CN104352525A - 用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉、制备方法及其应用。所述鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂和保鲜剂混合均匀后，0℃以下低温保存；将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；将过滤后的血浆灭活除菌；将除菌后的血浆冷冻干燥1-5小时；加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.5-2μm；血浆纯粉抽真空将水分升华干燥而得冻干粉。本发明的鹅血冻干粉对小鼠肉瘤S180、小鼠结肠癌Clon-26、人体移植性肿瘤(胃癌)SGC具有明显的抑制作用，说明本发明的鹅血冻干粉能够有效治疗消化道肿瘤，特别是食道癌、胃癌、肠癌等。

Description

用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药制剂领域，更具体地说，本发明涉及用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉、制备方法及其应用。

背景技术

现代健康的需要，在中药制剂领域在传承、复兴和发扬中形成众多中医药老字号品牌，如同仁堂(1669)、胡庆余堂(1874)、大生祥(1885)、韩杏堂(1901)、阜通(1644)、杏和堂(1600)、公益大、陈直翁、怀德鹤(1948)、老人和泰、翁长春(1699)、傅济春、雅观斋(明万历年间)、雷允上等以及中医药健康茶老字号品牌如万泰元(1860)、朱乾升、大鹏红日、乾泰聚等，其中万泰元茶號更是荣获1915年万国世界博览会金奖、1926年美国费城世界博览会甲等大奖和1929年首届西湖博览会金奖。

肿瘤(Tumor)是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。

随着人类饮食结构的改变及各种因素影响，肿瘤的发生率逐步攀升，尤以消化道肿瘤发病率为最高。据统计，亚洲消化道肿瘤发病率占全部肿瘤的60％以上。消化道肿瘤指发生在食管、胃、十二指肠、结肠等部位的肿瘤，如食管癌、胃癌、直肠癌等。

现在，对于肿瘤的治疗大多采用化疗的方法。化疗是化学药物治疗的简称，是利用化学药物阻止癌细胞的增殖、浸润、转移，直至最终杀灭癌细胞的一种治疗方式。它是一种全身性治疗手段，和手术、放疗一起，并称为癌症的三大治疗手段。由于化疗药物的选择性不强，在杀灭癌细胞的同时也会不可避免地损伤人体正常的细胞，特别是对于增殖旺盛的骨髓造血干细胞，毒害作用非常明显。因此，接受化疗的病人往往外周血白细胞等全血细胞数量下降，进而会引起贫血、抗感染能力下降等严重不良反应，若不采取相应的治疗措施，会加重患者病情，导致化疗失败。

抗肿瘤药物在目前肿瘤治疗中发挥着越来越重要的作用，然而目前绝大多数抗肿瘤药物在抑制或杀伤肿瘤细胞的同时，对机体的正常细胞也会有毒害作，尤其是骨髓造血细胞和胃肠道黏膜上皮细胞。因此，在有效的肿瘤治疗中，毒副反应几乎是不可避免的，部分病人可因严重的毒副反应或引起并发症而中断，使有些肿瘤患者不能按期化疗或不能接受有效剂量而致肿瘤复发，如何提高化效，降低其毒副反应是目前国内外临床研究的主要课题。

针对上述问题，现有技术中研制出一些治疗中药的中药组合物。但是，中药组合物成分及其含量之间关系较为复杂，即便是相同的中药成分，不同的含量其君臣佐使关系也不相同，可能导致药效的降低甚至出现相反的疗效。现有技术中中药组合物的生治疗效果往往不好。因此，对于具有治疗肿瘤功能的中药组合物的研究，具有现实而又久远的意义。

另外，在传统中医的组方临床应用中，一般采用配方制，即医生开好处方后，而抓配的过程由制药房完成，这样的流程使得药物的配比不精准，往往达不到最好的疗效。因此，仍需要治疗消化道肿瘤的具有确切疗效的中药。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术中中药组合物的治疗效果不好的缺陷，提供一种用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉、制备方法及应用。

为了实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案解决上述技术问题：

一种用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂和保鲜剂混合均匀后，0℃以下低温保存；

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-20℃～-45℃条件下冷冻干燥1-5小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.5-2μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分升华干燥而得冻干粉。

