CN104371979A - 一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的单克隆抗体及其应用，属于免疫学领域。本发明将Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒免疫接种小鼠后，将鼠脾脏细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，筛选产生抗Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.9232，其分泌的单克隆抗体效价高，中和活性强，能在体外有效阻断Ⅱ型脊髓灰质炎病毒的感染；同时抗体可以特异性的区分Ⅱ型与Ⅰ、Ⅲ型脊灰病毒以及其他多种肠道病毒，可用于制备脊髓灰质炎病毒Ⅱ型以及脊髓灰质炎灭活疫苗中的Ⅱ型抗原含量检测试剂盒和抗体检测试剂盒，也可以用于Ⅱ型脊髓灰质炎病毒的鉴别检测，具有广泛的应用前景。

Description

一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及免疫学领域与疫苗学领域，具体地，涉及一种抗Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的中和性单克隆抗体及产生该抗体的杂交瘤细胞株以及抗体的应用。
背景技术
脊髓灰质炎疾病早在公元前1580-1350时期就存在于人类社会中，最早的证据来源于古埃及石壁画中一个呈站立姿态的人物，具有明显的脊髓灰质炎疾病症状：腿部弯曲萎缩，脚面畸形。然而，直到1789年，英国人Michael Underwood才首次描述了脊髓灰质炎疾病的临床症状，称之为“下肢衰弱”。半个世纪后，德国人的研究表明脊髓灰质炎疾病可能具备传染性。1894年在美国爆发了有记载以来最大规模的婴儿瘫痪灾难，后来被证实罹患的是脊髓灰质炎疾病。1908年澳大利亚医生Karl Landsteiner和Erwin Popper首次提出了假说，认为脊髓灰质炎疾病是由一种病毒引起的。随后在美国流行的疫情更加速了人们对疾病传播的研究。直到1931年Macfarlane Burnet和JeanMacNamara首次解释了三种脊髓灰质炎病毒(后称脊灰病毒)，即Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。上述三种病毒导致脊髓灰质炎(poliomyelitis)疾病，该疾病是一种传播广泛、侵犯中枢神经系统的传染病。感染脊灰病毒的患者中有90％没有临床症状或只有很轻的临床症状。这些症状包括发烧、头疼、呕吐、疲劳、脖颈僵直、四肢疼痛等。在每200名受感染的患者中会有一位产生不可逆的瘫痪，部位主要集中在腿部。更为严重的瘫痪症状可以延伸到患者的躯干，包括胸部和腹部肌肉的麻痹，最为严重的症状是当脊灰病毒侵染脑部细胞后造成中枢呼吸系统的破坏，导致吞咽和说话的困难。有5-10％的患者因为呼吸肌麻痹导致死亡。脊髓灰质炎疫苗(包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的脊髓灰质炎病毒)是预防脊髓灰质炎疾病的有效手段，脊髓灰质炎疫苗包括脊髓灰质炎减毒活疫苗和脊髓灰质炎灭活疫苗，前者为口服疫苗，后者为注射用疫苗。
自1988年实施消灭脊髓灰质炎(脊灰)战略以来，我国通过接种口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)消灭了本土野毒株引起的脊髓灰质炎。但是仍存在OPV引起的疫苗相关麻痹病例(VAPP)和疫苗衍生株(VDPV)，脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)基本可避免OPV上述缺点。WHO指出当全球证实消除脊灰后，将停止使用OPV，届时可能需要脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)来长期保持脊灰免疫水平。相对于野毒株IPV，Sabin株IPV在制造和使用过程中更安全，对它的研究受到了WHO的高度重视。目前生产脊髓灰质炎减毒株灭活疫苗的国家有中国、日本及荷兰。
如上所述，根据抗原决定簇不同脊髓灰质炎病毒可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三个血清型，任何一型病毒造成的疾病都称为脊髓灰质炎。Ⅰ型易引起瘫痪，也最容易引起流行。三个型别的病毒间中和试验无交叉反应。每种脊髓灰质炎病毒均有两种抗原，D(致密)抗原和C(无核心)抗原。前者存在于成熟的、有感染性的病毒颗粒中，是脊髓灰质炎病毒的中和抗原，具有型特异性。C抗原存在于经过56℃灭活，或者未成熟的空心病毒颗粒中，是一种耐热的抗原成份，与三个型别的脊髓灰质炎病毒的抗血清均呈补体结合阳性反应。D抗原含量反应完整的病毒抗原颗粒的多少，是体外测定IPV效力的关键指标，与疫苗在人体内的免疫效力有较好的一致性。脊髓灰质炎病毒抗体是指动物或人体抗脊髓灰质炎各型别病毒产生的IgG、IgM等类型抗体的总称，广泛应用于脊髓灰质炎病毒鉴定、脊髓灰质炎疫苗以及各型别抗原的定性和定量检测中。
