CN104404005A - 禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 - Google Patents
禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104404005A CN104404005A CN201410811399.1A CN201410811399A CN104404005A CN 104404005 A CN104404005 A CN 104404005A CN 201410811399 A CN201410811399 A CN 201410811399A CN 104404005 A CN104404005 A CN 104404005A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- avian influenza
- influenza virus
- gene
- recombinant adenovirus
- plasmid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法创新性的利用质粒pCAGGS、腺病毒穿梭质粒pShuttle、腺病毒骨架质粒pAdEasy-1等,经一系列中间过程,得到基因表达质粒等中间产物,将最后得到的重组腺病毒质粒转染293细胞;根据腺病毒感染形成的细胞病变及特异细胞免疫组化筛选重组病毒。该方法以CAG为启动子表达目的基因,显著提升了目的基因的表达水平,同时利用该方法构建的分别表达H5N1与H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白重组腺病毒,为H5、H9亚型禽流感病毒双价核酸疫苗的研制提供病毒模型,也为AIV腺病毒活载体疫苗的研制奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及疫苗技术领域,具体涉及禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法。
背景技术
禽流感(Avian influenza)于1878年首发于意大利,后证实是由A型流感病毒引起。之后,禽流感不仅给畜牧业带来巨大的经济损失,而且严重威胁到人类的健康和生命。目前已有多个国家出现H5N1亚型禽流感病毒感染人的情况。在2005年10月,我国安徽省发生首例确证的人感染H5N1亚型禽流感病毒病例,并分离到我国首株人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005。2011年12月31日,我国深圳一人感染高致病性禽流感病毒并死亡。虽然深圳市疾控中心宣布此毒株不会人传染人,但是世界卫生组织证实了禽流感病毒在某些条件下可以以人传染人方式传播。所以,研制新型高效、安全的禽流感疫苗已成为病毒学工作者的重要任务。
目前,主要是通过接种疫苗来预防该病的发生。常规灭活疫苗对该病的免疫效果不佳,而弱毒疫苗则存在潜在的生物安全问题。因此,开发新型、高效、廉价、安全的疫苗势在必行。随着分子生物学技术的飞速发展,学者们不断进行着新型基因工程流感疫苗的研究。
现有技术中,无论制备核酸疫苗还是制备其他基因工程疫苗,相关抗原的制备都是必要技术条件。HA蛋白为AIV的表面糖蛋白,病毒感染后能够诱导机体产生特异性抗HA蛋白的抗体,该抗体具有病毒中和作用,因此,HA基因在流感病毒基因工程疫苗中被作为重要的靶抗原。
然而仅仅确定HA蛋白或HA蛋白表达基因作为抗原只是从基础角度确定可用的抗原类别。在此基础上如何开发一种表达稳定、安全性高的HA蛋白(或HA基因)表达系统成为了成功开发相关疫苗的技术关键。此外,如果该表达系统能够共表达多种AIV病毒亚型抗原将为制备禽流感病毒多价疫苗奠定了良好的技术基础。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷,提供一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,以解决现有技术中HA基因表达系统表达效率较低的技术问题。
本发明解决的另一技术问题是现有技术中无法以一个表达系统共表达多种病毒亚型抗原的技术问题。
为实现以上技术目的,本发明采用以下技术方案:
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
在此基础上,所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
优选的,所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的:将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接,而后将连接产物导入大肠杆菌扩增,而后提取重组质粒,而后酶切得到CAG-HA基因片段。
优选的,所述禽流感病毒HA基因有两种,分别是H5N1型禽流感病毒HA基因和H9N2型禽流感病毒HA基因,先完成其中一种禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体的连接,而后再与另一种禽流感病毒HA基因片段连接。在该优选方案中连接得到的产物结构为-CAG-HA(H5N1)-CAG-HA(H9N2)-。
在以上任一技术方案基础上可以执行以下优选:
步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒;
步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌。
步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌。
步骤2)所述的腺病毒骨架质粒是腺病毒骨架质粒pAdEasy-1。
步骤2)所述的单酶切是利用Pme I酶实现的。
步骤3)所述的293细胞为AD293细胞。
步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
CAG启动子是人工构建的组合启动子,由巨细胞病毒早期增强子(earlyenhancer element)和鸡β-肌动蛋白(chicken beta-actin)启动子组成,本发明以CAG为启动子表达目的基因,显著提升了目的基因的表达水平。
与此同时本发明构建一株分别表达H5N1与H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白重组腺病毒,为H5、H1亚型禽流感病毒双价核酸疫苗的研制提供病毒模型,也为AIV腺病毒活载体疫苗的研制奠定基础。本发明方法采用第三代腺病毒载体,由于该载体缺失全部的腺病毒蛋白编码序列,因此感染后没有病毒蛋白表达,降低了机体的免疫反应和细胞毒性,提高了安全性。
本发明创新性的利用质粒pCAGGS、腺病毒穿梭质粒pShuttle、腺病毒骨架质粒pAdEasy-1等,经一系列中间过程,得到基因表达质粒等中间产物,将最后得到的重组腺病毒质粒转染293细胞;根据腺病毒感染形成的细胞病变及特异细胞免疫组化筛选重组病毒,用PCR鉴定该重组腺病毒。该重组腺病毒为H5、H9亚型禽流感病毒双价核酸疫苗的研制提供病毒模型,也为进一步研究开发基因工程疫苗奠定了基础。
附图说明
图1是本发明重组腺病毒穿梭载体PCR鉴定结果,M:DL8000;
图2是本发明重组腺病毒质粒酶切(Pac I)鉴定结果,M:DL15000,其中PacI酶切除特异4.5kb片段,证明重组成功;
图3是本发明重组腺病毒PCR鉴定结果,M:DL2000;其中1号代表HA(H5N1),2号代表HA(H9N2),3号为对照试验;
图4是本发明重组腺病毒二次接种AD293细胞结果,其中A是阴性对照B细胞病变;
