CN104395758A - 用于检测胰腺癌的标志物 - Google Patents

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CN104395758A CN201380025877.XA CN201380025877A CN104395758A CN 104395758 A CN104395758 A CN 104395758A CN 201380025877 A CN201380025877 A CN 201380025877A CN 104395758 A CN104395758 A CN 104395758A
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Abstract

本发明作为用于检测糖蛋白质C4BPA或PIGR胰腺癌的标志物使用，则可与慢性胰腺炎患者或健康者区别开而特异性地判断胰腺癌。另外，可监测手术后的胰腺癌患者的预后的状况。还有，通过与其他胰腺癌标志物、例如，CA19-9等组合使用，可与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而更特异性地判断。

Description

用于检测胰腺癌的标志物
【技术领域】
本发明涉及用于检测胰腺癌的标志物。更具体而言，本发明涉及用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌的标志物、为了检测胰腺癌测定特定的糖蛋白质的方法、用于检测胰腺癌的方法、特定的糖蛋白质作为胰腺癌检测标志物的用途、胰腺癌检测用试剂盒等。
【背景技术】
肝胆胰腺区域的恶性肿瘤、特别是胰腺癌已知是在消化器官癌之中最预后不良的癌，其主要的理由可举，由于向周围器官的浸润－转移容易，所以被诊断时已经成进行性癌，从而切除率低，再者，有效的辅助疗法尚未确立。从而，就是为了升高唯一可期待根治的外科切除的效率，鉴定胰腺癌的特异性诊断标志物也是急务，开发以该蛋白质作为目标的分子目标治疗药，再者，为了得到更高的治疗效果，通过进行个别化治疗来图谋治疗成绩的升高是重要的。
作为胰腺癌标志物，已知有CA19-9(非专利文献1)。另外，也有人提案将人触珠蛋白的岩藻糖基化糖链作为胰腺癌标志物使用(专利文献1)。但是，这些的标志物未必在灵敏度或特异性的方面充分，再者，需求新的胰腺癌标志物的开发。
【现有技术文献】
【专利文献】
专利文献1：特开2009-168470号公报
【非专利文献】
非专利文献1：Br.J.Cancer，53卷，197-202页
【发明内容】
【发明要解决的技术课题】
在这样的环境下，本发明旨在提供用于检测胰腺癌的标志物、特别是，用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌的标志物。再者，本发明提供为了检测胰腺癌而测定特定的蛋白质的方法、及用于检测胰腺癌的方法。
【解决课题的技术方案】
本发明人以作为在灵敏度或特异性的方面优良的新的胰腺癌标志物的开发作为目的，至现在使用蛋白组学方法进行在肝胆胰腺区域中的几个癌特异性蛋白质的鉴定。于是，以低侵袭并且广泛使用性高的待测样品的血清作为样品，通过使用糖蛋白质提取和TMT试剂(串联质谱标签试剂)定量进行对胰腺癌的血清中的特异性糖蛋白质的鉴定，发现用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌的新的标志物，从而完成本发明。
从而，本发明涉及：
[1].用于检测胰腺癌的标志物，其含糖蛋白质C4BPA或PIGR；
[2].上述[1]所述的标志物，其用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌；
[3].测定C4BPA或PIGR的方法，其用于基于待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR来检测胰腺癌；
[4].上述[3]所述的方法，其中待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR的测定由免疫测定法、电泳法、质谱分析法或液相层析法进行；