优选地，步骤(4)中所述冷冻干燥的条件为-35℃，干燥4小时。

优选地，步骤(5)中经超细粉碎机打粉后，粒径为0.5-1μm。

更优选地，经超细粉碎机打粉后，粒径为0.5-0.6μm。

优选地，步骤(6)中所述干燥温度为45℃，干燥温度为24小时。

优选地，步骤(3)中所述灭活除菌处理为射线灭菌、微波灭菌、湿热蒸汽灭菌或臭氧灭菌的一种或几种。

优选地，步骤(1)中所述抗凝剂为枸橼酸钠，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.3-0.4％，所述保鲜剂为糖苷水解酶，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.1-0.3％。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的鹅血冻干粉。

本发明还提供上述鹅血冻干粉在制备预防和治疗消化道肿瘤药物上的应用。

本发明的有益效果在于：

1、本发明的鹅血冻干粉的制备方法中，通过对冷冻干燥的时间、温度等参数进行合理的设计，可以最大限度地保存鹅血的药效成分的性能，经检测，成品鹅血冻干粉的有效成份利用率相当于新鲜饿血的有效成分的5倍。

2、本发明的鹅血冻干粉的制备方法中，通过采用超微粉体技术，提高鹅血冻的细胞破壁率，增大比表面积，使得粉体粒径达到了微米级(0.5-2μm)，使得鹅血冻干粉的药效成份充分完全的释放出来，对提高鹅血的利用率、增强药物疗效有非常重要的现实意义。

3、利用本发明的鹅血冻干粉对小鼠肉瘤S180、小鼠结肠癌Clon-26、人体移植性肿瘤(胃癌)SGC具有明显的抑制作用，说明本发明的鹅血冻干粉能够有效治疗消化道肿瘤，特别是食道癌、胃癌、肠癌等。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

在符合本领域常识的基础上，本发明所述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

实施例1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法

在该实施例中，用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂枸橼酸钠和保鲜剂糖苷水解酶混合均匀后，0℃以下低温保存；所述抗凝剂加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.3％，所述保鲜剂为，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.2％。

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆湿热蒸汽灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-35℃条件下冷冻干燥4小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.5μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分45℃升华干燥24小时而得冻干粉。

实施例2用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法

在该实施例中，用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂枸橼酸钠和保鲜剂糖苷水解酶混合均匀后，0℃以下低温保存；所述抗凝剂加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.4％，所述保鲜剂为，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.3％。

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆射线灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-25℃条件下冷冻干燥3小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.6μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分45℃升华干燥24小时而得冻干粉。

实施例3用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法

在该实施例中，用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂枸橼酸钠和保鲜剂糖苷水解酶混合均匀后，0℃以下低温保存；所述抗凝剂加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.35％，所述保鲜剂为，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.2％。

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆微波灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-45℃条件下冷冻干燥2小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.8μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分45℃升华干燥24小时而得冻干粉。

实施例4用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法

在该实施例中，用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂枸橼酸钠和保鲜剂糖苷水解酶混合均匀后，0℃以下低温保存；所述抗凝剂加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.25％，所述保鲜剂为，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.2％。

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆射线灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-35℃条件下冷冻干燥5小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为1μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分45℃升华干燥24小时而得冻干粉。

实施例5用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉及其制备方法

在该实施例中，用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂枸橼酸钠和保鲜剂糖苷水解酶混合均匀后，0℃以下低温保存；所述抗凝剂加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.2％，所述保鲜剂为，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.2％。

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆射线灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-40℃条件下冷冻干燥4小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为1μm；

(6)、将步骤(5)中制得的血浆纯粉抽真空将水分45℃升华干燥24小时而得冻干粉。

药效学研究

通过对本发明的鹅血冻干粉的药效学研究发现：本发明的鹅血冻干粉对小鼠肉瘤S180、小鼠结肠癌Clon-26、人体移植性肿瘤(胃癌)SGC具有明显的抑制作用。

1、本发明的鹅血冻干粉对不同移植性动物肿瘤的抑制作用

动物实验的剂量设计为：0.1g/kg、0.5g/kg、2.5g/kg三个剂量组。

用注射用水配制成各个剂量组，给药方法为：注射，每日一次，连续七天。

1.1对小鼠肉瘤S180的抑制作用研究

取生长良好的小鼠肉瘤S180腹水，用生理盐水按1：5比例稀释制成细胞悬液接种于昆明雌性小鼠一侧腋皮下，0.2ml/只。随机分组，每组10只，设生理盐水对照组、环磷酰胺(CTX)阳性药组；本发明实施例1的鹅血冻干粉高、中、低三个剂量组。接种次日起给药，连续七天，阳性药环磷酰胺(100mg/kg)腹腔注射，共两次(1、4)天，于第10天脱颈处死动物，解剖取瘤块、称重，按如下公式计算结果。