图5是本发明重组腺病毒电镜观察结果。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节,在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述,表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此,用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中,“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10%)的范围内变化,比如,“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外,在“大约第一数值到第二数值”的表述中,大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下,近似性语言可能与测量仪器的精度有关。
除有定义外,以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
以下实施例中所用的试验试剂耗材,如无特殊说明,均为常规生化试剂;所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值;以下实施例中的%,如无特别说明,均为质量百分含量。
实施例1
目的基因引物设计及重组穿梭载体构建根据GenBank数据库提供的H5N1和H9N2亚型AIV HA1核酸序列设计引物,并在HA基因上、下游分别引入限制性酶切位点。将HA与经内切酶Sal I和Xho I双酶切后线性化的pShuttle载体连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定(上海生工公司进行测序分析)。鉴定阳性克隆的引物序列:
F:5'-ACGCGTCGACAAAATGAAGGCAATACTAGTGTT-3'
R:5'-CGCTCGAGGGGCCCTGGGTTGGACTCGACGTCGCCGGCCAACTTGAG-3'
PCR反应循环条件:95℃预变性1min;95℃变性30s,60℃退火40s,72℃延伸50s(30个cycles);最后72℃延伸10min。
将鉴定正确的重组载体经Xho I和Xba I线性化后与H9连接,转化DH5α感受态,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定(上海生工公司进行测序分析)。鉴定阳性克隆的引物序列:
F:5'-ACGCGTCGACAAAATGAAGGCAATACTAGTGTT-3',
R:5'-GCTCTAGAGCTCAGCCTCTAGTTTGTTTCT-3'
PCR反应循环条件:95℃预变性1min;95℃变性30s,59℃退火40s,72℃延伸90s(30个cycles);最后72℃延伸10min。
实施例2
重组腺病毒质粒的构建及重组腺病毒的获得,将重组腺病毒穿梭质粒用限制性内切酶Pme I线性化、纯化回收后,转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组。Kan抗性筛选后提取质粒,对提取后的质粒用Pac I进行酶切鉴定和PCR鉴定。为了获得大量高质量的重组质粒,将筛选的阳性重组腺病毒质粒转化于宿主菌DH5α扩增。
实施例3
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
同时:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
在以上技术方案的基础上,所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的:将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接,而后将连接产物导入大肠杆菌扩增,而后提取重组质粒,而后酶切得到CAG-HA基因片段;其中所述禽流感病毒HA基因有两种,分别是H5N1型禽流感病毒HA基因和H9N2型禽流感病毒HA基因,先完成其中一种禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体的连接,而后再与另一种禽流感病毒HA基因片段连接。
在以上技术方案的基础上:步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒;步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌;步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌;步骤2)所述的腺病毒骨架质粒是腺病毒骨架质粒pAdEasy-1;步骤2)所述的单酶切是利用Pme I酶实现的;步骤3)所述的293细胞为AD293细胞;步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
实施例4
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
同时:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
在以上技术方案的基础上,所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的:将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接,而后将连接产物导入大肠杆菌扩增,而后提取重组质粒,而后酶切得到CAG-HA基因片段;其中所述禽流感病毒HA基因有两种,分别是H5N1型禽流感病毒HA基因和H9N2型禽流感病毒HA基因,先完成其中一种禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体的连接,而后再与另一种禽流感病毒HA基因片段连接。
在以上技术方案的基础上:步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒;步骤2)所述的腺病毒骨架质粒是腺病毒骨架质粒pAdEasy-1;步骤3)所述的293细胞为AD293细胞。步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
实施例5
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
同时:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
在以上技术方案的基础上,所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的:将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接,而后将连接产物导入大肠杆菌扩增,而后提取重组质粒,而后酶切得到CAG-HA基因片段。
在以上技术方案的基础上:步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒;步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌;步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌;步骤3)所述的293细胞为AD293细胞。
实施例6
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
同时:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
在以上技术方案的基础上:步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌;步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌;步骤2)所述的单酶切是利用Pme I酶实现的;步骤3)所述的293细胞为AD293细胞;步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
实施例7
一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
同时:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