[5].用于检测胰腺癌的方法，其包括测定待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR，而使C4BPA或PIGR的量与胰腺癌的检测相关；
[6].上述[5]所述的用于检测胰腺癌的方法，其除C4BPA或PIGR之外，还包括使CA19-9的量与胰腺癌的检测相关；
[7].糖蛋白质C4BPA或PIGR作为用于检测胰腺癌的标志物的用途；
[8].上述[7]所述的用途，其是用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌的标志物；
[9].胰腺癌检测用试剂盒，其含用于测定糖蛋白质C4BPA或PIGR的试剂；及
[10].上述[9]所述的胰腺癌检测用试剂盒，其含针对糖蛋白质C4BPA或PIGR的抗体。
【发明效果】
作为本发明的用于检测胰腺癌的标志物，使用糖蛋白质C4BPA、PIGR，则与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而可特异性地判断胰腺癌的可能性。另外，可监测手术后的胰腺癌患者的预后的状况。还有，通过与其他胰腺癌标志物、例如，CA19-9等组合使用，可与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而更特异性地判断。
【附图说明】
【图1】显示对来自各种血清待测样品的蛋白质的利用SDS-PAGE的检查结果。
【图2】显示对各种血清待测样品的利用ELISA法的C4BPA的测定结果。
【图3】显示对各种血清待测样品的利用ELISA法的PIGR的测定结果。
【图4】显示在胰腺癌的诊断中的C4BPA、PIGR及CA19-9的ROC曲线。
【实施方式】
接下来，再详细地说明本发明。
由本发明得知，对于从健康者、慢性胰腺炎患者及胰腺癌患者(手术前及手术后)采集的血清待测样品，通过使用糖蛋白质提取和TMT试剂定量进行对胰腺癌的血清中的特异性糖蛋白质的鉴定的结果，与来自健康者、慢性胰腺炎患者及胰腺癌患者(手术后)的血清相比，来自胰腺癌患者(手术前)的血清中存在高水平的作为糖蛋白质的C4BPA或PIGR，从而发现，C4BPA及PIGR可成为胰腺癌标志物。
本发明的用于检测胰腺癌的标志物包括C4BPA或PIGR。C4BPA、即C4b-结合蛋白α链是以UniProt的登录编号P04003表示的糖蛋白质(http://www.uniprot.org/uniprot/P04003)。C4BPA控制补体活化的经典途径。C4BPA是C3bINA的辅因子，水解补体片段C4b。再者，有促进C4bC2a复合物、补体片段C2a的分解的功能(Barbosa et al.,Infection and Immunity,Mr.2009,p.1137-1143；Dahlback et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.80,pp.3461-3465,June1983)。
另一方面，PIGR、即多聚免疫球蛋白受体是以UniProt的登录编号P01833表示的糖蛋白质(http://www.uniprot.org/uniprot/P01833)。PIGR在上皮细胞的基底外侧表面与聚合物的IgA及IgM结合。结合的复合物在其切断的过程从膜贯通区域输送到细胞外(Deitcher et al.,The Journal of Cell Biology,Volume 102,March 1986,911-919；Asanoet al.,Journal of Oral Science,Vol.53,No.2,147-156,2011)。
本发明的用于检测胰腺癌的标志物包括C4BPA或PIGR。特别是，本发明的标志物与慢性胰腺炎或健康者区别开来而可检测胰腺癌。
在本发明的测定的方法中，为了基于待测样品中的C4BPA或PIGR检测胰腺癌而测定C4BPA或PIGR。
