CN104428004A - 生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法和得到的产品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法，所述方法包括下述步骤：提供包含溶剂、生物活性蛋白和20%w/w至60%w/w之间的非聚合糖的水性组合物，冷冻所述组合物，由此形成至少一个包含冷冻形式的溶剂的冷冻体，将所述冷冻体在被支持物承载的同时放入干燥设备中，所述支持物包含一个或多个限制元件，所述限制元件限定所述支持物的一个或多个边界，其中所述体的至多30%的表面与所述一个或多个限制元件邻接，将所述干燥设备中的压力降至大气压以下，给所述体提供热，以便升华所述体的冷冻溶剂和得到干燥体。本发明也涉及可通过该方法得到的产品。

Description

生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法和得到的产品

发明领域

本发明属于生物活性蛋白保存领域，具体地为了储存目的。具体地，本发明涉及一种用于生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法，所述方法包括：通过在包含糖的保护基质中冷冻干燥来保存蛋白。本发明也涉及得到的产品，其具体地是被糖稳定化的包含蛋白的冷冻干燥体。

背景技术

生物活性蛋白(在本说明书中也简称为“蛋白”)当在固体介质或液体溶液中储存时通常是不稳定的。具体地，蛋白的二级和三级结构（其依赖于分子内的氢键）易于变性。由于二级和三级结构具体地导致蛋白结构的可识别的结构域，该结构的保持对于蛋白的生物学活性的保持而言经常是关键性的。完整生物体经常被复杂的基于脂质的膜和镶嵌蛋白包围，所述镶嵌蛋白通过其周围水溶液的性质在结构上稳定化，所述结构的理想性能包括低自由能状态。该低自由能状态难以达到，并且转换结构以及由生物体自身或伴随的宿主细胞产生的蛋白酶使得非常难以以液体形式稳定结构。经常使用冷冻干燥(冻干)过程来稳定生物活性蛋白，在该过程中，将水性组合物（通常包含水作为主要溶剂）冷冻，然后通过升华进行干燥。溶剂的除去和使用包含保护性分子（诸如糖分子）的基质的置换，可以通过防止该蛋白的降解和变性而增加蛋白的稳定性。

在冷冻干燥中，通常将蛋白与保护剂一起在水中混合为混悬液，冷冻，并通过升华和二次干燥进行脱水。冷冻的低温和升华干燥以及涉及的低表面/体积比可以需要长干燥时段。这样的长干燥时段可能导致对蛋白的结构损伤。增加干燥温度以缩短干燥时间经常不是一个选项，因为干燥温度必须保持显著低于保护基质的玻璃化转变温度。此外，高干燥温度固有地导致蛋白的生物学活性的损失。当使用非聚合糖作为保护剂时，产生一个特别的问题。如普遍已知的，非聚合糖非常适合用于稳定生物活性蛋白，但是它们具有以下固有缺点：得到的基质的玻璃化转变温度是相对较低的(通常低于100℃，经常在20-45℃之间)。具体地，当使用大量糖且冷冻体具有相当厚度(通常高于2 mm)时，这会导致在72-96小时范围内的非常长的干燥时间。具体地，当非聚合糖的量接近20%w/w时，得到的基质变浓厚，以致于干燥时间成指数地增加(因此，在本领域中，当目的在于均匀干燥体时，施加最多高达15-16%(w/w))。长干燥时间固有地导致蛋白的生物学活性的显著损失，且从制备观点看是非常没有吸引力的。

在本领域中，已经在US 5,565,318中提供了解决方案。该参考文献提出使用聚合糖(诸如葡聚糖或蔗聚糖)作为保护剂。由于这样的聚合糖的玻璃化转变温度通常高于非聚合糖的玻璃化转变温度(通常是200℃以上相对于100℃以下)，人们可以使用高得多的干燥温度来达到更短的干燥时间。但是，这样的聚合糖的稳定性能远远逊于非聚合糖的稳定性能。并且，达到更短干燥时间的更高干燥温度也可能导致在冷冻干燥过程本身中更高的生物活性蛋白降解和或变性速率。