以上对本发明的实施例进行了详细说明,但所述内容仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上,将连接产物导入大肠杆菌中扩增,而后提取重组腺病毒穿梭质粒;
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组,而后提取重组腺病毒质粒;
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞,包装,即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒;
其特征在于:所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
2.根据权利要求1所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的:将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接,而后将连接产物导入大肠杆菌扩增,而后提取重组质粒,而后酶切得到CAG-HA基因片段。
3.根据权利要求2所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于所述禽流感病毒HA基因有两种,分别是H5N1型禽流感病毒HA基因和H9N2型禽流感病毒HA基因,先完成其中一种禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体的连接,而后再与另一种禽流感病毒HA基因片段连接。
4.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒。
5.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌。
6.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌。
7.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤2)所述的腺病毒骨架质粒是腺病毒骨架质粒pAdEasy-1。
8.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤2)所述的单酶切是利用Pme I酶实现的。
9.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤3)所述的293细胞为AD293细胞。
10.根据权利要求1~3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410811399.1A CN104404005A (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410811399.1A CN104404005A (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104404005A true CN104404005A (zh) | 2015-03-11 |
Family
ID=52641674
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410811399.1A Pending CN104404005A (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104404005A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106215184A (zh) * | 2016-08-04 | 2016-12-14 | 肇庆大华农生物药品有限公司 | 一种h7亚型重组禽流感病毒活载体疫苗毒种的制备方法 |
CN106729694A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-05-31 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种ⅰ群4型禽腺病毒dna疫苗及其应用 |
CN109136199A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-04 | 青岛农业大学 | 一种表达h5亚型ha的复制缺陷型重组h9n2禽流感病毒 |
CN109134624A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-01-04 | 天康生物股份有限公司 | 禽流感病毒血凝素抗原及其制备方法、应用和禽流感疫苗 |
CN112111503A (zh) * | 2020-08-24 | 2020-12-22 | 河北省动物疫病预防控制中心 | 同时预防禽流感h5和h9亚型的腺病毒载体二价苗及其制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1934260A (zh) * | 2004-01-22 | 2007-03-21 | 株式会社载体研究所 | 利用含有巨细胞病毒增强子和鸡β-肌动蛋白启动子的杂合启动子制造负链RNA病毒载体的方法 |
CN101193655A (zh) * | 2005-04-11 | 2008-06-04 | 美国政府健康及人类服务部,疾病控制和预防中心 | 抗大流行性流感病毒株的疫苗 |
CN101812478A (zh) * | 2009-12-29 | 2010-08-25 | 中国人民解放军第四军医大学 | 用于提高汉坦病毒融合蛋白g1s0.7表达的腺病毒高表达载体 |
-
2014
- 2014-12-22 CN CN201410811399.1A patent/CN104404005A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1934260A (zh) * | 2004-01-22 | 2007-03-21 | 株式会社载体研究所 | 利用含有巨细胞病毒增强子和鸡β-肌动蛋白启动子的杂合启动子制造负链RNA病毒载体的方法 |
CN101193655A (zh) * | 2005-04-11 | 2008-06-04 | 美国政府健康及人类服务部,疾病控制和预防中心 | 抗大流行性流感病毒株的疫苗 |
CN101812478A (zh) * | 2009-12-29 | 2010-08-25 | 中国人民解放军第四军医大学 | 用于提高汉坦病毒融合蛋白g1s0.7表达的腺病毒高表达载体 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GARG S等: "The hybrid cytomegalovirus enhancer/chicken β-actin promoter along with woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element enhances the protective efficacy of DNA vaccines.", 《J IMMUNOL.》 * |
王寿山: "表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及免疫效力研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106215184A (zh) * | 2016-08-04 | 2016-12-14 | 肇庆大华农生物药品有限公司 | 一种h7亚型重组禽流感病毒活载体疫苗毒种的制备方法 |
CN106729694A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-05-31 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种ⅰ群4型禽腺病毒dna疫苗及其应用 |