在本发明中，通过测定待测样品中的C4BPA或PIGR，使C4BPA或PIGR的量与胰腺癌的检测相关，从而可检测胰腺癌。在实际测定待测样品中的C4BPA或PIGR时，也可测定作为糖蛋白质的C4BPA或PIGR，另外，例如，用待测样品处理等自糖蛋白质除去糖链，也可测定C4BPA或PIGR的氨基酸序列部分。
在本发明中，例如，可测定从疑患胰腺癌的患者或胰腺癌的术后患者采集的待测样品中的C4BPA或PIGR的水平而判断胰腺癌的罹患可能性或预后的状况。此时，在C4BPA或PIGR的水平与健康者的水平相比高时，可认为检测胰腺癌的可能性高，另外，当在术后的胰腺癌患者的待测样品中C4BPA或PIGR的水平降低时，可认为胰腺癌的预后良好。
在本发明中，通过与其他胰腺癌标志物、例如，CA19-9等组合使用，可与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而更特异性地可检测胰腺癌。
作为可在本发明中使用的待测样品，可举出从疑患胰腺癌的患者或胰腺癌的术后患者采集的血清、血浆、血液、尿等。
为了测定C4BPA或PIGR，可采用现在已知的所有的方法。可举出例如，免疫测定法、电泳法、质谱分析法、液相层析法等。
作为免疫测定法，可举出例如，免疫比浊测定法、酶联免疫测定法等。免疫测定法是，在将以往知道的蛋白质作为抗原进行测定的免疫测定法中，作为抗体，可通过使用作为抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体的多克隆抗体或单克隆抗体来实施。作为抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体，可使用市售品的抗体，另外，也可由公知的方法制造。作为这些抗体，可为特异性地识别C4BPA或PIGR的氨基酸序列的结构的，也可为特异性地识别含糖链的全体结构的。
在免疫比浊测定法中，只要是使待测样品中的C4BPA或PIGR与抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体反应而进行抗原抗体反应，结果，由发生的浑浊的程度测定C4BPA或PIGR的浓度，就不特别限定。作为那样的方法，可例示TIA法、乳胶免疫比浊法、比浊法。TIA法是将在免疫比浊测定法中浑浊的程度用，例如，340nm～800nm的吸光度测定的方法。另外，乳胶免疫比浊法是，在免疫比浊测定法中，使用作为抗体，使抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体与乳胶粒子结合的进行测定的方法。再者，比浊法是将在免疫比浊测定法中浑浊的程度，使以一定角度以上的大小散射的光集合而作为散射光测定的方法。
作为酶联免疫测定法，可举出以板作为支持体的EIA法。接下来具体记述。首先，向聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、聚乙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸酯等的其公知的固相直接或间接物理结合或化学结合、利用亲和性使结合抗C4BPA抗体和抗PIGR抗体作为第一抗体。致敏抗体量，例如，通常是1ng～100mg/ml的范围。
在将C4BPA或PIGR用酶联免疫测定法测定时，例如，向由物理结合或化学结合、亲和性等与固相结合的第一抗体加用于测定C4BPA或PIGR的待测样品而进行反应。反应一定时间之后，将固相清洗，加第二标记抗体而进行第二次反应。再度清洗固相，测定与固相结合的标记部分。
在以上说明的免疫测定法中，代替抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体，可使用特异性地识别C4BPA或PIGR的糖链而与它们结合－交联的蛋白质、即作为特异性结合偶体的凝集素。作为凝集素，优选特异性地识别岩藻糖的凝集素，可举出例如，与具有L-岩藻糖的糖链结合的橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)等。此时，例如，也可使用凝集素和抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体，各自作为与固相结合的特异性结合偶体及标记的特异性结合偶体之任何组合，用夹心法测定。
