CN104381599A - 家禽用植物乳杆菌胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，属于微生物饲料添加剂技术领域。植物乳杆菌胶囊由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成；壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成，上述各物质配成混合溶液时的浓度为：酶解大豆分离蛋白7-10％、壳聚糖1-2％、黄原胶1-3％、卡拉胶0.1-0.5％、甘油0.3-1％，海藻糖0.5-2％。本发明方法制备的植物乳杆菌胶囊增强了胶囊的耐胃酸性，具有很好的肠溶性，并且能够有效抑制病原菌生长提高免疫力，降低畜禽发病率，提升养殖质量和效益。

Description

家禽用植物乳杆菌胶囊的制备方法

技术领域

本发明涉及一种乳酸菌微胶囊的制备方法，属于微生物饲料添加剂技术领域。

背景技术

抗生素等抗菌药物在畜牧业的广泛应用，极大地促进了养殖畜牧业的发展。目前，95％以上的预混料产品中都添加了抗菌药物。但其弊端也日益显著：畜牧产品中药物残留严重，直接危害人体的健康；抗生素的滥用导致病原菌产生抗药性，造成抗药菌株的扩散和蔓延；同时，动物体内菌群失调，动物的免疫力下降，养殖环境恶化，疾病增多；引发动物内源性感染与二重交叉感染等一系列的严重问题。欧盟于2006年开始全面禁止在饲料中添加抗生素，减少或禁止在饲料中添加抗菌药物；美国也开始禁止抗生素的饲用。当前，规范并减少养殖过程中抗菌药物的使用，开发安全绿色的饲料添加剂作为其替代品已被世界各国普遍关注。

乳酸菌类微生态饲料添加剂是抗菌药物的替代品中重要的一种。乳酸菌是肠道正常菌群中有益菌的杰出代表之一，具有重要的生理和保健功能：它可以拮抗病原微生物，调节动物消化道微生物区系平衡：活化免疫系统，增强免疫力，防止多种疾病和不良反应的发生；抑制肿瘤的发生，保护动物健康；合成营养物质，产生消化酶类，提高动物消化酶的活性，改善维生素的代谢，中和肠毒素，降低胺、氨等有害物质的产生等。然而，乳酸菌在生长过程中不形成芽抱，抗逆性较差，对外界环境，如氧、水分、高温、机械挤压、热激及胃酸等都非常敏感，在实际的应用中难以保证有效的活菌存活数量。因此，如何筛选出优良的乳酸菌种并延长其商品活性，一直是世界各地乳酸菌生产厂商的研发重点。

胶囊技术是保护菌体活力最为有效和实用的方法之一。将乳酸菌进行胶囊化，可以将菌体与外界的不良环境分开，免受饲料中微量元素损害，减缓制粒过程中温度和压力的影响；形成固体颗粒，利于在预混料中的均匀分布，也有利于储存和运输：采用肠溶性壁材后，还能保证尽可能多的菌体到达肠道，真正起到保健和治疗的功效。

如：专利CN1613455中公开了一种采用三层保护层包被的益生菌微胶囊；专利CN1569043中公开了一种采用海藻酸钠、氯化钙为壁材进行流化床喷雾包被制成的乳酸菌微胶囊。上述专利在一定程度上提高了益生菌或乳酸菌的存活率，但不可避免的是，CN1613455中氢化油脂温度超过55℃，会对芯材内部的乳酸菌造成损伤，同时外层的控释包衣材料，使乳酸菌在肠道中不能快速地释放，会导致一部分乳酸菌被排出体外，降低乳酸菌的利用率。CN1569043中采用海藻酸钠作为壁材，是目前微胶囊包被中经常使用的，但海藻酸钠本身持水能力差，由海藻酸钠包被的微胶囊凝胶易于失水硬化破裂，此外海藻酸钠包被的微胶囊不耐胃酸，使微胶囊过胃能力差。名称为一种含有多层微胶囊乳酸菌的乳酸菌粉的制备方法，专利申请号为201310743621.4，其特征在于：将海洋鱼皮胶原低聚肽粉20份～30份，柠檬酸5份～20份与多层微胶囊乳酸菌粉40份～50份混合搅拌。一种乳酸菌微胶囊及其制备方法和用途，申请号：200810135259.1，该发明也公开了一种乳酸菌微胶囊及其制备方法和用途。该乳酸菌微胶囊是由外层壁材、冻干保护剂和乳酸菌组成。

