CN104365680B - 一种湿地松松针提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种湿地松松针提取物,其通过如下方法制备:取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针,以粉碎松针与水的比为1∶(10~12)加入水提取24~26h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,接着用真空泵进行抽滤,得到松针提取物原液,所述松针提取物原液利用透析纯化得到具不同分子量范围的湿地松针提取物。所述湿地松松针的提取物在水产养殖中可以用来有效的抑制和杀灭青苔,改良水质,并且对环境和其他的水生生物无毒无害,无残留,无污染,不仅解决了水产养殖中防治青苔的难题,也开发了松针新的应用价值和前景。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖领域,涉及河蟹养殖池塘青苔的杀灭技术领域,具体地涉及一种湿地松松针提取物及其在青苔杀灭领域中的应用。
背景技术
湿地松为松科常绿乔木,该树种具有适应性强、前期生长快和松脂产量高等特点。研究表明,湿地松松针中含有大量挥发油、色素、纤维素、氨基酸、黄酮类等化合物,其中游离的氨基酸多达18种,富含人类必需的8种氨基酸,维生素比一般的水果蔬菜高出数倍甚至数十倍,此外还含有钙、磷、铁、锰等多种微量元素。湿地松松针提取物也有很强的药用价值,如消炎、降血脂、降血压、抑菌、抗衰老、抗癌等,已被学术界认可并且逐渐受到重视。据报道,松针还可用来制作优质的绿色畜禽饲料,禽蛋保藏中用来抗菌保鲜。
青苔是水体中藻类过度繁殖的产物,大量青苔生长破坏了水体藻相平衡,严重的破坏水质,因此池塘里过量的青苔对水产养殖危害非常大,造成严重的经济损失。而目前采用的青苔杀灭技术有物理法、化学法、生物法等。使用物理法费时费力;使用化学法有扑草净粉、硫酸铜等,对环境污染大,有残留,不安全;使用生物法如微生态制剂等成本高,效果甚微。
发明内容
发明目的:为解决现有技术中存在的问题,本发明提供一种湿地松松针提取物及其应用,通过提取湿地松松针的水溶性提取物并将其应用到水产养殖中,发现松针提取物对池塘青苔具有优异的杀灭作用。
技术方案:本发明一种湿地松松针提取物,所述松针提取物通过如下方法制备:取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针,以粉碎松针与水的比为1∶(10~12)加入水提取24~26h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,接着用真空泵进行抽滤,得到松针提取物原液,所述松针提取物原液利用透析纯化得到具不同分子量范围的湿地松针提取物。
本发明进一步提出了上述的湿地松松针提取物在水产养殖中防治青苔的应用。
优选地,所述的湿地松针提取物利用透析得到分子量小于等于10KD的组分,将具有该分子量范围的湿地松针提取物用于水产养殖中青苔的防止。
更为优选地,分子量小于等于1KD或3KD~10KD的湿地松针提取物具有跟优异的抑制水产养殖中青苔的效果。
本发明还进一步提出了上述的湿地松针提取物的乙醇浸提物在水产养殖中防治青苔的应用。
优选地,上述的湿地松针提取物的乙醇浸提物在使用时稀释到1/12倍~1/2倍。
具体地,所述的湿地松针提取物的乙醇浸提物通过如下方法制备:
利用装载有2/3吸附柱体积的AB-8树脂的吸附柱分别吸附所述不同截留分子量的松针提取物,然后用6倍吸附柱体积的乙醇溶液进行洗脱,分别收集各倍段体积的洗脱液并分别浓缩;将浓缩后的洗脱液分别用1KD分子截留量透析袋进行流动水透析24h得到不同洗脱倍段的湿地松针提取物的乙醇浸提物。
优选地,所述的乙醇的浓度为20wt%~95wt%,优选地,所述乙醇的浓度为40wt%~70wt%或70wt%~95wt%。
有益效果:本发明提供了一种湿地松松针的提取物,研究发现,所述湿地松松针的提取物在水产养殖中可以用来有效的抑制和杀灭青苔,改良水质,并且对环境和其他的水生生物无毒无害,无残留,无污染,不仅解决了水产养殖中防治青苔的难题,也开发了松针新的应用价值和前景,同时进一步发现,上述湿地松松针的乙醇浸提液同样具有优异的抑制和杀灭青苔的作用。
附图说明
图1为不同分子量松针提取液对青苔的抑制作用结果(培养48h);
图2为不同溶剂洗脱的松针提取液对青苔抑制作用结果(培养48h),其中BV表示倍段体积;
图3为乙醇洗脱松针提取液液不同稀释倍数对青苔抑制作用结果(培养48h);
图4为不同浓度乙醇洗脱松针提取液对青苔抑制作用结果(72h);