在使用这些抗体或凝集素等的特异性偶体的免疫测定法中，在标记物质中可使用辣根过氧化物酶(HRP)碱性磷酸酶等的酶。例如，在利用HRP标记抗体时，在底物可使用已知的DAB、TMB、OPD等。另外，在标记物质中，不仅是如HRP一样的酶，可举出胶体金、铕等的标记金属或FITC、若丹明、Texas Red、Alexa、GFP等的化学、生物性的各种荧光物质、32P、51Cr等的放射性物质等标记可能的所有的物质。另外，在本发明中使用标记物质时，也可使用亲和素-生物素系统或链霉亲和素-生物素系统。
作为电泳法，一般而言可举出SDS-PAGE法。SDS-PAGE法是在聚丙烯酰胺制成的凝胶中使蛋白质电泳，由在一定时间的移动度与构成蛋白质的氨基酸的数、即，分子量成比例来分类蛋白质的方法。此外，也有以醋酸纤维素作为支持体的等。在蛋白质的染色中，有考马斯－亮－蓝、丽春红S染色、酰胺黑染色、利用直接酶活性的方法等。例如，将一定量的待测样品与一般样品缓冲液以一定的比例1:1混合，加热处理。一般而言，在沸腾水中处理5分钟左右。其后，将样品应用于凝胶。聚丙烯酰胺电泳是以低电流运行有利于好的结果。一般而言，是5～100mA左右。电泳后，用上述试剂进行染色，用由醋酸、甲醇、水混合液构成的脱色液处理，则可确认C4BPA或PIGR的条带。由该条带的强弱，可测定C4BPA或PIGR的水平。
另外，利用蛋白印迹法的检测也有效。即，将实施电泳的凝胶转印到硝酸纤维素膜或PVDF膜等，接下来，使作为第一抗体的抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体、再者，作为第二标记抗体的HRP标记抗IgG反应，接下来，用HRP显色试剂(Wako)显色，由相当于C4BPA或PIGR的条带的显色程度，可测定C4BPA或PIGR。
作为质谱分析法，可举出最近开发快速推进的使用质谱分析器的分析方法。例如，可例示使用表面增强激光脱离/离子化(SurfaceEnhanced Laser Desorption/Ionization)飞行时间型质谱分析计(SELDI-TOF MS法)、基质辅助激光脱离/离子化(Matrix-AssistedLaser Desorption/Ionization)飞行时间型质谱分析计(MALDI-TOFMS法)、ESI法(电喷射离子化(Electrospray Ionization))的方法。SELDI-TOF MS法以在芯片表面的官能团上均一地捕捉目的物质的状态除去杂质，由于用激光进行离子化，得到有再现性的S/N比高的离子光谱，所以优选。
在SELDI-TOF MS法的情况中，通常、将待测样品预处理之后，使吸附于芯片，供给到SELDI-TOF MS质量计。在待测样品是血清的情况中，优选使用白蛋白的吸附剂，或用缓冲液清洗至在离子交换芯片上白蛋白不带电荷，并将白蛋白从系统中除去。作为SELDI-TOFMS法中使用的使蛋白质结合的芯片，只要是可吸附C4BPA或PIGR的蛋白质的芯片，就不特别限定种类。可例示疏水性或离子交换等的对蛋白质具有亲和性的官能团被修饰的芯片(也称为化学芯片)、固定化针对C4BPA或PIGR的抗体的芯片(生物化学芯片)等。
MALDI-TOF MS法是通过向待测样品混合吸收激光的化合物，照射数纳秒的短时间的激光来将待测样品中的蛋白质离子化，测定的方法。作为使蛋白质结合的芯片，可使用与SELDI-TOF MS法中使用的芯片同样的。在ESI法等的情况中，优选将蛋白酶处理等的预处理的待测样品供给到高效液相层析等的分离手段和直结的质谱分析计。