由于目前脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原检测普遍采用的多抗包被——多抗夹心的检测体系，该体系对于Ⅰ、Ⅲ型存在较大的交叉反应，尤其在用于三型混合疫苗Sabin株IPV的Ⅱ型抗原检测时，由于交叉反应导致检测结果不能真实反应Ⅱ型抗原的含量以及疫苗Ⅱ型的免疫原性，同时WHO也推荐采用多抗与单抗匹配的方式检测三价脊灰疫苗中的各型抗原含量；目前国际上尚缺乏Sabin株IPV D抗原检测的标准化的试剂，制备特异性好，具有中和活性的单克隆抗体，可为Sabin株IPV体外效力检测方法的标准化奠定基础。因此，有必要制备一种型特异的脊灰Ⅱ型单克隆抗体，用于Ⅱ型脊灰抗原、抗体的检测与病毒的鉴别。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的中和性单克隆抗体，用于Ⅱ型脊灰病毒抗原含量的检测。本发明的另一目的在于提供上述单克隆抗体的应用。
为了达到上述目的，本发明首先提供一种分泌Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的中和性单克隆抗体杂交瘤细胞株SVASIPV-Ⅱ，于2014年5月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，邮编100101)保藏，分类命名为Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型单抗杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.9232。
本发明提供了保藏编号为CGMCC No.9232是杂交瘤细胞株在制备预防或治疗脊髓灰质炎药物中的应用。
本发明还提供了由上述杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体。
具体而言，本发明采用小鼠骨髓瘤细胞杂交瘤技术制备Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的中和性单克隆抗体，通过以下技术方案实现：通过将免疫脊髓灰质炎病毒原液的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，分离出能够分泌脊髓灰质炎抗体的单克隆杂交瘤细胞，接种小鼠腹腔，制备含有特异性脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗体的腹水，经过后期处理并验证，得到特异性好、抗体水平高且能长期保存的Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体。
进一步，本发明提供了一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No.9232的杂交瘤细胞株分泌获得。
进一步，本发明提供了一种使用Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒直接免疫动物制备多克隆抗体和单克隆抗体制备的全新模式，收获液的免疫效果优于常规的疫苗原液添加佐剂的免疫效果，可以为其他病毒制备抗体提供参考，因此采用Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒收获液免疫小鼠制备杂交瘤细胞。
所述脊髓灰质炎病毒Sabin株Ⅱ型病毒收获液的制备方法为：取Ⅱ型病毒制备的工作种子批毒种按MOI＝10～0.05接种Vero或其他原代、传代细胞，接种病毒时的细胞浓度为0.1-10×106细胞/ml，病毒培养后收获细胞上清，即为Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅱ型病毒收获液。
更进一步地，本发明提供了上述单克隆抗体在制备检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原试剂盒中的应用。
本发明提供了上述的单克隆抗体在制备检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗体试剂盒中的应用。
本发明提供了一种用于检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原或抗体的试剂盒，含有上述单克隆抗体。
对本发明的单克隆抗体，经生物标记或化学标记后获得的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。
进一步地，经酶标记的上述单克隆抗体属于本发明的保护范围。
所述的酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
该单克隆抗体不进行生物标记或化学标记，而添加第二抗体；即采用一种物种的抗脊灰抗体包被酶标板，添加脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原后，加入本发明单抗，然后加入抗属二抗HRP，用于检测或制备检测试剂。
本发明提供了一种可以用于脊髓灰质炎治疗性抗体的改造的细胞株，以及包含于细胞株的保护性抗体的基因信息。
本发明提供的Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体具有如下有益效果：
