CN104621017B - 一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，特点是从咸淡水交界的河口或养殖池塘中，捕获桡足类群体作为筛选用的种质来源；在设定的条件下，进行定向筛选出温剑水蚤，经培养得到一定密度的温剑水蚤种群；将温剑水蚤在温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux的优化培育条件下进行规模化连续培育，每隔3天进行捕捞总数2/3的温剑水蚤个体，经过3周的培养，形成每L水体养殖90‑100个温剑水蚤个体，优点是可进行纯种高密度培育，培育的蚤类生物活体，大小适中，既营养丰富可直接作为食源，又可作为经济鱼、虾、蟹等幼体的开口饵料。
Description
技术领域
本发明涉及农业水产养殖技术领域，尤其是涉及一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法。
背景技术
桡足类是一类小型、低等的甲壳动物，一般营浮游生活，广泛分布于海洋、淡水或半咸水中，是水域浮游动物中的一个重要组成部分，同时也是水域食物网中的一个重要环节。由于它的不同种类在不同的季节均有分布而且具有很高的营养价值，是很多经济动物育苗时幼体的开口饵料。因此，有必要开展桡足类营养强化与大规模培育的研究。开展桡足类营养强化与大规模培育的研究，不仅可为幼苗饵料研究提供基础饵料，而且可为基于桡足类大规模繁殖的渔场建设利用提供科学依据。
国内外已有一些种类开展过试验研究，室内试验成功的种类主要有细巧华哲水蚤Sinocalanus tenellus、双齿许水蚤Schmackeria dubia、日本虎斑猛水蚤Tigriopus japonicus和尖额真猛水蚤Euterpe acutifrons等。但到目前为止，真正能进行生产性大量培养的桡足类主要种类几乎没有，仅广生态型的猛水蚤类（如虎斑猛水蚤）和近岸河口的哲水蚤（如纺锤水蚤）可低密度培养，且对这些桡足类的培养也大都停留在自然繁殖的状态下，还没有真正实现桡足类的大规模人工繁殖。所以，对桡足类培养的大规模繁殖进行研究是很有必要的，同时人工培育的桡足类一般不如野外采集的营养全面，需求开展营养强化或开展富营养品种的选育与规模化培育。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种筛选纯种桡足类并对其进行纯种人工高密度培养的温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，步骤如下：从咸淡水交界的河口或养殖池塘中，捕获桡足类群体；在设定的条件下，进行定向筛选出温剑水蚤；将温剑水蚤在优化培育条件下进行规模化连续培育。
具体步骤如下：
（1）种质获取：在咸淡水交界的河口或养殖池塘，于水温18-22℃时，选择水体比重在1.005-1.012之间的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于30-50cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
（2）定向筛选：将收获的桡足类群体于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育5-7天后，升高水温到24±2℃，盐度降到7-10，培育3-5天后，再回复到初始培育条件温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux下培育5-7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
（3）规模培育：将温剑水蚤种群在优化条件温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux下进行规模化培育生产，每隔3天进行捕捞一次，每次用80-100目筛绢网捕获总数2/3的温剑水蚤个体，经过3周的培养，形成每L水体养殖90-100个温剑水蚤个体。
步骤（3）规模培育过程中投喂以虾片或藻类为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每20-30天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为1-3g/L，藻类投喂量为20×104-30×104个细胞/ml，冰杂鱼虾发酵液投喂量为7.5-11.2g /m2。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、根据本发明的操作规范可定向筛选出温剑水蚤，并实现对其人工养殖及大规模化的高密度培养。
2、无论实验室或养殖场，对培育的地方没有太大的要求，人为控制的环境因素都较易做到，操作也较为简单。
3、纯化并扩大培养后的温剑水蚤极其适用于口器较小的生物幼体食用，并且一定程度上的提高了生物幼体的成活率和生长率。
4、经过筛选并扩大培养的温剑水蚤，具有质量好，繁殖快等特点。在优化条件温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux下，温剑水蚤的生长速率达63.02%。
5、提供了一套筛选纯化的方法，通过类似的方法还可以筛选纯化桡足类中的其他种类，可用于有关研究，包括规模化生产的研究等，甚至对其他小型甲壳动物种类的筛选纯化也同样有一定指导作用。
综上所述，本发明公开了一种水生桡足类----温剑水蚤的筛选纯化方法，以及对其纯种的扩大培养方法。包括，种质来源、筛选条件的优化与确定、规模化培育设施与技术以及产品收获及品质保障等，培育的蚤类生物活体，大小适中，既营养丰富可直接作为食源，又可作为经济鱼、虾、蟹等幼体的开口饵料。