在优选的实施方式中，将能分别检测的同位素标记C4BPA或同位素标记PIGR作为内部标准物质添加到样品中。在这些实施方式中，样品中存在的内源性C4BPA或内源性PIGR和内部标准物质的两方的全部或一部分被离子化而在质谱分析计中生成能检测的多个离子，由质谱分析法检测从各自生成的1个以上的离子。在关联实施方式中，同位素标记C4BPA或同位素标记PIGR也可含13C及15N同位素标记缬氨酸、精氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸亚基、或者它们的组合。在再优选的实施方式中，同位素标记C4BPA或同位素标记PIGR是，碳原子被13C同位素取代，或者氮原子被15N同位素取代，内源性C4BPA或内源性PIGR与天然的C4BPA或PIGR相比带来质量的增加。在优选的关联实施方式中，同位素标记有碳原子之一部分或全部被13C同位素取代，氮原子之一部分或全部被15N同位素取代的氨基酸亚基。此同位素标记C4BPA或同位素标记PIGR的质量通常比天然的更高。
在优选的实施方式中，C4BPA离子或PIGR离子的有无及/或量通过与内部标准物质的比较，与待测样品中的量相关联。
液相层析法是本领域技术人员公知的方法，在本发明中，可采用这些公知的方法。例如，可举出使用作为特异性地识别C4BPA或PIGR的糖链而与它们结合－交联的蛋白质的凝集素、例如，以与具有L-岩藻糖的糖链结合的橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)作为支持体的亲和柱的液相层析法等。
在本发明中，也提供用于进行以上说明的各种测定法的，含用于测定糖蛋白质C4BPA或PIGR的试剂的胰腺癌检测用试剂盒。在这些的试剂盒，根据测定法，可含有各种试剂作为构成成分。例如，为了进行免疫测定法，可含针对糖蛋白质C4BPA或PIGR的抗体有。作为这些抗体，也可使用市售品的抗体，另外，也可由公知的方法制造。作为这些抗体，可为特异性地识别C4BPA或PIGR的氨基酸序列的结构的，另外，也可为特异性地识别含糖链的全体结构的。在试剂盒中，再根据标记物质的显色系统试剂等，实施的测定法，可含有公知的试剂。
【实施例】
接下来举优选的实施例更具体说明本发明，但本发明不受这些实施例等的任何限定。
【实施例1】
【胰腺癌标志物的鉴定】
使用从健康者45名、慢性胰腺炎患者25名、胰腺癌患者57名采集的血清待测样品，进行胰腺癌标志物的探索，再进行鉴定。
【A.方法】
【1.对象的血清】
将从健康者45名、慢性胰腺炎患者25名、胰腺癌患者57名采集的血清待测样品用于胰腺癌标志物的探索及鉴定用的血清。
【2.从各合并血清的糖蛋白质的提取】
随机地各提取5名健康者、慢性胰腺炎患者、胰腺癌患者(手术前－手术后)的血清，合并而得到3种合并血清。
用岩藻糖特异性凝集素，使用作为利用与具有L-岩藻糖的糖链结合的橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)的糖蛋白质的检索试剂盒的VECTREX AAL结合和洗脱试剂盒(Vector Laboratories公司)，从各合并血清进行糖蛋白质的提取。
向AAL珠20μL放入合并血清20μL，温育1小时之后，以12000×g离心1分钟，舍去上清。向残留物放入TENT缓冲液(100mM Tris，pH8.0；10mM EDTA；1.5M NaCl；1.0％(v/v)Tween20)80μL而混合之后，以12000×g离心1分钟，舍去上清。向残留物放入洗脱缓冲液(1.25ML-岩藻糖；TENT缓冲液)20μL而混合之后，于室温温育1小时，以12000×g离心1分钟后，回收上清，从各合并血清提取糖蛋白质，得到3种标记化用样品。
【3.糖蛋白质的标记化】
标记化用样品的标记化使用TMT质谱标记试剂盒和试剂(Thermo SCIENTIFIC公司)。
在利用TMT(串联质谱标签)试剂的此方法中，可对各合并血清中的特定的糖蛋白质以物理性质相同、分子量不同的方式附加标签。结果，由此方法，通过混合多个标记化样品可定量各样品的特定的糖蛋白质的存在比。接下来示具体性的糖蛋白质的标记化的实施。
对在上述2得到的标记化用样品20μL(血清20μL相当)进行AAL(橙黄网孢盘菌凝集素)珠处理，接下来，放入50mM TEAB(三乙基铵碳酸氢盐)60μL、2％SDS 5μL和200mM TCEP(Tris(2-羧乙基)膦)5μL，于55℃温育1小时，再加375mM碘乙酰胺5μL，于室温静置30分钟。其后，向得到的各样品加用100％乙腈42μL可溶化的各质量的TMT试剂40μL，于室温温育1小时，再加5％羟胺8μL，于室温静置15分钟而停止反应。其后，将各样品用冷丙酮清洗，再冷冻干燥而得到完成糖蛋白质的标记化样品。