图5为不同洗脱体积乙醇洗脱松针提取液对青苔抑制作用结果(70%乙醇培养72h)。
具体实施方式
本发明所使用的试验材料和仪器如下:
试验材料:湿地松松针采江苏农林职业技术学院农博园,青苔采捞于江苏农林职业技术学院池塘;乙醇、氢氧化钠、盐酸、氯化钠均为国产分析纯;AB-8大孔吸附树脂,勾玉郑州市勤实科技有限公司;透析袋(分子截留量1KD)、透析袋(分子截留量3KD)、透析袋(分子截留量10KD)。
仪器:HY-02高速粉碎机,北京市环亚天元机械技术有限公司;SHZ-D循环水真空泵,巩义市予华仪器有限责任公司;电子万用炉,天津市泰斯特仪器有限公司;砂芯层析交换柱。
实施例1不同分子量的湿地松松针提取物松对青苔的抑制作用。
(1)制备原液
取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针100g,以料液比1∶10的比例分别加入自来水提取24h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,用真空泵进行抽滤,得到样品为原液。
(2)1KD分子量截留透析
用1KD分子量截留透析袋取湿地松的自来水提取液(原液)200mL(防止透析外液浓度过低)置于1000mL烧杯中进行透析,透析12h后取出透析外液(小于1KD成分)置于4℃冰箱中保存。再加入500mL蒸馏水继续透析,4h后更换蒸馏水,并重复3~5次,使透析袋内小于1KD的成分透析完全,保留透析内液,即得到截留分子量大于1KD的成分。
(3)3KD分子量截留透析
用3KD分子量截留透析袋对1KD分子量截留透析后的透析袋内液置于1000mL烧杯中进行透析,透析12h后取出透析外液(大于1KD小于3KD成分)置于4℃冰箱中保存。再加入500mL蒸馏水继续透析,4h后更换蒸馏水,并重复3~5次,使透析袋内小于3KD的成分透析完全,保留透析袋内液,即为大于3KD的成分。
(4)10KD分子量截留透析
用10KD分子量截留透析袋对3KD分子量截留后的透析内液置于1000mL烧杯中进行透析,透析12h后取出透析外液(大于3KD小于10KD成分)置于4℃冰箱中保存。再加入500mL蒸馏水继续透析,4h后更换蒸馏水,并重复3~5次,使透析袋内小于10KD的成分透析完全,保留透析袋内液,即为大于10KD的成分。
(5)青苔培养
(1)~(4)中收集的不同范围截留分子量的透析液均旋转蒸发浓缩至200mL并分别放置于200mL培养瓶中,对照组200mL河水,分别加2g青苔,阳光下培养,观察现象。结果如图1所示,青苔培养24h时对照液为清翠色伴有淡淡的鱼腥味,其他透析液颜色均为深色;48h时3KD~1KD段颜色为黑色,且有鱼腥味,1KD~3KD、大于10KD颜色加深变黑,但内有气泡;72h时3KD~10KD段颜色为黑色,且有腥臭味,1KD~3KD、大于10KD颜色加深变黑,但仍有气泡,小于1KD的颜色淡黄;96h时3KD~10KD段黑色,恶臭味,小于1KD颜色也变深,有腥臭味,1KD~3KD段颜色变黑,有少量气泡,大于10KD段也有少量气泡。
通过比较不同分子量对青苔的抑制作用发现,分子量小于10KD的松针成分对青苔具有抑制作用,尤其是小于1KD和3KD~10KD段抑制效果最好。
实施例2不同浓度NaCl洗脱的松针提取液对青苔抑制作用。
(1)树脂的预处理
取1支250mL离子交换柱装AB-8树脂,柱内装入约2/3体积的树脂,再于吸附柱内加入相当于装填树脂体积0.4~0.5倍体积的乙醇,浸泡树脂24h。用去离子水将乙醇洗净后,用3%的盐酸浸泡2h,去离子水将树脂洗至中性;再用3%的氢氧化钠溶液浸泡2h,去离子水洗至中性待用。
(2)穿透液的制备
取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针100g,以料液比1∶10的比例分别加入自来水提取24h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,用真空泵进行抽滤,得到样品为原液,约1000mL。从上述原液中取200mL用1KD分子量截留透析于流动水中透析24h,再取透析内液用10KD分子量截留的透析袋透析于1000mL烧杯中透析24h,浓缩透析液至200mL,得到浓缩液样品穿透液(即分子量大于1KD小于10KD透析液的浓缩液)。
(3)上样吸附
取处理好的树脂柱,加入步骤(3)中浓缩液样品穿透液200mL于吸附柱内,静置约15min使其充分吸附然后后打开开关,控制流速大约为3ml/min,使吸附液慢慢流出吸附柱,进行2次过柱,用烧杯接取流出液为穿透液。
(4)洗脱
