叔丁氧羰基)氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-20)(0.58g,1.07mmol)的MeOH(10mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，除去甲醇，剩余物中加入EtOAc(15mL)和水(10mL)，分液，用EtOAc(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到粗产品0.53g，直接用于下步反应。
步骤20)化合物((1R)-((1S,2R,4R)-2-乙酰氨基-4-甲酰基环丁基)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1-22)的合成
-78℃下，将DMSO(225mg,2.88mmol)的DCM(5mL)溶液滴入(COCl)2(0.14mL,1.44mmol)的DCM(20mL)溶液中，滴毕，保温反应半小时，滴加((1R)-((1S,2R,4R)-2-乙酰氨基-4-(羟基甲基)环丁基)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1-21)(0.53g,1.07mmol)，反应1小时后，滴加Et3N(0.59mL,4.28mmol)，反应半小时，将反应温度升至0℃，加入水(5mL)，TLC监测反应进程。反应结 束后，分液，有机层浓缩后，残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝1/1)得到白色固体0.36g，产率68％。
步骤21)化合物(1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-(1'-(叔丁基二甲基硅氧基)-2'-叔丁氧羰基氨基-4'-乙基己基)-环丁基甲酸(1-23)的合成
25℃下，依次将叔丁醇(5.5mL)与((1R)-((1S,2R,4R)-2-乙酰氨基-4-甲酰基环丁基)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1-22)(0.36g,0.72mmol)加入K2HPO4-KH2PO4的缓冲溶液(2.73mL，pH＝7.2)中，滴加KMnO4(0.65g,4.12mmol,1mol/L)的水溶液，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和亚硫酸钠溶液(5mL)和EtOAc(10mL)，分液，水层用EtOAc(10mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，有机层浓缩后，残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝1/1)得到产物0.46g。
MS(ESI,pos.ion)m/z:415.2[M+H-Boc]+.
步骤22)化合物(1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-((1R)-2-氨基-4-乙基-1-羟基己基)环丁烷甲酸(1-24)的合成
25℃下，将氢氟酸的吡啶饱和溶液(2mL)加入(1R,2S,3R)-3-乙酰氨基-2-(1'-(叔丁基二甲基硅氧基)-2'-叔丁氧羰基氨基-4'-乙基己基)-环丁基甲酸(1-23)(0.46g,0.89mmol)的THF(30mL)溶液中，回流反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，过滤，滤液浓缩，残余物中依次加入DCM(15mL)、水(5mL)和氨水(2mL)，分液，水层用DCM(10mL×2)萃取后，减压除去水，向剩余物中加入甲醇(10mL)，滤去不溶物，滤液浓缩后得到白色固体0.15g，产率56％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:301.3[M+H]+；
1H NMR(400MHz,MeOD):δ4.13(m,1H),3.73(m,1H),3.33-2.05(m,4H),1.91(d,3H),1.76(m,1H)1.36-1.33(m,7H),0.88(t,6H).
实施例2化合物(1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-4-乙基-1-羟基己基)-3-氨基环丁烷甲酸的合成
合成路线：
步骤1)化合物(1R,2S,3R)-2-((1R)-2-氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)甲基乙酸酯(2-1)的合成
0℃下，将六水合氯化镍(1.49g,6.27mmol)加入((1R,2S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-((1R)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基-2-硝基己基)环丁基)甲基乙酸酯(1-16)(2.2g,4.18mmol)的甲醇(50mL)溶液中，分批加入硼氢化钠(0.8g,20.9mmol)，25℃反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和氯化铵(20mL)溶液，除去甲醇，剩余物加入EtOAc(50mL)和氨水(5mL)，分液，水层用EtOAc(25mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，有机层浓缩后得到粗产品2.09g，直接用于下步反应。MS(ESI,pos.ion)m/z:501.4[M+H]+.
步骤2)化合物((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)甲基乙酸酯(2-2)的合成
25℃下，依次将三乙胺(1.5mL,10.9mmol)和乙酸酐(0.53mL,5.43mmol)滴入(1R,2S,3R)-2-((1R)-2-氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)甲基乙酸酯(2-1)(2.09g,4.18mmol)的DCM(50mL)溶液中，滴毕，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和食盐水(20mL)，分液，水层用DCM(20mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝3/1)得到产物0.44g，产率29％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:443.3[M+H-Boc]+.