在US 2010/0297231中，提供了一个替代解决方案，其中将包含生物活性蛋白和多元醇(其可以是非聚合糖诸如果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、核糖、鼠李糖、山梨醇、木糖醇等)的制剂膨胀成泡沫，此后将所述泡沫冷冻并干燥成稳定的干燥的泡沫组合物。由于所述泡沫包含2 mm或更小的厚度且表面/体积比非常高，即使用高百分比的非聚合糖也可以得到短干燥时间。该已知方法的一个缺点是，对于被加工的相对小量的活性物质而言，泡沫在冷冻干燥器中占据大量空间，并且，需要将泡沫研磨成粉末才能进一步使用，诸如通过吸入来施用，或用于得到预定量的干燥物质，所述干燥物质用于在液体中重构以实现在每天实践中的应用。另一个缺点是，通常在制剂中包含起泡剂。这会限制得到的产品的用途。

因此，生物活性蛋白的保存，尤其是实现使用最终产品的容易性（从而实现广谱应用和获得提供高保存性能的基质），仍然提出了一个重大挑战。本发明的一个目的是满足该挑战。

发明内容

为了达到本发明的目的，提供了一种用于生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法，所述方法包括下述步骤：提供包含溶剂、生物活性蛋白和20%w/w至60%w/w之间的非聚合糖的水性组合物，冷冻所述组合物，由此形成至少一个包含冷冻形式的溶剂的冷冻体，将所述冷冻体在被支持物承载的同时放入干燥设备中，所述支持物包含一个或多个限制元件，所述限制元件限定所述支持物的一个或多个边界，其中所述体的至多30%的表面与所述一个或多个限制元件邻接，将所述干燥设备中的压力降至大气压以下，和给所述体提供热(通常经由传导和/或辐射)，以便升华所述体的冷冻溶剂和得到干燥体。

令发明人惊奇的是，通过使用冷冻干燥技术（其基于从包含大量非聚合糖的组合物开始得到各个冷冻体，所述体被干燥从而确保它们的表面的更大部分不与容器的限制元件(诸如封闭的底或壁)邻接），人们可以在相对较短的时间（基本上低于72-96小时）内干燥所述体，尽管事实上表面/体积比远低于当施加泡沫时的比率，并且尽管事实上厚度可以甚至超过2 mm。目前认为，相对较大量的未与阻止升华的溶剂自由流出冷冻体的元件（例如典型冷冻干燥管形瓶的玻璃底和壁）邻接的表面，是得到这些高糖组合物的有利干燥结果所必需的。认识到这一点，显然，本发明不主要依赖于所述体的形式。例如，当使用立方体、棱锥体、砖块体、星形体、菱形体、tic-tac形体或任意其它形式时，当放在支持物上使得所述体的至多30%的表面与所述支持物的一个或多个限制元件邻接时，每个体的足够自由表面可供升华的溶剂离开所述体。

实际上，在现有技术（例如WO 2010/125087）中已知冷冻干燥技术，其中在冷冻体的大部分表面不与容器的限制元件邻接的同时，干燥所述冷冻体。但是，该参考文献没有公开从包含至少20%w/w的非聚合糖的溶液开始冷冻干燥包含生物活性蛋白的组合物。对于除了生物活性蛋白以外的化合物而言，特别是对于稳定的(小)分子而言，通过增加冷冻溶剂的升华所需的热的量，可以得到快速的干燥时间，因为变性经常不是问题。但是，对于生物活性蛋白而言，这不是一个选项。因此，通常，当干燥从包含生物活性蛋白的冷冻水性溶剂构成的体时，使用具有3-10%w/w的非聚合糖的溶剂。

本发明也体现在包含生物活性蛋白的、基本上均匀的冷冻干燥体形式的医学产品中，所述冷冻干燥体具有50-1000μl之间的体积，所述蛋白分散在非聚合糖的固体基质中，其特征在于，所述体包含约21-72%w/v之间的所述糖。最终干燥体中的21-72%w/v对应于开始水性组合物中的约20-60%w/w的糖(其可以使用用于计算糖在水中的溶液的近似密度的公式进行计算：密度≈0.3723×(以克/升为单位的糖浓度) + 1002.2)。该体可以个别地操作，在作为医学产品实际应用之前不需要碾磨或其它形式的再加工，且非常适合于在基质中存在高密度的非聚合糖的情况下保存生物活性蛋白。优选地，所述体是球状体。