分别按下述步骤完成10种洗脱处理:
①用1200mL自来水进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5倍段(图中标记为2.5-5BV,下文类似)500mL洗脱液收集(即从500mL~1000mL段,下文类似),并保留。
②用1200mL0.5%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5(2.5-5BV)倍段500mL洗脱液收集,并保留。
③用1200mL1%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5(2.5-5BV)倍段500mL洗脱液收集,并保留
④用1600mL4%NaCl溶液进行8倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5(2.5-5BV)倍段500mL和5-6倍段(5-6BV)200mL、6-7倍段(6-7BV)200mL、7-8倍段(7-8BV)200LmL洗脱液收集,并保留。
⑤用1200LmL6%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留,分别为0-1BV、1-2BV、2-3BV、3-4BV、4-5BV、5-6BV。
⑥用1200mL8%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5倍段(2.5-5BV)500mL洗脱液收集,并保留。
⑦用1200mL10%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5(2.5-5BV)倍段500mL洗脱液收集,并保留。
⑧用1200mL95%乙醇进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5倍段(2.5-5BV)500mL洗脱液收集,并保留。
⑨用1600mL蒸馏水进行8倍体积洗脱树脂柱,以便树脂的回收利用。
⑩用1200mL(4)中的穿透液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对2.5-5倍段500mL洗脱液收集,并保留
(5)浓缩
对步骤(4)中各组中收集到的洗脱液分别浓缩至200mL。
(6)透析
对所有步骤(5)中的200mL的浓缩洗脱液用1KD分子截留量透析袋进行流动水24h脱盐透析,将各个透析袋内的NaCl洗脱液旋转蒸发至体积为200mL用于青苔培养。
(7)青苔培养
取(6)中得到的所有透析后的NaCl洗脱液各200mL置于培养瓶中和,以及透析后的95%乙醇洗脱液浓缩至200mL后再用95%乙醇分别稀释到1/2倍、1/4倍、1/6倍、1/8倍、1/12倍,体积均为200mL,另取200mL河水做对照,每个烧杯中加2g青苔。观察其现象。
结果如图2所示,青苔培养24h时,95%乙醇洗脱液对苔藓有着明显的抑制作用,蒸馏水洗脱液和NaCl溶液洗脱液对苔藓无抑制作用;48h时95%乙醇洗脱液稀释1/2倍、1/4倍、1/6倍灰色,有腥臭味;96h时95%乙醇洗脱液1/2倍、1/4倍、1/6倍抑制效果最好,有腥臭味,他无明显变化。结果表明,蒸馏水、NaCl溶液洗脱液对苔藓无抑制作用,95%乙醇洗脱液对苔藓有抑制作用。95%乙醇洗脱液稀释1/2倍、1/4倍、1/6倍对苔藓具有明显的抑制作用,颜色变深,且有腥臭味,95%乙醇洗脱液稀释1/8倍、1/12倍效果比较差,如图3所示。
实施例3不同浓度乙醇洗脱的松针提取液对青苔抑制作用。
(1)树脂的预处理
取1支250mL离子交换柱装AB-8树脂,柱内内装入约2/3体积的树脂,再于吸附柱内加入相当于装填树脂体积0.4~0.5倍体积的乙醇,浸泡树脂24h。用去离子水将乙醇洗净后,用3%的盐酸浸泡2h,去离子水将树脂洗至中性;再用3%的氢氧化钠溶液浸泡2h,去离子水洗至中性待用。
(2)穿透液的制备
取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针100g,以料液比1∶10的比例分别加入自来水提取24h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,用真空泵进行抽滤,得到样品为原液。取原液200mL用1KD分子量截留透析袋流动水中透析24h,再取透析内液用10KD分子量截留透析袋1000mL烧杯中透析24h,浓缩透析液至200mL,为浓缩液样品穿透液,即分子量为1KD~10KD的浓缩液。
(3)上样吸附