步骤3)化合物((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-(羟基甲基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(2-3)的合成
25℃下，将NaOH(5g,12.5mmol,10％)溶液加入((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)甲基乙酸酯(2-2)(0.23g,0.42mmol)的甲醇(10mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，除去甲醇，向剩余物中加入EtOAc(15mL)和水(5mL)，分液，水层用EtOAc(5mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到粗产品0.16g，直接用于下步反应。
MS(ESI,pos.ion)m/z:401.3[M+H-Boc]+.
步骤4)化合物((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-甲酰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(2-4)的合成
-78℃下，将DMSO(204mg,0.97mmol)的DCM(2.0mL)溶液滴入(COCl)2(123mg,0.97mmol)的DCM(20mL)溶液中，滴毕，保温反应半小时，滴加((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-(羟基甲基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(2-3)(0.36g,0.72mmol)，反应1小时后，滴加Et3N(0.4mL,2.88mmol)，反应半小时，将反应温度升至0℃，加入水(5mL)，TLC监测反应进程。反应结束后，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩后残余物经柱层析分离纯化(PE/EtOAc(v/v)＝5/2)得到白色固体0.33g，产率90％。
步骤5)化合物((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁烷甲酸(2-5)的合成
25℃下，依次将叔丁醇(5mL)与((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-甲酰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(2-4)(0.33g,0.66mmol)加入K2HPO4-KH2PO4的缓冲溶液(2.5mL,pH＝7.2)中，滴加KMnO4(0.6g,3.77mmol,1mol/L)的水溶液，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入饱和亚硫酸钠溶液(5mL)和EtOAc(10mL)，分液，水层用EtOAc(10mL×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，有机层浓缩后得到粗产品0.39g，直接用于下一步反应。
步骤6)化合物(1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-4-乙基-1-羟基己基)-3-氨基环丁烷甲酸(2-6)的合成
25℃下，将氢氟酸的吡啶饱和溶液(2mL)加入((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁烷甲酸(2-5)(0.46g,0.89mmol)的THF溶液(30mL)中，回流反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，过滤，浓缩滤液，残余物加入DCM(15mL)、水(5mL)和氨水(2mL)，分液，水层用DCM(10mL×2)萃取后，减压除去水，向剩余物中加入甲醇(10mL)，滤去不溶物，滤液浓缩后得到白色固体0.15g，产率56％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:301.3[M+H]+；
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.10-4.07(m,1H),3.70-3.79(m,1H),3.59-3.57(m,2H),3.00-2.93(m,2H),2.73-2.69(m,1H),2.44-2.41(m,1H),2.18-2.15(m,1H),2.04(s,3H),1.49-1.26(m,9H),0.88-0.82(m,6H).
实施例3化合物(1R,2R,3R)-2-((1S)-2-乙酰氨基-4-乙基-1-羟基己基)-3-胍基环丁烷甲酸的合成
合成路线：
步骤1)化合物((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-氨基环丁烷甲酸(3-1)的合成
25℃下，将TFA(0.6mL)加入((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁烷甲酸(2-5)(0.15g,0.29mmol)的DCM(6mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，减压除去TFA和DCM，得到产物粗品0.12g，直接用于下一步反应。
步骤2)化合物((1R,2R,3R)-2-((1S)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-(2,3-双(叔丁氧羰基)胍基)环丁烷甲酸(3-2)的合成
25℃下，依次将三乙胺(0.15mL,1.10mmol)、N,N'-二-BOC-S-甲基异硫脲(93mg,0.32mmol)和HgCl2(88mg,0.32mmol)加入((1R,2S,3R)-2-((1R)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-氨基环丁烷甲酸(3-1)(0.12g,0.29mmol)的DMF(5mL)溶液中，保温反应，TLC监测反应进程。反应结束后，加入水(2mL)淬灭反应，减压除去DMF和水，剩余物中加入EtOAc(10mL)和水(5mL)，分液，水层用EtOAc(5mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，有机层浓缩后剩余物用大硅胶板分离(MeOH/DCM(v/v)＝1/10)得到产物30mg，产率18％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:557.3[M+H-Boc]+；
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.47(s,1H),8.79(d,1H),7.28(d,1H),4.46(d,1H),4.07(t,1H),3.90(d,1H),2.68(m,3H),2.06(s,3H),1.50(s,9H),1.45(s,9H),1.25-1.22(m,7H),0.88-0.83(m,6H),0.80-0.78(m,9H),0.22(s,3H),0.15(s,3H).