定义

生产：为将来使用而提供，例如用在实验室中，用在工厂中，作为中间产物，或用于由消费者(最终用户)使用。生产包括制备，即以受控的可重复方式生产，以提供较大量的相同产品。

医学产品：可以用于预防、治疗或治愈活生物体（特别是人类或非人动物）的疾病或病症的任何产品。

生物活性蛋白：任何蛋白，其具有三维结构，使得所述蛋白能够诱导或干扰活生物体中的生理学过程，诸如代谢过程或免疫学过程。术语生物活性蛋白可以表示全长蛋白或其片段。生物活性蛋白的例子是酶、毒素、类毒素、任何(其它)免疫学蛋白(例如微生物的表面蛋白或其片段)、抗体或其片段等。疫苗通常含有一种或多种生物活性蛋白，无论是作为活的或杀死的微生物的一部分，还是作为这样的微生物的分离的或重组表达的亚基。

溶剂: 任何载体流体，所述流体适合用于溶解和/或分散要运载的物质。

%w/w：相对于组合物的总质量的质量百分比。

%w/v：相对于组合物的总体积的质量百分比。

糖：具有相对较低分子量且通常具有甜味的水溶性碳水化合物的群组中的任一种。术语糖包括还原糖(诸如果糖和麦芽糖)、非还原糖(诸如蔗糖和海藻糖)、糖醇(诸如木糖醇和山梨醇)和糖酸(诸如葡糖酸和酒石酸)。

非聚合糖: 单体、二聚体、三聚体和寡聚体糖分子，其包含至多6个单体糖分子。

体：具有一定体积，使得它可以个别地用手(手工地)操作，通常具有等于或超过50μl的体积(这等于具有约2 mm的半径的球体)。优选地，它足够小以用作施用给动物(术语“动物”包括人类)的片剂，具体地具有小于2000μl的体积。优选地，所述体的体积是在50μl至1500μl之间，通常低于1000μl，尤其是在75μl至750μl之间，更尤其是在100μl至500μl之间。

干燥的: 小于5%的残留水分，尤其是小于4?、4、3?、3、2?、2%、1?%或1%的残留水分。

限制元件: 构成限制表面的实际元件，所述限制表面在限定支持元件的边界中起作用。通常，限制元件是容器的封闭(延续)底、侧壁或盖子。但是，它也可以是支持丝架或网格壁架的接线。

邻接: 共享边界。

球状体：形状像球、但是不一定是完美球形的体。例如，它可以是扁球体，扁长体，部分地由球体组成且部分地由扁球或扁长体组成的体，具有一个或多个凹痕、边框或其它不规则形状的球体，以上的组合等。

本发明的实施方案

在一个实施方案中，在小于48小时内使冷冻溶剂升华。优选地选择热流，使得在48小时内干燥所述体。这会显著减少生物活性蛋白处于相对较高的干燥温度的时间。令人惊奇地，在当前的方案中，可以在没有显著损失蛋白活性的情况下得到如此短的干燥时间。优选地，在小于36小时中，或甚至在16-24小时中，使冷冻溶剂升华。与用于干燥包含生物活性蛋白和至少20%w/w的非聚合糖的体的现有技术冷冻干燥方法相比，这是非常短的干燥时间。

在另一个实施方案中，所述体的至多20%，优选地甚至至多10%的表面与支持物的一个或多个限制元件邻接。通过使更多表面可供溶剂的自由升华(通过使所述体的更少表面与支持物的限制元件邻接)，似乎可以进一步缩短干燥时间，同时保留蛋白的生物学活性。

优选地，所述冷冻体是球状体，使得与支持物的限制元件邻接的所述体的表面的百分比通常低于3%，或甚至接近0%。在另一个实施方案中，所述球状体具有在50μl至1000μl之间的体积，该体积接近在2-6 mm之间的球状体半径(取决于球状体的形状)。