肿瘤抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重

结果见表1。

表1鹅血冻干粉对小鼠S180的抑制作用

与空白对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01

由表1可知，本发明实施例1的鹅血冻干粉对小鼠S180的抑瘤率在高剂量时48.94％(**p＜0.01)，中剂量时29.79％(*p＜0.05)，低剂量4.08％，有较明显的剂量相关性。

1.2对F1小鼠结肠癌Clone-26的抑制作用研究

在无菌下取出瘤源，用匀浆器制成匀浆，再用生理盐水按1：4比例稀释制成细胞悬液接种于F1小鼠一侧腋皮下，0.2ml/只。随机分组，每组10只，设生理盐水对照组、环磷酰胺(CTX)阳性药组；本发明实施例1的鹅血冻干粉高、中、低三个剂量组。接种次日起给药，连续七天，阳性药环磷酰胺(100mg/kg)腹腔注射，共两次(1、4)天，于第10天脱颈处死动物，解剖取瘤块、称重，按如下公式计算结果。

肿瘤抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重

结果见表2。

表2鹅血冻干粉对F1小鼠Clone-26的抑制作用

与空白对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01

由表2可知，本发明实施例1的鹅血冻干粉对小鼠Clone-26的抑瘤率在高剂量时37.88％(**p＜0.01)，中剂量时31.82％(*p＜0.05)，低剂量27.27％。

1.3对移植于裸鼠的人体胃癌SGC的抑制作用研究

在无菌下取出瘤源，用匀浆器制成匀浆，再用生理盐水按1：4比例稀释制成细胞悬液接种于BALB/C背景的裸鼠一侧腋皮下，0.2ml/只。随机分组，每组6只，设生理盐水对照组、环磷酰胺(CTX)阳性药组；本发明实施例1的鹅血冻干粉高、中、低三个剂量组。接种次日起给药，连续十四天，阳性药环磷酰胺(100mg/kg)腹腔注射，共三次(1、5、9)天，于第30天脱颈处死动物，解剖取瘤块、称重，按如下公式计算结果。

肿瘤抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重

结果见表3。

表3鹅血冻干粉对人体胃癌SGC的抑制作用

与空白对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01

由表3可知，本发明实施例1的鹅血冻干粉对人体胃癌SGC的抑瘤率在高剂量时38.89％(**p＜0.01)，中剂量时31.08％(*p＜0.05)，低剂量19.17％。

临床应用

1.1病例来源

全部病例均来自2010年3月至2011年8月在上海市第一人民医院的门诊与肿瘤外科病房；本发明的鹅血冻干粉的疗效评价所需病例则从中选择符合以下“纳入标准”和“排除标准”的消化道肿瘤患者90例。将90例患者随机分为3组：

治疗I组(本发明的实施例1的鹅血冻干粉、注射用)：60例中男36例，女24例；年龄24～72岁，平均年龄48岁；CEA阳性48例，CEA阴性12例；按UICC分期，II期32例，III期28例。

对照组：30例中男15例，女15例；年龄23～75岁，平均年龄49岁；CEA阳性27例，CEA阴性3例；UICC分期，II期15例，III期15例。

2组各种资料比较无统计学差异。参照GCP要求进行临床研究，所有参加试验的病人均亲自签署知情同意书。

1.1.1纳入标准

a)按照《新编常见恶性肿瘤诊治规》确诊为胃癌、肠癌、原发性肝癌。

b)临床分期按国际抗癌联盟(UICC)1997年第5版分期标准中II～III期患者。

c)3组病例无手术绝对禁忌症。

1.1.2排除标准

a)不符合纳入标准者；

b)患有不易控制的神经、精神疾病或精神障碍，依从性差，不能配合和叙述治疗反应者，原发性脑瘤或中枢神经转移瘤病情未获控制，具有明显的颅高压症或神经精神症状者；

c)有严重的急性感染，并且没有被控制的；或有化脓性和慢性感染，伤口迁延不愈者；

d)孕妇、哺乳期妇女、精神病患者；

e)过敏体质、有药物过敏史或对试验药物过敏者；

f)5年内有其它恶性肿瘤(治愈皮肤基底细胞癌和子宫颈原位癌除外)；

g)正在参加其它药物试验者。

1.2治疗方法

2组病例均行根治手术切除。2组唯一不同点为手术前的药物治疗。治疗组注射用本发明实施例1的鹅血冻干粉，每日一次，连续10～14d后行手术治疗。观察分析手术后患者并发症和疗效，同时定期复查CEA水平并结合CT观察肿瘤复发情况分别计算6、12、24、36个月的生存率，2组数据采用法和t检验分析作统计学比较。