步骤3)化合物((1R,2R,3R)-2-((1S)-2-乙酰氨基-4-乙基-1-羟基己基)-3-胍基环丁烷甲酸(3-3)的合成
25℃下，将氢氟酸的吡啶饱和溶液(0.6mL)加入((1R,2R,3R)-2-((1S)-2-乙酰氨基-1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-乙基己基)-3-(2,3-双(叔丁氧羰基)胍基)环丁烷甲酸(3-2)(0.1g,0.15mmol)的THF(12mL)溶液中，回流反应，LC-MS监测反应进程。反应结束后，过滤，浓缩滤液，残余物加入DCM(5mL)、水(1mL)和氨水(0.5mL)，分液，水层用DCM(4mL×2)萃取后，减压除去水，向剩余物中加入甲醇(3mL)，滤去不溶物，滤液浓缩后得到白色固体60mg，产率90％。
MS(ESI,pos.ion)m/z:343.3[M+H]+；
1H NMR(400MHz,MeOD):δ3.81(dd,1H),3.67(d,1H),3.57-3.51(m,2H),3.33(m,1H),2.02(s,3H), 1.39-1.23(m,7H),0.88-0.86(m,6H).
实施例4：抗流感病毒活性测定
96孔板CPE测定法步骤：
铺96孔板，每孔接种5000个MDCK细胞，37℃，5％CO2，过夜培养。
用DMSO和无血清培养基稀释化合物至合适浓度，DMSO终浓度为1％。
用培养基稀释-80℃冻存的流感病毒H1N1(A/weiss/43)。
每孔加50μl稀释后的化合物和50μl稀释后的病毒液(最终MOI＝0.01)。
将96孔板置于37℃,5％CO2，培养3天。
每孔加20μl MTT，置于37℃,孵育4小时。
测定MTT被活细胞还原生成的甲瓒量，并据此计算流感病毒介导的CPE被检测化合物抑制的百分比。
96孔板测定细胞毒性步骤：
铺96孔板，每孔接种5000个MDCK细胞，37℃，5％CO2，过夜培养。
用DMSO和无血清培养基稀释化合物至合适浓度，DMSO终浓度为1％。
每孔加50μl稀释后的化合物和50μl培养液。
将96孔板置于37℃,5％CO2，培养3天。
每孔加20μl MTT，置于37℃,4小时。
测定MTT被活细胞还原生成的甲瓒量，并据此计算被测化合物的细胞毒性。
数据分析：％抑制率＝(ODT–ODV)/(ODC–ODV)×100％
％细胞毒性＝ODT/ODC×100％
％活性＝％抑制率-％细胞毒性
ODT,ODV,和ODC分别代表测试化合物的吸光系数，病毒感染对照(无化合物，+1％DMSO)，以及细胞空白对照(无病毒、无化合物、+1％DMSO)
OD value＝OD570–OD630(MTT)
表2：本发明部分化合物对流感病毒H1N1(A/weiss/43)体外实验活性值
由上表可知，本发明所涉及的化合物具有明显的抗流感病毒活性。
对于本领域技术人员显而易见的是，本发明内容并不限于前述说明性实施例，而且可以体现在其它具体形式中而又不偏离其实质特性。因此，预期各实施例在所有方面都被视作说明性的且非限制 性的，应参照所附权利要求书，而不是前述这些实施例，因此，在所附权利要求书等同内容的含义和范围内的所有变化都包括在本文中。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.一种化合物，其为式(I)所示化合物或式(I)所示化合物的药学上可接受的盐，
其中，R1为H或C1-6烷基；
R2为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R3为H、-C(＝NH)NH2、C1-6烷基或-C(＝O)-C1-6烷基；
R4为H或C1-6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，R1为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，R4为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基或3,3-二甲基-2-丁基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，R2为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，R3为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、-C(＝NH)NH2、甲酰基或乙酰基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其包含以下其中之一的结构或其中之一结构的药学上可接受的盐：
7.一种药物组合物，其包含权利要求1-6任一项所述化合物，及其药学上可接受的辅剂。
8.权利要求1-6任一项所述化合物或权利要求7所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于抑制神经氨酸酶。
9.权利要求1-6任一项所述化合物或权利要求7所述药物组合物在制备药物中的用途，其中，所述药物用于预防、处理、治疗或减轻患者的流感疾病。
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