1、本发明的单克隆抗体具有较高的效价即反应性，间接法效价最高可达106。
2、本发明的单克隆抗体具有较高的中和效价，可以有效反映脊髓灰质炎Ⅱ型病毒有效抗原表位，用于抗原含量检测优于多抗——多抗的检测体系；同时该单抗反映的中和表位即有效抗体，可用于抗脊髓灰质炎IgG抗体竞争法检测，用于疫苗免疫效果的评价及流行病学调查，更加有效的评价疫苗的免疫效果及地区的过往发病史。
3、本发明的脊髓灰质炎Ⅱ型单克隆抗体可以特异性的区分脊髓灰质炎Ⅱ型病毒和Ⅰ、Ⅲ型病毒，不与其反应，是能够与sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒特异性结合的单抗。
4、本发明的单克隆抗体与甲肝病毒、肠道病毒71型病毒、柯萨奇A16病毒等无交叉反应，均有较好的病毒特异性。
5、单克隆抗体可广泛应用于脊髓灰质炎病毒的检测、鉴别、筛查与疫苗生产的抗原检测以及流行病调查中；同时检测的是抗原决定簇，可以更加有效的反应疫苗的有效组分，对疫苗的工艺研究与生产具有重要意义。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
本发明选用的Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒来自荷兰Intravacc，代次SO+2代，但毒株不限于本来源与本代次的毒株。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；实施例中所用的试剂为市售商品。
实施例1 免疫原制备与动物免疫
(1)取Vero细胞工作细胞库复苏后于36.5±0.5℃培养，至细胞浓度为0.1-10×106细胞/ml时，接种病毒。
(2)取Intravacc来源的sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒制备的工作种子批毒种按MOI＝10～0.05接种Vero细胞，置32.5±0.5℃培养。
(3)病毒培养2～4天,收获细胞上清，即为脊髓灰质炎病毒Sabin株Ⅱ型病毒收获液。
(4)Ⅱ型收获液澄清后用超滤膜包浓缩5倍以上。
(5)然后进行分子筛层析和离子交换层析，监测波长为280nm，分别收集洗脱液和流穿液，即得纯化液，甲醛灭活后即得Ⅱ型疫苗原液。
(6)将疫苗原液与弗氏佐剂(0天免疫为弗氏完全佐剂，14天、28天免疫为弗氏不完全佐剂)等体积混合乳化后于0天、14天、28天背部皮下多点免疫BALB/c小鼠，0.2ml/只。Ⅱ型收获液于0天、14天、28天背部皮下多点免疫BALB/c小鼠，0.2ml/只。
(7)末次免疫一周后采血检测抗体效价，血清稀释104时收获液免疫小鼠血清的间接ELISA的OD值为1.816，原液加佐剂免疫小鼠血清的间接ELISA的OD值为0.193，收获液免疫小鼠血清效价高于疫苗原液加佐剂免疫小鼠，确定采用收获液免疫小鼠进行细胞融合筛选单抗。于末次免疫二周后采用收获液腹腔冲击选定的小鼠，3天后取小鼠脾脏，进行细胞融合。
实施例2 细胞融合及建株
(1)细胞融合前复苏培养SP2/0细胞株，融合前3天扩大培养，融合前1天去除RPMI 1640细胞培养液(Gibco)，重新添加培养液，准备SP2/0细胞。
(2)处死免疫小鼠，按常规方法制备小鼠脾细胞悬液。
(3)根据脾细胞与SP2/0细胞计数结果分别加入适量不完全IMDM培养液(Gibco)，SP2/0细胞晃动混匀，脾细胞用移液管吹打均匀。然后将脾细胞与SP2/0细胞按1:2～10:1混合于50ml离心管中，混匀。
(4)加不完全IMDM培养液至50ml，离心5-10分钟，倒净上清。轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀，离心管置37℃水浴，准备融合。
(5)将37℃预热的50％的PEG40001ml，用滴管缓慢滴入混合细胞管，边滴边转动离心管，使细胞保存在混匀状态。
(6)静置90s后立即缓慢加入15ml无血清的IMDM培养基(Gibco)(37℃)，然后离心5-10分钟，弃去上清。
(7)加入IMDM完全培养液(Gibco)，混匀，将混悬液分别加至96孔细胞培养板中，100μl/孔，于37℃，5％CO2培养箱内培养。
(8)第2天细胞板加HAT培养液(IMDM含1*HAT(Sigma))100μl/孔。
(9)每2-3天换一次HAT培养液，观察是否出现杂交瘤，两周后换HT培养基(IMDM含1*的HT(Sigma))，观察融合细胞生长状况。
(10)细胞融合后第七天开始观察杂交瘤细胞生长情况，待其长至孔底面积1/10以上时吸出上清进行抗体ELISA检测。将阳性孔细胞转入24孔板扩大培养，及时做亚克隆。
(11)经3次亚克隆得到稳定分泌抗体的细胞系，命名为SVASIPV-Ⅱ，冻存细胞。将杂交瘤细胞株进行保藏，保藏号CGMCC NO.9232，分类命名为：Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型单抗杂交瘤细胞株；保藏时间：2014年5月26日；保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。
实施例3 单抗细胞株腹水制备与抗体效价检测