在一个实施方案中，其中所述支持物的限制元件是底板，所述体被提供成躺在该底板上，且所述支持物是开放的以允许辐射自由地穿过到达所述底板，通过从存在于所述支持物上方的干燥设备中的辐射源发射热辐射而提供所述热的至少一部分，以达到所述冷冻体。已经发现，当通过辐射提供热(至少部分地)时，可以实现含高糖的体的适当干燥。辐射具有以下优点：它不依赖于导热材料来传递热。

在另一个实施方案中，与普通冷冻干燥方法一致，经由与所述冷冻体邻接的限制元件通过热传导提供所述热的至少一部分。尽管事实上在当前方法中所述体的至多30%的表面与支持物的限制元件邻接(直到甚至低至1-3%的数字)，而在现有技术方法中，这通常超过50%，这似乎足以给所述体提供适当的热流。

在另一个实施方案中，其中所述支持物的限制元件是底板，所述体被提供成躺在该底板上，且所述支持物是开放的以允许辐射自由地穿过到达所述底板，通过从存在于所述支持物上方的干燥设备中的辐射源发射热辐射而提供所述热，以与经由与所述冷冻体邻接的限制元件的热传导组合地到达所述体(从EP 2249810已知的方案)。已经证实，通过传导和辐射实现的组合热流非常适合用于干燥这样的体：所述体的相对较低百分比与支持物接触。

在一个实施方案中，所述水性组合物中的糖的量选自以下范围：20-55%w/w、20-50%w/w、20-45%w/w、25-45%w/w、25-40%w/w、25-35%w/w和27-30%w/w。优选地，糖的量高于25%w/w，通常为约27%w/w。

在一个实施方案中，所述糖包含单体和/或二聚体分子，具体地选自葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇和木糖醇。

在一个实施方案中，其中所述支持物的限制元件是底板，当在干燥时多个冷冻体以单层形式位于所述底板上。以此方式，可以以高效方式干燥大量冷冻体。

在另一个实施方案中，所述干燥体中的残余含水量小于2%w/w，通常在0.5-2%w/w之间，例如在1-2%w/w之间。

将使用下述实施例和附图更详细地解释本发明。

图1示意地显示了第一类支持物，即玻璃瓶，其装有冷冻的球状体或液体组合物，它们在装入所述支持物中以后冷冻。

图2示意地显示了在低压冻干设备中的干燥方案。

图3示意地显示了在低压冻干设备中的一个替代干燥方案。

图4示意地显示了在低压冻干设备中的另一个替代干燥方案。

实施例1是冷冻干燥高糖组合物的第一个实施例。

实施例2是冷冻干燥高糖组合物的第二个实施例。

实施例3是冷冻干燥高糖组合物的第三个实施例。

实施例4是冷冻干燥高糖组合物的第四个实施例。

实施例5是冷冻干燥高糖组合物的第五个实施例。

实施例6提供了根据本发明的医学产品的稳定性数据。

图1

图1示意地显示了第一类支持物，即玻璃瓶，其装有冷冻的球状体或液体组合物，它们在装入所述支持物中以后冷冻。该图描绘了第一玻璃瓶(1)，其装有约15个每个为约110μl的冷冻球体(5)。该图还描绘了第二玻璃瓶(1’)，其装有1.5 ml液体组合物，所述液体组合物已经被冷冻以形成一个冷冻块(6)。

图2

图2示意地显示了在低压冻干设备(设备作为整体没有显示)中的干燥方案。该图描绘了承载管形瓶1和1’的架子(10)。管形瓶1装有冷冻球体5，且管形瓶1’装有冷冻液体块(6)。可以通过内装的电加热器(未显示)来加热架子。

图3

图3示意地显示了在低压冻干设备中的一个替代干燥方案。在该方案中，将管形瓶放在升高的支持物(20)上，所述支持物(20)与被加热的架子(10)基本上热绝缘。以此方式，所述管形瓶将基本上不通过在架子(10)中产生的热传导来接收热。在管形瓶上方存在第二个加热的架子(10’)，该架子提供有黑色涂层(11)。该黑色涂层会使该架子充当良好辐射源，向管形瓶发射热辐射12 (主要是红外光)。