综上所述，现有的微胶囊包被技术或者在其实施过程中会对乳酸菌产生较大的破坏作用，或者制成的微胶囊对胃部环境的耐受性较差，这些都不利于微胶囊产品的产业化和应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物乳杆菌胶囊的制备方法。

所述植物乳杆菌胶囊由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。

所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成；上述各物质配成混合溶液时的浓度为：酶解大豆分离蛋白7-10％、壳聚糖1-2％、黄原胶1-3％、卡拉胶0.1-0.5％、甘油0.3-1％，海藻糖0.5-2％。

植物乳杆菌胶囊的制备方法步骤如下：

1)制备芯材：向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5％的水苏糖和5-8％的羊肚菌酶解粉，然后与冻干保护剂溶液混合，-50℃下预冻0.5h，然后在真空冷冻干燥机中冻干10-18h，冻干后研磨粉碎制成芯材；

所述发酵液与冻干保护剂溶液的比例优选为1:1.4-0.8；所述冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成；三种溶液的体积比优选为脱脂奶粉：海藻糖：麦芽糊精＝3:1:0.5；

所述脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液的浓度优选为：脱脂奶粉5％，海藻糖1％，麦芽糊精2％。

2)包被：将芯材悬浮在流化床中，壁材喷雾包被，从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液，从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液，喷雾速度控制相同，包被过程中流化床内温度在25-38℃之间，30分钟后即形成胶囊。

所述酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液加热到30-45℃，调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1％的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时，酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

所述羊肚菌酶解粉制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到50-60℃，调整pH到4.5-6.0,加入羊肚菌子实体重量0.05-0.1％的纤维素酶、0.01-0.1％的β-葡聚糖酶、0.01-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时，酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥获得羊肚菌酶解粉。

所述干燥可以采用常规喷雾干燥、冷冻干燥等干燥形式。

所述冻干保护剂由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精组成。

本发明胶囊产品包含的植物乳杆菌优选菌株tlj-2014，该菌株已于2014年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编：100101)，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，保藏号为CGMCC NO.9405。

本发明中植物乳杆菌CGMCC No.9405菌株生理特点如下：在显微镜下观察，该菌株为短杆状，革兰氏染色呈阳性，无鞭毛，不产芽孢；在固体培养基上，该菌菌落为白色，表面光滑，致密，形态为圆形，边缘较整齐。

理化特征为：过氧化氢酶(-)，明胶液化(-)，吲哚实验(+)，运动性(-)，发酵产气(-)，亚硝酸盐还原(-)，发酵产气(-)，产硫化氢气体(-)，pH 4.0MRS培养基中生长(+)。((-)表示反应结果呈阴性，(+)表示反应结果呈阳性。)

本发明的胶囊产品作为饲料添加剂可以广泛应用于各类动物的饲料中，但优选用于禽类动物的饲料中。本发明胶囊产品在饲料中的添加量为3-5％，或每只畜禽每日使用10-20克。

有益效果：

本发明提供的乳酸菌微胶囊，其壁材中添加了改性大豆分离蛋白，改性大豆分离蛋白比大豆分离蛋白乳化能力提高25％、胶凝能力提高15-25％，改性大豆分离蛋白黄原胶和卡拉胶及壳聚糖的配合使用，凝胶强度提高了10％以上，增强了胶囊的耐胃酸性；

本发明胶囊采用改性大豆分离蛋白，具有很好的肠溶性，胶囊到达肠道后在1-1.5小时内即可完全崩解释放出植物乳杆菌，并迅速增殖成为优势菌群，从而达到抑制病原菌生长等作用。