1.3疗效评价标准

1.3.1临床症状缓解情况评定

按照《新编常见恶性肿瘤诊治规范》中消化道肿瘤治疗的疗效标准进行评价。

1.3.2疗效观察

所有病例于术前1周、术后4周抽血检测细胞免疫功能指标并观察手术后并发症情况、3年内复发情况及1、2、3年生存率。

1.3.3统计方法

两个总体率(或构成比)之间比较，用x2检验或确切概率法；等级资料比较采用两个独立样本Mann-Whitney U Test，以上均使用SPSS 12.0完成。P＜0.05为具有统计学意义。

2结果

2.1药物组手术前后检测细胞免疫功能指标可知治疗组NK细胞活性和CD4/CD8值治疗前后有显著性意义(P＜0.05)；而对照组NK细胞活性和CD4/CD8值治疗前后无显著性意义(P＞0.05)。提示围手术期本发明的鹅血冻干粉治疗可改善消化道肿瘤患者的细胞免疫功能。

组别

例数

时间

NK细胞活性

CD3+

CD4+

CD8+

CD4+/CD8+

治疗组

60

治疗前

24.8±12.1

44.8±12.2

30.7±8.7

23.9±7.5

1.5±0.4

治疗后

44.2±14.3

53.6±14.2

36.3±8.8

20.8±8.4

1.9±0.3

对照组

30

治疗前

24.8±12.1

44.3±12.1

31.4±8.4

23.2±7.8

1.6±0.3

治疗后

24.8±12.1

45.8±13.4

29.3±7.3

24.9±8.9

1.3±0.4

表42组免疫指标比较

2.2治疗组治疗1、2、3年后的生存率也分别高于对照组，见表5。

表52组生存情况比较

组别	例数	6个月	12个月	24个月	36个月
						治疗组	60	60	58	541)	441)
对照组	30	30	28	21	12

注：与对照组比较，1)、P＜0.05

2.32组复发情况以CT和AFP的综合检查结果来评价，结果治疗I组疗效高，见表6。

表62组复发情况比较(％)

组别	例数	6个月	12个月	24个月	36个月
						治疗组	60	2(3.3)	12(20.0)	20(33.3)	32(53.3)

对照组

30

5(10)

9(30.0)

19(63.3)

24(80.0)

3结论

本发明的鹅血冻干粉在治疗消化道肿瘤应用过程中，有改善免疫功能，降低复发率及提高累计生存率等作用，具有良好的推广前景。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将采集的新鲜的鹅血加入抗凝剂和保鲜剂混合均匀后，0℃以下低温保存；

(2)、将新鲜鹅血在打浆机中搅拌成血浆，过滤去除纤维物质及杂质；

(3)、将过滤后的血浆灭活除菌；

(4)、将除菌后的血浆在低于1个大气压，-20℃~-45℃条件下冷冻干燥1-5小时；

(5)、将干燥好的血浆加入超细粉碎机中进行打粉，打粉后所述血浆纯粉的粒径为0.5-2μm；

(6)、将步骤（5）中制得的血浆纯粉抽真空将水分升华干燥而得冻干粉。

2.根据权利要求1所述的用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述冷冻干燥的条件为-35℃，干燥4小时。

3.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，优选地，步骤(5)中经超细粉碎机打粉后，粒径为0.5-1μm。

4.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，经超细粉碎机打粉后，粒径为0.5-0.6μm。

5.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述干燥温度为45℃，干燥温度为24小时。

6.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述灭活除菌处理为射线灭菌、微波灭菌、湿热蒸汽灭菌或臭氧灭菌的一种或几种。

7.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述抗凝剂为枸橼酸钠，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.3-0.4%。

8.根据权利要求1用于预防和治疗消化道肿瘤的鹅血冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述保鲜剂为糖苷水解酶，加入的重量百分比为新鲜鹅血的0.1-0.3%。

9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到的鹅血冻干粉。

10.权利要求9所述的鹅血冻干粉在制备预防和治疗消化道肿瘤药物上的应用。