图4

图4示意地显示了在低压冻干设备中的另一个替代干燥方案。该方案使用2个架子，一个加热的架子10充当第一热源，且一个加热的架子10’充当第二热源(通过黑色涂层11，其为架子10’的底提供辐射表面，对应于图3中所示的方案)。开放容器15和15’站立在第一架子10上。容器15装有冷冻球体(5)的单层，而第二容器15’装有冷冻液体(6’)。

实施例1-5是原理验证实施例，表明使用根据本发明的方法，可以在合理快的干燥周期内得到基本上均匀的干燥体，尽管事实上超过20%w/w的非聚合糖存在于最初水性组合物中。对于这些实施例，使用30%蔗糖(w/v)在水中的简单溶液(其接近27%w/w)。使用该水性组合物的一部分来制备具有大约100μl体积的冷冻球体。为此，使用在WO 2010/125084中描述的方法，具体地是在第20页第33行至第21页第2行提及的方法(结合相同国际申请的图1、2、3和4)。如下所述在实施例中使用所述冷冻球体。

在实施例1中，给第一组3个具有大约20 mm直径的10 ml玻璃低压冻干管形瓶(1)装入约15个球体(5)，相当于约1.5 ml最初水性组合物。在管形瓶中，这产生约1?层的球体。在该方案中，低于10%的冷冻球体表面(约1-3%)与支持管形瓶的一个或多个壁(限制元件)邻接。给第二组3个对应管形瓶(1’)装入1.5 ml如上文所述的液体组合物，此后将液体冷冻。以此方式，约60%的冷冻体表面与支持管形瓶的一个或多个壁邻接。在图1中示意地显示了得到的填充管形瓶。

将这些管形瓶放在标准低压冻干设备中的架子上，所述设备的主要部分示意地显示在图2中，所述设备已经预先达到约-45℃的温度。对该低压冻干机进行下述冷冻干燥循环(表1)。

如在表1中所见，给架子装载经填充的容器以后，首先将架子(10)在-45℃的温度保持1分钟(“冷冻”阶段)。由此使冷冻体达到-45℃的温度。将压力保持在大气压。然后，在将架子的温度保持在-45℃的同时，将压力降低至0.04毫巴(“初步升华”)。在这些条件下，冷冻的液体已经升华，并且通过经由架子的传导给丸粒供热。但是，在这些条件下，升华速度相对较慢。为了增加升华速度，使架子达到35℃的温度(“升华”)，并在该温度保持约22小时(共1333分钟，如在“升华”下指示的)。将压力保持在0.04毫巴的低值。此后，升华过程结束，并且多达约98%的冷冻的液体已经离开冷冻体，由此转化成干燥体。然后，将具有约20℃温度的干燥氮气引入低压冻干机中直到压力为约大气压。这进行约2分钟。然后，可以打开门取出管形瓶。

在约22小时的干燥时间内，球体通常是干燥的且呈良好形状，在某些点处存在一些不显著的不完全干燥。但是，在第二组管形瓶中，冷冻体已经变成一大堆泡沫和糖浆状液体。

在实施例2中，使用与在实施例1中所用相同的低压冻干设备，但是给在承载管形瓶的架子上方的架子的底提供黑色PTFE (聚四氟乙烯)板。通过该黑色板和架子之间的亲密接触，该板被温热至与架子本身基本上相同的温度，并因此充当辐射热源。由于管形瓶的玻璃壁将吸收和反射大部分辐射，仍然仅小部分辐射将直接到达冷冻体。在WO 2010/125084中，结合该参考文献的图5，描述了一个可比较的方案。可以如下改善干燥性能：不仅通过站立在架子上的管形瓶的传导，而且通过来自上方架子的辐射，给管形瓶供给热流。仍然，仅仅对于球体而言，这导致改善的干燥结果，即所述球体可以在约20小时内干燥。但是，液体填充的管形瓶仍然导致非常差的不均匀的干燥结果。

在实施例3中，使用结合实施例2描述的低压冻干方案，但是如下基本上排除经由传导的热流：将管形瓶放在升高的支持物上，保持所述管形瓶与承载它们的架子基本上绝缘。该方案显示在图3中。通过选择该方案，基本上完全通过来自上方架子的辐射得到通向冷冻体的所需的热流。在下面的表2中显示了干燥周期，其现在包括所述材料从液体实际冷冻成固体冷冻体。