【4.利用SDS-PAGE的蛋白质的鉴定】
作为SDS-PAGE，使用10-20％的梯度凝胶(DRC公司)。使泳道1流过将预处理健康者合并血清、慢性胰腺炎患者合并血清、胰腺癌患者合并血清的完成标记化糖蛋白质混合的样品，使泳道2流过将预处理健康者合并血清、胰腺癌患者(手术前)、胰腺癌患者(手术后)合并血清的完成标记化糖蛋白质混合的样品。再有，在泳道1中，对于健康者、慢性胰腺炎患者、胰腺癌患者(手术前)来源的样品，作为质量报告物，各自使用TMT-126、TMT-127、TMT-128的标签。另外，在泳道2中，在健康者合并血清、胰腺癌患者(手术前)、胰腺癌患者(手术后)来源的样品中，各自使用TMT-126、TMT-127、TMT-128的标签。
对电泳后的凝胶进行考马斯染色，检测蛋白质条带(图1)。将各泳道从凝胶以18分割切出，使用胰蛋白酶进行凝胶内消化。得到的消化片段使用HPLC分离，用LTQ Orbitrap XL(ThermoSCIENTIFIC公司)进行MS/MS测定。测常数据用Mascot搜索引擎(Matrix science公司)进行数据库检索，鉴定蛋白质。各合并血清的蛋白质的定量比较用Proteome Discoverer(Thermo SCIENTIFIC公司)进行。
【B.结果】
用质谱分析装置定量比较待测样品中的蛋白质存在量的结果示于表1。
【表1】
胰腺癌合并血清：PaCa
慢性胰腺炎患者合并血清：PT
健康者合并血清：HV
胰腺癌患者合并血清(手术前)：OPE前
胰腺癌患者合并血清(手术后)：OPE后
从表1所示的结果筛选胰腺癌患者合并血清(手术前)与健康者合并血清的比率是1.5以上、胰腺癌患者合并血清(手术后)与健康者合并血清的比率是1.5以下，并且，慢性胰腺炎患者合并血清与健康者合并血清的比率是1.5以下，胰腺癌患者合并血清与健康者合并血清的比率是1.5以上的蛋白质，鉴定C4BPA及PIGR。
在C4BPA、PIGR作为胰腺癌标志物而将胰腺癌(手术前)患者与健康者或慢性胰腺炎患者或胰腺癌(手术后)患者区别开来的方面、另外，手术后的胰腺癌患者与健康者的数据的差异小的方面、再者，手术前的胰腺癌患者与健康者的数据的差异大的方面，从而在胰腺癌患者的手术前后数据的差异大的方面得到特别良好的结果，从这些的结果得知，C4BPA及PIGR适宜作为胰腺癌标志物。
另一方面，对于基质金属蛋白酶-9、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H3而言，尽管在健康者与胰腺癌患者的数据中见到差异，但在利用上述基准的筛选中在手术前后未见到数据的差异，从而从标志物候选中刨除。
【实施例3】
【C4BPA及PIGR作为胰腺癌标志物的有用性】
由使用抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体的ELISA法进行待测样品中的C4BPA或PIGR的测定而验证C4BPA及PIGR作为胰腺癌标志物的有用性。另外，为了诊断用测试或筛选测试与精度评价或以往方法的比较，也由通常进行的利用ROC曲线的评价验证C4BPA及PIGR作为胰腺癌标志物的有用性。
【1.利用ELISA的C4BPA或PIGR的测定】
【(1)方法】
特别是，对于作为胰腺癌标志物的数据良好的C4BPA及PIGR，对于各种的待测样品进行ELISA测定。C4BPA及PIGR各自使用C4结合蛋白αELISA试剂盒(Uscnlife Sciences和Technology公司)、多聚免疫球蛋白受体ELISA试剂盒(Uscnlife Sciences&Technology公司)测定。