本发明利用羊肚菌酶解粉复配而成，经过酶解处理，不仅使其营养成分有效释放到产品中，同时也使得羊肚菌的特殊香味通过酶解得到有效释放，使产品兼具羊肚菌的营养特性。

具体实施方式

实施例1

本发明所用植物乳杆菌CGMCC No.9405的选育过程如下：

原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→亚硝基胍(NTG)诱变→等离子体诱变→平板初筛→摇瓶复筛→传代稳定性试验。

本发明所采用的出发菌株在MRS葡萄糖培养基中，其乳酸的生产速率为1.5g/L/d,当培养基pH为3.5时几乎停止生长，对亚硝酸钠的分解速率为0.34mg/h/kg白菜。出发菌株由李政采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料，采集时间2013年9月15日。

为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率，依次采用DES和NTG技术对该菌种进行诱变，诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛，然后采用500mL摇瓶发酵，生物传感器分析仪对高产菌进行复筛，选育优良的植物乳杆菌菌株，然后做传代实验，评价其遗传稳定性。

植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明：经过连续传代十次，各项性能指标都比较稳定，遗传性较好，性状没有回复，因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的菌株。

经验证发现：该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时发酵后乳酸浓度达到95g/L；能够在pH为1.80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到9.8mg/h/kg(自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1.1mg/h/kg)，能够耐1％胆盐。

1)DES诱变选育

a.在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L一环(出发菌)，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂，葡萄糖20g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长前期。

b.取5mL菌液，5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。

c.用pH7.0磷酸缓冲液稀释成10⁷个/mL菌悬液。

d.取32mL pH7.0的磷酸钾缓冲液、8mL菌悬液、0.4mL DES在预先放入转子的150mL三角瓶中充分混合，使DES最终浓度为1％(v/v)。

e.在37℃摇床中150rpm反应30min，取1mL混合液，加入0.5mL 25％Na₂S₂O₃溶液中止反应。

f.适当稀释，取最后稀释度的菌液0.2mL，涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2～3天后，采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

g.在37℃培养2～3天后，挑选菌落较大，分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选，挑取出的菌落命名为植物乳杆菌L1。

2)亚硝基胍诱变

a.在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L1一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为60g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长前期。

b.取5mL菌液5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。

c.用pH6.0磷酸缓冲液稀释成10⁷个/mL菌悬液。

d.取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。

e.在37℃下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心10min收集菌体，用无菌生理盐水洗涤数次，中止反应。

f.适当稀释，取最后稀释度的菌液0.2mL，涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2～3天后，采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

g.挑选菌株方法：挑选菌落较大，分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选，挑取100支符合以上条件的菌落。

3)摇瓶复筛

a.在超净台上分别取各试管斜面上的植物乳杆菌一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为100g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养15h左右，使菌体处于对数生长中期。

b.分别取5mL菌液，接入装有50mL碳酸钙筛选液体培养基(含250g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中、pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS液体培养基(低pH值改性MRS培养基)和亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上(注：采用250mL三角瓶)。200rpm，37℃培养3-4天，每天分别检测碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。发酵结束后，比较100株菌种的碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。

c.选择兼具高L-乳酸产生速率、耐受低pH(该菌种仅能在最低为pH1.8的培养基中生长)和亚硝酸盐的消耗速率高的菌株，将其命名为L2菌。

4)遗传稳定性试验

将L2菌在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指标都正常，说明该菌种的遗传稳定性较强。菌株命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014。

5)5L发酵罐试验

a.取斜面上的植物乳杆菌L2一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长中期。

b.将对数期的菌种接入装有3L MRS液体培养基(初始葡萄糖为150g/L)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧培养63小时。发酵结束后，植物乳杆菌L2的乳酸产量达到95g/L。

c.将对数期的菌种接入装有3L pH为1.8的LPHMRS液体培养基(初始葡萄糖为50g/L)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧，整个过程用0.5mol/L的氢氧化钠将发酵液pH控制在1.8，总培养时间为48小时。发酵结束后，检测植物乳杆菌L2的生物量为2.5g/L，说明植物乳杆菌L2能够在pH1.8的环境中生存。

d.将对数期的菌种接入装有3L亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧，发酵过程根据亚硝酸盐的消耗速率流加20g/L的亚硝酸钠溶液，培养2-3天。发酵结束后，计算发酵过程植物乳杆菌L2对亚硝酸钠的降解速率。结果发现：在该条件下，L2对亚硝酸钠的降解速率可以达到563mg/h/L。

