CN104431354A - 一种益生菌微胶囊及其制备方法和应用 - Google Patents

一种益生菌微胶囊及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种益生菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：1)混合益生菌菌剂的制备；2)中药提取液的制备；3)均质；4)干燥：将步骤3)收集的乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。本发明还公开了上述制备方法得到的益生菌微胶囊。本发明还公开了益生菌微胶囊在制备饲料添加剂方面的应用。本发明的益生菌微胶囊可以改善宿主肠道微环境，增强宿主的抗病能力，另外本发明通过喷雾冷冻干燥进行造粒制备微胶囊，不仅可以降低能耗，保证颗粒完整，提高包埋率，而且能够大大提高益生菌的存活率。

Description

一种益生菌微胶囊及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种微胶囊的制备方法，属于生物医药领域，具体地说是一种益生菌微胶囊及其制备方法和应用。
背景技术
微胶囊造粒技术，或称微胶囊技术，就是将固体、液体或气体物质包埋、封存在一种微型胶囊内成为一种固体微粒产品的技术，可以最大限度地保持原有的色、香、味、性能和生物活性，防止营养物质的破坏与损失，是一项比较新颖而又发展迅速的高新技术。这项技术已在制药、食品、饲料、精细化工、照相材料以及机械制造等领域得到应用。
发明内容
发明目的：针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的是提供一种益生菌微胶囊的制备方法。
技术方案：为实现上述发明的目的，本发明采用的技术方案是：一种益生菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1)混合益生菌菌剂的制备：将各种益生菌各自接种、发酵培养，使其发酵液活菌浓度达到108cfu/g获得菌液；将上述菌液按一定比例混合，离心后得到菌体沉淀，用5倍灭菌蒸馏水重悬菌体得到混合益生菌菌液备用；
2)中药提取液的制备：按石榴皮60～70％、槐树花20～30％、鸡内金10～20％粉碎并混合均匀，加入10倍的水，煎煮浓缩至1g中药1ml提取液，降温过滤待用；
3)均质：按70-85％混合益生菌菌液、5-10％益生元、5-10％中药提取液和5-10％脱脂奶粉混合，高速均质器进行混匀，得到芯材；将4％海藻酸钠、2％大豆蛋白或乳清蛋白加入蒸馏水中混合，加入芯材充分混匀得到乳化液；
4)干燥：将步骤3)收集的乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。
上述益生菌为酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
上述益生元为寡糖，包括果寡糖、甘露寡糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚壳聚糖、壳寡糖、菊粉中的一种或多种。
上述喷雾冷冻干燥的具体参数为：喷嘴口径：0.4mm，加料速率20ml/min，进风量为1200l/h，初始冷冻温度为-60℃。
上述喷雾冷冻干燥中从初始冷冻温度-60℃冷冻5h后在2h内逐渐升高为-50℃，然后在2h内升高到-30℃并维持20h，在2h内升温至0℃维持10h，然后再缓慢升温至10℃并维持10h即可得到微胶囊干粉颗粒。
上述的制备方法制备得到的益生菌微胶囊。
上述的益生菌微胶囊在制备饲料添加剂方面的应用。
有益效果：本发明制备方法中壁材包裹益生菌，海藻酸钠可以提高益生菌对胃蛋白酶等的耐受能力，蛋白质壁材可以提高益生菌对胃酸等的耐受能力，两者结合大大提高进入肠道的活菌数；芯材中的脱脂奶粉可以提高益生菌对环境的耐受力，减少生产加工和运输贮藏中益生菌的损失；芯材中的益生元可以刺激有益菌群的生长。该益生菌微胶囊可以改善宿主肠道微环境，增强宿主的抗病能力，另外本发明通过喷雾冷冻干燥进行造粒制备微胶囊，不仅可以降低能耗，保证颗粒完整，提高包埋率，而且能够大大提高益生菌的存活率。
具体实施方式
实施例1：含益生元和中药提取物的嗜酸乳杆菌与酿酒酵母混合微胶囊的制备
按石榴皮700g、槐树花200g、鸡内金100g粉碎并混合均匀，加入10L水，煎煮浓缩至1L，降温过滤待用。将嗜酸乳杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g，将酿酒酵母种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将7.5L混合益生菌菌液(终浓度为75％)、1L中药提取液(终浓度为10％)、1L浓度为1Kg/L的果寡糖的悬浊液(终浓度为10％)和0.5L浓度为1Kg/L脱脂奶粉的悬浊液(终浓度为5％)混合，高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀得到乳化液；将乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。喷雾冷冻干燥的具体参数为：喷嘴口径：0.4mm，加料速率20ml/min，进风量为1200l/h，初始冷冻温度为-60℃。喷雾冷冻干燥中从初始冷冻温度-60℃冷冻5h后在2h内逐渐升高为-50℃，然后在2h内升高到-30℃并维持20h，在2h内升温至0℃维持10h，然后再缓慢升温至10℃并维持10h即可得到微胶囊干粉颗粒。
对比例1：不含益生元和中药提取物的嗜酸乳杆菌与酿酒酵母混合微胶囊的制备
将嗜酸乳杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g，将酿酒酵母种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将10L混合益生菌菌液、500g脱脂奶粉混合,高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀，通过Equl微胶囊发生器，并滴加0.4mol/L CaCl2，固化35min，过滤收集微胶囊。
实施例2含益生元和中药提取物的嗜酸乳杆菌与屎肠球菌混合微胶囊的制备
按石榴皮700g、槐树花200g、鸡内金100g粉碎并混合均匀，加入10L水，煎煮浓缩至1L，降温过滤待用。将嗜酸乳杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g；将屎肠球菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将8L混合益生菌菌液(终浓度为8％)、0.75L中药提取液(终浓度为7.5％)、0.75L浓度为1Kg/L的果寡糖悬浊液(终浓度为7.5％)和0.5L浓度为1Kg/L脱脂奶粉悬浊液(终浓度为5％)混合,高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀得到乳化液；将乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。喷雾冷冻干燥的具体参数为：喷嘴口径：0.4mm，加料速率20ml/min，进风量为1200l/h，初始冷冻温度为-60℃。喷雾冷冻干燥中从初始冷冻温度-60℃冷冻5h后在2h内逐渐升高为-50℃，然后在2h内升高到-30℃并维持20h，在2h内升温至0℃维持10h，然后再缓慢升温至10℃并维持10h即可得到微胶囊干粉颗粒。
对比例2不含益生元和中药提取物的嗜酸乳杆菌与屎肠球菌混合微胶囊的制备
将嗜酸乳杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g；将屎肠球菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将10L混合益生菌菌液、500g脱脂奶粉混合,高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀，通过Equl微胶囊发生器，并滴加0.4mol/L CaCl2，固化40min，过滤收集微胶囊。
实施例3含益生元和中药提取物的枯草芽孢杆菌和屎肠球菌混合微胶囊的制备
按石榴皮600g、槐树花200g、鸡内金200g粉碎并混合均匀，加入10L水，煎煮浓缩至1L，降温过滤待用。将枯草芽孢杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g，将屎肠球菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将8L混合益生菌菌液(终浓度为8％)、0.5L中药提取液(终浓度为5％)、0.5L浓度为1Kg/L的果寡糖悬浊液(终浓度为5％)和1L浓度为1Kg/L脱脂奶粉悬浊液(终浓度为10％)混合,高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀得到乳化液；将乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。喷雾冷冻干燥的具体参数为：喷嘴口径：0.4mm，加料速率20ml/min，进风量为1200l/h，初始冷冻温度为-60℃。喷雾冷冻干燥中从初始冷冻温度-60℃冷冻5h后在2h内逐渐升高为-50℃，然后在2h内升高到-30℃并维持20h，在2h内升温至0℃维持10h，然后再缓慢升温至10℃并维持10h即可得到微胶囊干粉颗粒。
对比例3不含含益生元和中药提取物的枯草芽孢杆菌和屎肠球菌混合微胶囊的制备
将枯草芽孢杆菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min条件下，培养活菌浓度达到108cfu/g；将屎肠球菌种子液按1％的接种量接种发酵培养基，在37℃、100r/min培养活菌浓度达到108cfu/g，按1:1的比例将两种菌液混合离心，用5倍灭菌蒸馏水将所得菌体沉淀重悬。将10L混合益生菌菌液、500g脱脂奶粉混合,高速均质器进行混匀，得到芯材；将1200g海藻酸钠(终浓度为4％)、600g大豆蛋白(终浓度为2％)溶于30L蒸馏水中,加入芯材充分混匀，通过Equl微胶囊发生器，并滴加0.4mol/L CaCl2，固化40min，过滤收集微胶囊。
实施例4：
对实施例1～3和对比例1～3的微囊化产品进行对动物生长性能影响的评定测试。
以实施例1～3和对比例1～3的微胶囊作为饲料添加剂，以日粮重量的0.1％-0.2％添加到饲料中，以不加微胶囊的饲料作为空白对照。选择10公斤左右断奶杜长大三元杂交小猪70头，经10天保育过渡，随机分为7组，每组10头，其中1-3组对应实施例1-3，4-6组对应对比例1-3，第7组为空白对照组。日常管理按照常规方式进行，各组实验猪均自由采食，自由饮水，至第30天后停止，统计各项数据。结果如下：
表1微胶囊对动物生长性能的影响
结果显示：本发明制备的益生菌微胶囊制剂作为饲料添加剂添加到饲料中，可以提高仔猪的日增重，提高仔猪的免疫力，降低腹泻的发病率。在芯材中添加益生元和中药提取物，提高益生菌微胶囊制剂的效果。