利用ELISA试剂盒的测定根据厂商的流程实施。具体而言，将抗C4BPA抗体、或者抗PIGR抗体在微滴定板中作为第一抗体固相化，向该抗体添加稀释待测样品而进行温育。接下来，将该板清洗之后，加HRP标记的抗C4BPA抗体或抗PIGR抗体而使进行反应，进行温育。再将板清洗后，添加TMB而进行显色反应，添加反应停止液后，使用iMarkTM酶标仪(Bio-Rad公司)在450nm处进行测定。将该数据与预先制成的标准曲线比较，测定待测样品中的C4BPA或PIGR。在统计处理中使用IBM SPSS统计学18软件(SPSS公司)。2个标本检验使用Mann-Whitney U-检验评价，p<0.05判断为有显著的差异。
【(2)结果】
C4BPA及PIGR的结果各自示于图2及图3。
从图2所示的结果看出，用C4BPA在健康者(HV)、慢性胰腺炎患者(PT)、胰腺癌患者(手术前)(PaCa)中各自是308.2±89.3μg/mL、303.3±78.3μg/mL、445.2±124.6μg/mL，相对于健康者、慢性胰腺炎患者，在胰腺癌患者中以p<0.001呈显著的差异。从而，C4BPA在将胰腺癌(手术前)患者与健康者或慢性胰腺炎患者区别开来的方面，显示作为胰腺癌标志物有用。
从图3所示的结果看出，用PIGR，在健康者(HV)、慢性胰腺炎患者(PT)、胰腺癌患者(PaCa)中，各自是3.9±0.9μg/mL、5.4±2.3μg/mL、6.5±3.2μg/mL，相对于健康者，在胰腺癌患者中以p<0.001呈显著的差异。从而显示，PIGR在作为胰腺癌标志物而将胰腺癌(手术前)患者与健康者区别开来的方面有用。
【2.利用ROC曲线的C4BPA及PIGR作为胰腺癌标志物的评价】
将在胰腺癌的诊断中的C4BPA及PIGR的ROC曲线与在以往胰腺癌的诊断中使用的CA19-9的ROC曲线一同示于图4。ROC曲线对各自的标志物由健康者浓度的2SD算出截止值，使用统计解析软件SPSS(18版)求出。由ROC曲线求出的AUROC(接收者操作特征曲线下面积)是，CA19-9是0.843、C4BPA是0.859、PIGR是0.728。另外，将CA19-9+C4BPA+PIGR组合时的AUROC是0.939。再者，将CA19-9+C4BPA组合时的AUROC是0.929(省略附图)。从而确证，C4BPA或PIGR的测定结果对于胰腺癌的诊断有用，还有，除了C4BPA或PIGR的测定结果之外，组合CA19-9的测定结果而进行判断对于胰腺癌的诊断更有用。
【工业实用性】
如以上详细地说明，作为用于检测胰腺癌的标志物，使用糖蛋白质C4BPA或PIGR，则与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而可特异性地判断胰腺癌的可能性。另外，可监测手术后的胰腺癌患者的预后的状况。还有，通过与其他胰腺癌标志物、例如，CA19-9等组合使用，可与慢性胰腺炎患者或健康者区别开来而更特异性地判断。

Claims (10)

1.用于检测胰腺癌的标志物，其包含糖蛋白质C4BPA或PIGR。
2.权利要求1所述的标志物，其用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌。
3.测定C4BPA或PIGR的方法，其用于基于待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR来检测胰腺癌。
4.权利要求3所述的方法，其中待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR的测定由免疫测定法、电泳法、质谱分析法或液相层析法进行。
5.用于检测胰腺癌的方法，其包括测定待测样品中的糖蛋白质C4BPA或PIGR，而使C4BPA或PIGR的量与胰腺癌的检测相关。
6.权利要求5所述的用于检测胰腺癌的方法，其除C4BPA或PIGR之外，还包括使CA19-9的量与胰腺癌的检测相关。
7.糖蛋白质C4BPA或PIGR作为用于检测胰腺癌的标志物的用途。
8.权利要求7所述的用途，其是用于与慢性胰腺炎或健康者区别开来而检测胰腺癌的标志物。
9.胰腺癌检测用试剂盒，其含用于测定糖蛋白质C4BPA或PIGR的试剂。
10.权利要求9所述的胰腺癌检测用试剂盒，其含针对糖蛋白质C4BPA或PIGR的抗体。
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