这样在大约相同的干燥时间中得到与结合实施例1描述的相同的干燥结果。

在下一个实施例——实施例4中，设法得到如在实施例1所述的第二组管形瓶中存在的所述体的适当好的干燥结果。将这些管形瓶放在相同低压冻干设备的架子上，因而仅使用通过经由架子的传导实现的热流。使用根据表3的干燥周期，这导致超过76小时的长干燥时间。

尽管与实施例1的结果相比得到了显著改善的干燥结果，但是得到的干燥体仍然具有大量熔化的区域、深裂缝和一些泡沫。这意味着，将需要甚至更长的干燥时间才能达到与使用根据本发明的方法可得到的结果相当的干燥结果。

在实施例5中，将另一类支持物用于干燥冷冻体(参见图4)。该支持物是开放容器(15, 15’)，其具有约20 cm的宽度、约30 cm的长度和约4 cm的高度。该容器由导热塑料材料（在该情况下，填充了炭黑的聚对苯二甲酸乙二醇酯）制成。可以将容器放置成与它们安置在其上面的架子导热接触。这样的容器与标准冷冻干燥管形瓶相比的差异是，这样的容器是完全开放的，且因而允许辐射自由地传递至所述容器的底板以到达冷冻材料。在图4所示的布置中，一个容器15装有冷冻球体5的单层，另一个容器15’装有含蔗糖组合物的冷冻层6’(具有约5?mm的厚度)。该干燥方案是结合实施例2描述的方案。通过加热架子，冷冻体可以经由加热的容器的底和侧壁和通过来自加热的上方架子的辐照而接收热。使用如表4所示的干燥周期来干燥冷冻材料。

该干燥周期的结果是，各个球体被很好地干燥，具有良好形状，且基本上不具有不完全干燥点。但是，冷冻蔗糖组合物的层被不均匀地干燥，具有大量不完全干燥和泡沫。

实施例6提供了包含生物活性蛋白的医学产品的一些实施方案，它们使用根据本发明的方法，尤其是在上文中结合实施例2描述的方法得到。第一种产品(被称作“CDV”)是冻干球体形式的疫苗，通过将一个或多个球体重新悬浮于注射用水中，所述冻干球体可以用于配制注射用疫苗。每个球体（具有大约100μl的体积）含有约7 (TCID50的log10)的滴度的活减毒犬瘟热病毒。该产品使用10 mM KPO₄缓冲液以两种都在pH 7.2的形式得到，根据现有技术的第一种形式具有3.7%(w/w)的蔗糖作为稳定剂(和另外，0.8%w/v明胶和1.0%w/v NZ胺作为填充剂)，且第二种形式具有21.4%(w/w)的非聚合糖(15.3%(w/w)蔗糖和6.1%(w/w)海藻糖)作为稳定剂(另外5.2%w/v精氨酸、0.8%w/v明胶和1.0%w/v NZ胺作为填充剂)。对这些球体进行试验，其中将球体在45℃储存至多4周。在储存1、2和4周以后，确定得到的滴度。在表5中指示了结果。

表5          在45℃储存以后CDV球体的滴度

第二种产品(被称作“CPI”)也是冻干球体形式的疫苗，通过将一个或多个球体重新悬浮于注射用水中，所述冻干球体可以用于配制注射用疫苗。每个球体（具有大约100μl的体积）含有约7 (TCID50的log10)的滴度的活减毒犬副流感病毒。该产品以两种形式得到，根据现有技术的第一种形式具有3.7%(w/w)的蔗糖作为稳定剂，且第二种形式具有21.4%(w/w)的非聚合糖作为稳定剂(二者都如上文中所示)。对这些球体进行试验，其中将球体在45℃储存至多4周。在储存1、2和4周以后，确定得到的滴度。在表6中指示了结果。

表6          在45℃储存以后CPI球状体的滴度

第三种产品(被称作“CAV2”)也是冻干球体形式的疫苗，通过将一个或多个球体重新悬浮于注射用水中，所述冻干球体可以用于配制注射用疫苗。每个球体（具有大约100μl的体积）含有约5 (TCID50的log10)的滴度的活减毒犬2型腺病毒。该产品以两种形式得到，根据现有技术的第一种形式具有3.7%(w/w)的蔗糖作为稳定剂，且第二种形式具有22.8%(w/w)的蔗糖作为稳定剂。对这些球体进行试验，其中将球体在45℃储存至多4周。在储存1、2、3和4周以后，确定得到的滴度。在表7中指示了结果。