实施例2

植物乳杆菌胶囊产品由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。

所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成；上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为：酶解大豆分离蛋白10％、壳聚糖1％、黄原胶3％、卡拉胶0.1％、甘油0.5％，海藻糖0.5％。

酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液加热到30-33℃，调整pH到3,加入大豆分离蛋白重量0.2％的酸性蛋白酶保温酶解1.5小时，酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

植物乳杆菌为保藏编号CGMCC NO.9405菌种。

所述羊肚菌酶解粉的制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3倍重量的水，浸泡5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.6±1微米，胶体磨流量为0.5吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到50℃，调整pH到6.0,加入羊肚菌子实体重量0.05％的纤维素酶、0.01％的β-葡聚糖酶、0.1％的蛋白酶，保温酶解1.5小时，酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后喷雾干燥获得羊肚菌酶解粉。

上述植物乳杆菌胶囊的制备方法步骤如下：

1)制备芯材：向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3％的水苏糖和8％的羊肚菌酶解粉，然后与冻干保护剂溶液混合，-50℃下预冻0.5h，然后在真空冷冻干燥机中冻干10h，冻干后研磨粉碎制成芯材；发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:1.4；冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成；三种溶液的体积比为脱脂奶粉：海藻糖：麦芽糊精＝3:1:0.5；

所述脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液的浓度分别为：脱脂奶粉5％，海藻糖1％，麦芽糊精2％。

2)包被：将芯材悬浮在流化床中，壁材喷雾包被，从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液，从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液，喷雾速度控制相同，包被过程中流化床内温度在28℃，30分钟后即形成胶囊。

实施例3

植物乳杆菌胶囊产品由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。

所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成；上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为：酶解大豆分离蛋白7％、壳聚糖2％、黄原胶1％、卡拉胶0.5％、甘油1％，海藻糖2％。

酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液加热到42-45℃，调整pH到5,加入大豆分离蛋白重量1％的酸性蛋白酶保温酶解0.5小时，酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

羊肚菌酶解粉制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体6倍重量的水，浸泡3小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为1微米，胶体磨流量为1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到60℃，调整pH到4.5,加入羊肚菌子实体重量0.1％的纤维素酶、0.1％的β-葡聚糖酶、0.01％的蛋白酶，保温酶解0.5小时，酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后真空冷冻干燥获得羊肚菌酶解粉。

上述植物乳杆菌胶囊的制备方法步骤如下：

1)制备芯材：向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3％的水苏糖和8％的羊肚菌酶解粉，然后与冻干保护剂溶液混合，-50℃下预冻0.5h，然后在真空冷冻干燥机中冻干10-18h，冻干后研磨粉碎制成芯材；

所述发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:0.8；所述冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成；三种溶液的体积比为脱脂奶粉：海藻糖：麦芽糊精＝3:1:0.5；

2)包被：将芯材悬浮在流化床中，壁材喷雾包被，从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液，从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液，喷雾速度控制相同，包被过程中流化床内温度在38℃，30分钟后即形成胶囊。

植物乳杆菌为保藏编号CGMCC NO.9405菌种。

实施例4

植物乳杆菌胶囊产品耐胆盐测试。

将实施例2-3中制备的胶囊产品置于37℃的猪胆盐溶液(溶液浓度3.0％)中保温并不断搅拌，2h后取出，用灭菌生理盐水洗涤，用解囊液溶解，测定乳酸菌存活率，并与未包埋的菌液进行比较。测试结果如下表所示。