CN109136199A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-04 | 青岛农业大学 | 一种表达h5亚型ha的复制缺陷型重组h9n2禽流感病毒 |
CN109136199B (zh) * | 2018-09-14 | 2020-02-07 | 青岛农业大学 | 一种表达h5亚型ha的复制缺陷型重组h9n2禽流感病毒 |
WO2020052035A1 (zh) * | 2018-09-14 | 2020-03-19 | 青岛农业大学 | 一种表达h5亚型ha的复制缺陷型重组h9n2禽流感病毒 |
GB2589230A (en) * | 2018-09-14 | 2021-05-26 | Univ Qingdao Agricultural | Replication-defective recombinant H9N2 avian influenza virus expressing HA of H5 subtype |
GB2589230B (en) * | 2018-09-14 | 2023-01-04 | Univ Qingdao Agricultural | Replication-defective recombinant H9N2 avian influenza virus expressing HA of H5 subtype |
CN109134624A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-01-04 | 天康生物股份有限公司 | 禽流感病毒血凝素抗原及其制备方法、应用和禽流感疫苗 |
CN112111503A (zh) * | 2020-08-24 | 2020-12-22 | 河北省动物疫病预防控制中心 | 同时预防禽流感h5和h9亚型的腺病毒载体二价苗及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mennechet et al. | A review of 65 years of human adenovirus seroprevalence | |
CN104404005A (zh) | 禽流感病毒ha基因重组腺病毒的制备方法 | |
Szewczyk et al. | Introduction to molecular biology of influenza A viruses | |
Kohl et al. | Genome analysis of bat adenovirus 2: indications of interspecies transmission | |
CN104846013B (zh) | 一种复制缺陷型人55型腺病毒载体及其制备方法和应用 | |
Toro et al. | Protection of chickens against avian influenza with non-replicating adenovirus-vectored vaccine | |
Cottet et al. | Bioinformatic analysis of the genome of infectious salmon anemia virus associated with outbreaks with high mortality in Chile | |
Teng et al. | Latest advances of virology research using CRISPR/Cas9-based gene-editing technology and its application to vaccine development | |
JP2008522621A (ja) | 世界的に流行するトリインフルエンザに対して迅速に応答するためのワクチン | |
CN104195154B (zh) | 新城疫病毒Mukteswar中等毒力疫苗株反向遗传操作系统及其应用 | |
Choi et al. | Protective efficacy of baculovirus-derived influenza virus-like particles bearing H5 HA alone or in combination with M1 in chickens | |
Jordan et al. | A genotype of modified vaccinia Ankara (MVA) that facilitates replication in suspension cultures in chemically defined medium | |
CN103221064B (zh) | 抗流感病毒的免疫方法及其组合疫苗 | |
Kim et al. | Recent outbreaks of highly pathogenic avian influenza viruses in South Korea | |
Pei et al. | Fowl adenovirus 4 (FAdV-4)-based infectious clone for vaccine vector development and viral gene function studies | |
Wang et al. | Infection of chicken H9N2 influenza viruses in different species of domestic ducks | |
CN102719479A (zh) | 共表达两种亚型猪流感病毒ha基因重组腺病毒的制备 | |
Orlova et al. | Development of modified vaccinia virus ankara-based vaccines: advantages and applications | |
Douglass et al. | Influence of the viral superoxide dismutase (SOD) homologue on lumpy skin disease virus (LSDV) growth, histopathology and pathogenicity | |
Liu et al. | Recombinant bovine herpesvirus type I expressing the bovine viral diarrhea virus E2 protein could effectively prevent infection by two viruses | |
Bahari et al. | Functional analysis of V2 protein of Beet curly top Iran virus | |
Zhang et al. | Emergence of H5N8 avian influenza virus in domestic geese in a wild bird habitat, Yishui Lake, north central China | |
Castellanos-Huerta et al. | Transformation of Dunaliella salina by Agrobacterium tumefaciens for the expression of the Hemagglutinin of Avian Influenza Virus H5 | |
Jang et al. | Genetic and pathologic characterization of a novel recombinant TC07-2-type avian infectious bronchitis virus | |
Wu et al. | A chimeric Sudan virus-like particle vaccine candidate produced by a recombinant baculovirus system induces specific immune responses in mice and horses |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150311 |