Claims (7)

1.一种益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)混合益生菌菌剂的制备：将各种益生菌各自接种、发酵培养，使其发酵液活菌浓度达到108cfu/g获得菌液；将上述菌液按一定比例混合，离心后得到菌体沉淀，用5倍灭菌蒸馏水重悬菌体得到混合益生菌菌液备用；
2)中药提取液的制备：按石榴皮60～70％、槐树花20～30％、鸡内金10～20％粉碎并混合均匀，加入10倍的水，煎煮浓缩至1g中药1ml提取液，降温过滤待用；
3)均质：按70-85％混合益生菌菌液、5-10％益生元、5-10％中药提取液和5-10％脱脂奶粉混合，高速均质器进行混匀，得到芯材；将4％海藻酸钠、2％大豆蛋白或乳清蛋白加入蒸馏水中混合，加入芯材充分混匀得到乳化液；
4)干燥：将步骤3)收集的乳化液采用喷雾冷冻干燥进行处理得到微胶囊。
2.根据权利要求1所述的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述益生菌为酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述益生元为寡糖，包括果寡糖、甘露寡糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚壳聚糖、壳寡糖、菊粉中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述喷雾冷冻干燥的具体参数为：喷嘴口径：0.4mm，加料速率20ml/min，进风量为1200l/h，初始冷冻温度为-60℃。
5.根据权利要求4所述的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述喷雾冷冻干燥中从初始冷冻温度-60℃冷冻5h后在2h内逐渐升高为-50℃，然后在2h内升高到-30℃并维持20h，在2h内升温至0℃维持10h，然后再缓慢升温至10℃并维持10h即可得到微胶囊干粉颗粒。
6.权利要求1～5任一项所述的制备方法制备得到的益生菌微胶囊。
7.权利要求6所述的益生菌微胶囊在制备饲料添加剂方面的应用。
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