	形态变化	存活率
			实施例1	不崩解	87.5％
实施例2	不崩解	89.3％
			未包被对照	--	0.65％

实施例5

本发明实施例2制备的胶囊产品应用于饲料添加剂在哺乳母猪中的使用效果试验。

在宁夏选择猪场进行了为期21天的饲喂试验。试验采用单因素对比设计，随机选取50头健康的、产仔头数与出生均重相近的、胎次均为2或3胎的哺乳母猪，随机分为2组(即试验组和对照组)，每组15个重复。其中：试验组日粮添加由实施例2制备的本产品胶囊，对照组为添加市场同类产品。记录仔猪断奶重、腹泻率、死亡率。试验结果如下表所示。

项目	试验组	对照组
			产活仔数(头数)	10.9	11.0
出生均重(kg)	1.46	1.48
			21天断奶小猪(头)	10	8.30
21天断奶窝重(kg)	66.4	44.4
			21天断奶均重(kg)	6.64	5.35
头净增重(kg)	5.18	3.87
			仔猪腹泻率(％)	6.1	11.3
死亡率(％)	1.7	4.1

试验结果表明：本发明方法制备的胶囊可改善母猪和仔猪机体免疫能力，减少抗生素用量，增加养殖质量和效益。

实施例6

本发明实施例2制备的胶囊产品应用于饲料添加剂饲喂断奶雏鸡的效果试验。

在宁夏某养鸡场进行试验。采用单因子实验设计，选取1日龄雏鸡600只，要求体重均在(35±1)g。随机分成对照组300只和本发明试验组300只，每组设置3个重复，每个重复100只。选用市场上某种质量最好的雏鸡育雏期饲料饲喂对照组，在该饲料基础上添加本发明实施例2产品饲喂试验组，试验期间其他环境条件均保持一致且符合雏鸡饲养管理规范。

试验期4周，测定指标包括：体重、采食量、成活率、发病率。试验结果如下表所示。

项目	对照组	本发明试验组
			试验鸡数(只)	300	300
雏鸡初生重(g)	35±1	35±1
			4周末体重(g)	415.56±2.25	640.50±3.42
采食量(g)	517.30±0.67	568.27±0.73
			成活率(％)	96.33	99.00
发病率(％)	5.33	2.33

试验结果表明：饲喂4周后本发明试验组鸡只体重和采食量明显高于对照组，说明本发明方法制备的产品能够促进消化增强食欲，有利于禽类生长发育。本发明试验组在鸡只成活率和发病率方面也较对照组具有明显优势，说明本发明方法制备的产品能够帮助改善畜禽消化系统环境，有效抑制病原菌生长，提高免疫力，降低病死率。

Claims (5)

1.一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，所述胶囊由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成，所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成，上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为：酶解大豆分离蛋白7-10％、壳聚糖1-2％、黄原胶1-3％、卡拉胶0.1-0.5％、甘油0.3-1％，海藻糖0.5-2％；所述植物乳杆菌的保藏号为CGMCC NO.9405；所述制备方法步骤如下：

1)制备芯材：向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5％的水苏糖和5-8％的羊肚菌酶解粉，然后与冻干保护剂溶液混合，-50℃下预冻0.5h，然后在真空冷冻干燥机中冻干10-18h，冻干后研磨粉碎制成芯材；所述冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精三种溶液体积比3:1:0.5组成；

2)包被：将芯材悬浮在流化床中，壁材喷雾包被，从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液，从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液，喷雾速度控制相同，包被过程中流化床内温度在25-38℃之间，30分钟后即形成胶囊。

2.如权利要求1所述的一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，其特征在于，所述酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液加热到30-45℃，调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1％的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时，酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

3.如权利要求1所述的一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，其特征在于，所述羊肚菌酶解粉的制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到50-60℃，调整pH到4.5-6.0,加入羊肚菌子实体重量0.05-0.1％的纤维素酶、0.01-0.1％的β-葡聚糖酶、0.01-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时，酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥获得羊肚菌酶解粉。

4.如权利要求1所述的一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，其特征在于，所述发酵液与冻干保护剂溶液混合时的比例为1:1.4-0.8。

5.如权利要求1所述的一种植物乳杆菌胶囊的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂中三种溶液的浓度分别为：脱脂奶粉5％，海藻糖1％，麦芽糊精2％。