按常规方法将冻存的实施例2获得的杂交瘤细胞进行复苏，培养，待细胞覆盖25ml的细胞培养瓶瓶底50％以上时即可按照常规方法腹腔接种BALB/c小鼠，定期收集腹水SIPV-Ⅱ。
将脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗原液采用0.01M PBS1:20稀释，100μl/孔包被酶标板，2-8℃过夜，检测脊髓灰质炎Ⅱ型腹水SIPV-Ⅱ的抗体效价，抗体效价最高达为106，结果见表1。
表1 抗体效价检测结果
实施例4 抗体特异性检测结果
将脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅲ型疫苗原液采用0.01M PBS 1:20稀释，100μl/孔包被酶标板，2-8℃过夜，检测实施例3获得的脊髓灰质炎Ⅱ型腹水SIPV-Ⅱ的抗体效价，均为阴性，结果见表2。
表2 间接ELISA法抗体特异性检测结果
本发明中SVA SIPV-Ⅱ分泌的单抗(SIPV-Ⅱ)不与脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅲ型病毒反应，说明该单克隆抗体能够区分该单克隆抗体Ⅱ型与Ⅰ型、Ⅲ型病毒，本发明SVA SIPV-Ⅱ杂交瘤细胞分泌的单抗在脊灰混合样品的检测时可以特异的识别脊髓灰质炎Ⅱ型抗原，而不被其他两型干扰，具有较好的特异性和应用价值。
实施例5 本发明的单克隆抗体中和效价结果
采用微量细胞中和法，检测实施例3获得的脊髓灰质炎杂交瘤细胞株SVA SIPV-Ⅱ分泌的腹水SIPV-Ⅱ针对于脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒的抗体中和效价，结果如下：
表3 单克隆抗体中和检测结果
抗病毒型别 抗Ⅰ型病毒 抗Ⅱ型病毒 抗Ⅲ型病毒
病毒回滴 133 100 178
SIPV-Ⅱ腹水 ＜1：8 1：4096 ＜1：8
本发明对脊髓灰质炎Ⅱ型病毒具有1：4096的中和效价，能有效和脊髓灰质炎Ⅱ型病毒发生中和效应，表明该单抗具有良好的中和效果，它针对的表位是脊髓灰质炎Ⅱ型病毒的中和性表位，即抗原决定簇，该表位的存在与检出直接反应疫苗的免疫效果，表明采用该单抗检测抗原可以反应疫苗的有效性；本发明不与脊髓灰质炎Ⅰ型、Ⅲ型病毒产生中和反应(<1:8为公认阴性标准)，进一步证明该单抗具有良好的特异性。
实施例6 抗体亚类测定
将Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗原液采用0.01M PBS 1:20倍稀释后100μl/孔包被酶标板2-8℃过夜，然后采用Sigma公司ISO2-1KT鼠单抗分型试剂按照单抗亚类试剂说明书进行试验，最后加入HRP标记的兔抗羊二抗进行单克隆抗体亚类鉴定。结果显示本发明单抗为IgG2a型。
实施例7 免疫印迹(Western blotting)实验
将Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型灭活疫苗原液采用BIO-RAD的电泳电转设备使用12％的SDS-PAGE电泳胶进行电泳后进行电转到硝酸纤维素膜后，以本发明杂交瘤细胞腹水为一抗(1：2000)，AP-羊抗鼠IgG为二抗进行Western blotting鉴定，结果显示，杂交瘤细胞SVA SIPV-Ⅱ分泌的单克隆抗体SIPV-Ⅱ与Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒VP1、VP2、VP3、VP4均不反应，表明该单抗与变性后的抗原不能产生反应，说明本发明杂交瘤细胞SVA SIPV-Ⅱ分泌的单抗SIPV-Ⅱ不能识别线性表位，是构象性单抗，识别空间结构。
实施例8 亲和常数测定
将本发明的杂交瘤细胞株分泌的单抗SIPV-Ⅱ纯化后检测蛋白质含量，采用1:5,1:10,1:20稀释的不同浓度的Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒横向包被酶标板，100μl/孔，2-8℃包被过夜。第二天洗板后封闭2小时，拍干待用。将纯化抗体2倍梯度稀释，纵向加入包被后的酶标板，采用间接ELISA法检测抗原抗体反应的OD值。以各抗原浓度时的曲线平坦段的OD值计为100％，计算50％OD值，考察50％OD值所对应点的单抗浓度[Ab]t，再根据亲和常数计算公式可以得到本发明单抗的亲和常数为2.85×109M-1。
实施例9 杂交瘤细胞系分泌单抗的稳定性检测
分别在3个月和9个月后，从液氮中取出冻存的SVA SIPV-Ⅱ杂交瘤细胞株进行复苏、扩大培养后，制备腹水，进行间接ELISA检测抗体效价，以前期制备的腹水为对照同时进行检测。结果本发明的杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体腹水效价达到106以上，与前期腹水效价无差异，表明细胞保藏后制备的腹水的效价未下降。因此单克隆细胞株分泌抗体的活性没有降低，稳定性良好。
实施例10 抗原含量检测试剂盒初步结果