取处理好的树脂柱,加入样品200mL于吸附柱内,静置约15min使其充分吸附然后打开开关,控制流速大约为3mL/min,使吸附液慢慢流出吸附柱,进行2次过柱,用烧杯接取流出液为穿透液
(4)洗脱
分别按下述步骤完成7种洗脱处理:
①用1200mL10%NaCl溶液进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
②用1600mL蒸馏水进行8倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
③用1200mL20%乙醇进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
④用1200mL40%乙醇进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
⑤用1200mL70%乙醇进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
⑥用1200mL95%乙醇进行6倍体积洗脱树脂柱,并用烧杯对每一倍段体积200mL洗脱液收集,并保留。
⑦用1600mL蒸馏水进行8倍体积洗脱树脂柱,以便树脂的回收利用。
(5)透析
对步骤(4)中各组所有收集的洗脱液浓缩至200mL后选择1KD分子量截留透析袋流动水透析24h,然后分别将透析袋内的洗脱液旋转蒸发至200mL。
(6)青苔培养
取(5)中所有透析后的洗脱液各200mL于培养瓶中,加2g青苔,并做对照。观察其现象,结果如图4至图5所示。
结果表明,用20%、40%、70%、95%4种不同浓度的乙醇洗脱大孔树脂吸附的松针提取液,其中40%~70%与70%~95%乙醇洗脱液对苔藓的抑制有非常明显的效果,颜色很深,并有腥臭味,如图4所示。结果表明,40%~70%与70%~95%乙醇洗脱液对苔藓有抑制效果。
如图5所示,青苔培养72h时,70%乙醇0-1倍段(0-1BV)、2-3BV、3-4BV、4-5BV,95%乙醇0-1BV、1-2BV、2-3BV、3-4BV、4-5BV都有显著地颜色变化,其他洗脱液无明显变化。同时,观察发现,96h时70%乙醇0-1BV、2-3BV、3-4BV、4-5BV、5-6BV,95%乙醇0-1BV、1-2BV、2-3BV、3-4BV、4-5BV、5-6BV颜色变黑,并有淡淡的臭水味,其他洗脱液无明显变化。结果表明,40%-70%乙醇0-1BV、2-3BV、3-4BV、4-5BV、5-6BV洗脱松针提取液对青苔有明显的抑制效果。70%-95%乙醇洗脱松针提取液0-6BV对青苔有抑制作用。
综上所述,松针有效成分分子量1KD~10KD对青苔有抑制作用,且分子量在3KD~10KD抑制效果最好;乙醇洗脱液原液至1/6倍对苔藓具有明显的抑制作用;40%-95%乙醇洗脱松针提取液对苔有明显的抑制作用;40%~70%乙醇2~6BV洗脱液与70%~95wt%乙醇洗脱松针提取液0~6BV对青苔有明显的抑制作用。
Claims (4)
1.一种湿地松松针提取物的乙醇浸提物在水产养殖中防治青苔的应用,其特征在于,包括如下步骤:
所述的湿地松针提取物的乙醇浸提物通过如下方法制备:
取新鲜湿地松松针用剪刀剪成2~3cm长,然后用高速粉碎机粉碎,取粉碎松针,以粉碎松针与水的比为1∶(10~12)加入水提取24~26h,然后用尼龙纱布过滤除去残渣,接着用真空泵进行抽滤,得到松针提取物原液,所述松针提取物原液利用透析纯化得到具不同分子量范围的湿地松针提取物;所述的湿地松针提取物的分子量小于等于10KD;
利用装载有2/3吸附柱体积的AB-8树脂的吸附柱分别吸附所述不同截留分子量的松针提取物,然后用6倍吸附柱体积的乙醇溶液进行洗脱,分别收集各倍段体积的洗脱液并分别浓缩;将浓缩后的洗脱液分别用1KD分子截留量透析袋进行流动水透析24h得到不同洗脱倍段的湿地松针提取物的乙醇浸提物。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的湿地松针提取物的分子量小于等于1KD或3KD~10KD。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的湿地松针提取物的乙醇浸提物在使用时稀释到1/12倍~1/2倍。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的乙醇的浓度为20wt%~95wt%。
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GR01 | Patent grant |