附图说明
图1为不进行捕捞的温剑水蚤规模化培育的天数与种群密度的关系图；
图2为每隔1天进行捕捞的温剑水蚤规模化培育的天数与种群密度的关系图；
图3为每隔3天进行捕捞的温剑水蚤规模化培育的天数与种群密度的关系图；
图4为每隔5天进行捕捞的温剑水蚤规模化培育的天数与种群密度的关系图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
具体实施例
一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，从咸淡水交界的河口或养殖池塘中，捕获桡足类群体；在设定的条件下，进行定向筛选出温剑水蚤；将温剑水蚤在优化培育条件下进行规模化连续培育，其具体步骤如下：
（1）种质获取：在咸淡水交界的河口或养殖池塘，于水温18-22℃（一般为春夏交接或晚秋时分）时，选择水体比重在1.005-1.012之间的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于30-50cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
（2）定向筛选：将收获的桡足类群体于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育5-7天后，升高水温到24±2℃，盐度降到7-10，培育3-5天后，再回复到初始培育条件温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux下培育5-7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
（3）规模培育：将温剑水蚤种群在优化条件温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux下进行规模化培育生产，每隔3天进行捕捞一次，每次用80-100目筛绢网捕获总数2/3的温剑水蚤个体，经过3周的培养，形成每L水体养殖90-100个温剑水蚤个体。
上述规模培育过程中投喂以虾片或藻类为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每20-30天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为1-3g/L，藻类投喂量为30×104-20×104个细胞/ml，冰杂鱼虾发酵液投喂量为7.5-11.2g /m2。冰杂鱼虾发酵液为将小鱼小虾放入缸中发酵所得液体。连续培育阶段，如有关条件控制、投饵管理、收获方式等各方面，可制定了明确的操作规范。
实施例1
一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，具体步骤如下：
（1）种质获取：在咸淡水交界的河口或养殖池塘，于水温20℃时，选择水体比重为1.008的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于40cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
（2）定向筛选：将收获的桡足类群体于温度20℃、盐度10、光强90 Lux的条件下培育6天后，升高水温到24℃，盐度降到8，培育4天后，再回复到初始培育条件温度20℃、盐度10、光强90 Lux下培育6天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度20℃、盐度10、光强90 Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
（3）规模培育：将温剑水蚤种群在优化条件温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux下进行规模化培育生产，每隔3天进行捕捞一次，每次用80-100目筛绢网捕获总数2/3的温剑水蚤个体，经过3周的培养，形成每L水体养殖90-100个温剑水蚤个体。
上述规模培育过程中投喂以虾片为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每25天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为1-3g/L，冰杂鱼虾发酵液投喂量为9 g /m2。
实施例2
同上述实施例1，其区别在于：
步骤（1）中在咸淡水交界的河口，于水温18℃时，选择水体比重为1.005的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于30cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
步骤（2）中将收获的桡足类群体于温度18℃、盐度7、光强30Lux的条件下培育7天后，升高水温到22℃，盐度降到7，培育5天后，再回复到初始培育条件温度18℃、盐度7、光强30Lux下培育7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度18℃、盐度7、光强30Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
步骤（3）中规模培育过程中投喂以藻类为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每20天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中藻类投喂量为20×104-30×104个细胞/ml，冰杂鱼虾发酵液投喂量为7.5g /m2。