将脊髓灰质炎Ⅱ型兔多抗采用0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6)1:10000稀释，100μl/孔包被酶标板，2-8℃过夜。封闭液37℃封闭2小时，分别加入脊髓灰质炎Ⅱ型抗原参比品和3批脊髓灰质炎灭活疫苗，37℃反应1小时，洗板后加入纯化后的1:4000稀释的本发明脊髓灰质炎Ⅱ型单抗SIPV-Ⅱ，37℃反应1小时，洗板后加入1:10000稀释的羊抗鼠HRP，37℃反应1小时后洗板进行显色、终止、读数，检测脊髓灰质炎灭活疫苗的Ⅱ型抗原含量。结果见表4。
表4 抗原含量检测方法应用
采用本发明建立的抗原含量检测方法检测3批脊髓灰质炎灭活疫苗中的Ⅱ型抗原含量，检测值相对于理论值的回收率分别为110％-111％之间，在酶联免疫法允许的误差范围以内，抗原含量的检测结果与理论值一致，检测方法准确可靠。本发明具有较好的应用效果。
实施例11 抗原含量检测试剂盒特异性研究
将脊髓灰质炎Ⅱ型兔多抗采用0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6)1:10000稀释，100μl/孔包被酶标板，2-8℃过夜(12-18小时)。封闭液37℃封闭2小时，分别加入脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型疫苗原液、甲肝灭活疫苗原液、柯萨奇A16(CA16)灭活疫苗原液、CA16收获液、肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗原液、EV71收获液，37℃反应1小时，洗板后加入纯化后的1:4000稀释的本发明脊髓灰质炎Ⅱ型单抗SIPV-Ⅱ，37℃反应1小时，洗板后加入1:10000稀释的羊抗鼠HRP，37℃反应1小时后洗板进行显色、终止、读数，检测样品的抗原含量，结果见表5。
表5 单克隆抗体特异性OD值
本发明与脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅲ型抗原、甲肝灭活疫苗原液、CA16灭活疫苗原液、CA16收获液、EV71灭活疫苗原液、EV71收获液均不反应，表明本发明可以有效区分上述病毒，同时采用本发明建立的体系和培养基以及Vero细胞培养物不存在交叉反应，可以有效检出脊髓灰质炎Ⅱ抗原，具有高度的特异性。
本发明在用于抗原含量检测时，可以作为双抗体夹心ELISA检测试剂盒的包被抗体，也可用对它进行生物标记或化学标记，作为双抗体夹心ELISA检测试剂盒的夹心酶标抗体；同时，也可以将它和另一物种的多抗配对使用，通过加入夹心抗体的第二酶标抗体的方法制备抗原含量检测试剂盒。
本发明用于抗体检测试剂盒时，可以作为包被抗体或者酶标竞争抗体，也可以作为竞争抗体并加入抗鼠酶标二抗的方法进行检测。
由于该单抗良好的中和试剂盒，它也具有预防和治疗脊髓灰质炎Ⅱ型病毒导致的脊髓灰质炎疾病的潜在功能。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种Sabin株脊髓灰质炎Ⅱ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.9232。
2.由权利要求1所述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。
3.权利要求2所述的单克隆抗体在制备检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原试剂盒中的应用。
4.权利要求2所述的单克隆抗体在制备检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗体试剂盒中的应用。
5.一种用于检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗原的试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述的单克隆抗体。
6.一种用于检测脊髓灰质炎Ⅱ型病毒抗体的试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述的单克隆抗体。
7.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，为经生物标记或化学标记的单克隆抗体。
8.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，为酶标记的单克隆抗体。
9.权利要求1所述的杂交瘤细胞株在制备预防或治疗脊髓灰质炎药物中的应用。
10.一种制备权利要求1所述杂交瘤细胞株的方法，其特征在于，采用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅱ型病毒收获液免疫小鼠，所述Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅱ型病毒收获液的制备方法为：取Ⅱ型病毒制备的工作种子批毒种按MOI＝10～0.05接种Vero或其他原代、传代细胞，接种病毒时的细胞浓度为0.1-10×106细胞/ml，病毒培养后收获细胞上清，即为Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅱ型病毒收获液。
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