表7  在45℃储存以后CAV2球体的滴度

用超过20%w/w的不同非聚合糖混合物，重复使用CPi、CAV2和CDV抗原的以上实验，以观察是否可以得到可比较的结果。在该实验中，稳定剂含有在10 mM KPO4缓冲液（pH 7.2）中的21.6%(w/w)的非聚合糖(6.1%(w/w)蔗糖和15.5%(w/w)海藻糖)。填充剂与在其它实验中相同(5.2%w/v精氨酸、0.8%w/v明胶和1.0%w/v NZ胺)。再次对球体进行试验，其中将球体在45℃储存至多4周。在储存1、2和4周以后，确定得到的滴度。结果显示在表8中。用该稳定剂可以得到与前述制剂等同的结果。

Claims (19)

1. 一种用于生产包含生物活性蛋白的医学产品的方法，所述方法包括下述步骤：

- 提供包含溶剂、生物活性蛋白和20%w/w至60%w/w之间的非聚合糖的水性组合物，

- 冷冻所述组合物，由此形成至少一个包含冷冻形式的溶剂的冷冻体，

- 将所述冷冻体在被支持物承载的同时放入干燥设备中，所述支持物包含一个或多个限制元件，所述限制元件限定所述支持物的一个或多个边界，其中所述体的至多30%的表面与所述一个或多个限制元件邻接，

- 将所述干燥设备中的压力降至大气压以下，

- 给所述体提供热，以便升华所述体的冷冻溶剂和得到干燥体。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷冻溶剂在小于48小时中升华。

3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述冷冻溶剂在小于36小时中升华。

4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述冷冻溶剂在16-24小时中升华。

5. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于，所述体的至多20%的表面与所述支持物的一个或多个限制元件邻接。

6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述体的至多10%的表面与所述支持物的一个或多个限制元件邻接。

7. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于，所述冷冻体是球状体。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述球状体具有在50μl至1000μl之间的体积。

9. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中所述支持物的限制元件是底板，所述体被提供成躺在该底板上，且所述支持物是开放的以允许辐射自由地穿过到达所述底板，其特征在于，通过从存在于所述支持物上方的干燥设备中的辐射源发射热辐射而提供所述热的至少一部分，以达到所述冷冻体。

10. 根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其特征在于，经由与所述冷冻体邻接的限制元件通过热传导，提供所述热的至少一部分。

11. 根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述支持物的限制元件是底板，所述体被提供成躺在该底板上，且所述支持物是开放的以允许辐射自由地穿过到达所述底板，其特征在于，通过从存在于所述支持物上方的干燥设备中的辐射源发射热辐射，提供所述热，以与经由与所述冷冻体邻接的限制元件的热传导组合地到达所述体。

12. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于，所述水性组合物中的糖的量选自以下范围：20-55%w/w、20-50%w/w、20-45%w/w、25-45%w/w、25-40%w/w、25-35%w/w和27-30%w/w。

13. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于，所述糖包含单体和/或二聚体分子。

14. 根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述糖包含葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇和/或木糖醇。

15. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中所述支持物的限制元件是底板，其特征在于，当在干燥时多个冷冻体以单层形式位于所述底板上。

16. 根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于，所述干燥体中的残余含水量小于2%w/w。

17. 一种包含生物活性蛋白的、基本上均匀的冷冻干燥体形式的医学产品，所述冷冻干燥体具有50-1000μl之间的体积，所述蛋白分散在非聚合糖的固体基质中，其特征在于，所述体包含约21-72%w/v之间的所述糖。

18. 根据权利要求17所述的体，其特征在于，所述体是球状体。

19. 一种包含生物活性蛋白的、基本上均匀的冷冻干燥体形式的产品，所述冷冻干燥体具有50-1000μl之间的体积，所述体可通过根据权利要求1-16中的任一项所述的方法得到。