实施例3
同上述实施例1，其区别在于：
步骤（1）中在养殖池塘，于水温22℃时，选择水体比重为1.012的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于50cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
步骤（2）中将收获的桡足类群体于温度22 ℃、盐度14、光强150 Lux的条件下培育5天后，升高水温到26℃，盐度降到10，培育3天后，再回复到初始培育条件温度22 ℃、盐度14、光强150 Lux下培育5-7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度22 ℃、盐度14、光强150 Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
步骤（3）中规模培育过程中投喂以虾片为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每30天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为2g/L，冰杂鱼虾发酵液投喂量为11.2g /m2。
实施例3
同上述实施例1，其区别在于：
步骤（1）中在咸淡水交界的河口或养殖池塘，于水温18-22℃时，选择水体比重在1.005-1.012之间的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于30-50cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
步骤（2）中将收获的桡足类群体于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育5-7天后，升高水温到24±2℃，盐度降到7-10，培育3-5天后，再回复到初始培育条件温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux下培育5-7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度20±2 ℃、盐度7-14、光强30-150 Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
步骤（3）中规模培育过程中投喂以虾片或藻类为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每20-30天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为1-3g/L，藻类投喂量为30×104-20×104个细胞/ml，冰杂鱼虾发酵液投喂量为7.5-11.2g /m2。
试验效果分析
一、定向筛选效果
将筛选用的种质来源桡足类群体带到实验室后进行清洗及简单消毒，即用淡水快速地冲洗2-3次。把桡足类群体分成6份，放到50*45*40cm的玻璃水族缸中。设定有关条件，主要包括温度、盐度以及光照强度进行筛选培养。
初始筛选条件：温度20±2 ℃、盐度14、光强150 Lux。每天取一定量水体进行桡足类的定性和定量计数。经过7天养殖后，各缸中桡足类群体的组成变化情况见表1，
表1 各水族缸中桡足类组成的变化（第1-7天）
调整各缸中的培养条件，升高水温到24 ℃、盐度7。再经过5天后，各缸中桡足类群体的组成变化情况见表2，
表2 各水族缸中桡足类组成的变化（第8-12天）
之后，各缸中的养殖条件重新恢复到初始条件下再培养。如果养殖水体中的桡足类还不是很纯，再进行一个周期。2个周期后，养殖系统中仅剩下温剑水蚤，并以成体为主。选取表2中的缸1、缸2、缸3、缸5。再在初始条件下培育约1周后，能达到12-20个/L的温剑水蚤种群，可用于培育条件优化试验（表3）。
表3 各水族缸中桡足类组成的变化（第15-21天）
二、响应面法优化培养条件
获得温剑水蚤试验种群后，开展该种的培养条件优化，为规模化培养该桡足类找到合适的条件。以下为采用响应面法优化条件的试验结果：
表4 条件优化响应面实验设计
| 水平 | 温度/℃ | 时间/h | pH |
| -1.68 | 41.6 | 1.3 | 6.3 |
| -1 | 45 | 2 | 7 |
| 0 | 50 | 3 | 8 |
| 1 | 55 | 4 | 9 |
| -1.68 | 58.4 | 4.7 | 9.7 |
表5 响应面实验表和结果
| 实验序号 | 温度/℃ | 盐度/% | 光强/lux | 生长速率%/d |
| 1 | 24 | 7 | 90 | 47.51 |
| 2 | 21 | 14 | 30 | 61.64 |
| 3 | 18 | 7 | 90 | 47.43 |
| 4 | 21 | 7 | 150 | 51.77 |
| 5 | 18 | 10.5 | 30 | 52.37 |
| 6 | 21 | 14 | 150 | 57.78 |
| 7 | 21 | 10.5 | 90 | 62.24 |
| 8 | 21 | 10.5 | 90 | 62.27 |
| 9 | 21 | 10.5 | 90 | 62.91 |
| 10 | 18 | 14 | 90 | 49.27 |
| 11 | 21 | 7 | 30 | 53.71 |
| 12 | 18 | 10.5 | 150 | 50.42 |
| 13 | 21 | 10.5 | 90 | 63.01 |
