CN104396896B - 一种快速生产轮虫及其休眠卵的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用淡水鱼类浸出液快速生产淡水轮虫及其休眠卵的方法。该方法是利用鱼类浸出液快速生产轮虫及其休眠卵，所述鱼类浸出液为淡水鱼类尸体或内脏废弃物经过曝气自来水自然腐烂溃解后的滤液。采用曝气自来水自然光照和室温人工配制鱼类浸出液、按照浸出液比例配制饵料微藻和轮虫液体通用培养基、轮虫食物为淡水小球藻。连续充气、持续光照方法，快速生产淡水轮虫和休眠卵。该方法能方便，快速，经济的收集到大量的淡水轮虫及其休眠卵，用于鱼类开口饵料和其他研究。适合实验室研究和水产开口生物饵料生产。该方法简方便，快速，经济，便于使用。
Description
技术领域
本发明属于水产学科生物技术领域，具体是涉及一种利用淡水鱼类尸体或其内脏制备浸出液用以快速生产轮虫的方法。
背景技术
轮虫(rotifer)是淡水生态系统主要功能群，95％以上鱼类和虾蟹类苗种期间早期开口生物饵料，也是环境污染风险评价最适受试动物。目前渔业生产上培育轮虫主要采用有机肥先期培肥水质的方法生产轮虫作为育苗开口生物饵料，轮虫产量稳定性和轮虫高峰期维持时间难以控制，制约了轮虫商品化发展。本发明利用淡水鱼类尸体残骸或其内脏废弃物制备浸出液替代有机肥快速生产轮虫及其休眠卵的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速生产轮虫及其休眠卵的方法。
本发明所提供的快速生产轮虫及其休眠卵的方法，是利用鱼类浸出液快速生产轮虫及其休眠卵；包括：鱼类浸出液的制备、透明玻璃水槽、淡水轮虫克隆挑选、轮虫饵料微藻培养、轮虫的生产和休眠卵的收集。所述鱼类浸出液为淡水鱼类尸体或内脏废弃物经过曝气自来水自然腐烂溃解后的滤液；淡水轮虫为萼花臂尾轮虫、藻类为小球藻。
本发明中所指鱼类浸出液：具体如下：淡水鱼类尸体或鱼类内脏废弃物50kg，用自来水漂洗干净，放入100L曝气过的自来水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敌百虫防止产生蝇蛆，加透明玻璃盖密闭；在28-35℃下自然光照曝晒，每天搅动2-3次；20天后，剔除固体残骸，经200目筛绢过滤，煮沸，常温避光保存。
本发明中所指淡水轮虫的快速生产。特征如下：鱼类浸出液和曝气自来水1:100(v/v)稀释，以升为单位，另加入过磷酸钙30g/m3、硫酸铵10g/m3和尿素10g/m3。用HCl和NaOH调节pH值7.0-7.5左右。接入小球藻，密度为1x106个细胞/毫升、接种轮虫，密度1.0个/ml。常温、连续充气、自然光照培养。72h后通过200目筛绢收集轮虫成体。
本发明所指生产轮虫休眠卵的方法。特征为：小球藻和轮虫同容器培养120h，当培养液颜色泛黄，小球藻消耗殆尽时，通过200目筛绢，过滤收集轮虫成体，获得活体轮虫；将水槽底下藻类和休眠卵混合物残渣移出，放在双层300目筛绢网中，自来水流水反复冲洗，刮取网中休眠卵；休眠卵经自然风干，4℃下避光保存。
本发明的原理为：鱼类浸出液经强光暴晒处理，有机物转化为无机物，作为轮虫饵料微藻食物，直接生产轮虫饵料微藻，保证饵料微藻的营养需求，达到快速生产轮虫生殖所需营养。快速增加的轮虫密度达到一定密度后，诱发轮虫有性生殖，形成休眠卵，实现快速生产轮虫和轮虫休眠卵目的。该方法操作简便，快速，经济，便于应用。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例中所说的轮虫是从养殖水体挑选的单个体，室内“克隆”培养分离培养获得。
实施例一：鲫鱼浸出液制备快速生产轮虫
1.淡水鲤鱼尸体50kg，在自来水中漂洗干净后，放入100L的曝气自来水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敌百虫防止产生蝇蛆，加透明玻璃盖密闭，在28-35℃下曝晒20-30天。每天搅动2-3次。待鱼组织自然腐烂溃解后，利用200目筛绢或筛网过滤，剔除有型固体，沉淀24h，取上清，在120℃下灭菌，再静置12h，取上清液，常温、密闭、避光保存。
2.轮虫培养液配制备：取鱼类浸出液，按照1:100(v/v)配制鱼类浸出液稀释液。添加过磷酸钙30g/m3、硫酸铵10g/m3和尿素10g/m3。
3.轮虫单个体“克隆”系培养：96孔培养板，每孔加入轮虫培养液1.5ml，悬浮液藻类密度1x106个细胞/毫升。池塘捞取轮虫，挑选1个携带非混交雌体个体，转移到微孔板中。连续光照，25℃培养36小时。