| 14 | 24 | 10.5 | 30 | 52.74 |
| 15 | 21 | 10.5 | 90 | 61.97 |
| 16 | 24 | 14 | 90 | 49.11 |
| 17 | 24 | 10.5 | 150 | 50.83 |
用Design-Expert 8.0.b软件对数据进行分析，得到回归方程：生长速率 = 62.48+0.088A+2.17B -1.21C-0.060AB+1.000E-002AC-0.48BC-9.39 A2-4.76B2-1.50C2，其中，A、B、C分别代表温度、盐度和光照。
表6 响应面方差分析
| 方差来源 | 平方和 | 自由度 | 均方 | F 值 | Prob>F (a) |
| 模型 | 560.41 | 9 | 62.27 | 28.73 | 0.0001 |
| A-温度 | 0.061 | 1 | 0.061 | 0.028 | 0.8713 |
| B-盐度 | 37.76 | 1 | 37.76 | 17.42 | 0.0042 |
| C-光照 | 11.66 | 1 | 11.66 | 5.38 | 0.0534 |
| AB | 0.014 | 1 | 0.014 | 6.644E-003 | 0.9373 |
| AC | 4.000E-004 | 1 | 4.000E-004 | 1.846E-004 | 0.9895 |
| BC | 0.92 | 1 | 0.92 | 0.43 | 0.5352 |
| A2 | 371.45 | 1 | 371.45 | 171.38 | < 0.0001 |
| B2 | 95.30 | 1 | 95.30 | 43.97 | 0.0003 |
| C2 | 9.44 | 1 | 9.44 | 4.36 | 0.0753 |
| 失拟项 | 14.34 | 3 | 4.78 | 23.11 | 0.0055 |
注：Prob>F (a)值大于0.05表示不显著；Prob>F (a)小于0.05表示显著；Prob>F(a)小于0.01表示极显著
通过Design-Expert软件求解方程，根据响应面分析得出温剑水蚤最佳的培养组合条件为温度21.01℃、盐度11.38、光强63.32Lux，温剑水蚤生长速率为63.02%。
三、规模化培育试验
设定四组温剑水蚤的纯种，分别在初始筛选条件：温度20±2 ℃、盐度14、光强150Lux下培育10天，然后将其在优化条件温度21.01℃、盐度11.38、光强63.32Lux下规模化培养3周，用100目的筛绢网捕捞缸内2/3的温剑水蚤。组一模化培养过程中不捕捞，组二模化培养过程中隔1天进行捕捞，组三规模化培养过程中每隔3天进行捕捞，组四模化培养过程中每隔5天进行捕捞（其培育天数与种群密度的关系如图4所示）。
图1为组一模化培养过程中培育天数与种群密度的关系，由图可知，经过3周的培养，每升水体温剑水蚤的个数为50-60个；
图2为组二模化培养过程中培育天数与种群密度的关系，由图可知，在培育第10天达到最高接近60个，之后迅速下降，经过3周的培养，每升水体温剑水蚤几乎为零；
图3为组三模化培养过程中其培育天数与种群密度的关系，由图可知，随着培育天数增加，每升水体温剑水蚤的个数也逐渐增加，经过3周的培养，每升水体温剑水蚤的个数达90-100个；
图4为组四模化培养过程中其培育天数与种群密度的关系，由图可知，在培育第10天达到最高接近80个后，随着培育天数增加，每升水体温剑水蚤的个数却略微减少，经过3周的培养，每升水体温剑水蚤的个数为70-80个。
综上所述，规模化培育过程中每隔3天捕捞一次能更好的持续开展温剑水蚤大规模培育，经过3周的培养，每升水体温剑水蚤的个数最多达90-100个。
当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，其特征在于步骤如下：从咸淡水交界的河口或养殖池塘中，捕获桡足类群体；在设定的条件下，进行定向筛选出温剑水蚤；将温剑水蚤在优化培育条件下进行规模化连续培育，具体步骤如下：
(1)种质获取：在咸淡水交界的河口或养殖池塘，于水温18-22℃时，选择水体比重在1.005-1.012之间的区域，用120目的筛绢网做成的拖网或捞网，在位于30-50cm水体表层处收获桡足类群体作为筛选用的种质来源；
(2)定向筛选：将收获的桡足类群体于温度20±2℃、盐度7-14、光强30-150Lux的条件下培育5-7天后，升高水温到24±2℃，盐度降到7-10，培育3-5天后，再回复到初始培育条件温度20±2℃、盐度7-14、光强30-150Lux下培育5-7天，即完成一个周期定向筛选，在完成至少一个周期定向筛选后，即得到纯种温剑水蚤，将纯种温剑水蚤于温度20±2℃、盐度7-14、光强30-150Lux的条件下培育1-2周后，得到一定密度的温剑水蚤种群；
(3)规模培育：将温剑水蚤种群在优化条件温度21.3℃、盐度12.46、光强65.6Lux下进行规模化培育生产，每隔3天进行捕捞一次，每次用80-100目筛绢网捕获总数2/3的温剑水蚤个体，经过3周的培养，形成每L水体养殖90-100个温剑水蚤个体。
2.根据权利要求1所述的一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法，其特征在于：步骤(3)规模培育过程中投喂以虾片或藻类为主的饵料，每天分别在早上和晚上各喂食一次，并且每20-30天辅以投喂冰杂鱼虾发酵液，其中虾片投喂量为1-3g/L，藻类投喂量为20×104-30×104个细胞/ml，冰杂鱼虾发酵液投喂量为7.5-11.2g/m2。
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