4.“克隆”系扩大培养：从3中挑取一个无有性生殖个体形成的克隆个体，转移到加有75ml培养基和藻类悬浮液的100ml三角烧瓶中扩大培养。
5.轮虫快速培养：取5L三角烧瓶，加入3L人工配制的无机培养液EPA作为对照，EPA配方每升含有NaHCO396mg、CaSO4.2H2O 60mg、MgSO4.7H2O 123mg、KCl 4mg。根据需要利用HCl和NaOH调节pH值7.5左右。另取5L三角烧瓶，加入3L鱼类浸出液配制的轮虫培养液。接种轮虫起始密度均为1.0个/ml。自然光照，室温。
表1：轮虫种群密度(个/ml)
| 时间(小时) | EPA对照 | 鱼类浸出液 |
| 24 | 16 | 39 |
| 48 | 74 | 175 |
| 72 | 109 | 235 |
实施例二：轮虫休眠卵快速生产
1.淡水鲤鱼尸体50kg，在自来水中漂洗干净后，放入100L的曝气自来水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敌百虫防止产生蝇蛆，加透明玻璃盖密闭，在28-35℃下曝晒20-30天。每天搅动2-3次。待鱼组织自然腐烂溃解后，利用200目筛绢或筛网过滤，剔除有型固体，沉淀24h，取上清，在120℃下灭菌，再静置12h，取上清液，常温、密闭、避光保存。
2.轮虫培养液配制备：取鱼类浸出液，按照1∶100(v/v)配制鱼类浸出液稀释液。添加过磷酸钙30g/m3、硫酸铵10g/m3和尿素10g/m3。
3.轮虫单个体“克隆”系培养：96孔培养板，每孔加入轮虫培养液1.5ml，悬浮液藻类密度1x106个细胞/毫升。池塘捞取轮虫，挑选1个携带非混交雌体个体，转移到微孔板中。连续光照，25℃培养36小时。
4.“克隆”系扩大培养：从3中挑取一个无有性生殖个体形成的克隆个体，转移到加有75ml培养基和藻类悬浮液的100ml三角烧瓶中扩大培养。
5.轮虫快速培养：取5L三角烧瓶，分别加入3L人工配制的无机培养液(EPA配方同实施例一)和浸出液配制的轮虫培养液，接种轮虫密度均为1.0个/ml。自然光照，室温，培养120h。200目筛绢，过滤收集轮虫，再将水槽底下藻类和休眠卵混合物残渣经过双层300目筛绢过滤收集，混合物经自来水流水反复冲洗，刮取网中休眠卵，解剖镜下观察计数。
表2：轮虫休眠卵密度(个/ml)
| 时间(小时) | EPA对照 | 鱼类浸出液 |
| 24 | 21 | 18 |
| 48 | 95 | 180 |
| 120 | 116 | 250 |
Claims (3)
1.一种快速生产轮虫及其休眠卵的方法，其特征在于，透明玻璃水槽中加入经过稀释的鱼类浸出液和曝气自来水1:100(v/v)，添加过磷酸钙30g/m3、硫酸铵10g/m3和尿素10g/m3制备小球藻和轮虫通用培养液；利用HCl和NaOH调节pH值7.0-7.5；接入小球藻；接种轮虫，常温、连续充气、自然光照培养；
所述鱼类浸出液为淡水鱼类尸体或内脏废弃物经过曝气自来水自然腐烂溃解后的滤液。
2.根据权利要求1所述的快速生产轮虫及其休眠卵的方法，其特征在于，所述鱼类浸出液的制备方法为：淡水鱼类尸体或鱼类内脏废弃物50kg，用自来水漂洗干净，放入100L曝气过的自来水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敌百虫防止产生蝇蛆，加透明玻璃盖密闭；在28-35℃下自然光照曝晒，每天搅动2-3次；20天后，剔除固体残骸，经200目筛绢过滤，煮沸，常温避光保存。
3.根据权利要求1所述的快速生产轮虫及其休眠卵的方法，其特征在于，轮虫休眠卵快速生产特征为：小球藻和轮虫同容器培养120h，当培养液颜色泛黄，小球藻消耗殆尽时，通过200目筛绢，过滤收集轮虫成体，获得活体轮虫；将水槽底下藻类和休眠卵混合物残渣移出，放在双层300目筛绢网中，自来水流水反复冲洗，刮取网中休眠卵；休眠卵经自然风干，4℃下避光保存。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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Granted publication date: 20170111 Termination date: 20211209 |
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